p53基因与5-Fu联合作用对鼻咽癌细胞生长的影响

目的:通过转染野生型p53基因,并与5-Fu联合作用,观察其对两种鼻咽癌细胞生长的影响.方法:将克隆有野生型p53基因的pUHD10-3-p53质粒,用脂质体(Lipofectamine)介导分别转染人鼻咽癌CNE1和CNE2细胞,同时在培养液中加入5-Fu,用四甲基偶氮唑(MTT)法分析细胞生长情况.结果:人鼻咽癌CNE1和CNE2细胞分别加入含5-Fu的培养液后,第4天生长抑制率分别为49.46%、54.85%.CNE1和CNE2细胞分别转染wt-p53基因后,第4天生长抑制率分别为47.14%、45.90%.人鼻咽癌CNE1和CNE2细胞分别转染wt-p53基因后应用5-Fu处理,细胞的生长抑制率第4天分别可达到84.74%、85.82%,其生长作用均明显受到抑制.结论:野生型p53基因与5-Fu联合作用,对人鼻咽癌CNE1及CNE2细胞生长有明显的抑制效果.     

p53基因与5-FU联合作用诱导鼻咽癌细胞凋亡的研究

目的:研究通过转染野生型p53基因,并联合5-FU诱导人鼻咽癌CNE2细胞的凋亡作用.方法:将克隆有野生型p53基因的pUHD10-3-p53质粒.用脂质体(Lipofectamine)介导的方法转染人鼻咽癌CNE2细胞,同时在培养液中加入5-FU;以RT-PCR检测p53基因的表达,通过AO/EB染色和流式细胞术等方法进行细胞凋亡分析.结果:经转染wt-p53基因后,基因在细胞中的表达增加.在荧光显微镜下可观察到凋亡细胞增多.流式细胞仪检测结果示,经转染质粒pUHDl0-3-p53后,细胞的凋亡率为35.2%,单纯用5-FU组的细胞凋亡率为33.8%,而联合作用组的细胞凋亡率可达53.9%.结论:野生型p53基因与5-FU均可诱导人鼻咽癌细胞CNE2发生凋亡,野生型p53基因与5-FU联合作用,促进鼻咽癌细胞凋亡.     

脂质体介导的p53基因转染对鼻咽癌细胞作用的研究

目的 通过转染野生型p53基因,观察其对鼻咽癌细胞CNE2生长的影响.方法 将克隆有野生型p53基因的pUHD10-3-p53质粒,用脂质体(lipofectamine)介导的方法转染人鼻咽癌CNE2细胞,以RT-PCR检测p53基因的表达,通过细胞生长曲线、AO/EB染色和流式细胞术等方法对转染细胞的生物学行为进行检测.结果 人鼻咽癌CNE2细胞转染p53基因后,基因在细胞中表达增加,细胞的生长受到抑制,在荧光显微镜下观察到凋亡细胞增多,流式细胞技术显示细胞凋亡率增高.结论 采用脂质体转染野生型p53基因的方法,可抑制人鼻咽癌CNE2细胞的生长,诱导鼻咽癌细胞凋亡.     

转染野生型p53基因对肝癌细胞生长的影响

目的：通过转染野生型p53基因致肝癌细胞株BEL-7404，研究其对肝癌细胞的生长及凋亡作用。方法：野生型p53基因通过脂质体Lipofectamine介导转染人肝癌细胞株BEL-7404。用四甲基偶氮唑（MTT）法测定细胞生长曲线，用流式细胞仪进行细胞凋亡分析。结果：肝癌细胞BEK-7404转染野生型p53基因后，其生长作用明显受到抑制．细胞生长抑制率在第4天可达50．8％。流式细胞仪分析细胞凋亡结果：阴性对照组为1．7％，转染pUHD10-3组为3．2％．转染pUHD10-3-p53组为40．7％。结论：野生型p53基因可诱导肝癌细胞BEL-7404的生长抑制及发生凋亡。     

转染野生型p53基因对人肝癌细胞生长的抑制作用

目的 研究转染野生型p53基因对人肝癌细胞的生长影响作用。方法 将克隆有野生型p53基因的pUHD10-3质粒,通过Lipofectin转染肝癌细胞株BEL-7402、BEL-7404、HLE、HUH-7及SMMC-7721,用四甲基偶氮唑(MTT)法观察细胞的生长情况。结果 转染野生型p53基因,可使肝癌细胞BEL-7404、HLE、HuH-7的生长明显受到抑制,第4天生长抑制率分别是50．0％、69．0％及65．1％。结论 转染野生型p53基因能有效抑制肝癌细胞株BEL-7404、HLE、HuH-7的生长。     

重组人p53腺病毒基因药物对人鼻咽癌细胞的抑制实验

目的探索p53基因在鼻咽癌基因治疗方面的可行性。方法以人鼻咽癌CNE细胞株为实验对象,将重组人p53腺病毒药物（1010rAd/p53）转染人鼻咽癌CNE细胞,用MTT比色实验及流式细胞仪实验的方法进行体外实验,观察重组人p53腺病毒药物（rAd/p53）对人鼻咽癌CNE细胞体外生长的影响。结果各浓度重组人p53腺病毒药物（1010rAd/p53、109rAd/p53、108rAd/p53、107rAd/p53）对人鼻咽癌CNE细胞生长有抑制。尤以1010rAd/p53明显。转染3天后,重组人p53腺病毒药物（rAd/p53）诱导人鼻咽癌CNE细胞明显凋亡。结论重组人p53腺病毒药物（rAd/p53）对人鼻咽癌CNE细胞生长能有效抑制,为鼻咽癌的基因治疗提供了实验依据。     

p53基因药物抑制人鼻咽癌生长的免疫组化研究

目的探索p53基因在鼻咽癌基因治疗方面的可行性。方法以人鼻咽癌CNE细胞株为实验对象,将重组人p53腺病毒药物（10^10rAd／p53）感染人鼻咽癌CNE细胞,用免疫组化实验的方法观察重组人p53腺病毒药物（rAct／p53）对人鼻咽癌CNE细胞体外生长的影响。结果重组人p53腺病毒药物（10^10rAd／p53）对人鼻咽癌CNE细胞生长有明显抑制。结论重组人p53腺病毒药物（rAd／p53）对人鼻咽癌CNE细胞生长能有效抑制,为鼻咽癌的基因治疗提供了实验依据。     

野生型p53基因转染对人胃癌细胞系HGC27生长的抑制作用

目的 研究野生型p53基因对人未分化胃癌细胞系HGC27生长的抑制作用。方法 用表达人野生型p53基因全长cDNA的真核载体pcDNA3—p53，转染人未分化胃癌细胞系HGC27，对转染后细胞进行生长曲线、细胞生长抑制率及流式细胞术分析，观察其生物学特性变化。结果 外源野生型p53基因在HGC27细胞内稳定表达，经pcDNA3—p53转染的HGC27细胞生长速度受到明显抑制，流式细胞分析显示G1期增加，S期下降，细胞出现凋亡。结论 野生型p53基因能在HGC27细胞内表达，且能抑制其生长并促进细胞凋亡。     

RNAi沉默Survivin基因抑制人鼻咽癌细胞生长

目的观察RNA干扰沉默Survivin基因对人鼻咽癌CNE2细胞在体内外生长的抑制作用。方法将Survivin特异性shRNA表达载体pGenesil-1-survivin经Lipofectamine。”2000介导转染人鼻咽癌CNE2细胞,经G418筛选获得稳定转染的CNE2细胞,荧光显微镜和流式细胞仪检测细胞转染效率;逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Westernblot分别检测Survivin基因mRNA和蛋白表达水平;噻唑蓝（MTF）法检测细胞增殖能力的变化。以稳定转染细胞建立裸鼠荷瘤模型,观测瘤体积的变化,绘制移植瘤生长曲线。结果流式细胞仪检测pGenesil-1-survivin细胞转染百分率为（87．13±2．21）％;RT．PCR和Westernblot结果显示,pGenesil-1-survivin组对人鼻咽癌CNE2细胞SurvivinmRNA和蛋白的抑制率分别为64．55％和51．24％,均较随机序列构建载体的阴性对照（pGenesil-1-NC）组和空白对照组明显下调（均P〈0．05）;MTT结果显示,pGenesil-1-survivin组细胞增殖能力明显较pGenesil-1-NC组和空白对照组降低（均P〈0．05）;体内实验表明,pGenesil-1-survivin组较pGenesil-1-NC组和空白对照组能有效抑制BALB／C裸鼠人鼻咽癌的生长（均P〈0．05）。结论沉默Survivin基因可以有效抑制人鼻咽癌CNE2细胞在体内外的增殖,Survivin基因有望成为鼻咽癌基因治疗的有效靶点。     

端粒酶正义寡核苷酸对鼻咽癌细胞生长的作用

目的：探讨端粒酶正义寡核苷酸对鼻咽癌细胞生长的作用。方法：脂质体介导端粒酶正义，反义及无义寡核苷酸转染鼻咽癌CNE1和CNE2Z细胞，MTT法检测细胞增殖能力，流式细胞仪检测细胞周期。结果：端粒酶正义寡核苷酸与反义寡核苷酸一样中抑制鼻咽癌CNE1和CNE2Z细胞的生长，且呈剂量和时间依赖性。1.5μmol.L^-1正义寡核苷酸与CNE1细胞共培养6，12，24和48h时抑制率分别为16．3％，15．6％，20．2％和26．3％，浓度为4．5μmol.L^-1时抑制率分别为22．5％，21．5％，32．4％和39．9％；在CNE2Z细胞，浓度为1．5μmol.L^-1时抑制率分别为7．7％，25．2％，27．0％和28．8％，浓度为4．5μmol.L^-1时抑制率分别为18．1％，30．1％，32．8％和32．9％；同时流式细胞仪检测到凋亡峰，含量分别为25．3％和19．3％，无义寡核苷酸无此作用。结论：端粒酶正义寡核苷酸可抑制鼻咽癌细胞的生长。     

缺氧诱导鼻咽癌细胞株CNE2化疗耐药及其机制

目的：探讨缺氧环境下人鼻咽癌多药耐药相关基因和缺氧诱导因子1α（HIF-1α）的表达和意义,从而部分阐明鼻咽癌发生多药耐药的机制,为逆转鼻咽癌耐药提供新的分子靶点.方法：将人鼻咽癌细胞系CNE2分别行不同时间低氧培养,MTT法检测CNE2对紫杉醇、顺铂及5-氟尿嘧啶的耐药倍数;流式细胞仪检测缺氧与常氧下细胞的凋亡情况.应用RT-PCR和Western Blot分别检测每组CNE2细胞中多药耐药相关基因（mdr1）、多药耐药相关蛋白1（MRP1）和HIF-1α在mRNA和蛋白水平的表达.结果：缺氧培养48 h,CNE2对紫杉醇、顺铂和5-氟尿嘧啶的耐药倍数较常氧分别提高2.14,1.86,1.43倍,且药物引起的凋亡减少.在缺氧组,随着缺氧时间的延长,CNE2细胞中多药耐药相关基因mdr1,MRP1的表达均逐渐增高,而且这些多药耐药相关基因的表达与HIF-1α的表达呈同步化改变.结论：缺氧可上调鼻咽癌细胞内的核转录因子HIF-1α以及多药耐药相关基因的表达,从而诱导鼻咽癌产生多药耐药性.核转录因子HIF-1α和这些多药耐药相关基因可能成为逆转鼻咽癌耐药的新的分子靶点.     

鼻咽癌顺铂耐药细胞系的建立及其耐药性变化

目的通过顺铂（cDDP）浓度递增法建立鼻咽癌耐药的细胞株CNE2／cDDP,并研究其耐药性变化。方法采用cDDP浓度递增法建立鼻咽癌顺铂耐药细胞系CNE2／cDDP,倒置显微镜进行形态学观察,MTT检测CNE2／cDDP细胞系对不同化疗药物的耐药性。结果MTT研究发现在不同药物（顺铂、长春新碱、卡铂、紫杉醇、5-FU）作用下,CNE2／cDDP较CNE2的IC50值及耐药指数均有明显的增加,CNE2／cDDP细胞对顺铂的耐药性最强,增加到200．6倍,对5-Fu的耐药性最差,增加到2．8倍;耐药细胞株CNE2／cDDP较非耐药细胞株CNE2生长速度减慢,其细胞倍增时间由18h增加到24h;CNE2／cDDP细胞体积较CNE2为小,常呈克隆聚集现象。结论CNE2／cDDP具有多药耐药性,是一个理想的用于鼻咽癌的多药耐药研究的细胞系。     

野生型p53基因诱导人肝癌细胞系HuH-7凋亡的研究

目的 通过转染野生型p53基因作用于肝癌细胞株HUH-7,来研究其诱导肿瘤细胞的凋亡作用。方法 野生型p53基因通过脂质体Lipofectamine介导转染人肝癌细胞系HUH-7,96h后,用流式细胞仪进行细胞凋亡分析。结果 流式细胞仪分析细胞凋亡结果：阴性对照组为2．8％、转染pUHD 10-3组为4．1％、转染pUHD 10-3-p53组为39．6％。结论 野生型p53基因可诱导人肝癌细胞系HuH-7发生凋亡。     

MiR-122上调野生p53蛋白增强BEL-7402/5-FU细胞对5-氟尿嘧啶敏感性

目的探讨MiRNA-122对肝癌耐药细胞株BEL-7402／5。Fu的5．氟尿嘧啶敏感性的影响以及作用机制。方法构建miR-122及其阴性对照空载体稳定转染至BEL-7402／5-FU细胞中,Westernblot检测未转染组,阴性载体转染组和miR-122转染组中与耐药相关的p53蛋白表达水平。用MTT法和流式细胞术检测三组细胞对5-氟尿嘧啶敏感性。结果MiR-122转染组与未转染组,阴性载体转染组比较,野生型p53蛋白表达水平升高。流式细胞术检测,miR-122转染组的细胞凋亡率较未转染组和阴性载体转染组高。结论miR-122能上调野生型p53蛋白表达,增加BEL-7402／5-FU细胞对5-氟尿嘧啶敏感性,从而成为治疗肝癌耐药治疗的一个方法。