猪苓多糖质量研究

<正> 猪苓多糖是从植物猪苓〔Polyporus umbellatus (Pers.) Fr.〕的菌核中提取分离得到的一种葡聚糖。据文献报道,实验研究和临床观察证明,猪苓多糖具有提高机体免疫力,治疗慢性肝炎和抗肿瘤作用。为保证用药安全,制定药物质量标准,作者对其猪苓多糖的质量进行了比旋度测定,鉴别试验,分子量分布和特性粘数测定,含量测定方法的研究。实验部分一、比旋度测定精密称取本品适量,加水制成每毫升中含0.01g的溶液,测定其比旋度〔α〕_D~(25)为-5～15°(C=1,H_2O)。二、鉴别试验取本品0.02g加水2ml溶解,加95%乙醇6ml使沉淀,离心,取沉淀物置试管中,加水溶解后,α-萘酚试剂试验应成正反应;费林试剂(Fehling)试验,未水解者应     

猪苓多糖的提取及硫酸酯化研究

目的:从中药猪苓中提取猪苓多糖,对其进行硫酸酯化,并比较是否加入分散剂对酯化结果的影响。方法:将纯化的多糖运用尺寸排除色谱和激光光散射联用仪(SEC-LLS)测定其分子量,氯磺酸-吡啶法进行硫酸酯化。通过傅立叶变红外光谱分析酯化前后的结构。结果:得到分子量分布较窄的多糖组分,是一种水溶性的粘多糖,其重均分子量在1.6×105Del左右;并通过硫酸酯化得到硫酸多糖。结论:得到分子量在1.6×105Del左右的β-D-葡萄吡喃糖苷,加入分散剂对酯化收率有很大提高,但会降低其分子量与硫酸基的含量。     

不同来源、不同等级猪苓饮片中总多糖的含量测定

目的:建立猪苓饮片总多糖的含量测定方法,分析不同来源、不同等级猪苓饮片中的总多糖含量,为制定猪苓饮片含量限度及饮片商品等级划分标准提供参考依据。方法:采用高效凝胶色谱法-示差折光-多角度激光检测器联用技术测定猪苓多糖的相对分子质量及其分布情况,选择与总多糖相对分子质量相近的葡聚糖为对照品,采用正交试验和单因素试验优化猪苓总多糖含量测定的前处理条件,采用蒽酮-硫酸显色法,在630 nm处测定13批不同产地猪苓饮片和39批不同等级猪苓饮片中总多糖的含量。结果:含量测定方法学考察的线性关系、稳定性、精密度、重复性及加样回收率结果均符合要求。不同产地猪苓饮片中总多糖的质量分数在0. 87%～1. 39%。不同等级猪苓饮片中总多糖质量分数为一等饮片1. 40%,二等饮片1. 21%,三等饮片1. 03%。结论:建立的含量测定方法灵敏度高、重复性好,可用于猪苓饮片的总多糖含量测定。不同来源的猪苓饮片总多糖含量有一定差异。不同等级猪苓饮片总多糖含量呈现一定的规律性,一等饮片中总多糖含量最高,二等饮片总多糖含量次之,三等饮片总多糖含量最低,对于制定猪苓饮片含量限度及饮片商品等级划分标准具有重要参考价值。     

猪苓多糖的近红外光谱定量分析模型研究

目的以偏最小二乘法(PLS)建立猪苓多糖的近红外光谱定量分析模型。方法采用正交法优化猪苓多糖提取工艺,结合紫外分光光度法测定猪苓多糖含量,并将样品的近红外光谱图与所测多糖含量相关联,建立光谱数据与多糖的定量校正模型。结果在8477.54～4076.78 cm~(-1)波段,选择一阶导数+ND平滑处理,可以得到最佳的定量模型,模型的校正均方根误差(RMSEC)为1.00,相关系数γ_c为0.9565,内部交叉验证均方根误差(RMSECV)为1.77,相关系数γ_V为0.8566,模型的预测均方根误差(RMSEP)为0.818,相关系数γ_P为0.9469,主成分数为5。结论所建的模型性能良好,可快速、准确地测定猪苓多糖的含量,可用于猪苓药材的质量监察。     

猪苓多糖微波辅助提取工艺的正交实验法优选

目的 运用微波辅助提取技术提取猪苓多糖,并对工艺条件进行优化.方法 以苯酚-硫酸法测定猪苓多糖含量,通过正交设计试验确定猪苓多糖微波辅助提取的最佳工艺条件,比较此条件下的猪苓多糖的得率与浸取法得率,测定两种方法提取的猪苓多糖的特性粘度,探讨微波辅助提取对猪苓多糖的影响.结果 最优提取条件为微波作用时间40min,微波占空比50％,固液比1∶30,此条件下,猪苓多糖的得率为3.663％,高于80℃浸取5h的猪苓多糖得率,1.034％.微波辅助提取和浸取法所得猪苓多糖特性黏度分别为(380±39) cm3/mg和(437±53) cm3/mg,差异无统计学意义(t=1.849,P＞0.05).结论 与传统方法比较,微波辅助提取能够提高猪苓多糖的提取效率,对多糖的特性粘度影响不明显,能够得到目标产物.     

正交试验法研究猪苓多糖提取工艺

目的　优选猪苓多糖的最佳提取工艺。方法　采用正交试验法 ,以煎煮液中水溶性多糖的含量为考察指标 ,对影响猪苓多糖的提取工艺因素进行了研究 ,用苯酚 -硫酸法对煎煮液中的猪苓多糖进行含量测定 ;结果　优选出猪苓多糖的最佳提取工艺 ,重复试验结果满意。结论　猪苓多糖的最佳提取工艺为 :用 10倍量水 ,煎煮 1.5 h,煎煮 4次     

SE-HPLC测定刺糖多糖相对分子质量及纯度

目的建立高效液相凝胶色谱法(SE-HPLC)测定刺糖多糖相对分子质量和纯度的方法;分析刺糖多糖的相对分子质量分布及并进行含量测定。方法采用水提醇沉法及AB-8大孔吸附树脂和DEAE Sepharose CL-6B阴离子交换树脂分离纯化不同相对分子质量的多糖组分,用TSK-GEL G4000PWXL,7.8mm×300mm色谱柱,2414示差折光检测器,测定其相对分子质量分布和纯度。结果得到刺糖多糖组分AP2-4,其多糖相对分子质量为4.9×10~4,纯度含量为(93±3)%;相对分子质量分布:重均分子量(M_r)为4.973 3;数均分子量(M_n)为4.951 8;峰值分子量(M_p)为6.311 2,4.873 2;多分散度(D)为1.0043。结论建立了简便、快捷、精密度高的凝胶色谱柱方法,可较准确地测定刺糖多糖的纯度和相对分子质量分布。     

猪苓药用多糖含量测定

目的:测定猪苓药用植物多糖的含量,为猪苓质量控制和资源开发提供科学依据.方法:以葡萄糖为对照品,采用硫酸-蒽酮比色法测定猪苓药用植物可溶性多糖和粗多糖的含量.结果不同生长发育阶段的猪苓含量差异较显著,总多糖最高含量是最低含量地3倍.结论:测定方法简单、准确、快速.以多糖含量为指标,的质量最优.     

猪苓多糖测定计算方法的探讨

猪苓多糖测定计算方法的探讨南京军区后勤部药品检验所（２１０００２）李松林，任延军，崔熙《中成药》杂志１９９３年第１期刊载了“猪苓多糖及其注射剂的含量测定研究”一文。该文是以无水葡萄糖为对照品，用硫酸－蒽酮比色法测定猪苓多糖及其注射剂的含量。其基本原理...     

正交试验法研究猪苓多糖提取工艺

目的：优选猪苓多糖的最佳提取工艺。方法：采用正交试验法，以煎煮液中水溶性多糖的含量为考察指标，对影响猪苓多糖的提取工艺因素进行了研究，用苯酚－硫酸法对煎煮液中的猪苓多糖进行含量测定；结果：优选出猪苓多糖的最佳提取工艺，重复试验结果满意。结论：猪苓多糖的最佳提取工艺为：用10倍量水，煎煮1．5h，煎煮4次。     

不同产地、不同采收期猪苓中麦角甾醇及多糖动态变化研究

目的测定不同产地、采收期猪苓麦角甾醇及多糖的含量,根据含量的差异及动态变化得到最佳猪苓产地及最佳猪苓采收期。方法以葡萄糖为对照品,采用紫外-分光光度计法测定不同采收期猪苓中多糖的含量,并采用HPLC法测定其中麦角甾醇含量。结果不同产地猪苓中麦角甾醇和多糖含量差异较大,其中吉林长白山栽培猪苓的含量高于其他产地,为0.45%和2.19%;9个不同采收期吉林长白山猪苓的含量测定结果显示,麦角甾醇和多糖含量在5月末达到峰值0.26%和2.1%。结论吉林长白山猪苓质量较好,吉林长白山猪苓5月末药材质量较佳,与传统采收期相符。此方法简便、灵敏、准确,为寻找最佳猪苓产地及猪苓最佳采收期提供了科学依据。     

猪苓多糖硫酸酯的制备及活性测定

目的:制备猪苓多糖硫酸酯,同时测定其活性.方法:采用醇沉分级、大孔吸附树脂、聚酰胺树脂和脱蛋白法从中药猪苓中提取分离得到猪苓多糖,硫磺酸-吡啶法进行硫酸酯化,经Sephadex G-75、透析得到硫酸化猪苓多糖,并体外观察硫酸酯化多糖对羟基自由基清除作用.结果:猪苓多糖硫酸酯化前后均有清除Fenton反应由Fe2+-H2O2体系产生的羟自由基,硫酸酯化猪苓多糖对羟自由基的清除能力增强,并呈明显量效关系.结论:制备猪苓多糖硫酸酯的方法准确可靠,为猪苓多糖的进一步开发利用提供实验依据.     

不同产地、商品规格及生长年限猪苓麦角甾醇及多糖的含量分析

目的:考察17批不同产地猪苓麦角甾醇及多糖的含量,为猪苓的质量标准及种植生产提供一定的依据。方法:分别采用HPLC法测定麦角甾醇的含量;水提醇沉法提取猪苓多糖,以葡萄糖为对照品,采用蒽酮-硫酸比色法测定猪苓多糖含量。结果:麦角甾醇以四川南江栽培猪苓样品含量较高,为0.07%~0.18%;四年生最高,达0.18%;云南云龙、陕西太白野生猪苓及河南西峡鸡爪苓的麦角甾醇含量最低,为0.04%~0.06%,低于中国药典标准。多糖含量范围为1.10%~2.30%,其中四川南江栽培三年生猪苓样品含量最高,为2.30%;南江栽培四年猪苓的多糖含量最低,为1.10%。同一产地样品,不同商品规格的猪苓麦角甾醇及多糖的含量差异很大:猪屎苓的麦角甾醇及多糖的含量均高于鸡爪苓;栽培猪苓麦角甾醇的含量高于野生猪苓,多糖含量与野生相差不大。同一产地(四川南江)猪苓麦角甾醇及多糖随着生长年限的增长而变化。结论:不同产地、不同商品规格及生长年限猪苓药材中麦角甾醇及多糖的含量存在较大差异,猪苓药材的质量受自然环境、来源、生长年限的影响。在适宜产区种植猪苓对保证猪苓药材质量和临床药效有积极的意义。     

猪苓多糖的提取工艺优化及抗氧化活性研究

目的:采用遗传算法优化猪苓多糖的提取工艺,进一步研究其体外抗氧化活性。方法:选择溶媒倍数、提取温度、提取时间和提取次数为考察因素,在正交试验基础上采用遗传算法优化猪苓多糖的提取工艺;根据Fenton反应和DPPH法进行抗氧化活性测定。结果:最佳提取工艺为:加药材41量的水,于99℃提取3次,每次2.5 h,猪苓多糖提取率为17.73 mg/g;猪苓多糖对DPPH及·OH自由基有较高的清除率,且清除率与浓度呈量效关系。结论:遗传算法优化所得提取工艺具有提取率高、稳定的优点,可用于猪苓多糖的提取;猪苓多糖具有良好的体外抗氧化活性。     

猪苓多糖注射液中细菌内毒素的检查

目的:对用细菌内毒素检查法取代猪苓多糖注谢液中的热原检查进行实验。方法,用细菌内毒素检查法检测猪苓多糖注射液中的细菌内毒素。结果:猪苓多糖注射液对细菌内毒素检查法有干扰作用,经过1～2倍稀释,即对灵敏度为0.5Eu/ml的鲎试剂无干扰作用,同时与家兔法进行对比试验,两者符合率为100％。结论:认为可用细菌内毒素检查法取代猪苓多糖注射液中的热原检查。     

广东海风藤多糖化学研究

目的:建立一种广东海风藤多糖分子量及其分布和单糖种类的质控方法.方法:分子量及其分布采用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC),色谱柱为Ultrahydrogel 120 Column(300mm×7.8 mmID),以已知分子量的葡聚糖为标样,0.2 mol·L-1氯化钠为流动相,示差折光检测器.单糖种类测定采用HPLC法,色谱柱为Sugar-pakTM(16.5 mm×300 mm),50 mg·L-1,EDTA-Ca为流动相,示差折光检测器.结果:利用GPC软件处理,得到广东海风藤多糖的数均、重均分子量.构成广东海风藤多糖的单糖种类有D-葡萄糖,D-半乳糖,D-阿拉伯糖.结论:本文建立的方法简便,重现性好,可作为广东海风藤多糖的质量控制.     

树舌多糖GF对小鼠HepA瘤Rb基因表达的影响

为探明树舌多糖GF对小鼠HepA瘤Rb基因表达的影响。本实验用链霉菌抗生素蛋白 -过氧化酶免疫组化法来测定瘤组织中Rb蛋白含量 ,通过多媒体图像分析系统分析实验结果。结果表明 :树舌多糖GF组、猪苓多糖组与荷瘤对照组比较 ,差异均非常显著 (P <0 .0 1) ,即树舌多糖GF、猪苓多糖明显增强HepA瘤组织中Rb基因的表达 ;树舌多糖组与猪苓多糖组比较 ,差异非常显著 (P <0 .0 1) ,即树舌多糖GF更能显著增强Rb基因表达 ,优于猪苓多糖。因此可初步认为 ,作用于抑癌基因Rb并使之表达增强 ,是树舌多糖GF抗瘤作用机制之一。     

伴生菌对猪苓菌丝生长及多糖含量的影响

目的：研究伴生菌对猪苓菌丝的生物量及多糖含量的影响。方法：将伴生菌的胞内及胞外成分添加到猪苓的液体发酵体系中，发酵培养结束后测定猪苓菌丝的生物量及多糖含量。结果：添加伴生菌菌丝体及适量的未经灭菌的伴生菌发酵液可显著提高猪苓菌丝的生物量，而添加经灭菌的伴生菌发酵液可显著降低猪苓菌丝的生物量；添加伴生菌菌丝体及发酵液均可显著提高猪苓菌丝多糖含量，而显著降低猪苓胞外多糖含量。结论：伴生菌的胞内及胞外成分可在今后猪苓发酵生产时有选择地利用。     

猪苓多糖注射液的含量测定

根据猪苓多糖与蒽酮在酸性条件下生成绿色,其浓度与比色吸收值在一定范围内成正比的原理,采用比色法测定猪苓多糖注射液的含量。该方法简便,尤其适用于快速分析。经加样回收试验,平均回收率为99.85%。     

桑叶多糖不同分子量段降血糖作用研究

目的:研究桑叶多糖中不同分子量段的降血糖效果,找出降血糖效果最佳的分子量段。方法:将桑叶水溶部分多糖利用大孔吸附树脂分离纯化,采用分级醇沉得到不同分子量段的多糖,sephadexG-100进一步分段纯化,高效液相凝胶色谱法测定其分子量分布;将不同分子量段多糖对糖尿病大鼠模型进行降血糖作用实验。结果:桑叶多糖的不同分子段有不同程度降血糖作用。结论:重均分子量为(11.7±0.5)×104多糖组分是对糖尿病大鼠模型灌胃降血糖作用最佳分子量段。