肺鳞癌患者胸水免疫复合物抗原及抗体组份的免疫学特异性分析

本文利用Protein A-Sepharose CL-4B亲和层析法纯化肺鳞癌患者胸水免疫复合物(IC);并在解离的条件下(8mol/L尿素),用QAE-Sephadex A-50离子交换柱层析法分离胸水免疫复合物中的抗原、抗体组份。IC抗体组份经间接免疫荧光法鉴定具有相对肺癌的反应特异性;用IC抗原组份制备的特异性抗血清经正常人组织、血浆等免疫吸附剂充分吸附后,仍保留与原胸水IC中分离所得抗体组份相似的抗肿瘤相关抗原反应特异性。该法为研究肿瘤宿主体内免疫调节反应提供了较直接的途径。分离所得抗原组份制备的抗血清可作为研究、检测宿主体内肿瘤相关抗原的特异探针。     

制备抗人血清白蛋白抗体的简单高效方法

以简单的酸乙醇法纯化人血清白蛋白(HSA)作为抗原,采用一个高效、经济、快速的免疫方案免疫家兔,得到高效价的抗血清。最后利用ProteinA-Sepharose 4B亲和层析法纯化IgG抗体。     

人血浆纤维联接蛋白的纯化制备及分析鉴定

采用亲合层析法制备纤维联接蛋白 (Fn)制剂 ,经免疫扩散法和 SDS- PAGE法分析 ,其纯度达免疫纯和电泳纯 (90 %～ 95% )。生物学实验结果表明 :纯化 Fn能促进培养基中肾小球细胞附壁和生长。并阐述其临床应用价值 ,为临床应用作准备     

人胎肝GGT纯化及其抗血清制备

以生化方法从人肥肝组织中提取及纯化人胎肝ＧＧＴ。用此酶作抗原免疫新西兰兔，满意地制备了兔抗人胎肝ＧＧＴ抗血清。应用火箭免疫电泳酶呈色法。显示此抗血清与人胎肝ＧＧＴ抗原及原发性肝癌病人血清均具有很好的特异性免疫反应。     

血浆纤维结合蛋白与巨噬细胞吞噬功能相关性初探

本文用火箭电泳法测定了17名慢性阻塞性肺疾病(CPPD)患者血浆纤维结合蛋白(血浆Fn)含量,同时用皮疱法则定其巨噬细胞呑噬功能,结果表明,血浆Fn水平与巨噬细胞呑噬功能呈高度正相关(r=0.922)。因此,我们认为测定血浆Fn水平可作为反映单核巨噬细胞系统能的无创伤性指标,有一定的实用价值。     

单克隆抗体F36/22分离和检测小鼠移植性乳腺肿瘤抗原的研究

作者应用免疫印迹法检测到单克隆抗体F36/22能识别小鼠移植性乳腺癌抗原.用SepharoseCL-4BA单克隆抗体F36/22免疫亲和层析法分离纯化了BALB/c小鼠移植性乳腺肿瘤抗原,固相放射免疫法检测纯化188.4倍,SDS-PAGE及免疫印迹检测其分子量为60kd。     

肺癌相关蛋白N35的纯化及鉴定

目的利用免疫亲和层析技术用自行制备的抗人肺癌单克隆抗体N35纯化其相应的肺癌相关抗原N35蛋白并对其进行鉴定。方法培养P35杂交瘤细胞,收集培养上清,利用Protein A-Sepharose CL-4B亲和层析法纯化单抗N35;用纯化得到的单抗与溴化氰活化的Protein A-Sepharose CL-4B制备免疫亲和柱;再将肺腺癌GLC-82细胞的裂解液通过此免疫亲和柱,纯化肺癌相关抗原N35;最后,对纯化得到的N35蛋白进行Western blot鉴定。结果应用Protein A-Sepharose CL-4B亲和层析法纯化得到纯度较高的单抗N35蛋白;应用溴化氰活化的Protein A-SepharoseCL-4B免疫亲和层析法纯化得到相对分子质量80 000的肺癌相关蛋白N35。结论纯化得到的肺癌相关蛋白N35是一种新的肿瘤相关抗原,可为肺癌的生物治疗提供新的靶点。     

日本血吸虫成虫67kD蛋白的分离与鉴定

目的 :分离日本血吸虫感染及免疫血清识别的成虫抗原 (AWA)中的特异蛋白带 ,为血吸虫病免疫诊断提供新的抗原分子。方法 :免疫印迹法分析AWA的特异蛋白带 ,电泳层析法分离靶抗原。结果 :获得了感染血清和免疫血清识别的 6 7kD蛋白。结论 :电泳层析法是一种分离血吸虫抗原的有效方法     

败血症大鼠肺纤维连接蛋白含量与分布的变化

作者对25只盲肠结扎后败血症大鼠体内的纤维连接蛋白(Fn)进行了研究。血浆Fn(pFn)用免疫火箭电泳法,组织中(肝、肺)可浸出的Fn含量用ELISA和Fn在肺中的定位分布用间接免疫荧光法检测。结果发现,盲肠结扎后22h肝中Fn含量明显减少(P<0.05),肺组织中Fn含量与炎症轻重有关,炎症轻微处Fn含量比正常及假手术对照明显减少(P<0.05),炎症严重处Fn明显增加(P<0.05)。但此时pFn增高。肺中的Fn抗原主要集中在微血管周围,其分布与嗜中性白细胞的浸润一致。作者认为,上述变化与败血症时肺功能衰竭的发生有一定关系。     

日本血吸虫成虫31/32KD抗原的纯化及其免疫化学特性

本文采用超凝胶柱层析法分离纯化日本血吸虫成虫31/32KD抗原。分离的抗原经银染色及免疫印迹法分析证明已达免疫纯及生化纯级。该抗原PAS染色呈阴性,经过碘酸钠处理后不失去活性,在琼脂糖凝胶电泳中趋向阳极。鉴于血吸虫成虫31/32KD组分是一种主要血清学抗原,它的分离纯化为改进和标化血吸虫病的诊断提供了条件。     

Purification of Fibronectin in Human Plasma and the Preparation of Its Antiserum

The techniquc of purification of plasma fibroncctin and preparation of its antiserum is re-ported in this paper.Blood plasma was passed through an affinity column of gclatin-Sepharose 4B,fol-lowed by passing throughia column of Scphadex G200.Fibronectin with high purity was obtained.The prepare fibronectin serum.It was found that there were not only specific immune reactions be-tween the anti-human fibronectin serum and hyman fibronectins,but also cross reactions between theanti-serum and the fibronectin from other animals.The serum can be used for the study ofimmunohistochernistry of the fibronectin.     

明胶柱纯化人血浆纤维连结蛋白实验条件的研究

用明胶与溴化氢活化琼脂糖珠４Ｂ亲和层析柱,对从人血浆中大规模提纯具有生物活性纤维连结蛋白（ＥＮ）的实验方法进行了研究,优选了加样最上、收得率高的较理想提取方法。实验表明：在明胶亲和柱体积不变的条件下,ＦＮ的吸附量与血浆在柱内的停留时间和血浆上柱总量有关。     

超高效液相色谱法测定人体血浆中水杨酸含量的方法学研究

目的：建立人体血浆中水杨酸含量的超高效液相色谱（ultra performance liquid chromatography,UPLC）测定方法。方法：采用Waters Spursil C18（100 mm×2.10 mm,3μm）色谱柱;乙腈∶水（含0.2%磷酸）=20.7∶79.3为流动相,用前经0.22μm的滤膜过滤,超声脱气;流速为0.3 ml/min;检测波长为304 nm;柱温为35℃,进样量5μl。结果：此方法最低检测浓度为0.018 mg/L,线性范围为0.018～28.200 mg/L,方法平均回收率在95.52%～104.63%,日内及日间精密度的相对标准差均〈10%。结论：该方法简便、快速、重现性好,可用于临床血药浓度监测和复方制剂的药代动力学和生物利用度研究。     

多粘蛋白的分离及其与纤粘蛋白的比较

用明胶、肝素和精氨酸亲和柱等从猪血浆中分离得到一明胶亲和蛋白Polynectin(PN)。此蛋白与精氨酸的亲和性很高,借此与FN分开,经聚丙烯酰胺凝胶电泳证明,PN的分子量为450 000,由多个相同的小亚基连接形成。免疫双扩散和ELISA结果表明,PN与FN之间无免疫交叉反应,PN只存在于猪血中,人及其它动物(牛、羊,小鼠和大鼠)血中无PN。PN不具有促中国地鼠卵巢(CHO)细胞贴壁活性。提示PN是一种不同于FN的大分子糖蛋白。此外,用无PN的FN免疫兔,制得高效价FN抗血清(1:32),并进一步纯化制得亲和层析纯FN抗体.     

白桦脂酸血浆蛋白结合率的测定

目的建立白桦脂酸在大鼠血浆、人血浆和牛血清白蛋白中蛋白结合率的测定方法。方法采用平衡透析法测定白桦脂酸血浆蛋白结合率,利用HPLC测定血浆中白桦脂酸浓度,测定并比较不同血浆中白桦脂酸的血浆蛋白结合率。采用DiamonsilTMC18柱,柱温为30℃,流动相为乙腈-0.2%乙酸(75∶25),流速为1.0 mL/min,检测波长为203 nm。结果在50～100 mg/L,药物浓度对血浆蛋白结合率无显著影响,白桦脂酸与大鼠和人的血浆蛋白结合率存在显著性差异,白桦脂酸与人血浆蛋白结合率高于与大鼠血浆蛋白结合率。结论白桦脂酸与血浆蛋白具有较强的结合。HPLC法测定白桦脂酸与血浆蛋白结合率试验具有简便、快速、灵敏与选择性高的特点。     

日本血吸虫天然抗原分子的柱层析分离纯化与鉴定

目的分离纯化日本血吸虫成虫(AWA)和未成熟虫卵(SIEA)可溶性抗原中的单一蛋白,为血吸虫病免疫诊断、预防提供新的抗原分子。方法柱层析分离纯化成虫和未成熟虫卵可溶性抗原,SDS—PAGE及银染色进行分析鉴定。结果得到了三种不同大小血吸虫分子抗原AwA18000u,SIEA42000u,SIEA130000u。结论实验证明柱层析法是一种快速分离纯化血吸虫单一组分抗原简单而有效的方法。     

湖北钉螺与日本血吸虫、斯氏狸殖吸虫及华枝睾吸虫共同抗原的研究

本文研究了湖北钉螺与日本血吸虫、斯氏狸殖吸虫、华枝睾吸虫的共同抗原。对流免疫电泳和免疫电泳均发现抗湖北钉螺血清可与日本血吸虫15天龄、18天龄童虫,42天龄成虫,斯氏狸殖吸虫成虫,华枝睾吸虫成虫抗原反应。而中和血清和正常兔血清则不能与这些抗原反应。说明这些吸虫与湖北钉螺确有共同抗原。作者认为不宜用钉螺抗原取代血吸虫抗原诊断血吸虫病。目前对共同抗原在吸虫幼虫免疫逃避中的作用下定论还为时过早,但吸虫与螺类在发展进化史上似有亲缘关系。     

类模板分子印迹整体柱识别人血清中甲氨蝶呤的研究

目的制备分子印迹整体柱,实现对人血清中甲氨蝶呤(MTX)的选择性富集,为其HPLC法分析提供便利。方法以三聚氰胺为类模板,甲基丙烯酸为功能单体,二甲基丙烯酸乙二醇酯为交联剂,聚乙二醇和甲醇为致孔剂,采用原位聚合法在不锈钢空色谱柱管内合成了分子印迹(MIP)整体柱。以该MIP柱为色谱柱,通过HPLC法分析考察其选择性识别MTX的效果。结果在依次经过甲醇-水(体积比1∶9)和乙腈-水-乙酸(体积比96∶3.5∶0.5)2种流动相的洗脱后,MTX依然能在MIP柱上保留而不出峰,人血清样中的基质干扰成分则能被完全清除,最后吸附在MIP柱上的MTX可用甲醇洗脱出峰。结论在选定的最佳色谱流动相条件下,制备的MIP整体柱对MTX显示良好的选择性识别作用,同时可将血清中的基质干扰组分除去。该MIP柱有望用于在线或离线选择性富集人血样中的MTX,为RP-HPLC法提供了便利。     

毛细管气相色谱法测定血浆中的硝苯地平

目的 介绍一种快速、有效、高灵敏度的用毛细管气相色谱法测定人血浆中硝苯地平的方法。方法 采用SE－30毛细管色谱柱(0．24mm×30m),岛津63Ni电子捕获检测器,安定作内标。在碱性条件下,用乙醚从血浆中提取硝苯地平,在气相色谱上直接进样。结果硝苯地平线性范围为1～1000mg／ml(r=0．9999),最低血浓度检出限0．192pg／ml,绝对回收率95％左右。精密度考察硝苯地平日内、日间相对偏差均小于5％。硝苯地平在暗室红灯下,浓度基本不变。结论本法适合临床分析研究和应用。     

A study on content and distribution of plasma and tissue fibronectin in rats using ELISA and immunofluorescence

Summary The content of plasma fibronectin and tissue extractable fibronectin in normal rats was measured with rocket immunoelectrophoresis and ELISA in the present study. The difference in tissue fibronectin distribution in various organs and the correlation between distribution and content of fibronectin have been studied. We suggest that tissue fibronectin may be a complex component. The change in plasma fibronectin reflects a dynamic balance existing between the tissue fibronectin pool and plasma fibronectin pool in normal rats. Plasma fibronectin and tissue fibronectin concentrations are not static, and they can only be maintained in a relatively stable state in normal rats.