PCR体外扩增法和SPRIA法在乙肝病毒检测中的运用

目前,全世界的慢性乙肝病毒（HBV）感染者大约3.5亿,其中30%~40%为慢性乙型肝炎患者,每年大约有100万慢性乙肝患者因肝衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌死亡。随着分子生物学技术的迅速发展,PCR体外扩增法定量检测HBV-DNA技术在乙肝抗病毒诊断和治疗中得到运用,乙型肝炎病毒的传播控制和治疗效果得到了一定的改进。本文将300例乙型肝炎病毒携带者HBV-DNA检测阳性血清标本,     

RIA在献血员体检中的应用

输血在临床抢救、手术和治疗病人起着重要的作用,且献血员的血液质量对受血者的关系非常密切。在世界范围内每年约采集全血8000万单位。人们很早就认识到输血存在着危险性,但随着ABO血型的鉴定、容器的消毒、可耐用的设备及冷藏贮存的出现,提高了输血的安全性,但受血者因输血而传染上某种疾病的问题仍未解决,因此,对供血者和病人的安全来说,确保挑选出可靠供血者的这一步骤比任何实验室检测更为主要。一、HBsAg与抗-HBc检测:通过血液和血液制品传播肝炎病毒,在行心脏直视手术的病人中发病率高至14～20％,低为2～8％。用大混合血浆制备,且未作灭活处理的凝血因子Ⅷ浓缩物治疗的血友病患者输血后肝炎(PTH)是一种常见并发症。对献血员肝炎病毒的筛选中检测HBsAg琼脂扩数法     

PCR方法检测献血员巨细胞病毒感染

ＰＣＲ方法检测献血员巨细胞病毒感染河北省人民医院遗传室（石家庄，０５００５１）郝玉宾，李洪云，郭文潮，张德峰，余小平血库刘甲俊指导朱俊真人巨细胞病毒是双链ＤＮＡ病毒，系疱疹病毒属。该病毒常与人体自身免疫和移植物排斥相关［１］。我们采用聚合酶链反应（Ｐ...     

提高筛选献血员ALT标准对献血员初复检合格率的影响

目的 观察改变筛选献血员ALT临界值对初复检合格率的影响.方法 对初复检与快速筛选方法进行直线相关分析并得出回归方程,然后拟定提高快速筛选临界值,观察初复检合格率.结果 初检值=-1.1886 +06137×快速值;复检值=-1.4018 +0.4821×快速值,快速筛选临界值提高5U和10U,初复检合格率均为100％.献血员合格率也显著提高.结论 将献血员快速筛选临界值初复检的值增加5～10U,在不影响血液的质量前提下,可显著增加献血员合格率.     

高灵敏度乙肝HBV DNA检测在乙肝诊疗中的应用及临床意义

目的探讨高灵敏度乙肝HBV DNA检测在乙肝诊疗中的应用及临床意义。方法收集23例普通荧光定量PCR(常规)检测HBV DNA为阴性患者的血清,采用高灵敏度乙肝HBV DNA检测,将检测数据进行整理,与其临床实验室资料相结合,进行综合分析,归纳总结。结果23例国产乙肝荧光定量 PCR检测均为阴性患者,使用高灵敏度乙肝HBV DNA检测结果为13例阳性（最低检测限20IU/mL）,阴性10例,阳性检出率为56.52%,显然高灵敏度乙肝 HBV DNA检测的灵敏度高于常规检测方法。结论高灵敏度乙肝HBV DNA检测,其检测敏感性远高于常规检测方法,能检测到体内低水平的 HBV DNA,结合患者其他实验室资料及用药史综合分析,对乙型肝炎诊断和治疗具有重要的指导意义。     

SPRIA法检测360对母婴乙肝八项指标结果的调查分析

通过母婴配对HBV八项血清指标检测,探讨产妇HBV血清指标在不同的感染模式下,对胎儿的传染性。用固相放射免疫的方法(SPRIA),对母亲血清及胎儿脐血中的HBsAg、抗-HBs、HBcAg、抗-HBc、HBeAg、抗-HBe、PHSA-R(聚合蛋白受体)和抗-HBc-IgM等八项进行检测。结果表明,母体出现一项指标以上阳性者170例,占47.2％(170/360),将170例阳性血清归类分析,出现15种感染模式,其中HBsAg阳性者为18例,与之对应的胎儿脐血HBsAg阳性者16例,阴性者2例,说明垂直感染率高达88.8％(16/18)。此外,有2例胎儿脐血HBsAg阳性,而母亲血清仅有抗-HBc阳性。有1例胎儿脐血HBsAg阳性,但母亲HBV八项指标全部阴性。     

应用PCR和ELISA法检测血清HBV的结果分析

在1985年美国Cetus公司遗传部Mullis等发现聚合酶链反应(PCR)技术并用其可检测到fg水平后,从基因测得了HBV DNA与HBV血清学标志物的相互关系.本文对本地区1368例(名)各类患者及正常人血清HBV DNA、HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb进行了检测,现将其结果报道如下. 材料与方法 1 HBVDNAPCR检测采用美国MJ公司生产的PTC-100型DNA扩增仪,PCR引物由上海复生生物工程研究所提供,严格按说明书操作.     

IL-32在HBV感染者检测中的诊断价值

HBV感染时肝脏参与自然性免疫和适应性免疫之间动态的相互作用,自然免疫参与肝内炎症,反复的肝脏炎症可导致肝纤维化和肝硬化甚至肝衰竭。近来研究表明,IL-32有促炎症因子的特性,可通过激活NF-κB和P38MAPK途径产生诸如TNF-α、IL-1β、IL-6等细胞因子。这种特性表明,IL-32可能在炎症中起放大效应[1];     

Au纳米颗粒HBV DNA基因探针的制备及其在目视化检测HBV DNA中的应用

制备金(gold,Au)纳米颗粒乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(hepatitis B virus deoxynucleic acid,HBV DNA)基因探针,研究其在目视化检测HBV DNA中的应用。Au纳米颗粒通过金-硫(Au-S)共价键结合烷氢硫醇修饰的寡核苷酸,制备检测探针。用荧光标记法检测Au纳米颗粒表面寡核苷酸的覆盖率和与其互补的寡核苷酸的杂交效率。检测探针与固定在尼龙膜上的捕捉探针构成双探针,用斑点杂交法检测HBV DNA,加入银离子(Ag+)-对苯二酚液染色观察结果。制备的Au纳米颗粒粒径为(12±5)nm,分散良好,在520nm有最大吸收峰,经寡核苷酸修饰后,最大吸收峰改变为524nm。Au纳米颗粒表面寡核苷酸的最大覆盖率为(132±10)条,最大杂交效率为(22±3)%。在尼龙膜上用斑点杂交法可检出低至10fmol的合成靶DNA,可目视化检出乙肝患者血清中HBV DNA的PCR产物。Au纳米颗粒HBV DNA基因探针可用于目视化检测HBV DNA,此方法具有敏感性高、特异性好、简单、价廉的特点,可望在许多领域,尤其是在多基因检测芯片上有潜在的应用价值。     

反义技术在抗HBV感染中的应用

反义技术是近些年来随着现代分子生物学技术的发展而产生的新的生物医学治疗技术.它采用反义核酸分子抑制、封闭或破坏靶基因组的技术手段,包括反义寡核苷酸、核酶及RNA干扰等.反义分子通过与靶基因异性互补配对结合,阻断靶基因的复制、转录或翻译过程,从而发挥抗病毒作用.针对乙型肝炎病毒的反义技术也有了广泛而深入的研究.根据反义技术在分子、细胞以及动物水平上的研究表明:反义技术能够高效、特异地抑制HBV的复制与表达.     

膜抗原的快速荧光检测及其在筛选单抗中的应用

免疫荧光技术已广泛地用于膜表而抗原的研究,但由于费时,限制了大规模推广使用。本文介绍一种适于大规模试验的、简便、快速的方法及其在筛选单克隆抗体(McAb)中的应用。试验中选用的细胞系为人急性淋巴母细胞白血病细胞系(REH、EBV诱生的B淋巴母样细胞系(LHN_(13))及急性T淋巴母细胞白血病衍化的细胞系(Peer)等。按常规法免疫小鼠,进行细胞融合。共进行四次杂交,     

多色荧光PCR法检测HBV耐药位点突变

目的 利用多色荧光PCR技术,建立一套快速检测HBV耐药位点突变的方法 ,并对临床收集的服药患者血清进行耐药位点检测.方法 建立2个反应体系,每个反应体系包含4个耐药位点.对新建的多色荧光PCR法进行灵敏度和特异性分析,并对30例临床收集的服药患者血清进行耐药检测.结果 构建了多色荧光PCR检测HBV耐药位点的体系,其特异性较好,分析灵敏度可达1×103拷贝/ml.30例样本中检测到YVDD 2例（占6.67%）,YIDD 1例（占3.33%）;1896位点变异5例,占总数的16.67%.其他位点未检测到耐药突变.结论 所构建的多色荧光PCR检测体系为临床医院提供快速、简便的HBV耐药位点突变检测手段.HBV基因前C区的1896位点变异率较高.     

应用聚合酶链反应技术检测肝组织中的HBV－DNA

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，对４２例肝活切组织石蜡切片中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ进行检测，并与乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）的免疫组织化学及血清学检测进行比较，ＨＢＶ－ＰＣＲ阳性率为７３．８％，高于组织及血清ＨＢｓＡｇ阳性率（分别为５９．５％和５０．０％）。３例病理形态呈肝炎改变，而血清ＨＢｓＡｇ（─）的肝组织中有２例检出ＨＢＶ－ＤＮＡ，提示ＰＣＲ的高度敏感性和准确性。８３．３％的门脉性肝硬变和８７．５％的肝细胞癌组织中ＨＢＶ－ＰＣＲ呈阳性，进一步证实了上述两病与ＨＢＶ的关系密切。我们还发现肝细胞淤胆患者ＨＢＶ感染率较高，ＨＢＶ－ＤＮＡ及组织ＨＢｓＡｇ阳性比例各为６／９和４／８。     

ELISA法和RT-PCR法在麻疹病毒检测中的应用比较分析

目的 探讨酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-PCR)对疑似麻疹病例的麻疹病毒的检测,为疾病的尽早确诊及治疗提供实验依据.方法 以上海市宝山区2014年4月至2015年12月的250例疑似麻疹病例为研究对象,采集其血清标本和咽拭子标本,分别应用ELISA法检测患者血清中的麻疹特异性的免疫球蛋白M(immunoglobulin M,IgM)抗体和RT-PCR法检测咽拭子中麻疹病毒的核酸.结果 250例疑似麻疹病例,排除风疹病毒阳性的34例病例,其中麻疹病毒(measles virus,MV) IgM抗体呈阳性的有80例,阳性率为37.04％;MV RT-PCR呈阳性的有128例,阳性率为59.26％.RT-PCR的检测阳性率显著高于IgM检测(x2=41.14,P＜0.001).结论 RT-PCR法可快速诊断麻疹病毒的病原学,且对出疹初期麻疹IgM呈阴性的病例可进～步确诊,是一种有效可靠的方法.     

McAb-ABC免疫组化法检测CEA在胆囊癌诊断中的应用

CEA为消化道恶性肿瘤的重要标志之一。为探讨其在胆囊癌诊断中的意义,本文采用抗CEA McAb-ABC免疫组化染色法,检查了101例各种胆囊组织切片。计:不同组织类型和分化程度的胆囊癌63例(其中20例可见癌旁组织),胆囊粘膜上皮异型增生24例(其中轻度12例,中度7例、重度5例)及正常胆囊14例(胎儿4例,成人10     

免疫定向双扩散法及其在HBsAg检测中的应用

在血清学反应中为了提高免疫双扩散法的灵敏度,我们吸取了细管双扩散法灵敏度较高的优点,制造了定向扩散板。通过有机玻璃的隔绝,迫使标本孔和阳性对照孔中的抗原(或抗体)只能向中央孔方向扩散,并加大标本孔直径,使凝胶中有效的抗原(或抗体)浓度提高,从而提高了检测的灵敏度,同时保留了免疫双扩散法的简便、特异性强、重复性好等优点。     

TRFIA法检测血清F-PSA在前列腺癌诊断中的应用

探讨血清游离PSA(F-PSA)、总PSA(T-PSA)和游离/总(F/T)PSA比值测定对良恶性前列腺疾病鉴别诊断的价值. 采用全自动时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)进行检测. T-PSA在2-20ng/mL范围内的患者共86例, 根据术后病检结果分为两组: 前列腺增生(BPH)症组68例, 前列腺癌组18例, 分析比较两组患者血清F-PSA、T-PSA和F/T PSA比值.结果是: ①前列腺癌组的F-PSA、T-PSA和前列腺增生组的F-PSA、T-PSA皆无显著性差异(P＞0.05), 但F/T PSA比值, 在前列腺癌组明显低于前列腺增生组(P＜0.01).②以F/T PSA=0.18作为诊断阈值, F/T PSA比值对前列腺癌诊断的灵敏度、特异性和阳性预测值分别为85%、72.5%、43.6%.结论是: F/T PSA比值测定有利于前列腺癌与前列腺增生症的鉴别诊断; 当T-PSA在2-20ng/mL范围时, 选用0.18作为诊断阈值有较大的临床应用价值.     

筛选与确诊试验在检测香港海鸥菌中的建立与应用

目的建立简便、快速、准确、特异的香港海鸥菌实验室诊断技术。方法采集淡水鱼类、胃肠炎腹泻患者新鲜粪样,接种于改良头孢哌酮MacConkey（CMA）培养基,对典型菌落分别进行氧化酶、触酶、三糖铁（TSI）3项筛选试验和常规生化鉴定,凡氧化酶、触酶试验阳性以及三糖铁（TSI）试验阴性的菌株,采用特异性PCR检测确诊;通用引物扩增16SrRNA并与香港海鸥菌HKU1株进行同源性分析。结果在92份淡水鱼样品和211份胃肠炎腹泻患者粪样中,共检出香港海鸥菌11株和1株,阳性率分别为11.96%（11/92）和0.48%（1/211）。筛选与确诊试验和常规生化试验的检测结果一致,符合率为100%（12/12）。分离的香港海鸥菌16SrRNA序列与HKU1株同源性在99.5%～100%之间,仅差1～2个碱基。结论本文建立的筛选与确诊试验适用于香港海鸥菌的诊断。