Evaluation of MLPA for the detection of cryptic subtelomeric rearrangements

Chromosomal rearrangements involving the telomeres are implied as a significant cause of idiopathic mental retardation. The most frequently used technique to detect these rearrangements was fluorescent in situ hybridization (FISH), an expensive and labor-intensive technique. One of the most promising alternative techniques is multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA). Here, the authors present the evaluation of a double set of probes (the SALSA P036, P019, and P020 human telomere test kits) on a series of 95 patients and 22 normal controls. Overall, 34 patients had been studied by telomeric FISH and MLPA, which was demonstrated to be a reliable method to detect essentially all subtelomeric rearrangements characterized by FISH. In addition, in these 34 patients, 13 dose imbalances were detected by MLPA, but not by FISH analysis. Overall, 12 alterations were observed only with one of the two sets, and they corresponded to polymorphic variants, as they were inherited from healthy parents or also appear in normal controls. The remaining 61 patients were initially studied with SALSA P036, and any putative dose alteration was confirmed with the two other kits and FISH. In the whole series, the authors found 9 dose imbalances evidenced with 2 MLPA kits and confirmed by FISH, representing 10% of patients with subtelomeric rearrangements. On the other hand, one small duplication at 14q11 may be clinically relevant as it appears de novo in one patient. In conclusion, MLPA can be considered a quick, sensitive, cost-effective, and easy method to screen for subtelomeric rearrangements, but any finding based in the testing of one probe should be confirmed by other sources.     

提上睑肌缩短术+睑板部分切除术治疗中重度上睑下垂患者的疗效及安全性分析

目的分析提上睑肌缩短术+睑板部分切除术治疗中重度上睑下垂患者的疗效及安全性.方法选取我院2017年6月~2019年5月收治的中重度上睑下垂患者86例,依据随机数字表法分为2组,即对照组(43例)、研究组(43例),其中对照组行提上睑肌缩短术治疗,研究组行提上睑肌缩短术、睑板部分切除术联合治疗,对比两组疗效、并发症发生状况、上睑缘高度对称情况以及术前、术后1个月、6个月眼睑状况[上睑缘到瞳孔中点距离(MRD)、睑裂高度、上睑回退量].结果研究组总有效率为83.72%(36/43),高于对照组62.79%(27/43,P<0.05);研究组上睑缘高度对称优良率为97.67%(42/43),高于对照组72.09%(31/43,P<0.05);两组术后1个月、6个月MRD大于术前,睑裂高度小于术前(P<0.05);术后1个月、6个月,研究组上睑回退量小于对照组(P<0.05);研究组并发症发生率对比,研究组11.63%(5/43)小于对照组30.23%(13/43,P<0.05).结论中重度上睑下垂患者采用提上睑肌缩短术联合睑板部分切除术治疗效果显著,可明显改善上睑缘高度对称度以及眼睑状况,减少并发症发生,安全性高.     

常规细胞遗传学检查联合多重荧光原位杂交技术确定急性白血病患者复杂核型异常

目的 探讨多重荧光原位杂交(M-FISH)技术在急性白血病(AL)患者复杂核型异常和标记染色体检测中的应用价值.方法 对11例常规R显带检测显示具有复杂核型异常和标记染色体的AL患者应用M-FISH技术确定复杂染色体重排和标记染色体的组成,识别并确定微小易位和隐匿易位.结果 11例AL患者应用常规细胞遗传学(CC)技术共检出27种染色体数目异常和41种结构异常.CC技术检出的3种染色体增加和9种染色体丢失以及12种结构异常与M-FISH分析结果一致,CC技术检出的15种染色体丢失经M-FISH证实为衍生染色体,M-FISH还检出3种CC检查未发现的染色体数目增加.CC检查所检出的其余29种结构异常(包括17种标记染色体)的性质被M-FISH进一步明确.M-FISH共检出33种结构重排,有6种异常未见文献报道,分别为t(5q-;16)(?q14;q24)、der(9)(Y::9::Y::9)、der(7)(7::8::9)、ins(20;21)、der(11)(11::21::20)和der(3)t(3p-;13)(3p-;q21),这些复杂染色体重排主要由染色体不平衡易位所致.复杂核型异常几乎涉及所有染色体,在AML患者以涉及17、5、7、15和11号染色体的异常较为常见;在ALL患者则以涉及8、9、14和22号染色体的异常较为多见.结论 联合应用CC和M-FISH检查可以提高CC核型分析的分辨率,对伴复杂核型和标记染色体的AL具有一定的临床应用价值.     

FISH检测人端粒酶RNA基因扩增预测宫颈病变发展趋势

目的 分析探讨hTERC基因在不同程度子宫颈病变脱落细胞中的表达及对早期宫颈病变筛查的意义.方法 采用FISH检测120名正常子宫颈脱落细胞、86例子宫颈上皮CIN及14例子宫颈鳞状细胞癌脱落细胞hTERC的表达情况,并分析hTERC的表达与宫颈病变发展的相关性.结果 hTERc基因在正常子宫颈脱落细胞、炎症或伴湿疣组宫颈上皮CIN Ⅰ期、CIN Ⅱ期、CIN Ⅲ期及SCC组中的阳性表达率分别为1.7%(2/120)、2.6%(1/38)、55.6%(10/18)、87.5%(14/16)、100.0%(14/14)和100.0%(14/14).hTERC基因阳性表达率在SCC/CIN m期与CIN Ⅰ期/CIN Ⅱ期的差异有统计学意义(P=0.01);CIN Ⅰ～Ⅲ期组与健康对照组比较,其阳性表达率差异也具有统计学意义(X~2=113.52,P＜0.01);hTERC基因在CIN Ⅲ期和SCC组的阳性表达率用直接概率检验,差异无统计学意义(P=1.00),但随着病变加重,SCC组多倍体的拷贝数显著增加(hTERC基因扩增杂交信号≥3:3的细胞数占总异常细胞数的比例在CIN Ⅰ期、CIN Ⅱ期、CIN Ⅲ期和SCC组中分别为6.12%、7.98%、28.07%和33.97%),且呈渐进性上升趋势.结论 hTERC基因在CIN和SCC中的表达异常,且随病变程度增加阳性表达率增加,hTERC基因可作为SCC早期筛查的生物遗传学监测指标.     

420nm强脉冲光结合水光注射治疗中重度痤疮的有效性及对GAGS评分的影响研究

目的 420nm强脉冲光联合水光注射治疗中重度痤疮疗效分析.方法 以随机样本抽样法,在我院收治的94例中重度痤疮患者中随机分为对照组、观察组,各47例,对照组:单纯采用420nm强脉冲光治疗,观察组:应用420nm强脉冲光联合水光注射治疗,对比两组治疗有效率、血清因子水平、皮肤屏障功能及痤疮综合分级系统(GAGS)评分...     

乳腺癌中不同克隆号HER-2抗体IHC与FISH检测结果比较

目的 3种不同克隆号人表皮生长因子受体2(HER-2)抗体的免疫组织化学(IHC)检测结果与荧光原位杂交(FISH)检测结果进行比较,为实验室选择合适的HER-2抗体提供依据。方法选择3种不同克隆号的HER-2抗体,对268例浸润性乳腺癌标本进行检测,并与HER-2基因的荧光原位杂交检测进行比较。结果 HER-2的3种抗体的结果分别为克隆号SP3IHC结果3+66例;克隆号EP3IHC结果3+53例;Polyclonal Her-2抗体IHC结果3+80例,差异有统计学意义(P0.05)。与FISH结果的一致性Kappa值分别为0.76、0.67、0.56。结论 HER-2的IHC检测以选择单克隆抗体优先,建议优先选择克隆号SP3抗体。     

FISH技术及细胞学技术检测尿脱落细胞对膀胱尿路上皮肿瘤诊断价值研究

目的：比较荧光原位杂交（FISH）技术及细胞学技术检测尿脱落细胞对膀胱尿路上皮肿瘤诊断价值。方法采用CSP3/CSP7组合探针和GLPp16/CSP17组合探针对膀胱尿路上皮肿瘤疑似患者的尿脱落细胞进行FISH检测,同时采用细胞学技术检测尿脱落细胞,比较2种方法的灵敏度和特异度。结果FISH技术筛查膀胱尿路上皮肿瘤的灵敏度和特异度分别为92．5％和85．0％,细胞学技术的灵敏度和特异度分别为27．5％和90．0％。FISH技术的灵敏度显著高于细胞学技术（P＜0．05）,但2种方法的特异度差异无统计学意义（P＞0．05）。结论FISH技术有望成为筛查膀胱尿路上皮肿瘤的新方法。     

荧光原位杂交技术与常规染色体分析检测骨髓增生异常综合征患者+8和20q-异常

目的 比较常规细胞遗传学分析(CCA)及荧光原住杂交(FISH)两种技术在骨髓增生异常综合征( MDS)患者8号和20号染色体异常检测中的应用.方法 40例MDS患者,CCA法采用骨髓短期培养法,核型分析采用R带技术.FISH法采用间期FISH,选取探针组合检测+8和20q-.结果 采用CCA法,+8和20q-检出率分别为7.5％(3/40)和7.5％ (3/40),而利用FISH技术,+8和20q-检出率分别为12.5％(5/40),20.0％ (8/40).采用FISH可以提高8号和20号染色体异常的检出率,但两种方法之间的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CCA结合FISH能提高MDS患者染色体异常的检出率,与CCA比较,采用组合探针的FISH更为敏感和特异.     

不同浓度氨基酮戊酸光动力疗法治疗面部中重度痤疮患者的有效性及安全性比较

目的 探讨不同浓度氨基酮戊酸光动力疗法治疗面部中重度痤疮患者的有效性及安全性.方法 选取2018年1月至2019年12月我院皮肤科收治的150例面部中重度痤疮患者,按照随机数字表法将其分为A组、B组、C组,各50例.A组、B组、C组分别采用5％、10％、15％氨基酮戊酸外敷,再采用光动力治疗仪进行光动力治疗.比较三组的...     

FISH和IHC检测乳腺癌患者HER2/neu基因影响因素的研究

目的 观察乳腺癌石蜡包埋组织荧光原位杂交(FISH)和免疫组化(IHC)检测乳腺癌患者HER2/neu基因状态,比较不同切片方法及不同结果判读人员的经验区别.方法 55例乳腺癌石蜡包埋组织分组切片和观察判读,观察1组:由技术人员选定区域切片,平行检测HER2/neu基因状态;观察2组:先切片做HE染色,由初级病理医师根据病理图像选定区域后切片,平行检测HER2/neu基因状态,并由初级病理医师分析结果;观察3组,由中、高级病理医师根据病理图像选定区域后重新切片检测,判读分析.结果 观察1组和观察2组,IHC(-)和IHC(1+)与FISH检测一致性较好,IHC(2+)和IHC(3+)与FISH检测的相符率分别为33.33%/33.33%,50.00%/100.00%;2组的一致性分别为中等和较好(K1=0.478,K2=0.659);共有10例患者入选观察3组,重新切片后,6例患者结果不同,其中3例为取材误差,3例为判读误差,3例取材误差均出现在观察1组.结论 FISH和IHC检测乳腺癌患者HER2/neu基因状态受到制片、结果判读等多种因素影响,实验室应制定标准化的操作程序,严密的质量控制和质量保证措施,才可得到准确而可靠的结果.     

LSI-RB1和LSI-D13S319荧光探针联合检测分析112例多发性骨髓瘤患者染色体13q14缺失

染色体13q14缺失是多发性骨髓瘤(MM)常见的遗传学异常,也是荧光原位杂交(FISH)检测的常规指标。目前针对该片段缺失的商品化序列特异性DNA探针有LSI-RB1(针对13q14.1-14.2区域)、LSI-D13S319(针对13q14.3区域)和LSI-D13S25(针对13q14.3区域)3种。本研究联合应用LSI-RB1、LSI-D13S319探针和间期FISH方法同时检测112例MM患者对应区域的缺失,比较MM患者上述区域缺失率和缺失细胞比例是否存在差异,总结我国MM患者13q14缺失片段大小的特点,以更好地指导临床检测和治疗。结果表明:①LSI-RB1和LSI-D13S319两种探针对MM患者13q14缺失的检出率均为47.3%,检出相符率为100%;如果将缺失的阈值提高至20%,则13q14缺失检出率分别为46.4%和47.3%,检出相符率为98%;②RB-1缺失组缺失细胞比例中位数为72.5%(18%-98%),D13S319缺失组缺失细胞比例中位数为76.5%(22%-98.5%),2种探针检测得出的13q14缺失细胞比例无统计学差异(P=0.38);如果分别将缺失细胞比例≥65%和≥85%定为高比例缺失,比较两种探针对高比例缺失患者的检出率,结果 RB1组有36例(67.9%)和14例(26.4%)为高比例缺失,D13S319组有35例(66%)和19例(35.8%)为高比例缺失,统计学分析显示两种探针对高比例缺失患者的检出率也无显著差异(P分别为0.188和0.439);③53例13q14缺失MM患者均为杂合型缺失,且同时具有上述两个区域缺失,即均为较大片段缺失。结论:本研究中112例MM患者13q14.1-14.2和13q14.3区域缺失、缺失细胞比例和高比例缺失检出率无明显差异,不能根据检测上述两个位点将MM患者划分为不同亚型,在检测13q14缺失时,仅需选择LSI-RB1和LSI-D13S319中1种探针即可。53例13q14缺失MM患者均同时存在13q14.1-14.2和13q14.3两个区域的缺失,提示较大片段缺失是MM患者13q缺失的重要特点之一。