长波紫外线致人皮肤成纤维细胞凋亡和活性氧生成的作用

目的 :分析长波紫外线照射诱发人皮肤成纤维细胞凋亡及活性氧生成的作用。方法 :用长波紫外线照射培养的人皮肤成纤维细胞 ,经流式细胞仪和荧光显微镜检测细胞凋亡情况 ,荧光分光光度计检测活性氧 ,电子自旋共振波谱仪检测自由基。结果 :110～ 12 0kJ·m-2 的UVA照射能够诱导明显的细胞凋亡 ,甘露醇能够拮抗这种作用 ,照射样品中发现活性氧生成增加 ,并检测到了羟自由基信号。结论 :低辐照度UVA(0 .6mW·cm-2 )照射能够诱发人皮肤成纤维细胞凋亡 ,氧化损伤可能在其中发挥着一定作用。     

长波紫外线对人真皮成纤维细胞线粒体损伤的研究

①目的　观察长波紫外线 (UVA)对人真皮成纤维细胞线粒体的损伤作用及其机制。②方法　用辐射强度 1.90 5× 10 -3 J/m2 UVA辐射人真皮成纤维细胞后 ,检测胞浆内活性氧 (ROS)含量、超氧化物歧化酶 (SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH px)活性、线粒体膜电位 (ΔΦM) ,同时观察成纤维细胞的超微结构。③结果　UVA辐射成纤维细胞后 ,细胞浆内ROS含量升高 (t=5 1.71,P <0 .0 1) ,SOD和GSH px活性降低 (t=93.0 0 ,3.87,P <0 .0 1) ,线粒体膜电位降低 ,与未辐射组相比差异有显著性 (t =14 .6 7,P <0 .0 1)。④结论　UVA对线粒体的损伤作用与氧自由基生成及其抑制细胞抗氧化能力有关     

枸杞多糖减轻长波紫外线辐射致人皮肤成纤维细胞损伤的超微结构观察

目的观察枸杞多糖（lycium barbarum polysaccharides,LBP）对长波紫外线（UVA）辐射损伤体外培养人皮肤成纤维细胞超微结构的影响。方法以体外培养的原代人皮肤成纤维细胞为实验材料,采用总剂量为2.4 J/cm2的UVA照射细胞,实验分为对照组、紫外线照射模型组和三个不同浓度LBP保护组（0.2mg.mL-1LBP＋UVA,0.4mg.mL-1 LBP＋UVA,UVA＋0.8mg.mL-1 LBP＋UVA）,应用透射电镜观察各组细胞超微结构的变化。结果 UVA辐照后细胞超微结构发生明显的变化,主要表现为核膜不连续,核内出现团块状染色质,胞浆内线粒体肿胀,空化明显,嵴断裂、溶解,粗面内质网扩张。枸杞多糖预处理可以减轻对线粒体,内质网等细胞器的损伤;且随LBP剂量的升高,辐射损伤程度逐渐减轻。结论 UVA照射可使体外培养的人皮肤成纤维细胞超微结构改变,LBP可以减轻UVA所致人皮肤成纤维细胞的损伤。     

杞叶含药血清对长波紫外线损伤人皮肤成纤维细胞的保护作用

目的探讨不同浓度枸杞叶（LBL）含药血清对长波紫外线（UVA）辐射致人真皮成纤维细胞（HSF）损伤的防护作用及其作用机制。方法采用强度2.8J.cm^-2的UVA照射HSF损伤造模,实验分为空白组、对照组、UVA模型组、空白血清组、UVA＋0.15g.mL^-1LBL组,UVA＋1.5 g.mL^-1LBL组和VitC阳性对照组,用MTT法检测细胞增殖活性,酶生化法检测MDA含量及培养液中LDH漏出量。结果正常大鼠血清不影响HSF功能,UVA照射HSF损伤法可造成HSF增殖活性降低,MDA含量升高,LDH漏出增加,与空白组相比差异有统计学意义（P均〈0.05）;不同浓度的LBL及VitC均能增加细胞的增殖活性,减少MDA含量和LDH的漏出量,但LBL作用更优（P〈0.05）。结论不同浓度LBL对UVA损伤的HSF均有一定的保护作用,其机制可能与LBL的抗氧化作用及促进细胞增殖活性有关。     

枸杞叶含药血清对长波紫外线损伤人皮肤成纤维细胞的保护作用

目的 探讨不同浓度枸杞叶(LBL)含药血清对长波紫外线(UVA)辐射致人真皮成纤维细胞(HSF)损伤的防护作用及其作用机制.方法 采用强度2.8J·cm-2的UVA照射HSF损伤造模,实验分为空白组、对照组、UVA模型组、空白血清组、UVA+0.15g·mL-1LBL组,UVA+1.5 g·mL-1LBL组和VitC阳性对照组,用MTT法检测细胞增殖活性,酶生化法检测MDA含量及培养液中LDH漏出量.结果 正常大鼠血清不影响HSF功能,UVA照射HSF损伤法可造成HSF增殖活性降低,MDA含量升高,LDH漏出增加,与空白组相比差异有统计学意义(P均＜0.05);不同浓度的LBL及VitC均能增加细胞的增殖活性,减少MDA含量和LDH的漏出量,但LBL作用更优(P＜0.05).结论 不同浓度LBL对UVA损伤的HSF均有一定的保护作用,其机制可能与LBL的抗氧化作用及促进细胞增殖活性有关.     

NADPH氧化酶在人真皮成纤维细胞氧化应激损伤中的作用

目的探讨NADPH氧化酶在人真皮成纤维细胞氧化应激损伤中的作用。方法H2O2 构建氧化应激模型,将实验分为正常 组、氧化损伤组和NADPH氧化酶抑制剂（DPI）组,MTT检测细胞活力,DCFH-DA 荧光探针检测细胞内活性氧（ROS）改变, Western blot分析NADPH氧化酶胞膜亚基gp91phox表达变化。结果H2O2 对成纤维细胞的氧化损伤呈时间和浓度依赖,H2O2 700 μmol/L处理24 h后细胞活力下降约40%（P<0.05）,ROS升高2倍（P<0.05）。而抑制剂组细胞活力较氧化损伤组增加20% （P<0.05）,ROS下降至正常水平（P<0.05）。Western blotting结果显示氧化损伤组gp91phox表达随H2O2 浓度逐渐升高,而抑制 剂组表达接近正常水平。结论H2O2 可通过影响NADPH氧化酶特别是胞膜亚基gp91phox引发成纤维细胞氧化损伤。     

APP17肽对糖尿病小鼠脑Tau蛋白的影响

应用免疫组化方法 ,观察对照组、糖尿病组和糖尿病APP1 7肽治疗组小鼠脑内Tau蛋白的分布 ,以探讨APP1 7肽对糖尿病小鼠脑神经元Tau蛋白表达的影响。结果 :用Tau 1单染 ,正常小鼠脑及APP1 7肽治疗的糖尿病小鼠脑压后颗粒皮质及海马阳性反应神经元数目多。糖尿病小鼠只有用蛋白磷酸酯酶 (PP 2B)脱磷酸后阳性反应神经元数目及染色程度才与正常组接近。提示 :糖尿病小鼠脑内正常Tau蛋白表达障碍 ,有过度磷酸化 ,而APP1 7肽可改善Tau蛋白过度磷酸化     

枸杞多糖对中波紫外线致人皮肤成纤维细胞损伤的保护作用

目的探讨枸杞多糖（LBP）对中波紫外线（UVB）辐射致体外培养人皮肤成纤维细胞损伤的保护作用。方法采用强度30mJ／cm^2的中波紫外线照射体外培养的人皮肤成纤维细胞,实验分为对照组、紫外线照射模型组和四个不同浓度LBP保护组,用MTT法检测细胞增殖活性,酶生化法检测细胞内SOD活性、MDA含量,以及培养液中LDH漏出率。结果强度为30mJ／cm^2的中波紫外线可以造成体外培养的人皮肤成纤维细胞增殖活性降低,细胞内SOD活性降低,MDA含量升高,LDH漏出增加,与埘照组相比均P＜0．05。给定浓度范围的LBP能剂量依赖性地增加细胞的增殖活性,增加细胞内SOD活性、MDA含量,减少LDH的漏出。结论紫外线可以造成体外培养的人皮肤成纤维细胞氧化损伤,LBP对UVB致人皮肤成纤维细胞的损伤具有一定保护作用,其机制可能与它的抗氧化作用和促进细胞增殖作用有关。     

APP17肽对卵巢去势大鼠海马神经元凋亡相关因子表达的影响

为研究卵巢去势大鼠海马神经元内凋亡相关因子Fas、Fas L、NFκB、c fos、c Jun的表达及APP1 7肽对这些因子表达的影响 ,将健康雌性Wistar大鼠行双侧卵巢切除手术造模 ,并用APP1 7肽治疗 ,分别用免疫组化方法观察Fas、Fas L、NFκB、c fos、c Jun的表达 ,用TUNEL方法检测神经元的凋亡。结果发现 :卵巢去势大鼠海马神经元Fas、Fas L、c fos、c Jun的表达增高 ,而NFκB的表达则减少 ;使用APP1 7肽治疗后 ,上述蛋白质的表达恢复到正常水平 ,TUNEL检测未发现凋亡神经元。提示卵巢去势大鼠发生了海马神经元的凋亡相关蛋白的改变 ,可能是神经元处于凋亡前状态 ;APP1 7肽可改善卵巢去势大鼠海马神经元内凋亡相关蛋白的表达 ,维持神经元的正常功能     

APP17肽对Aβ导致神经元毒性作用的影响

通过观察β 淀粉样肽 (Aβ)前体蛋白 (APP1 7)中 3 1 9 3 3 5肽段 (APP1 7肽 )对Aβ引起神经毒性作用的影响 ,进一步证实APP1 7肽的神经营养作用。用固相法合成APP1 7肽、Aβ2 5 3 5,高效液相纯化 ,以人神经母细胞瘤株SY5Y为细胞模型 ,分为正常对照组、Aβ2 5 3 51 0 μmol/L损伤组和Aβ2 5 3 51 0 μmol/L加APP1 7肽 1 0 μmol/L保护组。以细胞计数、噻唑蓝 (MTT)代谢率、LDH漏出率、细胞轴突长度、胞体面积、NT 3免疫细胞化学染色和细胞内游离钙离子(Ca2 + )浓度为观察指标。结果 :与正常对照组相比 ,Aβ2 5 3 5损伤组轴突长度和胞体面积均缩小 ,细胞计数减少 ,MTT代谢率降低 ,LDH漏出率升高 ,细胞内Ca2 + 浓度升高 ,而加入APP1 7肽保护后 ,可使上述指标恢复或接近正常。提示 :APP1 7肽具有神经营养和神经保护作用 ,可减轻Aβ引起的神经元损伤。     

Photoprotective effect of the N-terminal 5-mer peptide analog P165 of amyloid precursor protein in human dermal fibroblasts

Background We showed in our previous study that the N-terminal 17-mer peptide of amyloid precursor protein （APP17-mer peptide）,an active peptide segment with trophic and antioxidative effects,protects skin fibroblasts against ultraviolet （UV） damage and downregulates matrix metalloproteinase 1 （MMP-1） expression.The aim of the current study was to explore the protective effects of P165,the N-terminal 5-mer peptide analog of amyloid precursor protein that is resistant to enzymolysis,on UVA-induced damage in human dermal fibroblasts （HDFs）.Methods HDFs were cultured in Dulbecco＆#39;s modified Eagle＆#39;s medium without and with P165 （concentrations were 1,10,and 100 μJmol/L）.Then,15 J/cm2 UVA irradiation was used to obtain the UV-irradiated model.Cell proliferation was analyzed using MTT kit.The collagen type Ⅰ and MMP-1 contents in cell lysate were determined by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）.Fluorometric assays were performed to detect the formation of intracellular reactive oxygen species （ROS） in the cells.Results P165 significantly protected the HDFs against UVA-induced cytotoxicity.Compared with the UVA-irradiated control,1,10,and 100 μmol/L P165 elevated cell proliferation by 14.98% （P〈0.05）,17.52% （P〈0.01） and 28.34% （P〈0.001）,respectively.Simultaneously,10 and 100 μmol/L P165 increased collagen type Ⅰ content （both P〈0.05）.Moreover,P165 treatment （all concentrations） also markedly suppressed the UVA-induced MMP-1 expression （all P〈0.001）.P165 at 1,10,and 100 μmol/L also reduced UVA-induced ROS generation by 11.27%,13.69% （both P〈0.05）,and 25.48% （P〈0.001）,respectively.Conclusions P165 could protect the HDFs against UVA-induced photodamage,including cytotoxicity,and MMP-1 generation.Furthermore,it also increased the collagen type Ⅰ content in the cells.The inhibitory effect on intracellular ROS generation might be involved in these photoprotective effects.Thus,P165 may be a useful candidate in the prevention and treatment of skin photoaging.     

APP17肽对2型糖尿病KK小鼠海马神经元超微结构和InsR、IRS-1的影响

为观察APP1 7肽对糖尿病KKAy小鼠 (以下简称KK小鼠 )脑海马神经元部分信号转导蛋白表达的影响 ,并探讨APP1 7肽对神经元的营养作用 ,将KK小鼠分为正常对照组 (C组 )、糖尿病组 (DM组 )和APP1 7肽治疗组(DM +APP1 7P组 ,给予APP1 7肽皮下注射 )。 1 2周后将 3组小鼠处死 ,心脏取血测血糖和血浆胰岛素 ;灌注固定后 ,取海马送电镜检查并作免疫组织化学染色。结果显示 :①DM组与DM +APP1 7P组的血糖、胰岛素水平比C组显著升高 (P <0 .0 5 ) ,但是DM组与DM +APP1 7P组之间无显著差异 ;②DM组海马神经元胰岛素受体 (InsR)、胰岛素受体底物 1 (IRS 1 )的表达低于C组和DM +APP1 7P组 (P <0 .0 5 ) ;③海马超微结构显示DM组海马神经元线粒体肿胀 ,未见凋亡的神经元 ,DM +APP1 7P组和C组神经元基本正常。提示 :APP1 7肽作为神经营养因子能激活信息转导通路 ,从而对神经元凋亡有改善作用。     

ST段抬高型心肌梗死患者中医证型与超敏C反应蛋白、N端脑钠肽前体水平的相关性研究

目的探讨急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)中医证型与超敏C反应蛋白(hs-CRP)、N-末端脑钠肽前体(NT-pro BNP)的相关性。方法将316例STEMI患者及同期接受的60例健康体检者为研究对象。采用酶联免疫吸附法(ELISA)及电化学发光法(ECL)对STEMI患者及健康体检者hs-CRP、NT-pro BNP进行检测比较。将316例STEMI患者进行中医辨证分型,比较各亚组hs-CRP、NT-pro BNP,将所得数据进行统计,分析hs-CRP、NT-pro BNP与STEMI中医证型相关性。结果 STEMI患者hs-CRP、NT-pro BNP水平显著高于高于健康体检者(P0.05),且STEMI患者各亚组均显著高于高于健康体检者(P0.05)。STEMI患者各中医证型间hs-CRP、NT-pro BNP水平从高到低依次为:气虚血瘀型、痰瘀互阻型、寒凝心脉型、气阴两虚型、心肾阳虚型、心阳痹阻型。无法进行分型的20例患者hs-CRP、NT-pro BNP水平与痰瘀互阻型比较,无显著差异(P0.05)。结论 STEMI中医证型与hs-CRP、NT-pro BNP密切相关,分析hs-CRP、NT-pro BNP有助于中医辨证客观化、揭示证的本质。