LPS致敏巨噬细胞产生O_2~及其信号机制

目的 :探讨LPS诱导的巨噬细胞 (MΦ)致敏及其信号机制。方法 :巨噬细胞样细胞株RAW 2 6 4 .7以10 μg/LLPS预处理 1h后洗去 ,再以 1mg/LPMA、1μmmol/LfMLP、10 0 μg/LLPS、1g/LZyms和 15mg/LMDP攻击 1h ,检测上清中超氧阴离子 (O 2 )的产生 ,并用荧光显微成像系统检测细胞内游离钙离子浓度 ( [Ca2 +]i) ,探讨 [Ca2 +]i与LPS致敏MΦ产生O 2 的关系。结果 :LPS预处理后以上述刺激剂攻击 1h均能不同程度致敏O 2 的产生 ,且致敏程度在一定范围内与LPS剂量和作用时间相关 ;细胞内静息态 [Ca2 +]i也呈LPS剂量和时间依赖性升高 ,均显著相关。且LPS预处理后用PMA攻击 ,细胞内瞬时 [Ca2 +]i升高幅度明显高于LPS未处理组。用A2 3187使细胞内 [Ca2 +]i升高可代替LPS致敏O 2 的产生 ,而预先用BAPTA和EGTA降低细胞内 [Ca2 +]i则可阻断LPS致敏O 2 的作用。结论 :LPS可致敏MΦ产生O 2 ;LPS预处理后细胞内静态 [Ca2 +]i的升高是LPS诱导O 2 致敏的重要原因。     

LPS致敏巨噬细胞产生及其信号机制

目的探讨LPS诱导的巨噬细胞(Mφ)致敏及其信号机制.方法巨噬细胞样细胞株RAW 264.7以10μg/L LPS预处理1 h后洗去,再以1 mg/LPMA、1μmmol/LfMLP、100μg/L LPS、1 g/LZyms和15mg/L MDP攻击1h,检测上清中超氧阴离子(O-2)的产生,并用荧光显微成像系统检测细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i),探讨[Ca2+]i与LPS致敏Mφ产生O-2的关系.结果LPS预处理后以上述刺激剂攻击1 h均能不同程度致敏O-2的产生,且致敏程度在一定范围内与LPS剂量和作用时间相关;细胞内静息态[Ca2+]i也呈LPS剂量和时间依赖性升高,均显著相关.且LPS预处理后用PMA攻击,细胞内瞬时[Ca2+]i升高幅度明显高于LPS未处理组.用A23187使细胞内[Ca2+]i升高可代替LPS致敏O-2的产生,而预先用BAPTA和EGTA降低细胞内[Ca2+]i则可阻断LPS致敏O-2的作用.结论LPS可致敏Mφ产生O-2;LPS预处理后细胞内静态[Ca2+]i的升高是LPS诱导O-2致敏的重要原因.     

FMLP刺激HL—60细胞NADPH氧化酶激活的信号转导途径

目的 澄清中性粒细胞中[Ca^2 ]i及某些激酶在NADPH氧化酶激活中的作用和NADPH氧化酶激活的信号转导途径。方法 利用中性粒细胞样HL-60细胞,研究[Ca^2 ]i和某些激酶对fMLP刺激NADPH氧化酶激活的影响。结果 用10umol/L BAPTA-AM去除[Ca^2 ]i后使O2^-生成明显减少;8umol/L的PKC抑制物GF109203x显著地抑制了O2^-产生;50umol/L的p38抑制物SB203580、50umol/L的ERK抑制物PD098059和0.1umol/L的PI3K抑制物Wortmannin使O2^-产生受到不同程度抑制;PKC、PI3K、p38和ERK激活对[Ca^2 ]i升高没有影响;[Ca^2 ]i、PKC和PI3K对p38激活有一定作用,而ERK和Akt激活主要受PI3-K的调控。结论 试验说明[Ca^2 ]i依赖途径（PKC）和[Ca^2 ]i非依赖途径（PI3K、p38和ERK）对NADPH氧化酶激活都起着重要作用。     

尾加压素Ⅱ对大鼠肾小球系膜细胞内游离钙浓度影响

目的 探讨尾加压素Ⅱ（UmtensinⅡ，UⅡ）对肾小球系膜细胞（GMC）内游离钙浓度的影响及其作用机制。方法 以体外培养的SD乳鼠GMC为研究对象，用UⅡ刺激GMC，Fluo3／AM荧光标记细胞内游离钙离子，激光共聚焦显微技术动态测定GMC内游离钙浓度变化。结果 UⅡ激发GMC内[Ca^2＋]i升高作用分2个时相，即瞬时峰值升高时相和缓慢持久升高时相，对峰值升高呈剂量依赖方式，在10^-10mol／L～10^-7mol／L范围内引起峰值升高，且随着剂量增加，幅度增大。硝苯地平和无钙缓冲液对UⅡ激发GMC内[Ca^2＋]i瞬时峰值升高无作用，但可完全阻止缓慢持久升高时相出现。结论 UⅡ激发GMC内[Ca^2＋]i浓度瞬时峰值升高时相是由细胞内储存钙释放介导的，而缓慢持久升高时相是由细胞外钙流人增加引起的。     

TNF-α和 LPS对体外培养血脑屏障内皮细胞胞浆内钙离子浓度的影响

目的：观察脂多糖（Lipopolysaccharid，LPS）和肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-α，TNF-α)对血脑屏障内皮细胞（Blood-brain barrier endothelial cell，BBBEC）胞浆内钙离子浓度（plasmic inner concentration of calcium，[Ca^2 ]i）的影响。方法：用Fluo-3/AM做为荧光探针对钙离子进行负载，激光扫描共聚焦显微镜观察不同浓度的LPS和TNF-α刺激下BBBEC胞浆内钙离子浓度的变化。结果：在TNF-α刺激下，单个BBBEC[Ca^2 ]i呈浓度依赖性的一过性升高。不同浓度TNF-α引起的BBBEC Ca^2 的荧光强度达高峰的时间基本一致，高峰荧光强度和荧光持续时间随TNF-α浓度的升高而增加。低浓度LPS（1μg/ml和10μg/ml）刺激细胞时，BBBEC[Ca^2 ]i无明显变化，高浓度LPS刺激细胞时，可见[Ca^2 ]i呈短暂性升高，随后下降。结论：TNF-α和LPS在极短的时间内导致BBBEC[Ca^2 ]i的升高，激活BBBEC，这一过程是缺血性脑损伤极早期的重要病理机制之一。     

甘氨酸对腹腔巨噬细胞TNFα表达的影响

近来发现甘氨酸可剂量依赖性地抑制Kupffer细胞产生TNFα[1 ] ,鉴于单核细胞向各组织逸出成熟巨噬细胞 (MΦ)过程中 ,细胞形态、功能等表型出现了异质性[2 ] ,本研究用贴壁法体外分离培养Wistar大鼠腹腔MΦ ,观察 2mmol L甘氨酸(Gly)对其经 5 μg mL内毒素脂多糖 (Lipopolysaccharide,LPS)刺激后产生TNFα的影响并探讨可能机制。1　材料与方法1.1　TNFα测定　液相放射免疫法检测LPS刺激后 0、3、6、12、2 4h对照组和甘氨酸组培养上清液中TNFα含量。1.2　巨噬细胞 [Ca2 + ]i测定　用荧光指示剂Fura 2 AM检测含钙测定液 (Ca2 …     

双歧杆菌脂磷壁酸激活巨噬细胞活性机制的研究

目的：从信号分子PKC和细胞内游离Ca^2 ([Ca^2 ]i)这一途径探索青春型双歧杆菌的脂磷壁酸（lipoteichoic acid,LTA)激活小鼠腹腔巨噬细胞的机制，同时观察巨噬细胞之间缝隙连接通讯（GJIC）的变化。方法：γ-^32P ATP磷酸转移法测定巨噬细胞总PKC活性；激光共聚焦显微镜检测[Ca^2 ]i浓度的变化；激光漂白后荧光恢复技术（FRAP）观察GJIC的状态。结果：（1）LTA能明显提高巨噬细胞总PKC活性，呈剂量依赖性；（2）LTA可显著升高巨噬细胞[Ca^2 ]i的水平，并且EDTA和维拉帕米处理组、肝素和普鲁卡因处理组以及EDTA、维拉帕米、肝素和普鲁卡因处理组巨噬细胞内[Ca^2 ]i亦升高，但明显低于对照组（P＜0．01）。（3）巨噬细胞被LTA刺激后，其平均荧光恢复率明显高于对照组（P＜0．01）。结论：LTA可通过提高PKC活性，升高[Ca^2 ]i的水平以及增强GJIC的功能来激活巨噬细胞。     

地塞米松诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡过程中[Ca^2＋]i的变化

目的 研究地塞米松诱导调亡小鼠巨噬细胞[Ca^2 ]i的变化及其对调亡的影响以及信使分子对凋亡和[Ca^2 ]i变化的影响。方法 激光扫描共聚焦显微术、流式细胞术和荧光标记术。结果 1、凋亡巨噬细胞内fluo-3荧光强度逐渐增强,胞内钙库受体抑制剂,尤其是Ca^2 内流阴断剂抑制钠fluo-3荧光强度变化,同时使细胞凋亡率降低;2、staurosporine 和DFcAMP显著降低巨噬细胞凋亡率并明显抑制fluo-3荧光强度改变。genistein和亚甲蓝落降低巨噬细胞凋亡率,并降低fluo-3荧光强度升高幅度。结论 1、胞外Ca^2 内流和内源性Ca^2 释放,主要是胞外Ca^2 内流使[Ca^2 ]i逐渐升高并促进巨噬细胞凋亡;2、PKC促进[Ca^2 ]i升高和巨噬细胞凋亡。cAMP抑制[Ca^2 ]i升高和巨噬细胞凋亡。cGMP、TPK降低[Ca^2 ]i升高幅度并稍抑制巨噬细胞凋亡。结果提示,[Ca^2 ]i是信使分子调控巨噬细胞凋亡的主要靶点。     

不同诱导剂体外诱导巨噬细胞胞外诱捕网形成效率的比较

目的比较体外诱导巨噬细胞胞外诱捕网(MET)形成的不同方法。方法采用(0.5、1、5、10)μg/m L脂多糖(LPS)、(10、25、50、80)μmol/L佛波酯(PMA)和(50、100、150)μg/m L二氧化硅(Si O2)处理RAW264.7细胞,在处理后3 h和6 h,采用免疫荧光染色法检测MET的产生,并对其进行半定量分析。结果免疫荧光染色表明MET主要由DNA和组蛋白构成,1μg/m L LPS处理RAW264.7细胞6 h,MET形成百分比为(37.04±10.02)%,明显高于对照组(7.90±2.71)%;80μmol/L的PMA处理细胞后MET形成百分比为(22.40±1.83)%,高于对照组(10.11±1.13)%;各剂量的Si O2诱导MET的量与对照组无明显差异。结论用LPS和PMA均能在体外诱导RAW264.7细胞MET的形成,Si O2诱导不是可行的方法。     

人参皂苷Rg1对吗啡依赖海马神经元胞内游离钙离子浓度的影响

目的探讨人参皂苷Rg1对吗啡依赖海马神经元胞内游离钙离子浓度（intracellular free Ca^2＋ concentration,[Ca^2＋]i）的影响。方法采用荧光钙离子指示剂Fluo-3／AM,利用激光扫描共聚焦显微镜观察低剂量（1μmol／L）、中剂量（10μmol／L）、高剂量（100μmol／L）人参皂苷R暑。处理吗啡依赖原代培养大鼠海马神经元后[Ca^2＋]i的改变。结果低、中、高剂量人参皂苷Rg1单独处理海马神经元前后并没有引起胞内[Ca^2＋]i的显著改变（P〉0．05）,而吗啡依赖海马神经元胞内[Ca^2＋]i较正常海马神经元细胞明显增高（P〈0．01）。此外,低、中、高剂量人参皂苷R翱处理吗啡依赖海马神经元细胞后,均能显著抑制胞内[Ca^2＋]i的升高（P〈0．01）,并呈剂量依赖性,照。剂量越大,抑制作用越明显（P〈0．01）。结论人参皂苷Rg1可以抑制吗啡依赖海马神经元细胞内[Ca^2＋]i的增高,对吗啡的成瘾性具有明显的拮抗作用,为合理安全有效地应用人参戒毒提供了实验依据。