应用基因芯片筛选胃癌淋巴转移相关基因及TLN1的初步研究

目的： 应用基因表达谱芯片筛选胃癌正常胃黏膜、胃癌原发灶和淋巴结转移灶的差异表达基因,并结合生物信息学方法筛选胃癌淋巴结转移相关基因,探讨TLN1与胃癌淋巴结转移的关系。方法：应用Affymetrix芯片筛选癌旁正常胃黏膜(A组)、胃癌原发灶(B组)和淋巴结转移灶(C组)的差异表达基因,利用队列试验的基因表达谱分析、基于聚类分析结果的基因功能（基于Gene Ontology分类）集群分析和Pathway分析等生物信息学方法对结果进行分析,并用RT-PCR检测TLN1 在胃癌原发灶和淋巴结转移灶的表达情况。结果：A、B、C 3组呈连续上调的差异表达基因278个,其功能主要集中在免疫应答、细胞黏附、磷酸盐转运、阴离子转移、细胞趋化和移动、信号转导等方面;连续下调的387个基因其功能主要集中在消化、糖类代谢、脂质代谢、蛋白代谢、一氧化氮复合物代谢、一氧化碳复合物代谢、细胞黏附等方面。Pathway分析显示在整合素介导的细胞黏附信号通路异常激活,THBS1、TLN1、CAPN3、ITGAX、SORBS1、CAPN6、CAPN9在3组中呈连续梯度改变。TLN1在癌旁非肿瘤胃黏膜、胃癌原发灶和淋巴结转移灶表达量分别为：0.0000342±0.0000711、0.1064±0.1251和0.2886±0.3529;在胃癌淋巴结转移灶显著高表达（P＜0.05）。结论：基因芯片技术结合生物信息学方法筛选胃癌淋巴转移相关基因,有助于找到胃癌淋巴道转移的关键基因或通路,为寻找肿瘤淋巴道转移的早期诊断指标及新的治疗靶点奠定了实验基础,本研究结果初步表明在整合素信号通路中扮演重要角色的TLN1基因异常表达与胃癌淋巴结转移密切相关。     

从卵巢癌cDNA表达文库筛选肿瘤抗原基因的研究

目的：利用肿瘤患者自体血清筛选患者肿瘤cDNA表达文库（SEREX）,寻找肿瘤特异性抗原是肿瘤免疫学研究的新策略,由此方法所获B细胞抗原肽可为进一步寻找T细胞抗原肽,开展肿瘤免疫治疗和诊断提供线索。方法采用SEREX方法,筛选中国人卵巢癌cDNA表达文库,对获得的阳性克隆片段测序鉴定和进行BLAST同源性比较。采用RT－PCR,分析政党组织和肿瘤组织及肿瘤细胞株中6个新的EST片段的表达。结果,所获基因片段大多数为已知抗原基因（20／27）。根据其来源又可归类为结构基因。线粒体基因和调控基因。另外,获6个未知的EST片段。RT－PCR的结果表明,4个EST（EST87888、1750、1754和3533）片 肿瘤和正常组织中均有表达,2个EST在正常组织中未见表达,而在肿瘤组织中有表达,可能是与肿瘤相关或特异的EST片段。结论SEREX方法不失为一种有效筛选卵巢癌肿瘤抗原的新方法。所获肿瘤抗原候选基因,可进一步进行结构和功能的研究。     

L-选择蛋白在小鼠肝癌细胞高低转移株HCa-F、HCa-P的表达及与肿瘤转移潜能的相关性

目的　探讨经淋巴道转移的小鼠肝癌细胞高低转移株HCa F、HCa P淋巴道转移能力及与淋巴细胞归巢受体L 选择蛋白的相关性。方法　应用免疫印迹分析、RT PCR及流式细胞术检测小鼠肝癌HCa F、HCa P细胞表面L 选择蛋白的表达情况 ,再通过E 、P 、L 选择蛋白的抗体对细胞粘附实验的影响检测HCa F、HCa P细胞淋巴道转移潜能与L 选择蛋白的相关性。结果　L 选择蛋白在HCa F、HCa P细胞表面均有表达 ,且HCa F细胞的表达量明显高于HCa P细胞 (P <0 .0 1) ,HCa F细胞与淋巴结之间的粘附可被抗L 选择蛋白的抗体所阻断。结论　小鼠肝癌细胞高低转移株HCa F、HCa P细胞均表达L 选择蛋白 ,其程度与该细胞的淋巴道转移潜能正相关     

细胞内氯离子通道蛋白1在肝癌高、低淋巴道转移细胞株中的定位及表达差异

目的 研究细胞内氯离子通道蛋白1(CLIC1)在小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道转移细胞株中的定位及表达差异.方法 以小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移细胞株Hca-F和低淋巴道转移细胞株Hca-P为研究对象,采用双向凝胶电泳和质谱鉴定、细胞免疫荧光、细胞免疫化学染色方法和Western blot方法检测CLIC1在高、低淋巴道转移细胞株中的定位及蛋白表达情况.结果 双向凝胶电泳和质谱鉴定CLIC1在Hca-F细胞中高表达,是Hca-P细胞的1.6倍;细胞免疫荧光和免疫化学结果显示CLIC1定位于Hca-F和Hca-P细胞的细胞质和细胞膜,功能形式的细胞膜定位更多存在于Hca-F细胞中,并且在Hca-F细胞中的表达强于Hca-P细胞.Western blot结果显示CLIC1在Hca-F细胞中的表达是Hca-P细胞的1.6倍.结论 CLIC1在Hca-F和Hca-P细胞中定位于细胞质和细胞膜,在Hca-F细胞中高表达,且在Hca-F中更多定位于细胞膜,可能在肝癌淋巴道转移过程中发挥作用.     

Sorcin在小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道转移株中的表达及定位

目的：研究抗药蛋白sorcin（又称可溶性抗药相关蛋白）在小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道转移潜能不同的细胞株Hca-F/Hca-cP中的定位及表达差异,进一步探讨其在肿瘤淋巴道转移中的作用。方法：以小鼠腹水肝癌高淋巴道转移株Hca-F和小鼠腹水肝癌低淋巴道转移株Hca-P为研究对象,采用实时定量PCR技术检测sorcin在Hca-F/Hca-P细胞中基因水平的表达差异;采用Western免疫印迹技术检测sorcin在Hca-F/Hca-P细胞中蛋白水平的表达差异;采用免疫荧光技术检测sorcin在细胞中的定位情况;采用细胞计数试剂盒-8检测肿瘤细胞的增殖能力;应用Transwell小室检测肿瘤细胞的迁移和侵袭能力。结果：Hca-F细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力都明显高于Hca-P细胞;sorcin在Hca-F细胞中的基因水平和蛋白水平表达分别为Hca-P细胞的1.5和1.8倍;sorcin在两种小鼠腹水型肝癌细胞株中的定位主要位于细胞质。结论： sorcin在Hca-F中呈高表达,主要定位于细胞质,可能在其增殖、迁移和侵袭过程中发挥重要作用,为进一步探讨其作用机制和功能奠定了基础。     

两株肝癌细胞淋巴结转移机理的初步探讨

Hca－F（F）和Hca－P（P）是具有不向淋巴道转移能力的小鼠腹水型肝癌,F的转移率大于SO％,P的转移率小于20％,本实验观察了在体内外条件下它们对淋巴结内成分的粘附,以期找出其器官特异性的结构基础。将F和P细胞分别加到淋巴结冰冻切片上,于37－C,5％C02条件下孵育,分别于第24’48、72、96h取出,冲洗。将此对瘤株分别接种于SCID小鼠皮下,2周后取增大的淋巴结,部分制成石蜡切片,嗜银染色,部分制成透射电镜标本,观察瘤细胞与细胞外基质（ECM）的关系。酶谱法测定瘤细胞在有无淋巴结成分时的IV型胶原酶的分泌。F细胞粘…     

基因芯片检测吴茱萸碱对小鼠DC细胞功能调控相关基因表达的影响

目的：利用基因芯片技术检测吴茱萸碱对小鼠骨髓来源DC功能调控相关基因表达的影响。方法：分离BALB／c小鼠骨髓细胞，经GM-CSF体外诱导培养10天的未成熟DC细胞（iDC）经不同因素处理并分为：对照组（Ⅰ）、吴茱萸碱组（EVO）（Ⅱ）、内毒素（LPS）组（Ⅲ）、EVO＋LPS组（Ⅳ），24小时后收集各组细胞，抽提总RNA，利用SuperArray公司小鼠DC与抗原提呈细胞基因芯片MM-604对细胞功能相关基因进行检测。结果：Ⅱ／Ⅰ上调≥2倍基因7个，下调≥2倍基因10个；Ⅲ／Ⅰ上调≥2倍基因37个，下调≥2倍基因12个；Ⅳ／Ⅱ上调≥2倍基因46个，下调≥2倍基因7个；Ⅳ／Ⅲ上调≥2倍基因24个，下调≥2基因2个，对这些基因功能进行检索分类，主要涉及细胞因子分泌及其受体表达、抗原摄取、抗原提呈、细胞表面受体、信号传导。结论：吴茱萸碱对DC作用涉及多个基因的表达调控，这些基因控制并影响着DC功能、分化和成熟，为进一步寻找药物靶点提供了线索。     

高通量筛选肿瘤转移相关基因的研究

目的利用高通量双萤光素酶报告基因系统筛选与肿瘤转移相关的人类功能基因。方法利用与肿瘤转移相关的重要因子——血管内皮生长因子（VEGF）,将含有VEGF反应序列的萤光素酶报告基因（VEGF—LUC）质粒与409个待筛人类功能基因真核表达质粒共转染Hela细胞以筛选影响VEGF．LUC表达的人类功能基因,进一步通过Westernblot在蛋白质水平验证初筛阳性的基因对细胞内VEGF蛋白表达量的影响。结果染色质重塑蛋白4A（CHMP4A）明显增强VEGF．LUC相对萤光素酶值（P〈0．05）,Westernblot结果表明CHMP4A明显增强Hela细胞内VEGF的表达。结论初步筛选到一个可能通过影响VEGF活性增强肿瘤侵袭性的基因CHMP4A。     

Prox-1与淋巴管新生和肿瘤转移的关系

侵袭和转移是恶性肿瘤的重要生物学行为之一,淋巴道转移是恶性肿瘤难以根治以及高病死率的主要原因,也是判断患者预后的主要指标。果蝇prospero同源异形盒蛋白1（prospero homeobox protein 1,Prox-1）在胚胎时期淋巴管形成过程中具有重要作用,可以作为淋巴管内皮细胞标志物,显示肿瘤新生淋巴管,并与肿瘤淋巴道转移密切相关。尽管Prox-1促进胚胎淋巴管形成机制的研究较为深入,但是在肿瘤淋巴管新生和淋巴道转移的作用机制方面仍有待于进一步探讨,Prox-1可能作为抑制肿瘤淋巴管新生和治疗肿瘤的新靶点,用于阻断肿瘤转移和改善患者预后。现就Prox-1与胚胎淋巴管形成、肿瘤淋巴管新生以及与肿瘤淋巴道转移关系的相关研究现状综述如下。     

前列腺癌LNCap／PC-3细胞模型中肿瘤转移相关基因表达的芯片分析

目的筛选与分析LNCap细胞和PC-3细胞肿瘤转移相关的差异表达基因。方法通过肿瘤转移基因芯片分析前列腺癌雄激素依赖型（ADPc）LNc印细胞以及前列腺癌雄激素非依赖型（AIPC）PC-3细胞84个肿瘤转移相关基因的表达差异。结果两个细胞株中表达差异显著基因共56个,在LNCap细胞中有41个基因下调,15个基因上调表达。结论LNCap细胞和PC-3细胞肿瘤转移相关的差异表达基因有助于研究AIPC的形成以及前列腺癌的侵袭转移机制。     

不同淋巴道转移潜能小鼠肝癌细胞系中Toll样受体2基因的表达

目的 探讨TLR-2基因表达水平与小鼠肝癌淋巴道转移中的关系.方法 采用RQ-PCR方法检测TLR-2基因在肝癌细胞系H22、淋巴道低转移潜能的小鼠肝癌细胞系Hca-P和高转移潜能的小鼠肝癌细胞系Hca-F中的表达水平.结果 TLR-2基因在H22、Hca-P和HcaF细胞系基因表达分别为(1.08±0.25)×10-3、(2.14±0.42)×10-3、(4.31±0.62)×10-3,差异有统计学意义(P<0.01),其随转移潜能的增高,表达水平增加.结论 TLR-2基因表达水平增高提示其在肝癌的淋巴道侵袭转移中起作用,有可能成为预测肝癌预后新的靶点.     

小鼠肝癌淋巴道转移细胞系中NF-κB基因的表达及意义

目的 探讨NF-κB基因表达在小鼠肝癌淋巴道转移细胞系中的表达及意义.方法 采用RQ-PCR方法检测NF-κB基因在肝癌淋巴道低转移潜能的小鼠肝癌细胞系Hca-P和高转移潜能的小鼠肝癌细胞系Hca-F中的表达水平.结果 NF-κB基因在Hca-P和Hca-F细胞系基因表达分别为(1.41±0.48)×10~(-3)、(2.95±0.22)×10~(-3),Hca-P和 Hca-F之间,NF-κB基因表达差异有统计学意义 (P<0.01),其随转移潜能的增高,表达水平增加.结论 NF-κB基因表达水平增高与肝癌淋巴道侵袭转移相关.     

用基因芯片研究人肺癌转移相关基因

目的 自制肿瘤转移相关基因芯片研究人肺癌高、低转移细胞系PG和PAa间以及肺癌、淋巴结转移癌与正常肺组织间的基因表达谱差异，筛选与肺癌转移相关的特异基因。方法 提取2种肺癌细胞系、人肺癌、淋巴结转移癌及周围正常肺组织的mRNA后逆转录标记cDNA探针，与自制的含399个肿瘤转移相关基因的微阵列膜杂交，QuantArray软件分析杂交信号强度获得差异表达基因。结果 正常肺组织与肺原发癌的基因表达谱有显著差异。淋巴结转移癌组织与PG高转移细胞系表达基因行聚类分析，共同表达且最具统计学意义的基因有64个，包括上调基因27个，下调基因37个。结论 多基因参与肺癌的转移过程，肺转移癌与高转移细胞系共同差异表达的基因可能与肺癌的高转移特性密切相关。     

烯酯酰辅酶A水解酶1基因在小鼠肝癌细胞株中的表达及其与增殖和迁移能力的关系

目的 研究烯酯酰辅酶A水解酶1( ECH1)在小鼠肝癌高、低淋巴转移Hca-F/Hca-P细胞株中的表达及ECH1基因表达下调后对Hca-F细胞增殖和迁移能力的影响.方法 采用免疫荧光方法检测ECH1在小鼠肝癌细胞株中的表达.构建pGPU6/GFP/Neo-shRNA-ECH1表达载体,稳定转染至高淋巴转移Hca-F细胞中干扰ECH1基因的表达,通过CCK8法检测肿瘤细胞的增殖能力,Transwell小室检测肿瘤细胞的迁移能力,并应用流式细胞仪检测肿瘤细胞的细胞周期情况.结果 ECH1在小鼠肝癌细胞株中主要表达于细胞质,且ECH1在Hca-F细胞的表达强于其在Hca-P细胞的表达.ECH1表达下调后,Hca-F细胞的增殖能力明显下降.Transwell小室检测穿膜细胞数pGPU6/GFP/Neo-shRNA-ECH1转染Hca-F组(27.07±17.49)较阴性对照组(72.38±18.83)和Hca-F组(59.06±30.33)明显减少,细胞周期S期pGPU6/GFP/Neo-shRNA-ECH1转染Hca-F组(86.1％)较阴性对照组(75.8％)和Hca-F组(66.2％)停留细胞数明显增多,G1期pGPU6/GFP/Neo-shRNA-ECH1转染Hca-F组(9.4％)较阴性对照组(24.2％)和Hca-F组(30.3％)停留细胞数明显减少.结论 ECH1可能在肿瘤淋巴转移中发挥作用,抑制ECH1的表达可有效降低体外高淋巴转移肿瘤细胞的增殖和迁移能力.     

CML患者骨髓单个核细胞基因表达谱分析

目的 探讨慢性髓细胞性白血病(CML)的基因表达变化。方法 分别从正常人和CML患者骨髓样品中抽取骨髓单个核细胞,分离出cDNA片段,然后再逆转录成cRNA并标记后,与人的全基因组表达谱芯片杂交,ABI 1700芯片分析系统进行分析基因表达谱的差异。结果 总共发现差异表达的基因有6706个,其中与CML相关的差异基因有75个(上调19个,下调56个)。结论 全基因组寡核苷酸基因芯片在分析基因表达谱差异研究中具有广泛的应用价值。