苦参碱对人肺癌SPC-A-1细胞Bcl-2、Fas表达的影响

目的了解苦参碱（matrine）作用人肺癌细胞株SPC-A-1后其相关凋亡基因Fas、Bcl-2的变化。方法不同浓度苦参碱作用于体外培养人肺癌细胞株SPC-A-1,流式细胞术检测其凋亡相关基因Bcl-2、Fas蛋白表达的改变。结果不同浓度的苦参碱处理人肺癌SPC-A-1细胞后,流式细胞仪检测随着苦参碱浓度的升高,Bcl-2的表达量减少、Fas的表达量增加且呈剂量效应（P〈0．05）。结论苦参碱诱导人肺癌细胞株SPC-A-1细胞凋亡,其机制可能与降低Bcl-2、升高Fas等活性有关。     

苦参碱对体外人肺癌A549细胞的抑制作用

目的:研究苦参碱对体外培养人肺癌A549细胞的抑制作用及其机制.方法:用不同浓度的苦参碱作用A549细胞24、48、72 h,以MTT法检测苦参碱对A549细胞的抑制作用,流式细胞仪检测凋亡率和细胞周期分布时相,TRAP-ELISA法检测端粒酶的活性.结果:随着时间和浓度的增加,苦参碱对A549细胞的抑制作用逐渐增强(P＜0.01);不同浓度苦参碱(0.5、1.0、1.5、2.0 mg/mL)诱导A549细胞的凋亡率分别为3.2%、9.5%、13.4%、17.6%;G0/G1期细胞比例增加,G2/S期细胞比例下降;端粒酶的活性呈浓度和时间依赖性降低.结论:苦参碱可通过抑制端粒酶活性、诱导细胞凋亡抑制体外培养的A549细胞的增殖.     

U937细胞与骨髓间充质干细胞黏附培养后凋亡基因表达谱的研究

目的比较 U937细胞与人骨髓间充质干细胞(MSC)黏附培养前后凋亡相关基因表达谱的变化,寻找白备病耐药与造血微环境的关系。方法 U937细胞分别悬浮培养和与 MSC 黏附培养48h,以流式细胞术测定细胞周期。采用基因表达谱芯片技术测定并分析黏附培养组与悬浮培养组间凋亡基因表达的差异。结果 U937细胞黏附培养与悬浮培养48h,G_0/G_1期细胞分别为(45.3±3.1)%和(32.6±2.1)%(P<0.05),G_2/M 期细胞分别占(2.7±0.3)%和(14.3±1.4)%(P<0.01),自然凋亡率分别为(18.4±1.5)%和(23.4±1.9)%(P<0.05)。在487个凋亡相关候选基因中,筛选出28个明显差异表达基因,上调基因27个,主要分类为凋亡抑制基因、促凋亡基因、细胞周期正调控基因及细胞周期负调控基因等,但以 Bcl-XL 上调最明显。1个下调基因是促凋亡基因。结论与MSC 黏附培养可导致 U937细胞生长抑制,自然凋亡率下降,其机制是多种基因作用的结果,但最主要的可能是 Bcl-XL 凋亡抑制基因上调。     

Annexin V FITC/PI流式细胞术检测姜黄素诱导的肝星状细胞凋亡

目的:探讨Annexin V FITC/PI流式细胞术在检测姜黄素诱导的肝星状细胞(HSC)凋亡中的应用。方法:不同浓度姜黄素作用肝星状细胞株HSC-T6 24h,用Annexin V FITC/PI流式细胞术检测HSC凋亡。结果:姜黄素浓度为10μmol/L时,早期凋亡细胞开始增多,至30μmol/L时,坏死细胞开始增多,随姜黄素浓度增高,各组凋亡细胞随之增多。0、10、20、30、40μmol/L5组的凋亡率分别是(3.81±0.64)%、(6.52±1.88)%、(11.61±2.79)%、(52.03±4.38)%、(87.11±12.62)%,与0μmol/L组比较,20、30、40μmol/L3组的凋亡率差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Annexin V FITC/PI流式细胞术可定量检测姜黄素诱导的HSC早期凋亡。     

党参总皂苷抗缺氧缺糖再给氧诱导大鼠皮质神经细胞凋亡的作用

目的:以原代培养的胚胎大鼠大脑皮质神经细胞进行缺氧缺糖再给氧处理,观察党参总皂苷对神经细胞凋亡的抑制作用。方法:胚胎大鼠大脑皮质神经细胞原代培养,含连二亚硫酸钠的无糖Earle's液进行缺氧缺糖处理造模,MTT法测定细胞存活率,Hoechst33342和PI原位双染法荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死、凋亡细胞百分率,APO-BRDU法流式细胞术检测凋亡细胞百分率,Fluo-3法流式细胞术检测细胞内Ca2+浓度,评价药效。结果:细胞存活率:与模型组犤(19.69±5.80)%犦比较党参总皂苷0.52mg/L组39.21±12.21)%,0.052mg/L组犤(犦犤(37.91±4.67)%犦能显著提高细胞存活率(P<0.001);细胞坏死率:与模型组犤(44.99±12.81)%犦比较党参总皂苷0.52mg/L组犤(15.66±4.67)%犦,0.052mg/L组犤(23.98±4.04)%犦和0.0052mg/L组犤(20.50±5.19)%犦能显著降低细胞坏死率P<0.001);原位双染法细胞凋亡(率:与模型组犤(17.44±4.82)%犦比较党参总皂苷0.52mg/L组犤(10.58±2.04)%犦,0.052mg/L组犤(11.61±2.35)%犦能显著降低细胞凋亡率(P<0.05);流式细胞术检测细胞凋亡率:与模型组犤(8.55±3.84)%犦比较党参总皂苷0.52mg/L组犤(3.85±1.92)%犦,0.0052mg/L组犤(3.45±2.22)%犦能显著降低细胞凋亡率P<0.05);(细胞内Ca2+平均荧光值,与模型组(47.     

辅酶Q10对多巴胺损伤的PC12细胞凋亡的影响

目的:观察辅酶Q10在以PC12细胞建立的多巴胺神经元凋亡细胞模型中的作用。方法:实验于2003-04/2004-04在锦州医学院科技试验中心进行。取体外培养的PC12细胞分为3组:①辅酶Q10组:加450μmol/L辅酶Q10和0.3mmol/L多巴胺。②多巴胺组:加0.3mmol/L多巴胺。③空白对照组:只加等量RPMI1640。24h后进行流式细胞仪测试DNA含量,检测细胞凋亡率。结果:多巴胺组细胞凋亡率明显高于空白对照组[(30.66±1.90)%,(0.82±0.07)%,P<0.01],辅酶Q10组细胞凋亡率[(16.05±2.16)%]明显低于多巴胺组(P<0.01)。结论:辅酶Q10能显著降低多巴胺引起的PC12细胞凋亡,提示辅酶Q10作为神经保护性药物对保护多巴胺能神经元,防治帕金森病可能有实际应用价值。     

辛伐他汀诱导K562细胞凋亡过程中casp-ase-3、-8、-9活性变化及凋亡途径研究

目的研究辛伐他汀诱导K562细胞凋亡过程中caspase-3、-8、-9活性的变化。方法20μmol/L辛伐他汀处理K562细胞,48h观察细胞形态学;MTT检测细胞活力;24,48,72h流式细胞技术检测细胞凋亡率;比色法测定caspase-3、-8、-9活性;并用caspase-9抑制剂预处理K562细胞后再加入辛伐他汀,不同时间观察细胞数目和细胞凋亡率。结果20μmol/L辛伐他汀作用于K562细胞48h后细胞出现核固缩、核碎裂和凋亡小体等形态学改变;24,48,72h细胞凋亡率改变分别为(6.10±0.35)%、(14.15±0.42)%、(30.70±0.65)%,与对照组相比差异具有统计学意义;不同时间处理组的caspases-3、-8、-9活性与对照组相比明显升高,差异具有统计学意义;加入caspase-9抑制剂的处理组同对照组相比,其细胞数目和凋亡率没有显著性改变。结论辛伐他汀可能通过激活caspase-8、-9,进而活化caspase-3,从而导致K562细胞凋亡,其凋亡途径除了线粒体通路外还有其他途径参与。     

促红细胞生成素对缺氧乳鼠心肌细胞凋亡及坏死的影响

目的观察促红细胞生成素(EPO)对对缺氧心肌细胞的保护效应及量效关系。方法将当日生乳鼠,局部碘酒酒精消毒后胸骨正中开胸,取心尖前1/2心室肌进行细胞培养。培养4 d后选择细胞生长情况良好的培养瓶(>106个细胞/瓶)分为3组:A,对照组,正常培养;B,缺氧组,缺氧1h/复氧12 h;C,EPO组,缺氧/复氧加EPO干预。EPO组根据不同EPO干预浓度又分为C1,EPO干预浓度0.1 IU/ml;C2,EPO浓度1 IU/ml;C3,EPO干预浓度10 IU/ml。然后以荧光染色-流式细胞仪检测缺氧/复氧后心肌细胞的凋亡及坏死情况。结果缺氧组细胞的凋亡、坏死比率分别为(20.78±2.98)%和(50.10±0.29)%,明显高于EPO各组(P均小于0.01),也明显高于对照组[(2.3±1.09)%和(1.5±0.48)%,P<0.01]。不同浓度EPO浓度干预组间比较,C1组的存活率(40.18±7.49)%低于C2组、C3组(65.56±6.37)%,(62.56±11.32)%,均P<0.01,凋亡率(13.78±3.74)%和坏死率(42.51±5.49)%则明显高于后二者(P<0.05或P<0.01)。C2及C3间各指标差异无统计学意义。结论早期应用EPO可明显减少体外培养的乳鼠心室肌细胞缺氧/复氧后凋亡和坏死的发生。而且EPO在0.1 IU/ml至1 IU/ml浓度范围内其保护作用存在一定的量效关系。     

EVn-50对人宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究EVn-50体外对人宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响。方法:体外培养Hela细胞,台盼蓝拒染法检测细胞活力;AO/EB染色荧光显微镜观察EVn-50诱导Hela细胞凋亡形态学改变;DNA凝胶电泳确证EVn-50诱导Hela细胞凋亡作用;PI染色流式细胞仪检测EVn-50诱导Hela细胞凋亡率。结果:EVn-50体外对人宫颈癌Hela细胞的增殖具有显著抑制作用,呈浓度依赖性。EVn-50可诱导Hela细胞凋亡,AO/EB染色可见典型凋亡小体;DNA凝胶电泳在EVn-50浓度100μg/mL作用48h出现典型"梯形"DNA条带;PI染色流式法显示EVn-50在10、100μg/mL作用Hela细胞48h后,凋亡率分别为(8.80±0.16)%及(20.93±0.62)%,呈浓度依赖性。结论:EVn-50具有抑制人宫颈癌Hela细胞增殖并诱导细胞凋亡作用。     

异氟醚对人单核细胞株THP-1细胞凋亡的影响

目的:检验异氟醚是否诱导入单核细胞株THP-1细胞凋亡。方法:培养THP-1细胞于RPMI1640培养基中,检测THP-1细胞与不同浓度(0.5、1.0、2.0MAC)异氟醚接触不同时间(0、2、4、6h)的细胞凋亡率,同时检测接触异氟醚6h后再继续培养至24h的细胞凋亡率。细胞用碘化丙啶染色后通过流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:THP-1细胞凋亡率呈剂量依赖方式增加,在接触异氟醚6h为12.62±4.56%[1.0MAC],16.02±4.31%[2.0MAC]),对照为2.50±0.66%;在接触异氟醚24h为35.49±5.89%[1.0MAC],37.50±5.36%[2.0MAC]),对照为7.71±1.36%。THP-1细胞凋亡率也呈时间依赖方式增加,在接触1.0MAC异氟醚为1.14±0.34%[0h],8.55±1.44%[4h],12.62±4.56%[6h],35.49±5.89%[24h],对照为1.11±0.35%[0h],1.27±0.18%[4h],2.50±0.66%[6h],7.71±1.36%[24h];在接触2.0MAC异氟醚为1.20±0.25%[0h],9.30±1.78%[4h],16.02±4.31%[6h],37.50±5.36%[24h],对照为1.11±0.35%[0h],1.27±0.18%[4h],2.50±0.66%[6h],7.71±1.36%[24h]。结论:吸入0.5MAC以下浓度异氟醚对THP-1细胞凋亡无明显影响,当吸入浓度大于1.0MAC时,异氟醚以剂量和时间依赖方式诱导THP-1细胞凋亡。     

苦参碱对宫颈癌SiHa细胞凋亡的调节机制研究

目的 观察苦参碱体外诱导宫颈癌SiHa细胞凋亡效应并对其可能的作用机制进行初步探讨。方法 将不同浓度(0、0.25、0.5、1.00、2.00 mg.mL _-1)的苦参碱分别作用于体外培养的宫颈癌细胞,在不同时间点(24、48、72h),采用MTT法检测细胞的增殖情况;采用Annexin-Ⅴ和PI双染法在流式细胞仪上检测细胞的凋亡率;采用Western blot 检测细胞中凋亡相关蛋白Caspase- 3的表达。结果 各组苦参碱对SiHa细胞的增殖均有抑制作用,MTT和流式细胞结果显示,不同浓度的苦参碱对细胞生长抑制率与对照组相比存在明显差异(P均<0. 05 ),呈剂量效应正相关及时间效应正相关。加入Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK后,各组细胞凋亡率与只加苦参碱组相比凋亡率下降。Western blot 检测结果显示Caspase- 3蛋白水平随苦参碱浓度的提高而增加(P<0. 05)。结论 苦参碱可诱导宫颈癌SiHa细胞的增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与提高Caspase-3活性有关。     

苦参碱诱导宫颈癌SiHa细胞凋亡的相关机制研究

目的:观察苦参碱体外诱导宫颈癌SiHa细胞凋亡效应并对其可能的作用机制进行初步探讨。方法:将不同浓度(0.00、0.25、0.50、1.00、2.00 mg/ml)的苦参碱分别作用于体外培养的宫颈癌细胞,在不同时间点(24、48、72 h),采用MTT法检测细胞的增殖情况;采用Annexin-Ⅴ和PI双染法在流式细胞仪上检测细胞的凋亡率;采用Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白Caspase-3的表达。结果:各组苦参碱对SiHa细胞的增殖均有抑制作用,MTT和流式细胞结果显示,不同浓度的苦参碱对细胞生长抑制率与对照组相比存在明显差异(P0.05),呈剂量效应正相关及时间效应正相关。加入Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK后,各组细胞凋亡率与只加苦参碱组相比凋亡率下降。Western blot检测结果显示Caspase-3蛋白水平随苦参碱浓度的提高而增加(P0.05)。结论:苦参碱可诱导宫颈癌SiHa细胞的增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与提高Caspase-3活性有关。     

苦参碱对人肝癌细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响

目的:观察传统中药苦参的主要成分苦参碱对人肝癌细胞体外增殖、细胞周期及细胞凋亡作用的影响,探讨其对肝癌可能的作用机制。方法:实验于2004-05/2004-11在锦州医学院免疫与病原生物学教研室完成。选用人肝癌细胞株(BEL-7402),分设苦参碱0.5,0.75,1g/L浓度组,阴性对照组和阳性对照组(顺铂组)。①苦参碱对人肝癌细胞增殖作用的影响:将对数生长期的人肝癌细胞调至5×108L-1,按每孔100μL接种到96孔板内,培养24h后加入不同浓度(0.5,0.75,1g/L)的药物,继续培养72h。采用四甲基偶氮唑盐法最后用酶标仪测A值。实验同时设阴性对照组和阳性对照组(顺铂组),每组设6复孔。②苦参碱对人肝癌细胞周期的影响:将对数生长期的细胞用苦参碱(0.5,1g/L)处理48h后,消化并收集细胞,冲液后固定,4℃过夜。次日再冲洗2次,染色,调整细胞浓度至1×109L-1,流式细胞仪检测,按FACSort软件多正态拟合程序进行曲线拟合分析,计算DNA含量,得出细胞周期(G1、S、G2 M)的百分比。③苦参碱对人肝癌细胞DNALadder条带出现的影响:将对数生长期的细胞用苦参碱(0.5g/L、1g/L)处理48h后,消化并收集细胞,调整细胞浓度至1×109L-1,然后按细胞DNA提取试剂盒说明操作,提取细胞DNA,8g/L琼脂糖凝胶电泳,观察有无DNAladder条带出现。结果:①苦参碱在0.5,0.75,1g/L浓度时均能明显抑制人肝癌细胞增殖,抑制率分别为17.24%、26.05%和50.77%,存在着明显地浓度依赖关系,与对照组相比差异显著(P<0.01)。②苦参碱0.5,1g/L浓度组G0～G1期细胞数量明显高于对照组,并呈浓度依赖关系(36.96±1.98,48.41±3.12,27.30±1.11;t=-7.37,-11.04,P<0.01)。③苦参碱(0.5,1g/L)作用后可使人肝癌细胞发生凋亡,直方图上显示典型的细胞凋亡峰,凋亡率分别为10.21%、18.01%。④提取细胞DNA、电泳,可见苦参碱1g/L组出现典型的梯形条带,苦参碱0.5g/L组梯形条带不明显,而对照组未见梯型条带。结论:苦参碱对人肝癌细胞有明显地抑制作用,并存在着明显地浓度依赖关系;苦参碱可能是通过将人肝癌细胞周期阻滞在G0～G1期,抑制其增殖,通过诱导人肝癌细胞发生凋亡等,发挥其抗肝癌作用。     

葡萄籽提取物原花青素对人膀胱癌BIU87细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨葡萄籽提取物原花青素(GSPE)对人膀胱癌细胞株BIU87细胞增殖和凋亡的影响。方法 BIU87细胞与50、100、200μg/ml的GSPE共同孵育24h后,采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术分析细胞凋亡情况。结果 不同浓度（50、100、200μg/mL）GSPE对BIU87细胞的增殖抑制率分别为(13.0±1.5)%、(31.8±2.1)%和(48.6±1.8)%;凋亡率分别为(8.7±0.7)%、(28.2±1.6)%和(48.5±0.7)%;细胞增殖抑制率和凋亡率均随GSPE浓度的升高而增高（P＜0.01）。结论 葡萄籽提取物原花青素在体外可呈浓度依赖性抑制膀胱癌BIU87细胞增殖并促进其凋亡。     

构建体外联合培养条件下抗原诱导淋巴细胞反应的抑制模型

目的:观察在体外混合培养条件下,抗原能否诱导外周淋巴细胞反应抑制,建立体外淋巴细胞反应抑制模型。方法:实验于2003-10/2004-04在解放军第四军医大学西京医院心脏外科研究所实验室进行。取健康自愿者新鲜血液用于分离外周淋巴细胞。在体外条件下,以同种异体外周淋巴细胞分作供体和受体进行混合培养,采用四甲基偶氮唑盐比色法、电镜、姬姆萨-瑞氏染色、流式细胞仪检测对照组D组:首次混合培养淋巴细胞(PMLC),即受体淋巴细胞(R)+用丝裂霉素处理过的供体淋巴细胞(DBm)混合培养72h所得,A组(PMLC+DBm)、B组(PMLC+白细胞介素2中和单抗)、C组(PMLC+DBm+白细胞介素2中和单抗)等4组淋巴细胞的活性变化、活性变化的原因及其数量的变化。结果:①4组混合培养淋巴细胞在电镜、显微镜下变化:均可见细胞质染色浓集、核固缩裂解、凋亡小体形成。②四甲基偶氮唑盐比色法检测4组细胞活性即刺激指数:B组和C组比A、D组明显减弱(3.152±0.322,1.802±0.115,4.293±0.269,3.709±0.278,P<0.05);C组细胞活性比B组也明显减弱(P<0.05)。③流式细胞仪检测淋巴细胞凋亡率:单向混合淋巴细胞培养后的T淋巴细胞的凋亡率Bf组和Cf组高于Df对照组和Af组(11.25±0.78)%,(31.65±1.33)%,(5.95±0.24)%,(2.15±0.04)%,P<0.01;Cf组细胞凋亡率     

不同辐照模式聚焦超声诱导人胰腺癌细胞凋亡的量效关系

目的 探讨不同辐照模式聚焦超声诱导人胰腺癌细胞凋亡的最佳辐照方案。方法 对人胰腺癌细胞系PaTu 8988t细胞悬液进行聚焦超声辐照:第1组为空白对照组,第2、3组采用脉冲辐照模式,第4、5组采用连续辐照模式,各组辐照剂量通过改变辐照时间来改变。以流式细胞仪检测辐照后24 h肿瘤细胞凋亡率及细胞死亡率。结果 超声辐照后各组的细胞悬液最高温度分别为28.00℃、(42.20±2.17)℃、(50.80±0.84)℃、(55.80±2.17)℃、(65.20±3.11)℃,各组间差异均有统计学意义(P均<0.05)。各辐照组的细胞凋亡率为(0.56±0.15)%、(1.28±0.16)%、(1.84±0.29)%、(5.74±1.15)%、(2.00±0.84)%,细胞死亡率为(3.28±0.59)%、(4.60±0.47)%、(8.64±2.69)%、(41.12±15.91)%、(49.70±8.02)%,各组间差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论 聚焦超声辐照剂量在接近热凝固温度阈值时,采用连续辐照模式可获得较高的细胞凋亡率及细胞死亡率。     

碱性成纤维细胞生长因子及WTp53在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的作用

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的作用及其机制。方法:随机将28只大鼠分为正常组和手术组,其中手术组大鼠左眼为缺血再灌注组,右眼为治疗组(玻璃体腔内注射bFGF),观察再灌注后不同时间段1,6,12,24,48,72h视网膜组织中细胞凋亡情况及WTp53的表达变化。前房加压法制作大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型。应用末端脱氧核酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记(TUNEL)法检测视网膜组织中凋亡细胞数,免疫组织化学SABC法检测视网膜组织中WTp53蛋白的表达。结果:视网膜神经细胞的凋亡出现于再灌注后6h,并逐渐递增,24h达到高峰,48h开始下降,72h组不明显。WTp53蛋白表达改变与凋亡的神经细胞改变基本一致。治疗组各观察指标表达变化规律与缺血再灌注组基本一致,但凋亡细胞数目在6～48h犤6,12,24,48h分别为(358.3±43.4),(859.5±12.0),(1006.5±49.4),(695.7±72.2)个/mm2犦明显低于缺血再灌注组犤(444.8±89.7),(1053.0±96.1),(1254.0±164.8),(891.0±87.2)个/mm2犦(t=2.9131～4.299,P均<0.05);WTp53表达在6～48h缺血再灌注组显著下降(t=3.342～4.781,P<0.05;t=52.586,P<0.01)。结论:WTp53参与视网膜缺血-灌注损伤,促进神经节细胞的凋亡;bFG     

DLC-3表达对乳腺癌MCF-7细胞生物学行为的影响

目的探讨外源性过表达DLC-3对乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移及凋亡活动的影响。方法对数生长期乳腺癌MCF-7细胞分为实验组、阴性对照组和空白对照组,实验组细胞转染DLC-3基因过表达质粒,阴性对照组细胞转染空白质粒,空白对照组细胞仅进行换液处理。3组采用实时PCR法检测细胞DLC-3 mRNA相对表达量;转染12、24 h后,采用细胞划痕实验检测细胞划痕愈合率;转染48 h后,采用CCK-8实验检测细胞增殖率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果实验组DLC-3 mRNA相对表达量(17 563.57±2 880.85)高于空白对照组(0.56±0.43)和阴性对照组(1.00±0.00)(P0.05),空白对照组与阴性对照组比较差异无统计学意义(P0.05);转染48 h后,实验组细胞增殖率[(31.47±5.57)%]低于阴性对照组[(36.27±3.71)%]和空白对照组[(37.90±5.70)%],但差异无统计学意义(P0.05);转染12、24 h后,实验组划痕愈合率[(32.769±4.349)%、(38.237±4.286)%]低于空白对照组[(37.506±1.836)%、(49.052±4.090)%](P0.05),阴性对照组[(35.659±3.970)%、(48.724±5.092)%]与空白对照组比较差异无统计学意义(P0.05);转染48 h后,实验组细胞凋亡率[(15.893±1.597)%]高于阴性对照组[(10.277±1.947)%]和空白对照组[(11.973±1.564)%](P0.05),阴性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论提高MCF-7细胞中DLC-3表达可降低细胞增殖水平,抑制其迁移能力,并促进细胞凋亡。     

三磷酸腺苷保护脊髓损伤神经元的细胞活力

目的:观察核苷酸类神经营养因子三磷酸腺苷对大鼠脊髓神经元损伤后细胞活力的影响。方法:取新生Wistar大鼠20只,切取脊髓,剪碎组织成糜状进行神经细胞培养。将培养的神经细胞分为3组,①无损伤对照组,继续完全培养液培养。②损伤组,培养第7天神经元用微量移液器塑料滴头行机械性划痕损伤后完全培养液培养。③三磷酸腺苷组,培养第7天神经元划痕损伤后加入终浓度为1.0mmol/L的三磷酸腺苷培养液培养。倒置相差显微镜观察细胞生长及不同时期细胞形态变化,各组于处理后10min,1,12,24和48h,细胞损伤程度,以乳酸脱氢酶法检测(乳酸脱氢酶渗漏量比值越大,说明细胞损伤越重)。检测各组细胞活性采用四甲基偶氮唑盐比色法(四甲基偶氮唑盐代谢率吸光度越高,说明细胞活性越高)。结果:①各组细胞损伤程度评估:以培养液中乳酸脱氢酶含量表示。伤后1,12,24和48h,损伤组和三磷酸腺苷组较对照组明显增加(P<0.05);损伤24和48h,三磷酸腺苷组低于损伤组(17.94±0.82,23.05±1.04;18.52±1.12,24.88±1.16;P<0.05)。②体外培养的各组大鼠损伤神经元的变化:以四甲基偶氮唑盐代谢率表示。伤后1,12,24和48h,损伤组和三磷酸腺苷组明显低于对照组(P<0.05),损伤24和48h,三磷酸腺苷组高于损伤组(0.24±0.03,0.18±0.04;0.27±0.03,0.15±0.05;P<0.05)。结论:细胞外三磷酸腺苷可以减轻机械性损伤后的脊髓神经元的损伤程度,增强细胞活力,对受损伤的神经元有一定的保护作用。     

芦荟大黄素对增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的量效影响

目的:观察天然药物芦荟大黄素对增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的作用。方法:实验于2001-06/2004-12在广东医学院整形外科研究所完成。成纤维细胞取自广东医学院附属医院整形外科患者手术切除的增生性瘢痕组织,瘢痕组织经处理后进行成纤维细胞原代及传代培养至第3～8代细胞。用剂量为40mg/L的芦荟大黄素分别处理对数生长期成纤维细胞[0(为对照组),24,48,72h],以流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率;观察加入不同浓度(0,20,40,60,80mg/L)芦荟大黄素后24h对成纤维细胞凋亡的影响,采用特异性荧光染色和原位末端标记技术分别检测凋亡指数。结果:①芦荟大黄素作用不同时间对成纤维细胞周期和凋亡的影响:流式细胞术检测发现,用药24h出现“亚二倍体峰”即凋亡峰,凋亡指数为(10.81±1.43)%,到48和72h凋亡指数为(16.02±1.30)%和(21.58±1.56)%。随着作用时间的延长,DNA合成前期细胞百分数增多,DNA合成期的细胞含量逐渐减少,亚二倍体峰百分数增多(F=122.514,225.552,105.346,P<0.05)。②芦荟大黄素对成纤维细胞凋亡的量效影响:荧光染色和原位末端标记法检测凋亡指数,均呈剂量依赖性增高[荧光染色:0mg/L为(4.52±1.22)%,20mg/L为(25.56±1.12)%,40mg/L为(56.20±2.20)%,80mg/L为(80.05±2.12)%,F=1350.737;原位末端标记法:0mg/L为(3.85±1.15)%,20mg/L为(11.66±1.20)%,40mg/L为(23.12±1.06)%,80mg/L为(40.31±1.43)%,F=511.487,P<0.01]。结论:芦荟大黄素以时间依赖性的方式调节细胞周期并诱导增生性瘢痕成纤维细胞凋亡,还可呈量效关系促进成纤维细胞发生凋亡。