炮制对苦杏仁中苦杏仁苷在大鼠体内代谢的影响

目的:研究炮制对苦杏仁中主要成分苦杏仁苷在大鼠体内代谢的影响。方法:分别给SD大鼠注射和灌胃苦杏仁苷,灌胃苦杏仁生品及炮制品后,于不同时间点采血,高效液相色谱-质谱联用法分析血浆中苦杏仁苷及其代谢产物,绘制药时曲线。结果:苦杏仁苷注射给药后在血浆中以原型形式存在,而苦杏仁苷、苦杏仁生品和炮制品灌胃给药后均未检测到原型,其代谢产物经质谱鉴定为野樱苷;且炮制后代谢产物野樱苷在大鼠体内的药时曲线与生品有明显不同。结论:炮制对苦杏仁在大鼠体内的代谢过程有较大影响。     

朝藿定B在大鼠体内的药物代谢研究

目的探讨朝藿定B在大鼠体内的代谢产物及转化途径。方法选择SD大鼠12只,分为2组,肌肉注射组和口服给药组,收集给药前和给药后0~24 h尿样和粪便样品,采用高效液相色谱-串联线性离子阱静电场轨道阱质谱仪(LC-LTQ Orbitrap MSn)检测。结果通过比较给药前后各组总离子流色谱图,对尿和粪便中推测的代谢物和标准物质的出峰时间及相关化合物的多级串联质谱数据进行了分析,结果在粪便中发现了14种药物代谢产物,系统分析了这些代谢产物的代谢转化规律及可能的结构。而尿液中代谢产物的数量和含量远低于粪便,最终在尿液中找到的4种微量代谢产物,其在粪便中均有发现。结论朝藿定B在大鼠体内的主要转化途径为结合、水解、氧化、加成及脱甲基反应等。     

非索非那定片联合卡介菌多糖核酸注射液治疗不明原因的慢性荨麻疹临床研究

分析康复治疗师临床实习教学中基于问题学习（PBL,problem-based learning）教学理念及方法与专业英语学习相结合在康复治疗师实习基地中的实际应用情况,激发了同学的学习兴趣,增加了学习的主动性,提高了对于专业英语的理解与掌握以及临床康复问题的感性认识,有利于培养同学的专业英语能力和临床思维,有助于提高教学质量,更好地实现提高专业能力与英语水平的教学目标.     

LC-MS/MS法检测降压类中成药及保健品中非法添加的7种化学药物

目的：建立快速、灵敏、准确的检测降压类中成药及保健品中非法添加阿替洛尔、盐酸可乐定、氢氯噻嗪、卡托普利、盐酸哌唑嗪、利血平及硝苯地平等7种化学药物的LC-MS/MS方法.方法：采用Phenomenex Luna C18（2.0mm×100mm,3μm）色谱柱进行分离,以0.5％甲酸水-乙腈为流动相梯度洗脱,流速为0.2 mL·min-1,离子源为ESI源,正负离子检测模式,对降压类中成药及保健品中非法添加的该7种化学药物进行定性检测.结果：7种化学药物的检出限分别为0.01～0.02ng,6批供试品有1批检测到非法添加氢氯噻嗪.结论：该方法专属性强、灵敏度高,适用于降压类中成药及保健品中非法添加该7种化学药物的定性分析.     

应用LC-MS联用技术检测生命糖安胶囊中添加的西药降糖成分

目的:建立检测制剂中非法掺人的西药降糖成分的专属性方法.采用液相色谱.质谱联用法.方法:选用VenusilMP C18柱,以0.02 moL/L醋酸铵(用冰醋酸调pH值至3.5)-乙腈(45:55)为流动相,对非法制剂的提取液进行液相色谱-质谱联用分析.通过与对照品的色谱、紫外及质谱行为相比较,对非法此类药进行定量测定和定性鉴别.结果:在生命糖安胶囊中检出格列苯脲和格列美脲,且它们的回收率分别为98.592%,9r7.576%.结论:该方法选择性强,灵敏度高,可作为分析检测此类保健品制剂中的西药降糖成分.     

基于HPLC-MS的消岩汤在正常大鼠体内药动学研究

目的 研究消岩汤中的有效成分并分析其在正常大鼠体内的代谢情况,从而初步探究消岩汤中抗肿瘤有效成分及其代谢规律。方法 取12只雄性Wistar大鼠随机分为实验组及对照组,实验组ig消岩汤浓缩液,对照组ig单药黄芪(消岩汤中君药)浓缩液;给药后于不同时间点目内眦取血0.5mL,采用液质联用(LC-MS)技术测定大鼠体内不同时间点黄芪甲苷、咖啡酸的浓度,得血药浓度-时间数据,采用DSA2.0软件计算血浆药动学参数。结果 实验组大鼠血浆中黄芪甲苷的消除速率常数(K10)、清除率(CL/F)均小于对照组(P<0.05、0.01),消除半衰期(t_tl/2β)、表观分布容积(V/F)、C_max、药时曲线下面积(AUC)均大于对照组(P<0.05、0.01、0.001),两组的达峰时间(t_max)相同。实验组大鼠血浆中咖啡酸的CL/F小于对照组(P<0.01),t_tl/2β、V/F、AUC、K10、C_max均大于对照组(P<0.05、0.01、0.001)。结论 消岩汤能够促进其抗肿瘤成分黄芪甲苷、咖啡酸的吸收代谢。     

液相色谱-质谱联用法在分析P-糖蛋白介导体内药动学过程中的应用

 目的 综述液相色谱-质谱联用法(LC-MS/MS)在分析P-糖蛋白介导药物体内过程中的应用,以期为今后的研究提供借鉴。方法 查阅LC-MS/MS在转运体研究中应用的相关文献。结果 近几年来LC-MS/MS技术在药物转运体的研究中得以广泛应用。结论 液相色谱-质谱联用法(LC-MS/MS)已经成为分析药物转运体体内、体外模型中药物浓度的强大工具之一,未来分析方法学的进步将依赖于色谱分离技术及质谱检测能力的进一步发展,同时LC-MS/MS也将对基于转运体介导的药物转运研究做出更大贡献。     

奥美拉唑对多潘立酮在大鼠体内药动学的影响

 目的 研究奥美拉唑对多潘立酮在大鼠体内药动学的影响。方法 10只健康雄性Wistar大鼠随机分成2组（分别为单独和联合给药组,用LC-MS/MS测定血浆中多潘立酮的浓度。结果 单独用药与联合用药组t_max分别为（0.80±0.11, （1.20±0.45 h, ρ_max分别为（103.0±26.6,（72.6±9.23 μg·L-1,均具有显著性差异(P<0.05,其他药动学参数无显著性差异(P>0.05。结论 联合用药后奥美拉唑延缓了多潘立酮的吸收速度。     

齐墩果酸口服自微乳在大鼠体内的药动学研究

目的 研究大鼠口服齐墩果酸自微乳给药系统后齐墩果酸的药动学特征.方法 将24只SD大鼠随机分成齐墩果酸自微乳实验组和市售齐墩果酸片剂对照组,运用高效液相色谱-质谱联用法测定不同时间点血浆中齐墩果酸的质量浓度,使用DAS2.0统计软件分析.结果 经胃肠给予齐墩果酸自微乳给药系统和市售齐墩果酸片剂后,t1/2β、Cmax和AUC0-24分别为(4.172±0.861)h和(10.076±2.019)h,(201.33±56.01) ng/mL和(70.09±14.88) ng/mL,( 1749.29±401.22) ng·h/mL和(416.25±80.34) ng·h/mL,结果之间均有显著性差异(P＜0.05).结论 与普通片剂比对,齐墩果酸自微乳给药系统显著提高了生物利用度.     

大鼠血浆中告达庭的LC-MS-MS测定方法学研究

 目的建立大鼠血浆中告达庭浓度的LC-MS-MS测定方法。方法取待测大鼠血浆0.2mL,加入炔诺酮(内标),乙酸乙酯提取、浓缩,取上清液20μL进样分析。流动相为乙腈-水(70∶30),色谱柱为江苏汉邦C18柱(4.6mm×150mm,5μm),流速为1.0mL·min^-1,LC-MS-MS多反应离子检测,正离子模式,用于定量分析的离子分别是告达庭:m/z514.1→385.4[M+Na⁺]和炔诺酮:m/z299.7→108.9[M+H⁺]。结果告达庭的线性范围为2.5～1000μg·L^-1,方法的回收率大于80%,批内和批间的精密度均小于15%,稳定性符合生物样品测定要求。结论该方法经考察符合血浆样品的测定要求,可以应用于血药浓度的测定和药动学研究。     

Investigation on modulation of human P-gp by multiple doses of Radix Astragali extract granules using fexofenadine as a phenotyping probe

Ethnopharmacology

Herb–drug interactions may potentially affect drug efficacy and/or the likelihood of adverse drug reactions. Radix Astragali (RA) extract formulation is usually prescribed for long-term use for patients with immunodeficiency, diabetes, nephropathy or cardiovascular diseases. Its use in combination with P-glycoprotein (P-gp) substrates is possible in clinical practice. Currently there is little knowledge about whether concomitant use of RA extract has an influence on disposition of P-gp substrate.

Aim of the study

This study was to investigate whether continuous and multiple doses of RA extract granules had modulatory effects on human P-gp.

Material and methods

A randomised, placebo-controlled, two-period crossover pharmacokinetic drug interaction study was conducted in healthy Chinese volunteers. Fexofenadine was used as a P-gp phenotyping probe. Fourteen volunteers received RA extract granules or placebo (4 g bid) for 7 days and then received a single oral dose of 120 mg fexofenadine. Fexofenadine plasma concentrations were determined by HPLC. Pharmacokinetic parameters were calculated by non-compartmental method and bioequivalence evaluation was performed.

Results

Pharamcokinetic parameters in the placebo phase were as follows: T_1/2 (3.75±1.47 h), C_max (745.11±137.41 μg/L), T_max (2.25±0.47 h), AUC_(0−t) (3894.27±923.45 μg h/L), AUC_(0−∞) (3993.84±912.97 μg h/L). Pharamcokinetic parameters in the RA extract phase were as follows: T_1/2 (4.00±1.24 h), C_max (709.44±170.03 μg/L), T_max (2.21±0.51 h), AUC_(0−t) (3832.72±1077.60 μg h/L), AUC_(0−∞) (3983.53±1019.83 μg h/L). The influence of RA extract on fexofenadine C_max and AUC lacks statistical significance. Fexofenadine in the two phases were bioequivalent. In the placebo phase, T_1/2 of fexofenadine in ABCB1 3435T mutation allele carriers was longer compared to ABCB1 3435CC carriers (4.43±1.44 h vs. 2.54±0.21 h, p<0.05). However, RA extract pretreatment abolished such genotype-related difference due to the lengthened T_1/2 in ABCB1 3435CC carriers. There was no association of the C3435T polymorphism with C_max and AUC_(0−t) in subjects with two pretreatments.

Conclusion

One-week administration of RA extract granules did not have a statistically significant impact on systematic exposure to fexofenadine, suggesting that RA extract is not a potent modulator of P-gp in vivo. RA extract appears to have ABCB1 C3435T genotype-dependent inhibitory effect on elimination rather than absorption of a P-gp substrate. Further investigations are necessary in patients who receive long-term use of RA extract formulation and combined P-gp substrates, especially in those ABCB1 3435CC carriers.     

LC-MS/MS测定大鼠血浆中莫诺苷血药浓度

莫诺苷是从中药山茱萸Cornus officinalis Sieb. & Zucc.中提取分离获得的环烯醚萜苷类化合物,具有神经保护等多种药理活性.本研究首次采用LC-MS/MS技术建立了大鼠血浆中莫诺苷浓度的测定方法.血浆样品采用蛋白沉淀法,以金丝桃苷作为内标,色谱柱为Inertsil C8-3色谱柱(2.1 mm×50 mm,5 μm),流动相为水(含1 mmol·L^-1甲酸钠)-乙腈梯度洗脱,流速0.4 mL·min^-1.采用电喷雾离子源(ESI),正离子模式,多反应监测(MRM).莫诺苷在2~5 000 μg·L^-1 (r= 0.995 7)线性关系良好,最低定量限为2 μg·L^-1.方法精密度、准确度、回收率和基质效应均符合生物样品测定的要求,适合大鼠血浆中莫诺苷浓度的测定.应用该方法进行莫诺苷在大鼠体内的药代动力学研究,给药剂量为20 mg·kg^-1,绘制血药浓度-时间曲线,并采用DAS 2.0 计算得主要药代动力学参数:AUC_0-∞为(587.6±290.7) μg·min·L^-1,C_max为(334.2±148.0) μg·L^-1,T_max为(0.6±0.3) h,t_1/2为(0.7±0.3) h.     

健康志愿者单次和多次口服美敏伪麻缓释胶囊的药动学研究

目的：研究美敏伪麻缓释胶囊经单、多次给药后的药动学特征,评估其在健康志愿者体内的安全性。方法22例受试者随机、开放试验设计,研究单、多次给药药动学特征。血浆中氯苯那敏、伪麻黄碱、右美沙芬、右啡烷采用LC-MS/MS法测定,药动学参数采用WinNonlin软件计算。安全性特征以记录到的所有不良事件来进行评价。结果整个研究过程中没有严重不良事件报告。单次口服美敏伪麻缓释胶囊后,伪麻黄碱、氯苯那敏、右美沙芬和右啡烷均在3～5 h达峰,t1/2分别为6.30±1.17、23.3±6.91、10.4±2.19、8.62±3.04 h,Cmax分别为203±40.4、5.05±1.39、4.29±3.95、1.95±0.72 ng/mL, AUClast分别为2050±559、137±47.5、61.3±67.5、17.2±6.58μg·h/L,AUCinf分别为2140±570、161±63.8、17.6±6.65、62.8±69.3μg·h/L。在2次/d,连续给药4 d后基本达到稳态血药浓度,伪麻黄碱、氯苯那敏、右美沙芬和右啡烷的Cmax、Cmin、AUCtau, ss与单次给药比较均有不同程度的升高,波动系数的平均值为107%～271%。结论美敏伪麻缓释胶囊多次给药后4 d达到稳态血药浓度,暴露均较单次给药后有所增高,在健康志愿者体内安全性良好。     

脑心通胶囊对缺糖缺氧损伤脑微血管内皮细胞的保护作用及其机制

目的探讨脑心通胶囊(NXT)对乳鼠缺糖缺氧损伤脑微血管内皮细胞(rBMECs)的体外保护作用及其机制。方法原代培养rBMECs,进行兔抗鼠VⅢ因子鉴定,MTT筛选出NXT肠吸收液体外保护rBMECs的质量浓度范围,优选出3个质量浓度进行实验。实验设对照组、模型组、尼莫地平(200μg/mL)组、不同质量浓度(62.50、125.00、250.00 mg/L)NXT肠吸收液组、NXT肠吸收液(250.00 mg/L)和LY294002(20μmol/L,PI3K/Akt通路抑制剂)共作用组。倒置显微镜下观察rBMECs形态,按照ELISA试剂盒方法检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达水平,Hoechst33342染色荧光显微镜观察细胞凋亡情况,流式细胞仪检测各组rBMECs的早期凋亡率,Western blotting法检测PI3K/Akt信号通路关键蛋白的表达情况。结果与模型组相比,NXT不同质量浓度给药组均能显著改善rBMECs的形态,降低细胞上清液中LDH、MMP-9的量,显著降低rBMECs的凋亡数和早期凋亡率,可显著抑制PI3K/Akt通路中p-Akt、Bcl-2的表达上调及Bax的表达下降,抑制Caspase-3活性。PI3K/Akt信号通路的特异性抑制剂LY294002的加入,阻断了该通路信号的传导,显著降低了NXT的保护作用。结论 NXT对缺糖缺氧致rBMECs损伤具有抗凋亡保护作用,其作用机制与PI3K/Akt信号通路有关。     

LC-MS/MS测定6种丹参主要有效成分及其脑靶向分布研究

建立测定大鼠血浆及脑匀浆中原儿茶酸、原儿茶醛、丹酚酸A、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮ⅡA的LC-MS/MS分析方法。实验采用液液萃取的方法对血浆及脑匀浆样品进行处理,采用Agilent Eclipse Plus-C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,3.5μm),以0.1%甲酸乙腈和0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱。质谱条件为电喷雾电离源(ESI),多反应监测(MRM)。正离子模式下检测的离子对(m/z)为297.4/254.3(隐丹参酮),295.5/249.3(丹参酮ⅡA),285.2/154.0(内标地西泮);负离子模式下检测的离子对(m/z)为154.3/153.1(原儿茶酸),137.3/108(原儿茶醛),493.0/295.2(丹酚酸A),718.0/520.0(丹酚酸B),321.4/152.3(内标氯霉素)。血浆及脑匀浆中隐丹参酮、丹参酮ⅡA、原儿茶酸、原儿茶醛、丹酚酸A、丹酚酸B的线性范围分别为:0.15~1 000,0.625~1 000,0.625~1 000,0.625~1 000,1.25~1 000,2.5~1 000μg·L-1;定量下限分别为0.15,0.625,0.625,0.625,1.25,2.5μg·L-1。建立的方法稳定、灵敏,可用于研究丹参6种成分的脑及血浆药物代谢动力学特性。通过动物实验比较了6种成分之间的血脑分配系数,初步评价其跨越血脑屏障的能力。     

脑心通胶囊促进后下肢缺血损伤小鼠内皮祖细胞动员与归巢

内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)是一种能分化为血管内皮细胞的前体细胞,组织缺血缺氧所产生的信号分子可促使骨髓EPCs动员至外周循环,并归巢于损伤组织参与新生血管的形成。脑心通胶囊(Naoxintong capsule,NXT)具有活血化瘀、行气止痛之功效,其多成分具有血管保护作用,可以有效改善组织缺血症状,但其对EPCs动员和归巢的作用尚不明确。该研究采用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)转基因小鼠骨髓移植(bone marrow transplantation,BMT)联合后下肢缺血损伤模型(unilateral hind limb ischemia,UHLI)研究脑心通胶囊对EPCs动员和归巢的作用。受体小鼠经CS137全身照射后,从目内眦静脉丛输注GFP标记的骨髓单个核细胞,建立BMT模型,经过4周骨髓重建后取外周血检测GFP阳性细胞比例。取BMT模型成功的小鼠,采用股动脉结扎复制UHLI模型,术后随机分为3组:模型组、NXT组(模型+NXT)和阳性对照组(模型+辛伐他汀)。采用流式细胞术检测骨髓重建4周后GFP阳性细胞比例,术前及术后第1,3,7,14天外周血中EPCs细胞数;采用免疫荧光组织化学染色检测给药3,7 d缺血腓肠肌组织EPCs细胞归巢数目。BMT小鼠与GFP基因鼠相比,GFP阳性细胞比例无显著性差异;术后1,3 d,NXT组和辛伐他汀组外周血EPCs数量显著性上调;术后3,7 d,NXT组和辛伐他汀组EPCs归巢数量显著高于模型组(P0.001),因此脑心通胶囊能显著促进EPCs的动员与归巢。     

LC-MS/MS测定马钱子总碱囊泡凝胶经皮给药后大鼠的血药浓度

目的:建立LC-MS/MS测定大鼠血浆中的马钱子碱和士的宁含量,以溶剂萃取法提取大鼠血浆中的待测成分。方法:以他克林为内标,采用Agilent ZORBAX XDB-C18色谱柱,流动相为乙腈-甲醇-水(0.05%甲酸,10 nmol.L-1甲酸铵)梯度洗脱,质谱采用多反应监测(MRM),用于定量分析的离子对依次为m/z 395.2/324.2(马钱子碱),m/z 335.2/184.2(士的宁)和m/z 199.1/171.1(他克林)。结果:测定血浆样品2种成分的线性范围分别为0.195～100,0.078 1～40μg.L-1,相关系数分别为0.994,0.996,马钱子碱的提取回收率为78.9%～102.4%,士的宁的提取回收率为95.2%～106.1%,方法的精密度、准确度、基质效应和稳定性均符合要求。结论:方法专属性强、灵敏度高,适用于血浆马钱子类生物碱的药代动力学研究。囊泡制剂能够降低马钱子碱进入体循环的药物浓度,且具有缓释作用。     

LC-MS/MS 测定大鼠血浆中香柑内酯及其药代动力学研究

目的:建立测定香柑内酯(berg)血浆药物浓度的液相色谱-电喷雾离子化-质谱(LC-ESI-MS)联用的分析方法,并探讨其在大鼠体内的药动学。方法:采用Hypersil ODS柱(4.6 mm×250 mm,5 mm),流动相甲醇-水(77.5∶2.5),流速0.8mL.min-1,柱温30℃,检测波长300 nm。结果:Berg在8.12～162.4μg.L-1(r=0.999 9)线性关系良好。方法学考察均符合要求。日内、日间变异系数(RSD)均<10%,精密度和准确度等均符合生物样品分析的要求。结论:该法准确、灵敏、特异,适用于berg的体内定量分析,berg在大鼠体内药动学过程属于一级吸收二室模型。     

液质联用测定人血浆中泮托拉唑的浓度

 目的 测定人血浆中泮托拉唑的浓度,并评价国产和进口泮托拉唑钠肠溶片的生物等效性。方法 采用LC-MS/MS测定人血浆中泮托拉唑的浓度,以DAS2.0计算药动学参数考察其生物等效性。结果 受试制剂和参比制剂的泮托拉唑t_1/2分别为（1.96±0.66）和（1.98±0.59）h,t_max分别为（3.17±0.84）和（3.09±0.81）h,ρ_max分别为（3.53±0.78）和（3.41±0.79）μg·mL^-1,AUC_0-∞分别为（10.12±4.09）和（10.86±3.99）μg·h·mL^-1。生物利用度为（97.9±22.3）%。结论 该方法重复性好,灵敏度高,泮托拉唑钠肠溶片受试制剂和参比制剂具有生物等效性。     

LC-MS/MS测定豚鼠血清中罗哌卡因浓度

 目的建立测定豚鼠血清罗哌卡因浓度的液相串联质谱(LC-MS/MS)法。方法血清样品用蛋白沉淀法进行预处理。以ZORBAX SB-C₁₈(3.0 mm×150 mm,3.5μm)色谱柱为分析柱,流动相:甲醇-水(80:20,各含5 mmol·L^-1甲酸铵),流速:0.4 mL·min^-1,通过电喷雾离子源(ESI)以多重反应选择离子检测(MRM)。正离子模式下罗哌卡因、内标布比卡因母离子及子离子m/z分别为275.3/126.2,289.4/140.3。结果罗哌卡因在6.58～6 580μg·L^-1内线性良好,方法的最低检测浓度为6.58μg·L^-1,方法回收率在93.29%～98.32%之间,日内、日间精密度(RSD)均小于6.92%。结论此方法快速、准确、灵敏,适用于药动学研究。