靶向干扰Glypican-3基因表达对鼻咽癌细胞增殖及侵袭迁移的影响

目的:探讨Glypican-3(GPC3)基因在鼻咽癌细胞系CNE中的表达情况,并研究靶向抑制GPC3基因表达对鼻咽癌细胞增殖及侵袭迁移的影响.方法:应用Western blotting和QRT-PCR检测人正常永生化鼻咽上皮细胞株NP69、鼻咽癌细胞株CNE中GPC3的表达,采用siRNA干扰技术沉默CNE细胞中GPC3基因的表达,分别采用Western blotting和QRT-PCR检测siRNA的靶向沉默效果.MTT增殖实验与Transwell实验观察GPC3抑制对CNE细胞增殖及侵袭迁移的影响.结果:GPC3在CNE细胞中高表达,用siRNA干扰技术沉默鼻咽癌细胞CNE的GPC3后可以抑制癌细胞的增殖、侵袭和迁移(P＜0.05).结论:下调GPC3的表达可以抑制鼻咽癌细胞的增值、侵袭及迁移.     

鼻咽癌组织中Gli1的表达及其对5-8F细胞增殖和迁移的影响

目的:研究神经胶质瘤相关癌基因1(Gli1)在鼻咽癌组织中的表达及其对鼻咽癌细胞5-8F增殖和迁移的影响。方法:采用荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测40例鼻咽癌组织和12例正常鼻咽组织中Gli1的表达;设计并合成针对Gli1基因的RNAi片段,将其感染5-8F细胞,蛋白质印迹法检测Gli1蛋白表达;MTT实验、平板克隆形成实验、细胞划痕实验和Boyden实验分别研究Gli1基因沉默后对5-8F细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果:Gli1在鼻咽癌组织中的表达明显高于正常鼻咽组织,将siRNA-Gli1-01和siRNA-Gli1-02转染入5-8F细胞后,5-8F细胞中Gli1蛋白表达水平明显降低,细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显减弱。结论:Gli1基因的表达异常与鼻咽癌的发生发展相关,有望成为鼻咽癌早期诊断和预测预后的生物分子标志物。     

ALDH1A1基因表达沉默对鼻咽癌细胞的增殖抑制作用

目的：探讨干扰乙醛脱氢酶1A1（ALDH1A1）基因表达后对鼻咽癌5-8F和CNE2细胞生长、增殖的影响。方法：构建ALDH1A1 siRNA 表达质粒稳定转染鼻咽癌5-8F和CNE2细胞,Western blot 检测干扰ALDH1A1基因蛋白表达水平。MTT、平板克隆、裸鼠成瘤实验检测干扰ALDH1A1基因前后鼻咽癌5-8F和CNE2细胞的增殖、克隆及成瘤能力。结果：与空白组和阴性对照组相比,干扰ALDH1A1表达后5-8F和CNE2细胞增殖、克隆及肿瘤形成能力明显受到抑制。结论：干扰ALDH1A1基因表达,可抑制鼻咽癌细胞的生长、增殖、克隆及成瘤能力。     

白花蛇舌草注射液对鼻咽癌CNE-2细胞体外增殖抑制及凋亡作用的研究

摘 要：［目的］ 探讨白花蛇舌草注射液对鼻咽癌CNE-2细胞体外增殖抑制作用及凋亡机制。［方法］ MTT法检测白花蛇舌草注射液对鼻咽癌CNE-2细胞的抑制率,Annexin-V-FITC/PI 双染法和Hoechst法检测细胞凋亡,Western blot法检测Bcl-2、Survivin、Bax、Caspase-3蛋白表达。［结果］ 不同浓度白花蛇舌草注射液对鼻咽癌CNE-2细胞具有抑制增殖作用,呈时间浓度依赖性（P＜0.05）。8ml/L白花蛇舌草注射液能明显诱导CNE-2细胞凋亡,与对照组相比,具有统计学意义（P＜0.05）。8ml/L白花蛇舌草注射液能诱导CNE-2细胞Bcl-2、Survivin蛋白表达降低、Bax及Caspase-3蛋白表达增加。［结论］ 白花蛇舌草注射液对鼻咽癌CNE-2细胞具有明显的体外增殖抑制作用,且呈时间浓度依赖性,其机制可能与诱导细胞凋亡,降低Bcl-2、Survivin蛋白表达,增加Bax及Caspase-3蛋白表达有关。     

miRNA-124-3p通过靶向STAT3抑制鼻咽癌细胞生长和转移

目的:探讨miR-124-3p在鼻咽癌中的表达及其对鼻咽癌细胞的影响及其机制.方法:收集鼻咽癌组织标本90例和慢性鼻咽炎症组织标本85例,运用qRT-PCR方法检测组织标本和CNE1、CNE2、SUNE1、HONE1、5-8F、6-10B及C666-1鼻咽癌细胞株和永生化鼻咽上皮细胞NP69中miR-124-3p的表达,脂质体介导的转染方法下调高表达miRNA-124-3p的鼻咽癌细胞株CNE2,同时上调低表达miRNA-124-3p的鼻咽癌细胞株C666-1.CCK8法、流式细胞技术、细胞划痕实验、Transwell实验和Boyden小室检测细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的变化;生物信息学靶基因预测miRNA-124-3的靶基因并运用荧光素酶报告实验验证,Western Blotting检测细胞中STAT3及其下游的p-STAT3、CCND2和MMP2蛋白表达水平.结果:鼻咽癌组织中miRNA-124-3p表达水平与慢性鼻咽炎症组织相比明显下调(P ＜0.001);miRNA-124-3p的表达水平与肿瘤大小及范围、区域淋巴结受累情况及临床分期显著相关(均P＜0.001);7种鼻咽癌细胞与NP69细胞相比较,miRNA-124-3p的表达水平均显著低于NP69(均P＜0.05).miRNA-124-3p过表达后C666-1细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭均显著低于空白对照组和mimics NC组(均P＜0.05);miRNA-124-3p抑制后CNE2细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭均显著高于inhibitor NC组和空白对照组(均P＜0.05).转染miRNA-124-3p后C666-1细胞STAT3、p-STAT3、CCND2和MMP2的表达显著降低,抑制CNE2细胞的miRNA-124-3p表达后STAT3、p-STAT3、CCND2和MMP2的表达显著降低.结论:miR-124-3p可通过下调靶基因STAT3的表达,进而影响其下游的p-STAT3、CCND2和MMP2信号通路,从而促进鼻咽癌细胞凋亡,抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移及侵袭.     

LncRNA PRNCR1靶向miR-653-5p调控鼻咽癌细胞恶性生物学行为

目的探讨前列腺癌非编码RNA 1(prostate cancer non-coding RNA 1,PRNCRl)对鼻咽癌细胞恶性生物学行为的影响及其可能的机制。方法采用RT-qPCR法检测鼻咽癌细胞系(5-8F、6-10B、C666-1)及鼻咽上皮细胞NP69中PRNCR1和miR-653-5p表达。分别将si-PRNCR1、miR-653-5p mimics或两者共转染至鼻咽癌6-10B细胞,采用CCK-8法检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞的凋亡情况,划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验验证PRNCR1和miR-653-5p的靶向关系。结果鼻咽癌细胞系(5-8F、6-10B、C666-1)中PRNCR1的表达水平均高于鼻咽上皮细胞NP69(均P<0.001),而miR-653-5p表达水平均低于NP69细胞(均P<0.001)。敲减PRNCR1或过表达miR-653-5p后,鼻咽癌6-10B细胞的增殖能力、划痕愈合率及侵袭细胞数均降低(均P<0.001),而凋亡率升高(均P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验证实PRNCR1与miR-653-5p存在靶向关系。敲减PRNCR1后,6-10B细胞中miR-653-5p的表达水平升高(P<0.001)。敲减miR-653-5p可逆转敲减PRNCR1对鼻咽癌6-10B细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。结论PRNCR1在鼻咽癌细胞系中高表达,敲减PRNCR1表达可抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,其作用机制可能与靶向负调控miR-653-5p有关。     

BMAL1基因抑制耐放射鼻咽癌细胞株增殖、迁移和侵袭能力机制研究

目的探究BMAL1基因对耐放射鼻咽癌细胞株（5‐8FR）增殖、迁移和侵袭能力的影响及分子机制。方法 小剂量分次照射构建鼻咽癌耐放射细胞5‐8FR,运用克隆形成实验结果拟合多靶单击模型并计算放疗增敏比。通过蛋白质印迹实验检测5‐8FR和对照组5‐8F细胞株中PI3K/Akt/MMP‐2/9信号通路相关蛋白的表达。构建BMAL1基因的高表达及敲除载体,分别转染鼻咽癌细胞株5‐8F和耐放射细胞株5‐8FR,获得BMAL1基因过表达（pcDNA‐BMAL1）及其对照组（pcDNA）和干扰（BMAL1‐shRNA）及对照组（con‐shRNA）的稳转细胞株。蛋白质印迹法验证感染效率,检测两组细胞过表达或干扰BMAL1基因后PI3K/Akt/MMP‐2/9信号通路相关蛋白的改变情况。采用CCK‐8法、划痕实验、Transwell法检测过表达及干扰BMAL1基因后耐放疗细胞株5‐8FR增殖、迁移和侵袭能力的变化。结果 鼻咽癌耐放射细胞株中BMAL1基因表达下调,PI3K/Akt通路蛋白及下游相关分子MMP‐2、MMP‐9表达增加,TIMP‐2、TIMP‐1表达降低。过表达BMAL1基因可抑制PI3K/Akt通路蛋白及下游相关分子MMP‐2、MMP‐9表达,促进TIMP‐2、TIMP‐1表达,抑制耐放射鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,干扰BMAL1基因则结果相反。结论 BMAL1基因可以逆转耐放射鼻咽癌细胞株PI3K/Akt/MMP‐2/9信号通路相关蛋白的表达,并抑制耐放射鼻咽癌细胞株的增殖、迁移和侵袭能力。     

异黏蛋白调控鼻咽癌细胞增殖及紫杉醇耐药的研究

 目的 探讨异黏蛋白（Metadherin, MTDH）对鼻咽癌细胞增殖及紫杉醇耐药的影响。方法 采用慢病毒介导的MTDH cDNA和MTDH-shRNA转染鼻咽癌细胞，分别上调和抑制MTDH的表达。CCK-8法、流式细胞实验分别检测细胞增殖能力、细胞周期及凋亡改变。CCK-8法确定紫杉醇对鼻咽癌细胞的IC₃₀、IC₅₀、IIC₇₀，并检测IC₃₀、IC₅₀、IC₇₀浓度下MTDH过表达组与沉默组细胞生存率改变。结果 MTDH上调后5-8F、HNE-1细胞的增殖能力均增强，而沉默MTDH后细胞的增殖能力均降低。MTDH沉默组的G1期细胞比例明显增加。MTDH过表达组细胞凋亡率降低，MTDH沉默组细胞凋亡率增加。MTDH表达上调之后，鼻咽癌细胞对紫杉醇的敏感度降低，在IC₇₀、IC₅₀浓度下，MTDH过表达组细胞的生存率高于对照组细胞。沉默MTDH之后，鼻咽癌细胞对紫杉醇的敏感度升高，在IC₅₀、IC₃₀浓度下，MTDH沉默组细胞的生存率低于对照组细胞。结论 MTDH在促进鼻咽癌细胞增殖中起重要作用，其高表达可促进鼻咽癌细胞紫杉醇耐药性的产生。     

miR-21-5p通过靶向FGF18促进人鼻咽癌CNE1细胞增殖的机制研究

目的:探讨miR-21-5p通过靶向FGF18促进人鼻咽癌CNE1细胞增殖的具体机制。方法:Real-time quantitative PCR检测miR-21-5p、FGF18在人鼻咽癌组织及各鼻咽癌细胞系中的表达情况。对照组转染mimics/inhibitor NC,实验组转染miR-21-5p mimics/inhibitor/siFGF18。利用MTT、细胞克隆形成实验观察miR-21-5p及FGF18对CNE1细胞增殖活力的影响;Luciferase实验验证miR-21-5p和FGF18 3'-UTR的结合;Western blot检测FGF18、PI3K及Akt等的表达情况。结果:RT-PCR检测:人鼻咽癌组织及其细胞系中miR-21-5p及FGF18表达均显著增加（P＜0.05)。MTT及细胞克隆形成实验:CNE1细胞瞬转miR-21-5p inhibitor后活细胞数量明显减少,增殖能力显著下降（P＜0.05);而在miR-21-5p inhibitor+siFGF18组中,这种增殖抑制作用显著增强（P＜0.05）。Luciferase实验:miR-21-5p与FGF18 3'-UTR直接结合。Western blot检测:miR-21-5p inhibitor组FGF18、PI3K及Akt表达显著减少（P＜0.05）。结论:miR-21-5p靶向结合FGF18基因,激活PI3K/Akt信号通路,从而促进人鼻咽癌组织及CNE1细胞的增殖。     

lncRNA MEG3通过下调miR-7-5p表达对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响

目的 探讨lncRNA MEG3对鼻咽癌细胞的放射敏感性影响及潜在作用机制。方法 实验设置过表达对照组、过表达MEG3组、抑制miR-NC组、抑制miR-7-5p组、过表达对照+4 Gy组、过表达MEG3+4 Gy组、抑制miR-NC+4 Gy组、抑制miR-7-5p+4 Gy组、过表达MEG3+过表达miR-NC组、过表达MEG3+过表达miR-7-5p组。采用qRT-PCR检测miR-7-5p和MEG3表达;细胞克隆形成实验检测鼻咽癌细胞放射敏感性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果 MEG3在鼻咽癌组织和细胞系中低表达;过表达MEG3和抑制miR-7-5p表达可增加鼻咽癌细胞放射敏感性且促进细胞凋亡。MEG3可靶向调节miR-7-5p表达;过表达miR-7-5p逆转了过表达MEG3对鼻咽癌细胞放射增敏和促进细胞凋亡的作用。结论 过表达MEG3增加鼻咽癌细胞放射敏感性,并促进细胞凋亡,其机制可能与下调miR-7-5p有关。     

鼻咽癌干细胞的生物学行为特征及CD44对Ras信号通路的调控作用

目的探讨鼻咽癌干细胞的生物学行为和Ras信号通路特征,以及CD44与Ras信号通路活化之间的调控关系。方法采用无血清悬浮培养法获得鼻咽癌CNE2和5-8F细胞的干细胞CNE2-SC和5-8F-SC。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞增殖,细胞平板克隆形成实验观察细胞克隆形成情况,Transwell细胞迁移实验检测细胞的迁移能力,细胞黏附实验观察细胞贴壁情况,Western blot法检测细胞中Ras信号通路相关蛋白的表达水平,采用RNA干扰技术明确CD44对Ras信号通路的调控作用。结果接种后24、48和72 h,鼻咽癌干细胞CNE2-SC和5-8F-SC的增殖能力分别低于其来源鼻咽癌细胞(均P<0.05)。细胞种植14 d后,CNE2-SC细胞的克隆形成率为(44.5±1.9)%,高于其来源细胞CNE2[(34.9±1.5)%,P<0.01];5-8F-SC细胞的克隆形成率为(47.4±1.8)%,亦高于其来源细胞5-8F[(37.2±1.7)%,P<0.01]。CNE2-SC细胞的迁移细胞数为(87.6±7.8)个/视野,是CNE2细胞的3.97倍(P<0.01)。5-8F-SC细胞的迁移细胞数为(67.2±5.7)个/视野,是5-8F细胞的3.07倍(P<0.01)。接种后3 h,CNE2-SC和CNE2细胞的黏附贴壁率分别为(42.1±7.6)%和(8.9±2.0)%;接种后6 h,分别为(82.4±5.0)%和(12.1±2.2)%。CNE2-SC细胞的黏附贴壁率均高于CNE2细胞(均P<0.01)。接种后3 h,5-8F-SC和5-8F细胞的黏附贴壁率分别为(53.6±6.1)%和(7.3±1.5)%;接种后6 h,分别为(90.7±3.6)%和(11.0±1.2)%。5-8F-SC细胞的黏附贴壁率均高于5-8F细胞(均P<0.01)。与普通鼻咽癌细胞相比,鼻咽癌干细胞中CD44、Ras和N-钙黏蛋白(N-cadherin)的表达水平升高(均P<0.01),E-钙黏蛋白(E-cadherin)、10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)表达水平降低(均P<0.01),磷酸化丝裂原细胞外激酶1/2(p-MEK1/2)、磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)磷酸化水平升高(均P<0.01)。相关分析显示,CNE2细胞与CNE2-SC细胞中,5-8F细胞与5-8F-SC细胞中,CD44与Ras蛋白表达水平均呈高度正相关(r=0.985,P=0.002;r=0.962,P=0.038)。沉默CNE2-SC细胞中CD44的表达后,人表皮生长因子受体2(HER-2)和Ras的蛋白表达水平显著降低,p-ERK1/2、p-Akt和p-PKCδ磷酸化水平下降(均P<0.01)。结论相对于来源鼻咽癌细胞,鼻咽癌干细胞增殖能力降低,但其克隆形成能力、迁移能力、黏附能力增强,可能与其CD44调控的Ras信号通路异常激活有关。     

AMIGO2通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路促进鼻咽癌细胞的增殖

目的：探讨Ig 样结构域 2 黏附分子（adhesion molecule with Ig like domain 2,AMIGO2）在鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）细胞增殖中的作用及其机制。方法: 选用2017年9月至11月福建省肿瘤医院收集的10例NPC组织和10例正常鼻 咽黏膜上皮组织标本,以及NPC细胞系CNE-1、CNE-2、SUNE-1、 6-10B、 C666-1和人永生化鼻咽黏膜上皮细胞株NP69, 用qPCR法 检测NPC组织和细胞中AMIGO2 mRNA的表达。构建慢病毒载体干扰AMIGO2表达, 用qPCR法验证其干扰效率; 用CCK-8 法、克隆形成及流式细胞术检测干扰AMIGO2表达对NPC细胞增殖、克隆形成和凋亡的影响, 用 Western blotting 检测干扰 AMIGO2 表达对 NPC 细胞增殖及 PI3K/AKT/mTOR 信号通路相关标志蛋白表达的影响。结果: AMIGO2在NPC组织和 CNE-2和SUNE-1细胞中高表达（均P<0.01）。慢病毒AMIGO2感染后,CNE-2和SUNE-1细胞的AMIGO2干扰效率均达50%以 上。干扰AMIGO2表达,显著降低CNE-2和SUNE-1细胞增殖及克隆形成能力（均P<0.01）、明显提高细胞的凋亡率（均P<0.01）; 降低 SUNE-1 细胞中PI3K、AKT和mTOR磷酸化蛋白的表达水平 （均P<0.01）、下调survivin 和 PCNA 蛋白的表达水平（均P<0.01）。 结论：AMIGO2通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路促进NPC细胞增殖并抑制其凋亡,提示AMIGO2可能是NPC治疗的潜 在靶点。     

Serglycin稳定干扰对鼻咽癌高转移细胞顺铂敏感性的影响及机制研究

目的：观察鼻咽癌高转移细胞5－8f的顺铂敏感性受Serglycin稳定干扰的影响，并对干扰机制进行初步探究。方法：建立Serglycin 稳定干扰的鼻咽癌高转移细胞株，分为三组：实验组5－8f KDA和5－8f KDC及对照组5－8f scrambled。测定Serglycin蛋白的表达情况；观察亲代及稳定株细胞形态；MTT法检测吸光度，绘制顺铂作用下的增殖曲线；测定细胞存活率；测定干细胞基因表达量；测定Vimentin 与 E－cadherin 含量。结果：实验组Serglycin基因表达被抑制，对照组Serglycin基因表达较多，差异具有统计学意义（P＜0．05）。实验组的分泌性Serglycin蛋白明显减少，对照组的Serglycin分泌蛋白表达较多。稳定组细胞形态呈圆形或多边形，对照组细胞为长梭形。MTT检测发现癌细胞受顺铂作用后第三天开始，对照组细胞吸光度增加较稳定组细胞明显快，差异有统计学意义（P＜0．05）。与5－8f scrambled组相比，实验组的细胞存活率明显下降，差异具有统计学意义（P＜0．05）。稳定组细胞干细胞基因表达明显降低，差异具有统计学意义（P＜0．05）。肿瘤组织中 Serglycin 能促进Vimentin 蛋白的表达，抑制E－cadherin 蛋白的表达。结论：Serglycin 稳定干扰可以增加鼻咽癌高转移细胞对顺铂的敏感性。     

miR-17-5p 通过下调BRMS1L表达调控鼻咽癌CNE2 细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡

目的：探讨miR-17-5p 通过调控乳腺癌转移抑制基因1 相似基因（breast cancer metastasis suppressor 1 like,BRMS1-like 或BRMS1L）表达调控鼻咽癌细胞增殖和侵袭的分子机制。方法：收集2014 年1 月至2017 年12 月间平煤神马医疗集团总医院收治的40 例鼻咽癌患者切除的鼻咽癌组织及其相应的癌旁组织标本,以及鼻咽癌细胞系CNE 2、HONE 1、C666-1 和鼻咽部永生化上皮细胞株NP69,采用qPCR 检测miR-17-5p 在癌组织和癌细胞系中的表达水平。通过StarBase 数据库预测BRMS1L 与miR-17-5p 的靶向关系,采用双荧光素酶报告基因实验进行验证。WB检测转染miR-17-5p 模拟物和抑制物对CNE2 细胞中BRMS1L表达的影响;CCK-8、Transwell 和流式细胞术检测miR-17-5p/BRMS1L分子轴对CNE2 细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。结果：miR-17-5p 在鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞系中呈高表达（P<0.05 或P<0.01）,下调miR-17-5p 显著抑制CNE2 细胞增殖、侵袭、迁移但促进细胞凋亡（P<0.05 或P<0.01）。miR-17-5p 靶向作用于BRMS1L并下调其表达水平。过表达BRMS1L可显著抑制CNE2 细胞增殖、侵袭、迁移而促进细胞凋亡（均P<0.01）;而同时过表达miR-17-5p 和BRMS1L 可逆转上述作用（均P<0.01）。结论：miR-17-5p通过靶向下调BRMS1L的表达,进而促进CNE2 细胞增殖、侵袭和迁移而抑制细胞凋亡。     

LncRNA LINC00261下调miR-620表达调控鼻咽癌放射敏感性实验研究

目的:探讨LINC00261对鼻咽癌放射敏感性影响及其作用机制。方法:用qRT-PCR检测放射敏感、放射抵抗鼻咽癌组织中miR-620和LINC00261的相对表达水平。采用0、2、4、6、8 Gy 60Coγ射线照射鼻咽癌细胞系6-10B、HNE-3细胞后,qRT-PCR法检测miR-620和LINC0...     

miR-409-3p靶向调控RRM2抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的:探究微小RNA-409-3p(miR-409-3p)对鼻咽癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其作用机制.方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测人永生化鼻咽上皮细胞(NP69)、鼻咽癌细胞5-8F、6-10B中miR-409-3p、核糖核苷酸还原酶M2(...     

鼻咽癌细胞XIAP mRNA表达及其意义

目的 探讨XIAP mRNA在鼻咽癌细胞中的表达及其意义.方法 体外培养5-8F鼻咽癌细胞,RT-PCR法检测XIAP mRNA表达水平.结果 与正常鼻咽部上皮细胞相比,XIAP mRNA在鼻咽癌细胞中的表达水平显著升高(P<0.01).结论 XIAP在鼻咽癌细胞中高表达,可能与鼻咽癌发生发展有关,有可能成为鼻咽癌治疗的靶标.     

细胞表面核仁素表达下调抑制肝癌细胞生长

目的 探讨核仁素在肝细胞癌(HCC)表面的表达及其表达下调对HCC细胞生长的影响.方法 用免疫荧光和流式细胞仪检测HCC细胞表面的核仁素表达;用RNA干扰技术将核仁素短发夹RNA(shRNA)质粒转染到HCC细胞,下调核仁素在HCC细胞中的表达;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞的迁移能力,探讨细胞表面核仁素表达下调对HCC细胞生长和侵袭能力的影响.结果 核仁素不仅表达于HCC的细胞核,而且在细胞质和细胞膜也有表达.RNA干扰可下调细胞质和细胞膜内70.0%的核仁素表达(P<0.01),而细胞核内核仁素表达水平保持不变.HCC表面核仁素表达下调后,MTT实验显示,shRNA干扰组痛细胞体外增殖速度较对照组减慢(P<0.01);Transwell实验显示,shRNA干扰组癌细胞穿膜细胞数为(27.6±1.8)个,显著少于对照组[(37.5±2.1)个,P<0.01].结论 HCC细胞表面核仁素表达下调可抑制癌细胞生长.

Abstract：

Objective To detect the cell-surface-expressed nucleolin and investigate its tumor suppressing effect on the growth of hepatocellular carcinoma cells.Methods To detect cell-surfaceexpressed nucleolin in the hepatocellular carcinoma cells by immunofluorescence and flow cytometry.To down-regulate the nucleolin expression level in hepatocellular carcinoma cells by RNA interference.The tumor-suppressing effect of cell-surface nucleolin on hepatocellular carcinoma cells was assessed by MTT and transwell chamber assays.Results Nucleolin was expressed in the nuclei, cytoplasm and on the cell surface of hepatocellular carcinoma cells.ShRNA markedly decreased the nucleolin expression level in the cytoplasm and on the cell surface ( P <0.01 ), but the nuclear nucleolin remained unchanged.After downregulation of cell-surface nucleolin, MTT assays showed that the cell growth rate of hepatocellular carcinoma cells in the shRNA interference group was significantly inhibited as compared with that in the control group (P <0.01 ).The transwell chamber assay showed that the mean transmembrane cell number in the shRNA interference group was significantly lower than that in the control group.Conclusion The results of this study show that downregulation of cell-surface nucleolin expression inhibits the growth of hepatocellular carcinoma cells in vitro.     

Downregulated Expression of PTPN9 Contributes to Human Hepatocellular Carcinoma Growth and Progression

Human hepatocellular carcinoma (HCC) is one of the most common malignant cancers, whose molecular mechanisms is remains largely. PTPN9 has recently been reported to play a critical role in breast cancer development. However, the role of PTPN9 in human HCC remains elusive. The present study aimed at investigating the potential role of PTPN9 in HCC. Western blot and immunohistochemistry were used to examine the expression of PTPN9 protein in HCC and adjacent non-tumorous tissues in 45 patients. Furthermore, Cell Counting Kit-8, flow cytometry and RNA interference experiments were performed to analyze the role of PTPN9 in the regulation of HCC cell proliferation. We showed that the expression level of PTPN9 was significantly reduced in HCC, compared with adjacent non-tumorous tissues. PTPN9 expression was inversely associated with Tumor size (P?=?0.014), serum AFP level (P?=?0.004) and Ki-67 expression. Low expression of PTPN9 predicted poor survival in HCC patients. Moreover, PTPN9 interference assay that PTPN9 inhibited cell proliferation in HepG2 cells. Cell apoptosis assay revealed that, silencing of PTPN9 expression significantly reduced cell apoptosis, compared with control ShRNA treatment group. Our results suggested that PTPN9 expression was down-regulated in HCC tumor tissues, and reduced PTPN9 expression was associated with worsened overall survival in HCC patients. Depletion of PTPN9 inhibits the apoptosis and promotes the proliferation of HCC cells.