小分子RNA干扰技术及其抗肿瘤作用研究进展

RNA干扰是一种由双链RNA介导的基因沉默现象,现已成为生物学领域研究的热点。RNA能特异性抑制同源基因的表达,尤其在抗肿瘤方面,已经得到了深入的研究。小分子RNA主要包括siRNA、miRNA和piRNA 3类,表现出截然不同的作用效果,为人类在治疗恶性肿瘤时提供了很有潜力的方向。但还存在特异性和介导率较低和毒副作用的问题,值得进一步深入研究。     

RNA干扰——一种有力的基因沉默工具

RNA干扰(RNAi)自从1998年被阐明以来,一直是科学研究的一大热点。短短几年,基于此机制建立的技术,在功能基因组学、微生物学、基因表达调控机制研究等领域得到了广泛应用,已经成为一种有力的基因沉默方法。尤其对非编码RNA中的短干扰RNA与微小RNA的研究日益受到重视。本文从RNAi技术的发展、作用机制及应用等方面进行综述。     

RNA干扰的途径和机制

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是由双链RNA介导的序列特异的基因沉默现象,它在转录水平、转录后水平和翻译水平上阻断基因的表达,具有高效性和高特异性的特点.现就RNAi的两种途径:小干扰RNA和微小RNA的特点和机制作一综述.     

竞争性内源性RNA调控网络在乳腺癌中的作用研究进展

乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤,尽管其治疗已取得进展,但仍然是女性癌症死亡的主要原因。非编码RNA(noncoding RNA, ncRNA)在乳腺癌的发生发展中起关键作用,但是不同ncRNA之间存在的作用机制尚不清楚。近来,RNA研究领域新提出的概念是“竞争性内源性RNA(competing endogeous RNA, ceRNA)”,即不同RNA之间存在相互调节作用,包括长链非编码RNA（long noncoding RNA,LncRNA）、微小RNA、转录假基因和环状RNA。研究表明,这些RNA之间的作用失调在促进或抑制乳腺癌发生发展方面具有重要作用。本文针对ceRNA网络调控轴在乳腺癌中的研究进展作一综述。     

基于生物信息学构建肝细胞癌预后相关circRNA-miRNA-mRNA调控网络

目的 应用生物信息学方法筛选肝细胞癌中差异表达的环状RNA (circRNA),构建肝癌预后相关circRNA-微RNA (miRNA)-mRNA调控网络。方法 从基因表达综合（GEO）数据库中下载肝癌相关circRNA数据集,应用GEO2R工具筛选差异表达circRNA,在Circular RNA Interactome及circBank数据库中预测与circRNA相结合的miRNA,在miRDB、RNAInter及TargetScan数据中预测miRNA的靶基因,构建circRNA-miRNA-mRNA调控网络。应用DAVID软件、STRING数据库、Cytoscape软件及GEPIA数据库对靶基因进行功能注释、通路分析、蛋白质-蛋白质相互作用网络（PPI）构建及预后分析,最后确定肝癌预后相关circRNA-miRNA-核心靶基因调控网络。结果 筛选出1个circRNA,为hsa＿circRNA＿0000301,与之结合的miRNA有4个,分别为hsamiR-377-3p、hsa-miR-767-3p、hsa-miR-1178-3p及hsa-miR-1228-3p。功能注释和通路富...     

小鼠CYP2E1基因靶向miRNA表达载体的构建及鉴定

目的 设计并构建靶向小鼠CYP2E1基因的miRNA干扰质粒,为探索CYP2E1基因功能奠定基础.方法 应用invitrogen设计软件设计两条干扰小鼠CYP2E1基因的靶向miRNA序列,合成相应的回文DNA序列,退火后分别连接到pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR载体上,构建两套miRNA真核表达载体CYP2E1-miR1和CYP2E1-miR2,并使用该载体特有的串联方法将两载体上的miRNA前体寡核苷酸序列进行串联成为CYP2E1-miR1-miR2;将上述重组载体分别与构建的pcDNA3.1(+)-CYP2E1表达质粒共转染入293T细胞,RT-PCR法鉴定其干扰效果.结果 经酶切及测序鉴定,针对鼠CYP2E1基因的miRNA干扰质粒构建成功,并能够有效抑制共转染入293T细胞的pcDNA3.1(+)-CYP2E1质粒的表达,且串联质粒CYP2E1-miR1-miR2优于单独的干扰质粒CYP2E1-miR1及CYP2E1-miR2.结论 小鼠CYP2E1基因的靶向miRNA表达载体构建成功.     

大鼠即刻早期基因产物Cyr61短发夹环 RNA质粒的构建与鉴定

目的构建Cyr61短发夹环RNA(shRNA),探讨即刻早期基因产物Cyr61RNAi对Cyr61功能的影响,以期为进行这方面研究提供基础。方法在Gene Bank中查到鼠Cyr61的mRNA基因序列并输入到相应设计软件中,以此设计引物序列。经PCR扩增、酶切后,克隆于Pgenesil-1载体并行酶切鉴定。结果构建的鼠即刻早期基因产物Cyr61shRNA质粒经测序鉴定验证与预期相符。结论该研究结果为研究Cyr61shRNA质粒的RNAi功能及其对Cyr61功能影响的研究奠定了基础。     

全血标本保存条件对人总RNA提取效率的影响

目的探讨全血标本保存条件对RNA提取效率和RNA完整性的影响。方法从179例保存在不同温度、不同时间的全血标本中提取总RNA,测定其浓度和纯度、分析其完整性。另选20例标本研究冻融次数对RNA提取效率的影响。179例中的73例总RNA在-80℃下保存1周前、后分别测定浓度和纯度,观察两者差异。结果新鲜血来源的总RNA浓度最高,平均306.51ng/μl;冻融2次全血仍可获得足量的RNA,浓度181.98ng/μl,RNA完整性有所下降;-80℃保存1周的RNA,浓度和纯度都略有下降。结论利用Trizol法可从小体积全血标本中获取足量有效的总RNA;不同保存条件全血中所获取的总RNA浓度存在差异;总RNA-80℃短期保存也会略有降解。     

近视相关非编码RNA的研究进展

非编码RNA是一类无法借由翻译形成蛋白质的RNA,包括微RNA(microRNA,miRNA)、长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)和环状RNA(circular RNA,circRNA)等,曾被认为是"转录噪音".研究发现非编码RNA参与许多人类疾病病理生理过程,包括细胞的增殖、分...