基于GLP-1R/cAMP/PKA/CREB的泽泻汤促进白色脂肪棕色化/激活棕色脂肪作用机制研究

基于GLP-1R/cAMP/PKA/CREB探讨泽泻汤(Zexie Decoction, ZXD)体内外促进白色脂肪棕色化/激活棕色脂肪的作用机制。西式饮食(western diet, WD)诱导高脂血症小鼠模型,设置对照组,WD组(模型组),ZXD低、中、高剂量组;体外诱导3T3-L1细胞成脂分化模型,以毛喉素(forskolin, FSK)作为阳性对照,设置ZXD低、中、高剂量组。免疫组化与免疫荧光结果提示,与WD组相比,泽泻汤促进白色和棕色脂肪组织中UCP1表达;同时泽泻汤上调了细胞中UCP1、CPT1β、PPARα等基因;Western blot检测PGC-1α、UCP1、PPARα的蛋白表达也表现出随泽泻汤剂量依赖性升高,表明泽泻汤促进白色脂肪棕色化/激活棕色脂肪。苏木素-伊红(HE)染色结果显示,相较于WD组,泽泻汤处理后,白色和棕色脂肪细胞明显缩小,ATGL、HSL、MGL、PLIN1的mRNA表达显著上调;油红O染色和生化试剂盒检测细胞TC、TG水平均提示泽泻汤改善脂质蓄积,促进脂肪分解。p-CREB免疫组化和免疫荧光发现,泽泻汤处理逆转了WD导致的p-CREB表达降低...     

基于AMPK/SIRT1/PGC-1α通路探讨泽泻汤改善高脂饮食诱导小鼠认知障碍的作用机制

目的：探讨泽泻汤对高脂饮食小鼠认知功能及AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路的调控作用。方法：普通饮食C57BL/6J小鼠作为对照组,高脂模型小鼠随机分为模型组、泽泻汤组和辛伐他汀组,每组8只。对照组及模型组给予蒸馏水灌胃,给药组分别给予泽泻汤和辛伐他汀灌胃。干预后,通过葡萄糖耐量试验、胰岛素耐受试验以及血脂4项（TG、TC、LDL-c、HDL-c）评估各组小鼠血糖及血脂的变化情况;Morris水迷宫及新物体识别实验评估各组小鼠学习记忆能力;Nissl染色观察海马神经元情况;免疫荧光及RT-qPCR分别检测IBA1蛋白及促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α、iNOS、COX2 mRNA相对表达水平;硫磺素S观察脑内淀粉样蛋白沉淀情况;Western Blot检测海马组织细胞凋亡、Aβ转运以及AMPK/SIRT1/PGC-1α通路相关蛋白表达水平。结果：与模型组比较,泽泻汤能改善高脂模型小鼠的葡萄糖耐受性和胰岛素敏感性（P<0.01,P<0.05）,泽泻汤组小鼠体质量和血清中TG及LDL-c水平显著降低（P<0.01,P<0.05）,血清中HDL-c水平...     

化瘀祛痰方调节AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路抑制炎症小体活化改善AS小鼠肝脏脂质沉积的机制研究

目的?探讨化瘀祛痰方调节腺苷酸活化蛋白激酶/沉默信息调节因子1/过氧化酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α（AMPK/SIRT1/PGC-1α）信号通路调控炎症小体活化对动脉粥样硬化ApoE-/-小鼠肝脏脂质沉积的影响及作用机制。方法?将24只ApoE-/-小鼠按随机数字表法分为模型组、辛伐他汀组、化瘀祛痰方组，8只C57BL/6J小鼠作为正常组对照。造模结束次日各组开始灌胃，正常组和模型组采用等容积生理盐水，辛伐他汀组采用辛伐他汀混悬液2.275 mg/（kg·d），化瘀祛痰方组采用化瘀祛痰方，生药量为20 g/（kg·d），每日1次，连续给药8周。采用全自动生化分析仪检测血清血脂水平；HE染色和油红O染色观察肝脏组织病理和脂质沉积情况；Western Blot法检测肝脏腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（p-AMPK）、沉默信息调节因子1（SIRT1）、过氧化物酶体增殖物受体γ共激活因子1α（PGC-1α）、线粒体转录因子A（Tfam）、含pyrin结构域NOD样受体家族3（NLRP3）蛋白表达；实时荧光定量PCR法检测肝脏线粒体DNA（mtDNA）水平；ELISA法检测血清IL-1β、IL-18水平。结果?与正常组比较，模型组甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白总胆固醇（LDL-C）水平显著升高（P<0.01）；肝脏细胞肿胀，排列紊乱，出现大量脂肪空泡，脂质沉积明显；p-AMPK、SIRT1、PGC-1α、Tfam蛋白表达降低，NLRP3蛋白表达升高（P<0.05）； mtDNA相对表达量减少（P<0.01）；IL-1β、IL-18水平升高（P<0.01）。与模型组比较，辛伐他汀组和化瘀祛痰方组TG、TC、LDL-C水平降低（P<0.01）；肝细胞结构有所恢复，少见脂肪空泡，脂质沉积现象改善明显；两组p-AMPK、SIRT1、PGC-1α、Tfam蛋白表达升高，NLRP3蛋白表达减少（P<0.05，P<0.01）；mtDNA相对表达量增加（P<0.01）；两组血清IL-1β、IL-18水平降低（P<0.01）。4组血清高密度脂蛋白总胆固醇（HDL-C）水平差异无统计学意义（P>0.05）。结论?化瘀祛痰方可通过AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路调节线粒体功能，抑制炎症小体激活和炎性反应，改善肝脏脂质沉积。     

葱白提取物对非酒精性脂肪肝模型大鼠PGC-1α和脂肪酸β氧化限速酶CPT-1表达的影响

目的探讨葱白提取物治疗高脂饮食诱导的非酒精性肝病大鼠可能的分子机制。方法采用高脂饮食建立大鼠非酒精性脂肪肝模型,并应用小干扰RNA技术抑制转染组大鼠辅激活因子(peroxisome proliferator-activated receptor-γcoactivator`1α,PGC-1α)的表达,将48只Wistar大鼠随机分为6组,观察各组大鼠的一般情况,计算肝指数,油红染色法观察各组大鼠肝脏组织的病理形态学变化,并运用RT-PCR法和Western-blot法分别检测PGC-1α和脂肪酸β氧化限速酶肉毒碱棕榈酰基转移酶-1(carnitine palmitoyltransferase-1,CPT-1)的表达水平。结果各组大鼠体重无明显差异,模型组精神较差,偶见腹泻便溏情况,活动度明显不及葱白治疗组。与正常对照组相比,模型组大鼠肝指数明显升高(P0.05);与模型组比较,葱白组肝指数下降(P0.05),转染葱白组与模型组肝指数差异不明显。从油红染色可见模型组大鼠肝细胞内较多橘红色脂滴聚集,细胞肿胀明细;葱白组胞内脂滴明显减少;转染葱白组胞内脂滴数量介于模型组和葱白治疗组之间。PGC-1α和CPT-1的表达情况:与空转组比,转染组PGC-1α的表达水平降低(P0.05),CPT-1的表达水平也下降(P0.05)。和正常组比,模型组PGC-1α与CPT-1的表达水平均降低(P0.05);和模型组比,葱白组PGC-1α与CPT-1的表达水平均增加(P0.05),转染葱白组两者的表达则与模型组无明显差异(P0.05)。结论辛温通阳中药葱白提取物治疗NAFLD依赖PGC-1α的转录活化水平,从而调控肝细胞脂肪酸β氧化发挥作用。     

虎金方对小鼠非酒精性脂肪肝的作用及对SIRT1/PPARα通路的影响

目的探讨虎金方对高脂饮食(HFD)导致的非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型小鼠的治疗作用及相关作用机制。方法将50只雄性SPF级C57/BL6J小鼠随机分为正常组,模型组,虎金方高、中、低剂量组。模型复制成功后,正常组和模型组小鼠按10 mL·kg^-1给予0.9%生理盐水灌胃;虎金方各组分别按高、中、低(21.24、10.62、5.31 g·kg^-1)剂量给予虎金方浓煎药液灌胃,每日1次,共4周。模型复制及给药期间每周称量小鼠体质量,并观察一般状况。给药结束后收集血液用于检测血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG),并取整块肝脏,称质量并肉眼观察其外观大小、质地及颜色。一部分做成病理切片,用于HE染色,剩余肝脏组织用于以Western Blot法检测沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)、活化过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)蛋白的表达。结果与正常组比,模型组最终体质量明显增加(P<0.001);肝脏体积增大,呈黄色,质量增加明显(P<0.001);血清TC、TG上升明显(P<0.05,P<0.001);肝小叶结构被破坏,肝细胞肿胀变形;SIRT1、PGC-1α、PPAR-α蛋白表达明显下降(P<0.05,P<0.001)。给药后,与模型组比,虎金方高剂量组最终体质量下降明显(P<0.05),肝湿质量降低(P<0.001),TG明显下降(P<0.001),SIRT1、PGC-1α、PPAR-α蛋白表达均明显增加(P<0.05,P<0.01)。结论虎金方有治疗小鼠非酒精性脂肪肝的作用,其作用机制可能与其调节SIRT1/PPAR-α通路,减轻肝脏脂质沉积有关。     

平糖方促进非酒精性脂肪肝大鼠肝脏PPAR-α和CPT-1 mRNA表达

目的：观察中药复方平糖方对非酒精性脂肪肝（NAFLD）大鼠模型的治疗作用。方法：通过高脂喂养诱导NAFLD大鼠模型,观察平糖方对NAFLD大鼠模型血脂、转氨酶、肝脏形态学及肝脏PPAR-α（过氧化物酶体增殖物激活受体α）及CPT-1（肉毒碱棕榈酰基转移酶1）mRNA表达的影响。结果：与NAFLD组相比,平糖方组的血脂及转氨酶水平显著下降（P〈0.05）,脂肪变性肝细胞数目显著下降,肝脏PPAR-α及CPT-1 mRNA的表达显著增高。结论：平糖方对NAFLD大鼠模型具有良好的治疗作用,其机制可能与促进肝脏PPAR-α及CPT-1 mRNA的表达有关。     

基于miR-34a/SIRT1/PGC-1α通路探讨化瘀祛痰方对ApoE-/-AS小鼠肝脏脂质沉积的作用机制

目的 以miR-34a/SIRT1/PGC-1α信号通路为切入点探讨化瘀祛痰方对ApoE^-/-AS小鼠肝脏脂质沉积的作用机制。方法 将C57BL/6J野生型小鼠7只作为空白对照组,21只ApoE^-/-AS小鼠随机分为模型组、化瘀祛痰方组、瑞舒伐他汀组,每组7只。空白对照组小鼠给予正常饮食,模型组、辛伐他汀组和化瘀祛痰方组小鼠给予高脂饲料。8周后,辛伐他汀组和化瘀祛痰方组小鼠灌胃相应药物;空白对照组和模型组小鼠给予等体积生理盐水。全自动生化分析仪测定肝脏TC、TG、 HDL、 LDL水平;试剂盒检测肝脏游离脂肪酸含量;HE染色法,油红O染色观察肝脏组织形态学变化;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法测定miR-34a、SIRT1、PPAR-α、PGC-1α及CPT1AmRNA表达水平;Western Blot检测各组小鼠肝脏SIRT1、PPAR-α、PGC-1α、CPT1A蛋白表达水平。结果 与空白对照组比较,模型组ApoE^-/-小鼠血清、TG、TC及LDL-C水平升高(P<0.05),HDL-C水平降低(P<...     

三七皂苷R1抑制ApoE基因敲除小鼠肝脏脂质沉积的作用及其机制研究

目的探索三七皂苷R1抑制ApoE基因敲除小鼠肝脏脂质沉积的作用及其相关机制。方法将C57BL/6J小鼠作为正常组,将ApoE基因敲除小鼠随机分为模型组和三七皂苷R1组(25μg/g)。正常组及模型组接受溶剂治疗。腹腔注射8周进行干预。通过HE染色和油红O染色观察肝脏病理形态学及脂质沉积相关改变。提取肝脏组织总RNA,采用Real-time PCR分析肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1和SRBI基因的表达以及miR-26a、miR-33和miR-122表达。结果肝脏HE染色和油红O染色结果显示:与正常对照组比较,模型组小鼠肝组织出现大量空泡样变,变性的肝细胞肿胀,肝细胞内见大量脂肪空泡和脂质沉积。与模型组比较,三七皂苷R1能显著减轻肝细胞肿胀,减少脂肪空泡和脂质沉积。肝脏脂质代谢相关基因和miRNA表达分析结果提示:与模型组比较,三七皂苷R1可显著上调肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1以及SRBI的表达水平(P0.05,P0.01),显著下调肝脏miR-26a的表达水平(P0.05)。结论三七皂苷R1可显著抑制ApoE基因敲除小鼠肝脏脂质沉积,其机制可能与调节胆固醇代谢作用相关。     

黄芪-当归配伍调节Keap1/Nrf2/PGC-1α信号抑制雷公藤甲素肝脏毒性的作用及机制

旨在研究黄芪、当归配伍前后抑制雷公藤甲素(triptolide, TP)肝脏毒性的作用及机制。实验分为空白组，模型组，黄芪组，当归组，黄芪-当归1∶1、2∶1、5∶1组。建立TP诱导的小鼠肝脏毒性模型，相应受试药物进行干预。检测小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)的含量，HE染色法检测肝脏组织病理改变，检测小鼠肝脏组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和还原型谷胱甘肽(GSH)的含量。Western blot法检测肝脏组织核因子E2相关因子2(Nrf2)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、过氧化物增殖体激活受体γ共激活因子-1α(PGC-1α)、血红素加氧酶-1(HO-1)和醌氧化还原酶-1(NQO1)蛋白的表达。免疫荧光法检测肝脏组织Nrf2和PGC-1α蛋白的表达。结果表明，黄芪-当归2∶1和5∶1配伍显著降低血清AST、ALT和ALP水平，改善肝脏组织病理损伤，升高肝脏组织GSH和GSH-Px水平，降低MDA含量。黄芪-当归1∶1、2∶1组显著升高SOD水平。黄芪、当归配伍前后均显著升高...     

脾虚痰浊证巴马小型猪心肌组织LKB1/MPK信号通路的变化

目的:探讨脾虚痰浊证巴马小型猪心肌物质代谢相关通路LKB1/AMPK的变化。方法:普通级雄性巴马小型猪10只随机分为正常组、脾虚痰浊组,每组5头。采用疲劳过度联合高脂单笼饲养建立小型猪脾虚痰浊证模型。采用实时荧光定量PCR法检测心肌组织腺苷单磷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶(p AMPK)、肝脏激酶B1(LKB1)mRNA表达,应用Western blotting法检测心肌组织AMPK、p AMPK、LKB1蛋白表达水平。结果:与正常组小型猪相比,脾虚痰浊组小型猪心肌组织AMPK、p AMPK mRNA表达水平显著下降(P<0.05),AMPK、p AMPK蛋白表达水平亦明显下降(P<0.01);与正常组小型猪相比,脾虚痰浊组小型猪心肌组织LKB1mRNA及蛋白表达水平显著下降(P<0.01)。结论:心肌组织LKB1/AMPK信号通路相关分子表达下调可能为脾虚痰浊证的分子生物学基础。     

大黄素对非酒精性脂肪肝大鼠脂质水平及肝脏脂质代谢基因表达的影响

目的探讨大黄素(emodin)对高脂喂养导致的非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠脂质水平和肝脏脂质代谢基因表达的影响。方法大鼠高脂饮食6周形成NAFLD模型,大黄素低、高剂量(30、60 mg/kg)干预4周,肝脏HE染色观察NAFLD模型大鼠肝脏病理改变,检测血清和肝脏的甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)和转氨酶(ALT、AST)水平;采用荧光实时定量PCR技术检测肝脏X受体(LXR)、固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)、脂肪酸合成酶(FAS)、二酰基甘油酰基转移酶2(DGAT-2)、硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD-1)、脂酰辅酶A氧化酶(ACO)、肉毒碱棕榈酸转移酶-1(CPT-1)和过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)等脂质代谢基因表达。结果与模型组相比,大黄素低剂量组大鼠血清FFA、TG、ALT显著下降,肝脏HE染色显示脂质沉积减轻,SCD-1表达下降;高剂量组大鼠ALT、AST,血清和肝脏TG、FFA显著下降,肝脏脂质沉积显著下降,肝脏FAS、DGAT-2、SCD-1表达降低,CPT-1和PPAR-α的表达显著增高。结论大黄素剂量依赖性地改善NAFLD,其机制可能与下调肝脏脂质合成基因和上调脂肪酸氧化基因的表达有关。     

天麻素通过SIRT1/PGC-1α信号通路抗叔丁基过氧化氢诱导的HL7702细胞氧化损伤

目的 :探讨天麻素对叔丁基过氧化氢诱导的人肝细胞HL7702氧化损伤的保护作用。方法:以叔丁基过氧化氢损伤人肝细胞HL7702建立氧化损伤模型,以不同浓度天麻素(5²0μmol/L)进行干预。采用MTT比色法检测细胞活力,光学显微镜观察细胞形态,罗丹明123染色法检测细胞线粒体膜电位改变,免疫印迹实验检测细胞中SIRT1和PGC-1α蛋白的表达。结果:不同浓度天麻素(520μmol/L)进行干预。采用MTT比色法检测细胞活力,光学显微镜观察细胞形态,罗丹明123染色法检测细胞线粒体膜电位改变,免疫印迹实验检测细胞中SIRT1和PGC-1α蛋白的表达。结果:不同浓度天麻素(5²0μmol/L)能够提高叔丁基过氧化氢作用的细胞存活率并呈时间-剂量依赖性,确定其最佳作用时间为24 h,最佳作用浓度为10μmol/L。与对照组相比,模型组细胞氧化应激作用明显增强,而天麻素10μmol/L作用24 h后,能够显著降低活性氧和丙二醛含量,升高超氧化物歧化酶活力;抑制叔丁基过氧化氢诱导的线粒体膜电位降低并显著增加SIRT1和PGC-1α蛋白的表达。结论 :天麻素能够抑制活性氧对HL7702细胞的氧化损伤,其保护作用可能与抑制氧化应激引起线粒体功能损伤并上调SIRT1/PGC-1α蛋白表达有关。     

祛痰活血方对非酒精性脂肪性肝病大鼠PPARα/CPT-1通路及胰岛素抵抗的影响

目的观察祛痰活血方对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠PPARα/CPT-1通路及胰岛素抵抗的影响,探讨其治疗NAFLD的作用机制。方法 SPF雄性SD大鼠32只,随机分为正常组(6只)、造模组(26只),造模结束后随机抽取2只大鼠验证造模成功后,将24只NAFLD大鼠模型随机分为模型组,祛痰活血方低、中、高剂量组,每组6只按6,12,16g/(kg·d)灌胃。干预结束后,检测相关生化指标,行肝组织HE、油红O染色,检测肝脏组织过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、肉毒碱棕榈酰转移酶-1(CPT-1)、胰岛素受体-1(IRS-1)蛋白及mRNA表达水平。结果与正常组相比,模型组丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸基转移酶(AST)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)明显升高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)明显降低,葡萄糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)明显升高,肝脏组织中PPARα、CPT-1、IRS-1 mRNA及蛋白表达明显降低(P0.01);与模型组相比,祛痰活血方各组大鼠ALT、AST、TC、TG、LDL-C明显降低,HDL-C明显升高,FBG、FINS及HOMA-IR显著降低(P0.01),以高剂量组效果最好(P0.01);中、高剂量组PPARα、CPT-1、IRS-1 m RNA及蛋白表达明显升高(P0.01),以高剂量组效果最好(P0.05)。结论祛痰活血方能改善NAFLD大鼠肝脏的脂肪变性程度及炎症反应,其作用机制可能与其激活PPARα /CPT-1通路,改善胰岛素抵抗进而改善NAFLD的脂质代谢有关。     

木犀草素含药血清对高糖诱导肾小球系膜细胞AMPK/SIRT-1/PGC-1α信号通路及凋亡的影响

目的:探讨木犀草素(Luteolin)含药血清对高糖诱导下肾小球系膜细胞(GMCs)凋亡及单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子1(SIRT1)/过氧化物酶增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)信号通路的影响.方法:将健康SPF级SD雄性大鼠分为正常组、Luteolin低(50 mg/kg)、中(...     

虎杖苷对高脂喂养的中年LDLr~(-/-)小鼠非酒精性脂肪肝炎的作用及机制研究

目的探讨虎杖苷对高脂喂养的中年低密度脂蛋白受体基因敲除(low-density lipoprotein receptor knockout,LDLr~(-/-))小鼠非酒精性脂肪肝炎的保护作用及机制。方法 12月龄雄性LDLr~(-/-)小鼠随机分为对照组、模型组、白藜芦醇(200 mg/kg)组和虎杖苷低、高剂量(100、200 mg/kg)组,对照组给予常规饲料喂养,其余各组给予高脂饲料喂养;同时给予虎杖苷和白藜芦醇干预12周后,检测各组小鼠血清代谢参数;采用油红O染色、苏木素-伊红(HE)染色和Masson染色考察各组小鼠肝脏组织病理变化;采用试剂盒检测各组小鼠肝脏中三酰甘油(triglycerides,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6 (interleukin 6,IL-6)、丙二醛(malonaldehyde,MDA)、羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)水平及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathion peroxidase,GSH)活性;采用免疫共沉淀法检测各组小鼠肝脏组织中乙酰化肝激酶B1 (liver kinase Bl,LKB1)表达情况;采用Western blotting法检测各组小鼠肝脏组织中氧化应激、纤维化及sirtuin l (SIRT1)信号通路相关蛋白表达情况。结果虎杖苷显著改善高脂喂养的中年LDLr-/小鼠代谢基础特征(P0.05),抑制肝脏脂肪变性和肝纤维化;显著降低肝脏组织中TC、TG、TNF-α、IL-6、MDA和HYP水平(P0.05);显著升高SOD、GSH和CAT活性(P0.05);显著降低肝脏中脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FASN)、硬脂酰辅酶A去饱和酶 1 (stearoyl-CoA desaturase 1,SCD1)、转化生长因子-β (transforming growth factor-β,TGF-β)和α-平滑肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)蛋白表达水平(P0.05),显著升高过氧化物酶体增殖激活受体α (peroxisome proliferator-activated receptor α,PPARα)和肉毒碱棕榈酰基转移酶 1α (carnitine palmitoyltransferasela,CPT1α)蛋白表达水平(P0.05);显著增加核因子E2相关因子(nuclear factor E2-:related factor2,Nrf2)入核表达(P0.05);显著升高SIRT1蛋白表达水平(P0.05),降低SIRT1靶蛋白肝激酶B1(liver kinase B1,LKB1乙酰化水平(P0.05);显著升高p-LKB1/LKB1和磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(phosphorylated AMP-activated protein kinase,p-AMPK)/AMPK 蛋白表达水平(P0.05),显著降低p65乙酰化水平和p65入核表达(P0.05)。结论虎杖苷对高脂喂养的中年LDLr~(-/-)小鼠非酒精性脂肪肝炎具有保护作用,且与SIRT1的激活有关。     

补肾降脂方通过PPARγ-LXRα-ABCA1通路干预ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的效应机制

目的探讨补肾降脂方通过PPARγ-LXRα-ABCA1通路干预ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)的效应机制。方法采用高脂饮食喂饲ApoE~(-/-)小鼠复制AS模型,随机分为ApoE~(-/-)小鼠+高脂饮食喂饲组(模型组)、ApoE~(-/-)小鼠+高脂饮食喂饲+补肾降脂方组(补肾组)、ApoE~(-/-)小鼠+高脂饮食喂饲+阿托伐他汀组(他汀组),同品系、同周龄雄性C57BL/6小鼠为正常对照组(正常组),每组25只。各组给予相应干预12周。HE、油红O染色法分别检测小鼠主动脉窦、肝脏组织病理形态及脂质蓄积,Filipin染色法检测小鼠主动脉窦游离胆固醇;ELISA法检测小鼠外周血血清脂质(TC、TG、LDL-C、HDL-C)含量;Western blot法检测小鼠主动脉、肝脏组织PPARγ、LXRα及ABCA1蛋白表达。结果高脂饮食喂饲的ApoE~(-/-)小鼠呈典型的AS病变,主动脉窦可见大面积AS斑块及红染脂质,游离胆固醇增多;肝脏组织可见肝细胞结构紊乱,红染脂质蓄积;血清TC、LDL-C含量升高,HDL-C含量降低;主动脉及肝脏组织PPARγ、LXRα、ABCA1蛋白表达降低。与模型组比较,补肾组小鼠主动脉窦AS斑块面积、红染脂质、游离胆固醇均减少;肝脏组织肝细胞结构大部分清晰可见,红染脂质减少;血清TC、LDL-C含量降低;主动脉及肝脏组织PPARγ、LXRα、ABCA1蛋白表达上调。结论补肾降脂方可能通过调控PPARγ-LXRα-ABCA1通路进而有效干预治疗动脉粥样硬化。     

下瘀血汤下调NLRP3改善高脂饮食诱导小鼠非酒精性脂肪性肝炎

目的探讨下瘀血汤对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的干预作用及机制。方法24只雄性C57/BL6小鼠随机分为低脂饮食(LFD)组(8只)、高脂饮食(HFD)组(16只),喂养6周。第7周始,HFD组随机分为HFD-water组(简称HFD组,8只)和下瘀血汤干预组(高脂饮食+下瘀血汤治疗组,简称XYX组,8只),灌胃共计16周。22周结束后,检测小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)含量;采用HE染色、油红O染色,观察小鼠肝脏组织形态、脂滴沉积;实时定量PCR检测肝组织中脂肪代谢途径相关因子固醇调节元件结合蛋白1(SREBP-1)、脂肪酸合成酶(FASN)、乙酰辅酶羧化酶α(ACCα),炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)、簇分化抗原68(CD68)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及核苷酸结合寡聚化结构域蛋白样受体3(NLRP3)炎性小体相关基因等;Western Blot、免疫组化检测NLRP3表达;天狼猩红染色、免疫组化检测a-SMA观察肝脏纤维化。结果与LFD组比较,HFD组血清ALT活性、TC、TG含量显著升高(P0.05,P0.01)。肝脏脂肪变明显,NAS评分显著升高(P0.05); SREBP-1、FANS、ACCα等脂肪代谢合成相关因子显著上调,CD68、MCP-1等炎症相关因子mRNA表达显著升高(P0.05);NLRP3炎性小体相关基因的表达显著上调(P0.01,P0.05);与HFD组比较,XYX组的肝脏脂肪变改善,NAS评分下调,脂肪代谢合成相关因子、炎症因子的mRNA表达下调,NLRP3炎性小体相关基因下调和NLRP3蛋白表达下调(均P0.05)。天狼猩红染色及α-SMA染色显示HFD组的染色面积较LFD组增加(P0.05),XYX组则较HFD组减少(P0.05)。结论下瘀血汤对HFD诱导小鼠NASH有显著改善作用;抑制NLRP3是下瘀血汤改善NASH的作用机制之一。     

胡柚皮黄酮对非酒精性脂肪性肝炎小鼠肝组织SIRT1/PGC-1α通路的影响

目的： 观察胡柚皮黄酮（PTFC）对非酒精性脂肪性肝炎（NASH）小鼠肝组织脂肪变、炎症程度、氧化应激水平及SIRT1,PGC-1α表达的影响,探讨PTFC防治NASH的作用机制。方法： 以高脂饮食喂养16周诱导小鼠NASH模型,于造模第7周起以100,50,25 mg·kg^-1·d^-1的PTFC干预10周,HE染色观察肝组织病理学变化,生化法检测肝组织TG,CHOL含量和血清ALT,AST水平;Real-time PCR法检测肝组织SIRT1,PGC-1α,MnSOD mRNA表达;免疫组织化学法检测肝组织SIRT1, PGC-1α 蛋白及8-OHdG表达;黄嘌呤氧化酶法检测肝组织SOD水平;硫代巴比妥酸法检测肝组织MDA含量。结果： 高脂饮食诱导的NASH模型组小鼠肝组织TG,CHOL水平、NAFLD活动度积分、血清ALT较正常组显著增高（P<0.01）,肝组织SIRT1,PGC-1α,MnSOD mRNA和蛋白表达较正常组显著降低（P<0.01）,肝组织8-OHdG表达和MDA含量较正常组明显增高（P<0.01）;不同剂量PTFC干预后小鼠肝组织的NAFLD活动度积分、TG水平、血清AST较模型组显著降低（P<0.01,P<0.05）,肝组织SIRT1,PGC-1α,MnSOD mRNA和蛋白表达较模型组明显增高（P<0.01,P<0.05）,8-OHdG表达和MDA含量较模型组明显减少（P<0.01）。结论： 高脂饮食诱导小鼠NASH氧化应激/脂质过氧化增强可能与SIRT1/PGC-1α信号转导通路的改变有关;PTFC能通过调节SIRT1/PGC-1α信号通路,增强肝脏抗氧化能力,减少脂肪酸代谢过程中活性氧的损伤,防治NASH的发生发展。     

川芎嗪通过PGC-1α途径抑制线粒体分裂与肾小管上皮细胞凋亡改善顺铂诱导的急性肾损伤

目的 探究川芎嗪(TMP)对顺铂(Cis)诱导的急性肾损伤(AKI)作用及其相关机制。方法 将60只SPF级雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组(Ctl)、TMP组、Cis诱导的AKI模型组(Cis组)和TMP处理的AKI组(Cis+TMP组);检测各组小鼠血尿素氮(BUN)与血肌酐(Scr)含量,TUNEL染色检测小鼠肾组织细胞凋亡,透射电镜观察肾皮质组织中线粒体结构改变,DHE染色检测肾组织中活性氧(ROS)表达,Western blot检测肾组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助活化因子1α(PGC-1α)表达与动力相关蛋白1的磷酸化水平(p-Drp1^Ser637/Drp1);体外培养近端肾小管上皮细胞系HK-2,并将其同样分为Ctl组、TMP组、Cis组和Cis+TMP组;CCK-8检测各组细胞的增殖活性,Annexin V-FITC/PI法检测细胞的凋亡,DCFH-DA荧光探针法检测细胞中ROS的表达,JC-1染色检测细胞线粒体的膜电位变化;Western blot实验检测细胞中PGC-1α的表达与p-Drp1^Ser637/Drp...     

参苓白术散对高脂饮食诱导的NAFLD大鼠肝组织超微结构及AMPKα磷酸化的影响

目的:观察参苓白术散对高脂饮食建立的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝组织超微结构和腺苷酸活化蛋白激酶(AMPKα)磷酸化的影响。方法:选用SPF级SD大鼠32只,随机分为4组:正常组、模型组、参苓白术散30g/kg剂量组、参苓白术散10g/kg剂量组,每组8只。采用高脂饲料喂养大鼠16周建立NAFLD大鼠模型,各药物干预组大鼠分别灌服30g/kg和10g/kg参苓白术散进行干预,16周后取血和肝组织样本,全自动生化仪检测血清和肝匀浆甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)含量;HE染色观察肝组织病理学变化;透射电镜观察肝细胞的超微结构改变;实时荧光定量RT-PCR法检测肝组织AMPKαmRNA表达水平;Western blot法检测肝组织AMPKα蛋白及其磷酸化AMPKα蛋白(p AMPKα)的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠病理证实肝组织脂质蓄积严重,肝组织匀浆和血清TG、TC含量显著升高,肝组织AMPKαmRNA和p AMPKα蛋白水平显著降低,与模型组比较,参苓白术散30g/kg和10g/kg剂量组大鼠肝组织脂质蓄积明显改善,肝组织匀浆和血清TG、TC含量显著降低,肝组织AMPKαmRNA及p AMPKα蛋白水平显著上调,其中参苓白术散30g/kg剂量组疗效更好;但各组大鼠总AMPKα蛋白水平差异无统计学意义。结论:参苓白术散能够改善16周高脂饮食诱导的NAFLD大鼠脂肪代谢紊乱、减轻肝脏脂质蓄积,其作用机制可能与其激活AMPKαmRNA及其蛋白磷酸化水平有关。