体外双核淋巴细胞微核试验方法的改进

胞质分裂阻断微核法是一种新的致突变检测方法。首先在 1985年Ｆｅｎｅｃｈ和Ｍｏｒｌｃｙ提出细胞松弛素Ｂ(简称ＣＢ)阻断胞质分裂 ,经过 1次分裂的细胞就能形成双核细胞 ,经过 2次分裂时可形成 3个或 4个核的细胞。所以检测微核时只要统计双核细胞的微核率 ,就可剔除未经分裂和分裂 1次以上的细胞[1] 。现将此方法要点和本人的初步经验介绍如下。1　 实验部分1 1　人淋巴细胞微量全血培养方法　肝素抗凝外周血 0 6ｍｌ加 5ｍｌＲＰＭＩ 16 40完全培养液 (含 2 0 %小牛血清、青霉素10 0ＫＵ/Ｌ)用ＰＨＡ植物血凝素刺激淋巴细胞有丝分裂。…     

胸腺肽降低环磷酰胺诱导的小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率的初步研究

目的　探讨胸腺肽对遗传损伤的作用。方法　以每天 2 5 0mg kg(高剂量组 )、12 5mg kg(低剂量组 )的胸腺肽连续 10d小鼠腹腔注射给药 ,实验另设以生理盐水 10ml kg代替胸腺肽的阴性对照组 ;于第 9、10两天以 40mg kg剂量腹腔注射染色体断裂剂环磷酰胺 ,环磷酰胺末次注射后 6h处死小鼠 ,检测小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率。结果　胸腺肽能显著降低环磷酰胺诱导的微核率 ,与阴性对照组相比P均小于 0 0 1,高低两个胸腺肽剂量组及阴性对照组的微核率分别为 (12 5 0± 3 88)‰、(14 75± 3 42 )‰ ,(2 2 5 8± 4 98)‰。结论　胸腺肽具有拮抗或修复环磷酰胺诱导的遗传损伤作用。     

炭纤维增强壳聚糖骨折内固定棒的小鼠微核试验研究

目的 :观察自行研制的碳纤维增强壳聚糖骨折内固定棒对小鼠骨髓和外周嗜多染红细胞 (PCE)的致突变作用 ,评价其生物安全性。方法 :碳纤维增强壳聚糖内固定棒不同时间浸提液给昆明小鼠一次性腹腔注射 (ip)染毒 2 4h后取样 ,以及 72h浸提液的不同时间取样观察其对小鼠骨髓和外周血PCE微核率的诱发作用 ,并与空白对照比较。结果 :所研制的碳纤维增强壳聚糖内固定棒浸提液并不诱发微核增加 ,PCE微核率与空白对照组的差异不具统计学意义 (P >0 0 5 )。结论 :碳纤维增强壳聚糖内固定棒不诱发骨髓和外周血PCE微核率增加 ,不具有致突变作用。     

6种明胶胶囊药壳对小鼠骨髓细胞微核率的影响

目的：探讨6种明胶胶囊药壳的致突变性，为研究药用明胶空心胶囊的安全性提供实验数据。方法以小鼠为受试对象，利用微核实验技术检测6种明胶胶囊药壳在4种不同剂量下对小鼠骨髓细胞微核率的影响，并制作肝脏病理切片观察小鼠肝组织病理学改变。结果在临床成人使用剂量及临床成人使用剂量100倍条件下，6种明胶胶囊药壳未引起小鼠微核率的明显升高（ P＞0.05），仅在高于临床成人使用剂量的200、400和800倍情况下，有3种明胶胶囊药壳对小鼠微核率的影响有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01），但这6种明胶胶囊药壳对于小鼠肝脏均未造成有意义的病理改变。结论选用的6种明胶胶囊药壳在临床成人使用剂量及低剂量条件下没有诱导染色体损伤的遗传毒性，但在中、高剂量下，有3种明胶胶囊药壳具有致染色体损伤的效应，这种潜在的遗传毒理威胁应引起行业注意，选用优质的明胶胶囊药壳是关键。     

胎盘免疫调节肽遗传毒理研究

目的：为了评价胎般免疫肽（ＰＩＰ）的安全性，探讨ＰＩＰ对小鼠遗传物质的损伤效应。方法：用小髓髓ＰＣＥ微核试验和ＣＡ试验两种方法。结果：ＰＩＰ试验组与阴性对照组比较，无显著性差异（Ｐ〉０．０５）。结论ＰＩＰ对哺乳动物的遗传物质不具损伤效应。     

复合多糖降低环林酰胺诱导的小鼠骨髓微核率的研究

目的　探讨复合多糖对化疗后骨髓系统损伤的保护作用。方法　复合多糖分高、中、低三个剂量组连续 7d灌胃给药 ,实验另设相同容量生理盐水代替复合多糖为阴性对照组 ,于第 8、9d ,与多糖给药间隔 6h ,腹腔注射环林酰胺 4 0mg/kg·d致染色体断裂。环林酰胺末次给药后 6h处死小鼠 ,检测小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率。结果　复合多糖能显著降低环林酰胺诱导的骨髓微核率 ,与阴性对照组比P均 <0 .0 1,复合多糖高、中、低三个剂量 ,阴性对照的微核率分别是 13.17%、11.0 0 %、19.6 7%、2 9.5 0 %。结论　复合多糖对化疗后骨髓系统损伤具有保护作用。     

砷对人淋巴细胞微核率影响的研究

目的：分析人淋巴细胞的遗传物质在砷作用下受到损伤的情况,进一步探讨砷的遗传毒性和砷对人细胞遗传物质作用的机理,方法：我们对不加受试物的对照组与3组经不同浓度NaAsO2处理的处理组的人淋巴细胞微核率进行对比分析。结果：用不同浓度的NaAsO2处理培养的人淋巴细胞,其出现的微核率显著高于非处理组（P＜0．05）。结论：NaAsO2对人淋巴细胞遗传物质有明显的损伤作用。     

砷对人淋巴细胞微核率影响的研究

目的 分析人淋巴细胞的遗传物质在砷作用下受到损伤的情况,进一步探讨砷的遗传毒性和砷对人细胞遗传物质作用的机理。方法 我们对不加受试物的对照组与3组经不同浓度NaAsO2处理的处理组的人淋巴细胞微核率进行对比分析。结果 有不同浓度的NaAsO2处理培养的人淋巴细胞,其出现的微核率显著高于非处理组（P＜0．05）。结论 NaAsO2对人淋巴细胞遗传物质有明显的损伤作用。     

瘦肉精短期染毒对小鼠肝肾功能及遗传毒性的影响

目的探讨瘦肉精短期染毒对小鼠肝肾功能的影响及遗传毒性损伤。方法取40只KM小鼠随机分为4组,每组10只,雌雄各半,分别饮用含瘦肉精1．26mg／kg、2．52mg／kg、12．6mg／kg的水（剂量组）和不含瘦肉精的水（对照组）,连续染毒28d,观察染毒过程中小鼠临床表现,结束染毒后测定肝肾功能及脏器系数。另取50只KM小鼠随机分成5组,每组lO只,雌雄各半,连续5d分别以6．3mg／kg、12．6mg／kg、25．2mg／kg三个剂量瘦肉精经口灌胃染毒,阴性对照组以等量超纯水灌胃,阳性对照以80mg／kg环膦酰胺腹腔注射。末次染毒后24h后处死动物,分别应用小鼠骨髓染色体畸变试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精原细胞畸变试验对瘦肉精的体细胞及生殖细胞遗传毒性作用进行研究。结果28d短期染毒过程中小鼠出现呼吸加快、烦躁不安、毛发蓬松及肌肉震颤症状,肝功能AST含量逐渐升高,肾功能SUA含量和肝脏系数与对照组相比显著降低,差异有统计学意义（P〈0．05）。小鼠骨髓染色体畸变试验、骨髓嗜多染红细胞微核、精原细胞畸变试验结果,与阴性对照组比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论本次试验剂量28d短期染毒瘦肉精对小鼠的肝肾有一定的损害;经小鼠骨髓染色体畸变试验、骨髓嗜多染红细胞微核、精原细胞畸变试验研究,瘦肉精体细胞和生殖细胞的遗传毒性均为阴性。     

脱氢乙酸小鼠骨髓细胞微核试验

目的：采用小鼠骨髓细胞微核试验,对脱氢乙酸进行体内致突变安全性评价。方法按照1/10 LD50、1/5 LD50和1/2 LD50设置三个剂量组,另设置阴性对照组和环磷酰胺（ CP）阳性对照组（100 mg·kg-1）。每组10只小鼠,雌雄各半,灌胃给药,两次攻毒时间间隔24 h。在第二次灌胃后6 h,处死小鼠,制片,观察并计数嗜多染红细胞的微核率,并与阳性对照组和隐形对照组进行比较分析。结果1/5 LD50、1/10 LD50剂量时,与正常对照组无显著差异;1/2 LD50剂量组与正常对照组有显著差异（ P﹤0.05）,但无剂量-效应关系。结论脱氢乙酸小鼠骨髓细胞微核试验结果为阴性。     

超细氯化钠粉的BALB/C小鼠骨髓微核实验

目的:用骨髓微核试验观察超细氯化钠粉对BALB/C小鼠的毒性作用,为进一步研究矿盐粉的致突变性提供参考。方法:将50只小鼠随机分为5组,分别为阴性对照组,超细氯化钠粉低、中、高3个剂量组和阳性对照组(腹腔注射环磷酰胺),每组10只。高、中、低剂量组分别给予5.0、2.5、1.25 mg/kg剂量的超细氯化钠粉(pM2.5-10)连续灌胃14 d,观察试验期内小鼠的一般毒性症状、体质量增长情况和骨髓细胞微核率。结果:实验期间各组小鼠精神、外观均无异常。超细氯化钠粉高剂量组动物体质量在给药后第2～3天下降,中、低剂量组体质量未见异常。3种剂量氯化钠灌服组小鼠骨髓细胞微核率无明显变化(P>0.05)。结论:超细氯化钠粉对小鼠骨髓细胞无致突变作用。     

河南省100例健康成人外周血淋巴细胞微核测定

本文报道河南省100例健康成人外周血淋巴细胞微核检查结果;同时对不同性别,不同年龄及食管癌高、低发区健康成人的微核出现率进行了比较。结果100例健康人外周血微核淋巴细胞出现率为42%,淋巴细胞微核出现率为0.61%,微核淋巴细胞中多微核淋巴细胞出现率为11.44%;男女性别间微核淋巴细胞出现率,淋巴细胞微核出现率及微核淋巴细胞中多微核淋巴细胞出现率均无统计学差异;随着年龄增大,微核淋巴细胞出现率及淋巴细胞微核出现率均增高;食管癌高发区组微核淋巴细胞出现率和淋巴细胞微核出现率均高于低发区组(P<0.01)。结果表明,要确定健康成人外周血淋巴细胞微核出现率时,应考虑年龄及不同地区的环境影响。     

HBIG中和HBsAg能力的体外与新生儿体内试验研究

目的观察HBIG中和HBsAg的体外与新生儿体内能力,提高出生HBsAg阳性新生儿的治愈率。方法体外测试HBIG中和HBsAg的能力。观察42例出生静脉血HBsAg阴性新生儿使用HBIG 200 IU第4~7天体内的抗-HBs量。将出生HBsAg阳性新生儿分为HBsAg≤40 ng组(Ⅰ组)46例,>40 ng组(Ⅱ组)17例。比较不同感染量体内HBIG中和HBsAg的能力。结果使用200 IU HBIG 4~7 d后在新生儿体内平均抗-HBs量为226.4 IU。体外试验1 IU HBIG中和HBsAg 42 ng。新生儿体内1 IU HBIG中和HBsAg:Ⅰ组2.04 ng,Ⅱ组1.87 ng。体内外中和能力相差20.5~22.4倍。结论体内外HBIG中和HBsAg能力存在差异,提示新生儿感染HBsAg在组织与血液中分布可能不同。     

Seasonal arsenic exposure from burning chromium-copper-arsenate-treated wood

All eight members of a rural Wisconsin family experienced recurring neurological and medical illness over three years, especially during the winter months. Arsenic, in concentrations of 12 to 87 ppm, was noted in the hair of the mother and father, and analysis of hair and fingernails of all family members demonstrated pathological levels of arsenic. For four years the five-room home had been heated with a small wood stove in which outdoor or marine plywood and wood remnants had been preferentially burned. Stove ashes that contained more than 1,000 ppm of arsenic contaminated the living area, and the ratio of copper, chromium, and arsenic pentoxide in this ash matched the ratio used in the chromium-copper-arsenate-treated wood.     

可植入微型轴流血泵溶血实验研究

目的通过自制轴流血泵进行体外、体内溶血实验,探讨血泵的溶血特性。方法轴流血泵置于充满新鲜羊血的模拟循环通路中,在输出流量为5L／min,后负荷压力为100mmHg的条件下,检测血泵体外溶血水平。在3只健康绵羊体内植入血泵进行在体辅助实验,并稳定运转24h,测定其在体溶血水平。结果可植入微型轴流血泵的体外溶血指数（normal index of haematolysis,NIH）为（0．01644&#177;0．00018）g／100L。在体实验中,血泵运行无机械故障,循环辅助后血浆游离血红蛋白（plasma free hemoglobin,FHb）及乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）呈现上升趋势,平均最大值分别达（7．93&#177;0．71）g／L、（622．3&#177;22．5）U／L。结论血泵溶血性能在可接受范围内,接近于部分国外三代血泵溶血水平,初步具备进入动物辅助实验研究水平。     

纳米砷与三氧化二砷的体外细胞毒性比较研究

目的通过比较三氧化二砷与纳米元素砷两种砷制剂在体外对肺腺癌细胞株以及正常小鼠淋巴细胞的影响，对纳米砷制剂的作用进行初步评估。方法将不同浓度的纳米砷或三氧化二砷与肺腺癌细胞株A549或H1299细胞体外作用2d，将不同浓度的纳米砷或三氧化二砷与小鼠脾细胞作用24h，将不同浓度的纳米砷或三氧化二砷加白细胞介素2与小鼠脾细胞作用72h。随后以MTT检测法分别检测各组的杀伤率。结果纳米砷与三氧化二砷对肺腺癌细胞株A549或H1299的杀伤率，在相同摩尔药物浓度下很接近。三氧化二砷与纳米砷对小鼠脾脏淋巴细胞与rIL-2活化的淋巴细胞的毒性作用也相当接近，且三氧化二砷与纳米砷在低浓度1．5umol／L时，其杀伤率巳达40％以上，二者差异无显著性（P〉0．05）。结论纳米元素砷具有较强抗癌活性，但其对正常淋巴细胞的毒性与三氧化二砷相比未见减轻。这对于笔者加深对纳米元素的认识，具有一定的意义。     

三氧化二砷对人卵巢癌细胞株体外作用的研究

目的：探讨三氧化二砷（As2O3)对卵巢癌细胞株体外生长的影响。方法：以As2O3处理卵巢癌细胞株SKOV3，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法，测定As2O3对SKOV3生长的抑制作用，并绘制剂量－效应曲线；通过透射电镜观察细胞超微结构的变化；应用流式细胞仪分析DNA含量和细胞周期并测定凋亡特征酶caspase-3的活性变化。结果：0．5－4．0μmol/L三氧化二砷明显抑制SKOV3细胞的增殖，并呈剂量和时间依赖性；透射电镜观察可看到较为典型的细胞凋亡的形态学改变；细胞核固缩，染色质凝集，呈新月状紧贴于核膜周边，凋亡小体形成等；流式细胞仪检测出现DNA含量小于G1峰的亚二倍体凋亡峰，同时出现G2／M期阻滞；SKOV3在As2O3作用下，caspase-3是实现凋亡的效应因子，它的激活必然导致凋亡细胞最终的各种表型变化。结论：As2O3对卵巢癌细胞株SKOV3的生长有明显的抑制作用，诱导凋亡是其主要作用机制之一。     

饮水型砷暴露地区人群皮肤损害的剂量-反应关系

目的:确认暴露人群的皮肤症状特征以及与暴露量的关系.方法:选择饮水型砷暴露病区村民125人及对照村村民48人,进行饮水砷含量测定及问诊和皮肤病诊查.结果:砷暴露地区水井中平均砷含量158.3 μ g/l,最高浓度为197.26 μ g/l;对照村水井中未检出超标砷含量.砷暴露村民中皮肤病患病率45.6%,70%以上的病人年龄分布在40岁以上;对照村村民皮肤病患病率12.5%,年龄分布在30～50岁范围.调整性别和年龄后,皮肤病患病率随饮水砷浓度的增高而上升.水砷浓度在51～150 μ gg/L组和150 μ g/L以上组的患病率分别为24.3%(0R=9.97,95%CI:1.54-64.47)及46.2%(0R=10.21,95%CI:2.71-38.51);另外,在调整性别、年龄和砷暴露水平后,与饮水时间低于5年组相比,饮水时间高于5年或更长的分组中,皮肤病患病率没有显著性差异(0R=1.00,95%CI:0.06-15.99,OR=1.00,95%CI:0.10-9.83).结论:砷中毒皮肤损害与饮水中的砷暴露水平有相关性,与饮水时间的相关没有显著差异.