急性心肌梗死病程不同时期患者血清蛋白质组学分析

目的探讨蛋白质质谱分析对急性心肌梗死病程不同时期的鉴别意义。方法应用美国CipherGen公司金属亲和表面(IMAC3)芯片和蛋白芯片仪检测153例心肌梗死患者血清标本(其中刚入院45例,3h标本12例,6h标本22例,9h标本24例,12h标本24例,24h标本16例,48h标本10例)中的蛋白质相对含量。结果不同时期急性心肌梗死患者在质荷比为4kD-12kD问有10种血清蛋白质含量有显著差异。不同时期的患者均被正确判断,准确率为100％(153／153),灵敏度和特异性分别为100％(45／45)和100％(108／108)。结论该方法可快速、准确检测各期急性心肌梗死,灵敏度、特异性高。     

利用血清中蛋白质组构型鉴定Dukes A期结直肠癌

目的通过对血清蛋白质组的质谱分析,寻找用于Dukes A期结直肠癌鉴定的蛋白质组构型。方法随机取10例Dukes A期及68例Dukes B、C、D期结直肠癌患者的血清作为预备组,另取10例Dukes A期及68例Dukes B、C、D期结直肠癌患者的血清作为检测组。预备组血清与金属亲和表面(IMAC3)芯片结合后,用蛋白芯片仪读取数据,分析可得到用于区分Dukes A期和Dukes B、C、D期结直肠癌患者的树状分类规则,并用双盲法测试检测组以证实其准确性。结果预备组中两类血清蛋白质在质荷比为8320、8604、8867、15872Da等4处含量有显著差异,得到树状分类规则,其分类准确率为97．4％(76／78),灵敏度为100％(10／10),特异性为97．1％(66／68);对检测组进行双盲检测,结果显示准确率为94．9％(74／78),灵敏度和特异性分别为100％(10／10)、94．1％(64／68)。结论该方法可快速、准确检测Dukes A期结直肠癌,灵敏度、特异性高。     

肺癌患者血清蛋白质组的特征研究

目的比较肺癌患者、肺良性病患者及正常人血清蛋白质组的差异,以期发现可用于肺癌诊断的生物学指标。方法采用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)蛋白芯片技术,检测89例肺癌患者、64例肺良性病患者及68例健康人血清,筛选出有分类意义的差异蛋白并建立分类树模型。再从同期住院或健康体检人群中随机抽取肺癌患者、肺良性病患者及健康人各30例组成测试组,对诊断分类树模型进行盲法验证。结果比较三组血清,共发现39种差异蛋白质(P<0.05),由其中质荷比(M/Z)为4485、5252、5807、5908、5969、6113、6625、8946、8998、9137、9183、9298、9498、13878、15128、15867、16081的17种蛋白建立的诊断分类树模型,对肺癌、肺良性病、健康人的分类准确率为98.2%(217/221),敏感度为98.9%(88/89),特异度为97.7%(129/132),双盲验证的敏感度和特异度分别为90.0%(27/30)和93.3%(56/60)。结论利用SELDI-TOF-MS技术建立的肺癌诊断分类树模型具有较高的敏感度和特异度,可用于肺癌的快速诊断。     

乳腺癌患者血清蛋白质组的特征研究

目的比较乳腺癌患者、乳腺良性病患者及健康女性血清蛋白质组的差异,以期发现可用于乳腺癌诊断的生物学指标。方法采用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)蛋白芯片技术,检测46例乳腺癌患者、40例乳腺良性病患者及40例健康女性血清,筛选出有分类意义的差异蛋白并建立分类树模型。再从同期住院或健康体检人群中随机抽取乳腺癌患者、乳腺良性病患者及健康女性各10例组成测试组,对诊断分类树模型进行独立双盲验证。结果比较三组血清,共发现22种差异蛋白质(P<0.05),由其中质荷比(M/Z)为3162、3960、4213、4526、5908、5386、11383、11735、13892、6007的10种蛋白建立的诊断分类树模型,对乳腺癌、乳腺良性病、健康女性的分类准确率为98.4%(124/126),灵敏度及特异度分别为100.0%(46/46)和97.5%(78/80),经独立双盲验证该模型诊断乳腺癌的准确率、灵敏度及特异度分别为83.3%(25/30)、80.0%(8/10)、85.0%(17/20)。结论利用SELDI-TOF-MS技术建立的乳腺癌诊断分类树模型具有较高的敏感度和特异度,可用于乳腺癌...     

宫颈浸润癌患者血清蛋白质组的特征研究

目的探讨宫颈浸润癌患者、宫颈良性病患者及健康女性血清蛋白质组的差异,以期发现诊断宫颈浸润癌的生物学指标。方法采用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱仪(SELDI-TOF-MS)检测宫颈浸润癌患者的血清蛋白质谱图,利用配套软件进行蛋白峰值鉴定、聚类并建立分类树模型。以43例宫颈浸润癌患者、32例宫颈良性病患者及71例健康女性作为训练组,其血清与IMAC-Cu芯片结合检测差异蛋白质,通过软件分析得到分类树模型,以年龄匹配的20例宫颈浸润癌患者、20例宫颈良性病患者及20例健康女性作为测试组进行独立双盲验证。结果共识别出46种差异蛋白,其中由质荷比为3888、7763、6631的3种蛋白构成的分类树模型的分类准确率为95.9%(140/146),敏感度为95.3%(41/43),特异度为98.1%(101/103),经双盲验证其诊断敏感度和特异度分别为90.0%(18/20)和87.5%(35/40)。结论比较蛋白质组学研究发现,3种蛋白质含量与宫颈癌密切相关,有可能成为宫颈癌诊断的生物标志物。     

食管癌相关血清小分子蛋白谱的初步研究

目的 分析食管鳞癌血浆蛋白表达谱改变,筛选恰当的蛋白分类芯片用于建立食管鳞癌血清标志诊断模型.方法 血浆蛋白经离子交换,按不同pH值范围预分离为6个组份,各组份分别在弱阳离子交换型和铜离子螯和型等两类蛋白芯片上分选与富集,经表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱技术分析食管鳞癌差异表达蛋白.分析5例食管鳞癌和2例性别、年龄匹配的对照血清,初步获得弱阳离子交换型和铜离子螯和型蛋白芯片表达图谱.结果 血浆蛋白经不同离子交换柱预分离和不同蛋白分类捕获芯片富集,在相对分子质量0～50 000范围内,弱阳离子交换型和铜离子螯和型蛋白芯片上检测到近百种差异蛋白峰,其中部分差异峰具有统计学意义(P＜0.05).结论 血浆蛋白经不同pH区段预分离和分类捕获后可降低高丰度蛋白干扰,提高负载疾病信息的低丰度蛋白/肽段显示度.弱阳离子交换型和铜离子螯和型蛋白芯片结合蛋白可呈现食管癌术前与术后,以及食管癌和健康对照者的差异表达谱.初步研究提示,食管癌外周血浆存在肿瘤候选标志分子(谱).     

SELDI-TOF-MS技术在胃癌早期诊断中的应用

胃癌是我国最常见的消化道肿瘤,占恶性肿瘤死亡率的第一位。早期发现、早期诊断、早期手术是改善胃癌预后的主要手段。目前对胃癌进行早期诊断的方法尚存在诸多弊端,如内窥镜检查会带来一定的痛苦,现已发现的胃癌相关标志物主要有癌胚抗原和糖链抗原19—9、125等,其敏感性、特异性均很低,尚不足于用来进行早期诊断。     

胃癌血清蛋白质谱的差异性研究

目的对比胃癌患者手术前后与正常人血清蛋白质谱的差异,筛选出诊断胃癌的特异性蛋白标志物。方法应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术和CM10蛋白质芯片,对22例胃癌患者和18名正常人的血清蛋白质谱进行检测。结果通过对胃癌术前血清与正常人血清蛋白质谱分析,发现由5个蛋白质峰组成的生物标记物可将胃癌术前患者与正常人准确分组。结论建立胃癌的血清蛋白质谱,为胃癌蛋白质组学研究奠定一定的基础．建立了以8961．2404M／Z、3947．264M／Z、5919．7541M／Z、4103．348M／Z、8711．0363M/Z5个蛋白质峰组成的生物标记物检测胃癌。     

鼻咽癌放疗前后血清蛋白质谱的变异性研究

目的 通过对鼻咽癌患者放疗前后及健康对照组血清蛋白质谱的测定,观察放疗前后血清蛋白质图谱变化。方法 应用CM-10弱阳离子交换芯片和表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS),分析50例鼻咽癌放疗前组、40例健康对照组和25例经放疗后完全缓解组(鼻咽癌患者自身配对)3组的血清标本。结果 对鼻咽癌放疗前组与正常对照组蛋白质谱分析发现共有20个蛋白质表达量有差异。获得相对分子质量为2931、4098、5343和13766的4个蛋白质峰组合建立的分类树模型,判别鼻咽癌的敏感性为90.0%,特异性为90.0%。观察20个差异蛋白质的表达量在放疗后的变化,显示均发生了不同程度的变化。放疗前组高表达的相对分子质量为2931、4182、4688、13766的4个蛋白质表达量在完全缓解组降低,接近正常水平;相对分子质量为4098和5343的蛋白质表达量在CR组升高,接近正常水平。结论 应用SELDI-TOF-MS分析,可在放疗前后筛选出鼻咽癌患者血清蛋白质标志物,有可能对微小病灶的监测及疗效的判定等提供有用的信息。     

应用SELDI-TOF-MS技术初步建立结直肠癌区域淋巴转移分类树模型

目的寻找血清中与结直肠癌淋巴结转移相关的特异性生物标志物。方法应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱仪(SELDI-TOF-MS)检测结直肠癌患者血清的蛋白质谱,利用配套软件进行蛋白质峰值鉴定、聚类并建立分类树模型。70例伴区域淋巴结转移的结直肠癌患者和75例年龄、性别匹配,无区域淋巴结转移的结直肠癌患者作为训练组,通过软件分析得到分类树模型,以35例伴区域淋巴结转移的结直肠癌患者和30例年龄、性别匹配,无区域淋巴结转移的结直肠癌患者作为测试组进行独立样本的双盲验证。结果共识别出46种组间差异蛋白,其中由质荷比(M/Z)为3104、3781、5867、7970、9290五种蛋白构成的分类树模型可以有效鉴别结直肠癌患者伴或不伴区域淋巴结转移,灵敏度和特异度分别为94.3%(66/70)和100.0%(75/75),经双盲验证其灵敏度、特异度、阳性预测值分别为91.4%(32/35)、96.7%(29/30)、97.0%(32/33)。结论所建立的分类树模型可以准确鉴别结直肠癌患者伴或不伴区域淋巴结转移,对结直肠癌的术前筛查有重要价值。     

卵巢癌患者血清比较蛋白质组学研究

目的探讨应用蛋白质质谱分析鉴定卵巢癌生物标志物的可行性。方法应用美国CipherCen公司金属亲和表面(IMAC3)芯片和蛋白芯片仪检测24例卵巢癌患者、56例正常人血清中的蛋白质相对含量。结果24例卵巢癌患者与56例正常人血清蛋白质在质荷比为4kb-10kb间有6种蛋白质含量有显著差异。用4472Da的血清蛋白质作为生物标志物可将正常人与卵巢癌患者准确地分组。在学习模式下24例卵巢癌患者被正确诊断，56例正常人均被正确识别；在检测模式下24例卵巢癌患者中有23例患者被正确诊断，56例正常人均被正确识别，准确率为98．8％(79／80)，灵敏度和特异性分别为95．8％(23／24)、100％(56／56)。结论该方法可快速、准确检测卵巢癌，灵敏度和特异性高。     

应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱研究细菌性血流感染的血清多肽指纹图谱

目的 应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱系统(MALDI-TOF MS)分析金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌引起的血流感染血清多肽指纹图谱,寻找差异多肽峰并建立相应的诊断模型.方法 建立ICR小鼠金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌血流感染模型,收集血清标本,经弱阳离子交换磁珠纯化,MALDI-TOF MS检测及BioExplorer生物软件分析研究金葡菌感染组与正常对照组、大肠埃希菌感染组与正常对照组间血清多肽指纹图谱.结果 比较金葡菌感染组与正常对照组发现,表达上调的多肽有6个,表达下调的多肽有7个,表达呈先上调后下调的多肽有8个.比较大肠埃希感染组与正常对照组发现,表达下调的多肽有5个,表达呈先下调后上调的多肽有4个,表达呈先上调后下调的多肽有8个.结论 利用MALDI-TOF MS技术和BioExplorer软件研究大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌血流感染的血清多肽,可以发现感染组与正常对照组间的差异多肽并有效地建立这两种细菌感染的诊断模型,对于细菌性血流感染的诊断具有一定的价值.     

人体体液多肽组质谱分析方法优化

人体体液中多肽组成分近年来获得越来越多的关注。不同体液作为不同器官、细胞在生理或病理状态下的分泌产物,对其成分特定改变的监测具有无创性、早期、敏感特异地预测人体健康状态、疾病变化、治疗疗效、药物毒性等体内变化方面的潜力。而体液成分多而复杂,体液系统易受干扰,富集、提取分离出相对分子质量整体较低的多肽组成分并进行特定多肽成分的准确计量非常重要而具有挑战性。目前对人体体液多肽组成分的研究多采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法。对此方法的实验偏差进行分析、提出改进方法,可以提高人体体液多肽组成分分析的准确性。应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法对人体体液多肽组成分进行质谱分析是人体健康状况临床检查的新思路,其中特定多肽组成分有潜力成为监测人体相关部位健康状况的生物标志物。     

结直肠癌患者血清与LoVo细胞、HT29细胞培养液比较蛋白质组学研究

目的对LoVo细胞、HT29细胞培养液与结直肠癌患者血清中特异蛋白质组进行对比研究。方法应用美国CipherGen公司金属亲和表N(IMAC3)芯片和蛋白质芯片仪检测LoVo细胞培养液、HT29细胞培养液与结直肠癌患者血清。结果结直肠癌患者血清与LoVo细胞培养液中都含有质荷比为11731Da的蛋白质。HT29细胞培养液与结直肠癌患者血清中无相同的蛋白质。结论LoVo细胞培养液与结直肠癌患者血清中有相同的蛋白质。     

HPCE TOF—MS和ESI—MS法研究重组人白细胞介素—2的质量

目的：建立测定重组人白细胞介素－2（IL－2）表达的正确性、产物的纯度和均一性的方法。方法：采用了高效毛细管电泳（HPCE）、时间飞行质谱（TOF－MS）和电喷雾质谱法（ESI－MS）。结果：IL－2样品中存在相对分子量约为15745－15795的杂质，其主成分IL－2在表达和纯化过程中被修饰，其相对分子量比理论值增加了143．8％。结论：HPCE、TOF－MS和ESI－MS法有正交互补性，测定结果可相互印证，质谱法是纯度测定的一种重要工具。