单核细胞核因子-κB 活性的检测及应用

目的探讨单核细胞(Mo)NF-κB核易位及其检测方法,了解脂多糖(LPS)对NF-κB的活化作用。方法采用免疫组化方法和凝胶电泳迁移率改变分析(EMSA)法。结果Mo免疫组化结果,胞浆组化染色强阳性,其胞核染色弱阳性;LPS刺激Mo后,胞核组化染色显强阳性。EMSA示LPS刺激组的自显影密度远高于正常对照组（P<0.01)。结论Mo受LPS刺激后,免疫组化方法证实在完整细胞中NF-κB核易位并活化;EMSA证明LPS刺激后,NF-κB核易位大量增加,与κB序列结合活力大为增强。     

博来霉素和石棉对肺泡巨噬细胞转录因子的活化作用

目的研究博来霉素和石棉对THP-1和肺泡巨噬细胞内转录因子核因子-κB (NF-κB)和环磷酸腺苷效应元件(CREB)的活化作用,探讨肺泡巨噬细胞内转录因子在肺间质性疾病中的作用.方法用磷酯酰多糖(LPS)或石棉刺激THP-1细胞,提取细胞核蛋白质,以电泳迁移率变动分析方法检测NF-κB和CREB的活性.采用纤维支气管镜进行支气管肺泡灌洗收集健康非吸烟者的肺泡巨噬细胞,用LPS、博来霉素及石棉分别或共同刺激细胞,提取核蛋白质,用电泳迁移率变动分析方法检测NF-κB的活性.以竞争抑制实验检测DNA结合蛋白的特异性.结果 THP-1细胞未受到刺激时,转录因子NF-κB和CREB均具有一定的基础活性;在LPS或石棉刺激后3、6及24 h后,NF-κB的活性进一步增强,但CREB的活性无明显变化. 在未刺激的肺泡巨噬细胞中,存在NF-κB的基础活性,在LPS刺激后NF-κB的活性明显增强,3 h为肺泡巨噬细胞NF-κB活化增强的最佳时间,24 h时NF-κB活性下降.博来霉素(10-2 mmol/ml)或石棉(100 μg/ml)均可诱导NF-κB的活性增强,LPS可进一步增强博来霉素或石棉对NF-κB的活化作用.结论在博来霉素或石棉引起的肺间质疾病中,肺泡巨噬细胞转录因子NF-κB的活化可能具有重要的作用.     

磷脂酰肌醇3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶/核转录因子κB信号通路对细胞凋亡影响的研究进展

磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)/核转录因子κB(NF-κB)信号通路是有核细胞内重要的传导通路之一,在调节细胞增殖、凋亡中起着重要作用。大量研究证明PI3K/Akt/NF-κB信号通路的激活可以影响细胞凋亡。本文就PI3K/Akt/NF-κB信号通路对细胞凋亡影响作用进行综述。     

p38蛋白激酶对脂多糖诱导肺泡巨噬细胞NF-κB活化的调控

目的探讨p38蛋白激酶对脂多糖（LPS）诱导肺泡巨噬细胞NF-κB活化的调控机制。方法分离培养肺泡巨噬细胞。设正常对照组、LPS刺激组、SB203580（p38蛋白激酶抑制剂）＋LPS组、PDTC（NF—κB抑制剂）＋LPS组和SB203580＋PDTC＋LPS组。分别采用免疫细胞化学（SP法）和Western blot检测NF—κB、p38蛋白激酶和NF—κB抑制蛋白（I-κB）的表达。结果与正常对照组相比，LPS刺激肺泡巨噬细胞后胞核NF-κB和p38蛋白激酶染色显著增强，而I—κB的表达显著降低（均P〈0．01）。SB203580、PDTC均可显著降低LPS刺激的肺泡巨噬细胞NF-κB，p38蛋白激酶胞核染色阳性细胞的百分比，并显著增强I—κB的表达（均P〈0．05）。同时应用PDTC和SB203580预孵育肺泡巨噬细胞，与LPS刺激组相比，p38蛋白激酶和NF—κB胞核染色阳性细胞百分比均显著降低（P〈0．05），I-κB的表达显著增强（P〈0．05），但分别与SB203580＋LPS和PDTC＋LPS组相比，差异均无显著性意义（均P〉0．05）。结论LPS刺激肺泡巨噬细胞p38蛋白激酶和NF—κB活化；p38蛋白激酶可能通过调节I-κB降解而调控NF—κB的活化，NF—κB可能是p38信号途径下游的最重要位点。     

内毒素诱导的TLR4信号转导通路研究进展

TLR4是内毒素(LPS)激活信号转导的受体。LPS首先与LPS结合蛋白(LBP)结合，再传递给CD14分子，形成LPS-LBP-CD14复合物，该复合物与TLR4-MD2相互作用，通过激活细胞内的信号通路而最终导致核因子-κB(NF-κB)、活化蛋白-1(AP-1)等核转录因子的活化，从而诱导炎症细胞因子包括TNF-α、IL-1、IL-6、NO等的大量表达引发脓毒症。对TLR4的研究使我们可以从阻断TLR4信号通路中发挥毒性作用的环节来预防和治疗脓毒性休克。     

Toll样受体4/核因子κB与早产

早产是妊娠期围生儿死亡及并发症的主要原因之一。经研究证实,感染与早产的发生密切相关,而Toll样受体4(TLR4)和核因子κB(NF-κB)在脂多糖信号转导过程中起着重要作用。TLR4识别LPS并启动活化信号,从而激活NF-κB,后者转位入核内诱导细胞因子产生,介导炎性反应。TLR4与NF-κB炎症信号转导途径已成为早产研究的热点。本文概述了TLR4/NF-κB信号转导通路以及相关因子,并且阐明了TLR4/NF-κB与早产的密切关系,以期早产研究的新方向。     

阿斯匹林抑制内毒素致猪肺泡巨噬细胞核因子-κB活化的作用

目的探讨阿斯匹林对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致猪肺泡巨噬细胞(alveolarmacrophages,AM)核因子kappaB(nuclearfactorkappa-B,NF-κB)活化抑制作用的机制。方法AM经单独或联合应用阿斯匹林、CalphostinC及过氧钒酸盐预处理,分别予以LPS刺激,以Western方法测定其IκBα水平及EMSA方法检测NF-κB活化程度。结果LPS(10μg/mL)刺激后,AMNF-κB在15min即可检测到,并于1、2h达到峰值,AM胞浆IκBα水平在5min起开始下降,低谷出现在LPS刺激后45min。治疗剂量阿斯匹林可抑制LPS引起的AMNF-κB活化及IκBα降解,PTP抑制剂POV可增强LPS刺激后AMNF-κB活化水平,阿斯匹林能减低该效应;PKC抑制剂CalphostinC可降低LPS引起的AMIκBα降解程度,且阿斯匹林与之具协同效应。结论阿斯匹林可通过影响AM蛋白激酶-磷酸酶系统平衡,抑制LPS致AMIκBα磷酸化降解及NF-κB活化。     

蓝桉油对单核细胞THP-1核因子-κB核转位活化的影响

目的：探讨蓝桉油对人单核细胞THP-1细胞株核因子-κB(NF-κB)核转位活化的影响。方法：蓝桉油(1、10、100mg／L，30min)预处理THP—1细胞，经脂多糖(LPS，1mg／L，30min)刺激后，采用间接免疫荧光细胞化学法结合激光扫描共聚焦显微镜，测定THP—1细胞NF-κBp65亚基(NF-κB／p65)定位；Western-blot法分析细胞核内NF-κB／p65水平。结果：免疫荧光分析显示，正常细胞NF-κB／p65荧光标记主要分布于胞浆区，核区很少，LPS刺激后NF-κB／p65荧光标记浓集于核区，胞浆区少见；但经蓝桉油(100mg／L)预处理后，LPS刺激的THP—1细胞NF-κB／p65荧光标记则主要位于胞浆区；Western-blot分析显示，在正常THP—1细胞核蛋白中有低水平的NF-κB／p65表达，经LPS刺激，核内NF-κB／p65表达明显增高；蓝桉油预处理后，可以抑制LPS诱导的核内NF-κB／p65高水平表达，且呈剂量依赖关系。结论：蓝桉油预处理阻止了LPS诱导的NF-κB／p65核转位，从而抑制了其活性功能的发挥。蓝桉油可抑制LPS刺激引起的NF-κB核转位活化。     

紫铆因抑制脂多糖诱导小胶质细胞炎性反应的作用机制研究

目的 探讨紫铆因抑制脂多糖(LPS)诱导BV2小胶质细胞炎性反应的作用机制.方法 以LPS诱导BV2小胶质细胞活化建立体外神经炎症细胞模型.MTT法检测紫铆因对BV2细胞存活率的影响;qPCR法检测各组细胞中炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA表达水平;Western blot法检测各组细胞内核因子-κB(NF-κB) p65和ERK信号通路相关蛋白的表达变化;免疫荧光染色观察各组细胞内NF-κcB p65的核转录活性变化.结果 紫铆因干预BV2细胞24 h后,对细胞活力无明显影响;紫铆因能显著下调LPS诱导BV2细胞活化后炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达水平;紫铆因能明显降低LPS诱导BV2细胞活化后,ERK信号通路相关蛋白的磷酸化水平,并且能有效抑制NF-κB p65的核转录活性,阻止其向核内转移.结论 紫铆因可以抑制LPS诱导的小胶质细胞活化,降低BV2小胶质细胞的炎性反应.     

一氧化氮调节脂多糖致炎大鼠肺泡巨噬细胞糖皮质激素受体功能的研究

目的研究肺泡巨噬细胞在脂多糖(LPS)作用条件下一氧化氮供体(SNP)对糖皮质激素受体(GR)功能的调节作用.方法将GR荧光表达质粒pGFP-GR转染大鼠肺泡巨噬细胞,经LPS和SNP作用后,荧光显微镜观察质粒表达产物GFP-GR核移位情况;相对荧光素酶法检测GR转录激活活性;EMSA检测检测细胞NF-κB活性.结果 500 μmol/L SNP作用2 h出现GFP-GR核移位,同时GR转录激活活性显著增强,NF-κB活性被显著抑制.运用GR特异性拮抗剂RU486后,NF-κB活性抑制现象消失.结论肺泡巨噬细胞在致炎因子作用条件下,一氧化氮供体(500 μmol/L SNP )通过活化GR发挥抗炎活性.     

番茄红素对脂多糖诱导巨噬细胞炎症反应的作用及其分子机制

 【目的】 探讨番茄红素对脂多糖(LPS)所诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症因子生成的影响及其作用的分子机制。【方法】 分别用1、5、10 μmol/L 的番茄红素孵育细胞1 h,再用1 μg/mL LPS 处理细胞不同时间,分别用Griess法和ELISA法检测RAW264.7巨噬细胞培养基中NO及IL-6的含量,用Western-blot检测核因子-κB(NF-κB) p65、磷酸化和非磷酸化I-κBα、丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)的蛋白表达量。【结果】 番茄红素能有效地降低炎性因子NO和IL-6分泌,进一步研究显示番茄红素能够抑制LPS诱导I-κBα磷酸化和降解、NF-κB核转移,阻断ERK1/2和p38 MAPK激活,而对JNK活化没有影响。【结论】 番茄红素能够通过抑制ERK1/2 和p38 MAPK信号通路的激活而抑制巨噬细胞NF-κB依赖的炎症因子NO和IL-6生成,这可能是番茄红素防治一些炎症相关性疾病的作用机制之一。     

胰岛素对糖尿病大鼠肾小球蛋白激酶C和核因子κB表达的影响

目的 通过观察糖尿病大鼠肾小球病理改变及蛋白激酶C(PKC)、核因子κB(NF-κB)表达的变化,探讨胰岛素的抗炎机制与对PKC、NF-κB信号转导通路抑制的相关性.方法 将实验动物随机分为正常对照组(N组)、糖尿病组(DM组)、胰岛素治疗组(INS组)、二甲双胍治疗组(MET组),第4 周、8周观察其肾小球病理改变,采用免疫组化方法测定PKC、NF-κB活性,及其在糖尿病大鼠肾小球的表达变化.结果 INS组大鼠血糖水平低于DM组高于MET组,但其肾小球PKC、NF-κB的表达明显低于DM组、MET组.结论 胰岛素对PKC、NF-κB表达的抑制应更多为其抗炎作用所致,而并非完全依靠其降糖作用.     

多黏菌素B抗炎作用机制的研究

目的观察多黏菌素B(PMB)和内毒素(LPS)共同处理大鼠肺泡巨噬细胞(PAM)后对核因子-κB(NF-κB)信号通路的变化。方法分离、培养大鼠PAM,分为正常对照组、LPS刺激组及PMB干预组。采用原位杂交(ISN)技术、凝胶电泳迁移率改变(EMSA)及ELISA法,检测刺激后0、15、30、60、120和240min各时相点PAM中IKK-βmRNA及IκB-α的表达、NF-κB的活性和TNF-α的含量。结果LPS刺激组IKK-βmRNA的水平在刺激后15min出现升高,30min达高峰,60min后逐渐下降;IκB-α的水平的变化趋势在各时相点与IKK-βmRNA刚好相反;NF-κB活性的峰值相出现在60min,15min出现升高,120min后逐渐下降;TNF-α的含量峰值相出现在60min,30min出现升高,120~240min后恢复至刺激前水平。PMB干预组NF-κB的活性与TNF-α的含量虽较刺激前和正常对照组升高,但均显著低于LPS刺激组(P<0.01)。IκB-α水平的最低值显著高于LPS刺激组(P<0.01);而IKK-βmRNA的峰值则显著低于LPS刺激组(P<0.01)。结论LPS能诱导PAM中的IKK-β激活、IκB-α降解和NF-κB活化,并促进TNF-α释放。而PMB则能抑制LPS诱导的IKK-β激活、IκB-α降解、NF-κB活化和TNF-α释放。     

小鼠烧伤后腹腔巨噬细胞核因子κB的活化

目的:观察小鼠烧伤后腹腔巨噬细胞核因子κB(NF-κB)活化情况.方法:小鼠烫伤后6 h,取腹腔巨噬细胞,用免疫组化方法观察NF-κB的活化情况,用格林试剂测定上清中一氧化氮(NO)含量.结果:烧伤后腹腔巨噬细胞NF-κB从细胞质移位到细胞核,而正常组腹腔巨噬细胞NF-κB移位不明显.体外培养巨噬细胞上清中NO含量烧伤组明显高于正常组.结论:烧伤后腹腔巨噬细胞NF-κB活化,产生N()增加.     

重组人生长激素对内毒素诱导的巨噬细胞凋亡和NF-κB的影响

目的 观察内毒素(LPS)对巨噬细胞的凋亡作用以及重组人生长激素(rhGH)的干预效果.方法 巨噬细胞系U937细胞经传代培养24 h后,换用舍LPS(40μg/mL)和LPS+rhGH(4u/L)新鲜培养液继续培养16 h,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫细胞化学法检测巨噬细胞内NF-κB的活化程度.结果 U937细胞经LPS和LPS+rhGH作用16 h后,rhGH明显降低LPS诱导U937细胞的细胞凋亡率,并可抑制NF-κB的活化.结论 rhGH能抑制LPS诱导的U937细胞凋亡,并对NF-κB的活化有一定的抑制作用.     

IL-10对脂多糖诱导Ana-1细胞的MyD88/核因子κB活性影响的研究

目的探讨IL-10对小鼠巨噬细胞髓样分化因子88(MyD88)/核因子κB(NF-κB)炎症信号活化的影响。方法将小鼠巨噬细胞Ana-1分为脂多糖(LPS)组和LPS+IL-10组,分别于0.5、1及2h收集巨噬细胞和细胞培养上清液,Western blot检测细胞MyD88与胞浆、胞核NF-κBp65亚基表达,ELISA法检测培养上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量。结果在0～2h,LPS组细胞MyD88表达显著持续上升,LPS+IL-10组于LPS刺激后上升,0.5h达峰值,2h恢复至正常水平,1h和2h相对含量均低于LPS组(11.6±1.3比17.5±0.7,8.8±0.3比21.4±1.8,P0.05);总NF-κB表达量在两组间无明显差异。NF-κB核浆比变化趋势与MyD88类似,LPS+IL-10组1h及2h相对含量亦均低于LPS组(1.1±0.1比2.4±0.4,0.6±0.7比3.1±0.6,P0.05);相应的,LPS+IL-10组1h和2hTNF-α含量亦低于LPS组[(222.5±33.5)pg/mL比(365.2±22.7)pg/mL,(212.7±15.9)pg/mL比(566.2±31.5)pg/mL,P0.05]。结论 IL-10通过抑制减少MyD88/NF-κB信号通路活化,降低TNF-α表达,从而下调炎症反应强度。     

川芎嗪抑制肿瘤坏死因子α诱导人脐静脉血管内皮细胞组织因子表达的机制研究

目的探讨川芎嗪(TMP)抑制肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导人脐静脉血管内皮细胞组织因子(TF)表达的胞内信号转导机制。方法胰酶消化法分离培养人脐静脉血管内皮细胞,以一期凝固法、ELISA、RT-PCR分别测总的细胞促凝活性、TF抗原和mRNA;放射免疫法测PKC(蛋白激酶C)活性;免疫组织化学染色观察NF-κB的变化。结果TMP和Staurosporine(Sta)可显著减少PMA与TNFα刺激的TF活性、抗原及mRNA的表达(P<0.01);PMA、TNFα使胞浆中PKC活性明显降低(P<0.05),胞膜PKC活性显著增高(P<0.01),而TMP与Sta均能降低胞膜PKC活性(P>0.05);TNFα引起内皮细胞NF-κB从胞浆移入核内,TMP及吡咯二硫氨基甲酸酯(PDTC)均可抑制NF-κB的活化。结论TNFα诱导HUVEC TF的表达中,PKC及NF-κB的活化发挥着重要的作用;TMP通过影响PKC途径及NF-κB的活化而抑制TNFα诱导TF的表达。     

LPS对PC12细胞NF-κB的激活时程

[目的]了解脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对PC12细胞中核转录因子(NF-κB)激活过程。[方法]采用LPS(200 ng/mL)刺激培养的PC12细胞0.5~4 h后,以免疫细胞化学染色和W estern b lot方法检测不同时间点NF-κB的激活和表达水平。[结果]LPS刺激PC12细胞0.5 h后,NF-κB开始激活表达,1 h时NF-κB激活表达水平增加,2 h时NF-κB激活表达水平达到高峰,4 h时NF-κB激活表达水平有所降低,LPS各组与正常对照组比较差异有显著性意义(P<0.01)。[结论]LPS可诱导培养的PC12细胞中NF-κB一过性激活高表达。     

P38蛋白激酶和核因子κB对大鼠肺泡巨噬细胞一氧化氮合酶表达的调控

目的　探讨P38蛋白激酶和核因子κB (NF κB) 在脂多糖(LPS) 诱导肺泡巨噬细胞诱生型一氧化氮合酶(iNOS) 表达过程中的调控作用。方法　分离培养大鼠肺泡巨噬细胞, 设正常对照组, LPS刺激组, P38 蛋白激酶抑制剂SB203580干预组(SB203580 LPS组)。分别采用免疫组织化学、RT- PCR、Western blot 及Griess 方法检测NF- κB、iNOS mRNA、核蛋白P38的表达以及培养上清NO含量。结果　LPS刺激组核蛋白P38、胞核NF κB染色阳性细胞百分比、iNOS -mRNA的表达以及培养上清NO含量均较正常对照组显著升高(P<0. 01); 加入SB203580干预后上述指标均显著降低, 与LPS刺激组相比差异均具有极显著性意义(P<0 .01)。核蛋白P38 的表达与胞核NF κB染色阳性细胞百分比、iNOS mRNA以及培养上清NO含量均呈显著正相关(r= 0. 862, 0 .569, 0. 715, 均P<0. 01), 胞核NF κB染色阳性细胞百分比与iNOS mRNA 的表达以及NO 的产生亦呈显著正相关(r= 0 .653,0 .597, 均P<0 .01)。结论　LPS刺激肺泡巨噬细胞P38 活化可上调胞核NF-κB、iNOS- mRNA和NO的表达; NF-κB可能是P38信号途径下游的重要位点之一。