miRNA调控自噬及其在胶质瘤中的作用

胶质瘤是中枢神经系统(CNS)中最常见的原发性恶性肿瘤,具有发病率高、死亡率高的特点.传统的手术、放射治疗和包括替莫唑胺(TMZ)在内的化学疗法虽然取得了一定成果,但患者的预后仍然较差,亟待拓展新的治疗方法.自噬作为一种生物代谢过程,对肿瘤的发生发展具有促进和抑制的双重作用;自噬失调与胶质瘤的病理生理过程存在密切联系....     

自噬在ALA-PDT诱导C6胶质瘤细胞死亡中的作用机制

目的 探讨自噬在光敏剂5-氨基乙酰丙酸(aminolaevulinic acid,ALA)介导的光动力治疗(photodynamic therapy,PDT)C6胶质瘤细胞死亡中作用机制.方法 ALA-PDT处理后不同时间,用自噬特异染料MDC和免疫荧光法观察自噬水平变化,Western blotting检测自噬相关蛋白cathepsin B的表达水平.结果 MDC染色和免疫荧光观察可见ALA-PDT后C6胶质瘤细胞内有大量含点状荧光颗粒的自噬泡和自噬体标志物LC3绿色荧光蛋白,Western-blot示自噬相关蛋白cathepsin B表达水平明显升高,其白噬水平随AIA-PDT后时间而逐渐增强.结论 ALA-PDT可诱导C6胶质瘤细胞发生自噬,其诱导胶质瘤细胞发生自噬的机制可能与溶酶体酶cathepsin B大量释放有关.     

双氢青蒿素诱导胶质瘤细胞自噬作用的研究

目的 研究双氢青蒿素(DHA)抑制胶质瘤生长作用、机制及联合替莫唑胺(TMZ)的协同抗肿瘤作用.方法 选用胶质瘤细胞株10个,MTT法检测DHA持续作用72 h后细胞株半数抑制浓度(IC50);0.5 μg/ml浓度DHA联合梯度浓度TMZ作用于SKMG-4细胞株,MTT法检测IC50;MDC法荧光分析DHA作用后自噬泡形成;梯度浓度DHA作用SKMG-4,Western Blot法检测caspase-3、Beclin -1、LC3-B蛋白表达.结果 DHA抑制胶质瘤细胞生长IC50为(1.17±0.078)μg/ml-(23.568±0.796)μg/ml;在SKMG-4细胞株中,DHA实验组与空白对照相比,可见明显的自噬泡染色;Beclin-1及LC3-B表达随DHA浓度增加而增加,而cagpase-3表达无明显变化;DHA联合TMZ抑制SKMG-4生长,IC50值明显下降(P＜0.01).结论 DHA具有抗胶质瘤活性,诱导胶质瘤细胞自噬;DHA联合作用可提高TMZ的抗胶质瘤SKMG-4活性,机制可能为增强了TMZ自噬效能.

Abstract：

Objective To investigate the anti - glioma efficacy of dihydroartemisinin ( DHA) and combined with temozolomide (TMZ) on human glioma cell line in vitro. Methods The growth inhibition of DHA on 10 glioma cell lines induced by DHA treatment for 72 h was analyzed by MTT method. TMZ combined with 0. 5 μg/ml DHA, and the IC50 value was measured in SKMG - 4 cells. The autofluorescent drug monodansylcadaverine (MDC) was used to mark autophagicvacuoles. The autophagy related protein LC3 - B and Beclin - 1, and the apoptosis protein caspase - 3 were analyzed by western blot ( WB). Results The IC50 of DHA was different in ten glioma cell lines [from (1. 17 ±0. 078) μg/ml to (23. 568 ±0. 796) μg/ml]. In SKMG -4 cells, the autophagicvacuoles were detected in the DHA group, the IC50 of TMZ had significant difference with 0. 5 μg/ml DHA contrast to the control group ( P ＜ 0. 01), and the levels of LC3 - B and Beclin -1 protein were increased gradually with the increase of DHA concentration, and caspase - 3 protein has no difference. Conclusion DHA can inhibit proliferation of glioma cell lines and increase the efficacy of TMZ, and the autophagy may be the mechanism.     

DNA修复与自噬在胶质瘤替莫唑胺耐药中的作用机制研究进展

替莫唑胺（TMZ）作为一种新型的口服烷化剂,是现今胶质瘤化学治疗的一线用药。TMZ耐药性涉及多种机制。包括O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶（MGMT）、错配修复（MMR）及碱基切除修复（BER）等在内的DNA修复机制可以修复TMZ引起的DNA损伤,从而降低TMZ敏感性。此外,自噬对于TMZ耐药性也有着复杂的作用。该文对TMZ耐药机制以及为改善耐药性而开发的一些治疗策略的最新研究进展进行综述。     

KU-55933抑制替莫唑胺诱导的U87胶质瘤细胞自噬

目的研究KU-55933对替莫唑胺(TMZ)诱导的U87细胞自噬及TMZ毒性的影响及机制。方法 U87细胞分别给予5、10、15、20μmol/L KU-55933作用72 h,或10μmol/L KU-55933作用24、48、72、96 h,MTT法检测细胞增殖。U87细胞分别给予DMSO、100μmol/L TMZ、10μmol/L KU-55933、100μmol/L TMZ+10μmol/L KU-55933作用72 h,流式细胞术检测自噬小体,Western blot检测相关蛋白的表达。结果 KU-55933抑制U87细胞的增殖,并呈剂量及时间依赖性;KU-55933抑制TMZ诱导的共济失调突变蛋白(ataxia-telangiectasia mutated,ATM)、自噬激活激酶(unc-51 like autophagy activating kinase1,ULK1)、P53蛋白磷酸化,降低微管相关蛋白(microtubule-associated protein 1 light chain 3 beta,LC3B)裂解,减少自噬小体的生成,增加TMZ敏感细胞组蛋白亚型γH2AX的形成,但对细胞周期检测点激酶1(checkpoint kinase 1,Chk1)、细胞周期检测点激酶2(checkpoint kinase 2,Chk2)蛋白磷酸化无影响。结论 KU-55933可抑制TMZ诱导的胶质瘤细胞自噬,并且增强TMZ对敏感胶质瘤的细胞毒性。     

碘125粒子内放疗后胶质瘤U251细胞自噬的发生

目的探讨碘125（125I）内放疗后胶质瘤U251细胞发生自噬的情况。方法用甲基噻唑基四唑（MTT）比色法检测不同照射时间及剂量下125I粒子对U251细胞增殖活性的影响。通过单丹（磺）酰戊二胺（MDC）染色,自噬溶酶体活性的检测以及Western blotting蛋白印迹检测微管相关蛋白轻链3（LC3）来证实125I粒子对U251细胞自噬发生的影响。结果125I粒子照射U251细胞后细胞活性明显下降并呈现时间和剂量相关性。MDC染色和溶酶体活性检测以及LC3-Ⅱ蛋白印迹均证实内放疗照射后U251细胞自噬明显增加。结论125I粒子内放疗后U251细胞自噬明显增加。     

姜黄素诱导自噬抑制脑胶质瘤U87细胞增殖的研究

目的研究姜黄素对脑胶质瘤U87细胞增殖的抑制作用及机制。方法采用10、20、40、60、80μmol/L姜黄素分别处理U87细胞72h后,MTT法检测姜黄素对U87细胞增殖的影响。流式细胞术检测40μmol/L姜黄素处理前后U87细胞周期和凋亡变化。提取40μmol/L姜黄素处理前后不同时间点U87细胞总蛋白,Westernblot检测自噬相关蛋白LC3的表达。结果姜黄素呈剂量依赖性抑制U87细胞增殖(P0.05),半数抑制浓度(IC50)为42.44μmol/L。姜黄素诱导G2-M期细胞周期阻滞,实验组G2-M期细胞比例为(47.71±2.67)%,对照组为(17.96±0.88)%(P0.01);实验组细胞凋亡率为(3.93±0.82)%,对照组为(1.80±0.65)%,两组差异无统计学意义(P0.05)。姜黄素给药12、24、48h,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值分别为(0.89±0.004)、(0.93±0.01)、(1.09±0.02),高于对照组(0.76±0.04)(P0.05);3-MA能减弱姜黄素对U87细胞增殖的抑制作用。结论姜黄素通过诱导自噬抑制脑胶质瘤U87细胞的增殖。     

恶性胶质瘤耐药细胞通过Beclin1上调自噬抵抗替莫唑胺化疗

目的 分析Beclin 1与临床胶质瘤病理等级和胶质瘤复发间的关系,探讨其在胶质瘤耐药中的作用和机制. 方法 收集南方医科大学珠江医院和南方医院神经外科自2012年4月至2013年4月手术切除的胶质瘤标本53例(WHO分级Ⅰ级7例,复发2例;Ⅱ级9例,复发4例;Ⅲ级11例,复发6例;Ⅳ级9例,复发5例),免疫组化和Western blotting检测胶质瘤标本中Beclin1的表达;体外培养胶质瘤耐药细胞系U251AR和非耐药U251细胞,Western blotting检测细胞中Beclin 1和耐药蛋白P-gP的表达;Western blotting检测双链小分子Beclin 1干扰RNA(siBeclin l)转染U251AR细胞48h后Beclin 1蛋白的表达;CCK8法检测不同浓度替莫唑胺(TMZ)作用U251、U251AR和U251AR-siBeclin 1后细胞活性;Western blotting检测200μmol/L TMZ作用U251、U251AR和U251AR-siBeclin 1 48 h后Capase-3的表达;吖啶橙染色和Western blotting分别检测干扰Beclin 1表达和HCQ对U251AR细胞自噬小体数量和Capase-3表达的影响. 结果 免疫组化染色结果显示Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤中Beclin 1阳性细胞数明显高于Ⅰ、Ⅱ级胶质瘤.Western blotting结果显示Ⅳ级、Ⅱ和Ⅲ级、Ⅰ级中Beclin 1的表达依次降低,Ⅲ、Ⅳ级复发肿瘤Beclin 1的表达量明显高于原发肿瘤,差异有统计学意义(P＜0.05); U251AR中Beclin 1和耐药蛋白P-gP的表达量均高于U251细胞.与干扰对照组和空白对照组比较,转染siBeclin 1 48 h后干扰组Beclin 1蛋白的水平明显下降;在含TMZ(50,100,500和1000 μmol/L)培养基中培养24 h后,U251AR细胞存活率明显高于U251和si-Bec1-U251AR细胞,差异有统计学意义(P＜0.05).200 μmol/L TMZ作用48 h后,U251细胞凋亡蛋白Caspase-3的表达量明显高于U251AR和si-Bec l-U251AR细胞.吖啶橙染色显示在TMZ培养U251AR 48 h后,HCQ和Beclin 1干扰都导致自噬小体形成明显减少,Caspase-3的表达增高,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 Beclin 1与胶质瘤恶性程度、复发和耐药相关,可能用于胶质瘤恶性诊断和预后评估.Beclin 1在胶质瘤中的耐药功能可能是通过自噬实现的,联合运用TMZ和自噬抑制剂或Beclin 1干扰剂有助于胶质瘤的治疗.     

胶质瘤自噬相关长链非编码RNA的生信分析

目的 探讨胶质瘤自噬相关长链非编码RNA(lncRNA).方法 应用生信分析方法,首先检索CGGA和自噬基因列表来自人类自噬数据库(HADb),构建自噬相关lncRNA共表达网络;第二,多因素Cox回归分析胶质瘤预后相关的自噬相关ln-cRNA,并根据预后lncRNA计算风险评分,将胶质瘤分为低危组和高危组,采用生存曲...     

低级别胶质瘤自噬相关基因预后分类器的构建及验证

目的 本研究旨在构建自噬相关基因(ARGs)的风险分类器,从而预测低级别胶质瘤(LGG)患者的生存率。方法 从UCSC Xena, CGGA, GlioVis和GTEx公共数据库中获取LGG患者和正常脑组织数据,结合人类自噬数据库筛选出232个ARGs。通过差异分析得到差异ARGs。在训练集中,利用单因素Cox回归分析和LASSO回归分析,构建ARGs的预后分类器。通过绘制受试者工作特征(ROC)曲线确定最佳Cut-off值。Kaplan-Meier生存曲线和ROC曲线下面积(AUC)用于评估分类器性能,并在内部数据集和外部数据集中验证。Cox回归分析用于评估分类器的独立预后价值。最后,结合常见临床参数和风险分类用于构建列线图模型,并利用ROC曲线,一致性指数和校准曲线评估该模型的预测能力。结果 本研究构建了由6个ARGs(BAG1、 PTK6、 EEF2、 PEA15、 ITGA6和MAP1LC3C)的预后风险分类器,其可将LGG患者分为具有明显生存差异的高、低风险组在多个数据集(均P<0.05)。5年AUC值显示该分类器在训练集,内部验证集和TCGA总集中分别为0.837, ...     

自噬——脑缺血损伤中的双刃剑

近来研究表明,自噬可能成为卒中治疗过程中的新靶点,但是自噬在脑缺血过程中的激活是否提升神经元存活率一直存在争议,关于其对于脑缺血后神经元发挥的作用是保护还是加重损伤尚不明确。本文主要综述脑缺血后自噬在缺血/低氧损伤中可能发挥的双重作用及其可能的信号通路。     

MG-132激活SHG-44细胞株自噬途径的体外实验

目的 探讨抑制蛋白酶体功能对人胶质瘤SHG-44细胞内自噬途径的激活作用.方法 采用5.0μmol/L蛋白酶体特异性抑制剂MG-132抑制人胶质瘤细胞SHG-44蛋白酶体功能.采用HE染色光镜观察细胞形态变化,AO染色荧光显微镜观察胞质内酸性囊泡细胞器的形成,锇铀铅染色透射电镜观察亚细胞结构变化.差速离心及蛋白印迹分析自噬关联蛋白Beclin及LC3的表达.结果 蛋白酶体功能被抑制后,HE染色光镜下可见SHG-44细胞的胞核呈深蓝色,大小无明显变化,部分染色质轻度浓缩,胞质内可见空泡,胞核附近胞质呈嗜酸性红染;荧光显微镜下见胞核呈黄绿色荧光,细胞核周围的胞质呈点状红色荧光;透射电镜下可见胞核无明显变化,胞质内出现自噬前体、自噬体及自噬溶酶体等亚细胞结构;蛋白印迹分析显示胞质内的Beclin、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ显著增加.结论 抑制蛋白酶体功能可以有效地激活人胶质瘤SHG-44细胞内自噬途径.     

自噬在帕金森病中的研究进展

<正>帕金森病(Parkinson's disease,PD)是神经系统第二大变性病,影响着世界约5千万人口。Karin Wirdefeldt等[1]在总结了世界各地流行病学资料后于2011年发表了1篇文献中指出PD的发病率为(1.5~22)/10万人年,其患病率约为(167~5 703)/10万。PD患病率随着年龄增长而明显增高,陈生弟[2]通过调查得出50~59岁PD患病率为25.1/10万,     

反义核酸技术在胶质瘤治疗中的进展

反义核酸(Antisense nucleic acids)技术是分子遗传学和肿瘤基因治疗上颇受重视的课题.遗传学者以反向遗传学角度,利用反义核酸特异性阻断细胞内单一基因表达,研究特定基因的功能,不影响其它基因的正常功能.因而,此技术对阐明单个基因在肿瘤发生、发展中的作用有重要意义;反义核酸技术也是基因治疗中较具吸引力的手段之一.利用此项技术 ,针对与肿瘤发生、发展起重要作用的几种癌基因或抑癌基因的突变体以及自分泌生长因子及其受体的基因,设计反义核酸,在转录或翻译水平封闭异常基因,使其编码产物不表达或低表达,阻断肿瘤细胞内异常信号传导,使肿瘤细胞转入正常轨道或抑制肿瘤细胞生长或诱导肿瘤细胞凋亡.     

线粒体自噬在蛛网膜下腔出血中的研究进展

线粒体自噬为选择性自噬的一种,在生理状态下、各种急性应激及慢性疾病中,主要参与了线粒体稳态的调节、受损线粒体的清除及避免细胞死亡等多种细胞内生理性反应过程.在多种神经疾病过程中可见到线粒体自噬的参与,但关于线粒体自噬在蛛网膜下腔出血中的研究较少,本文从线粒体自噬的经典通路、在蛛网膜下腔出血中的作用机制及对预后的影响等方...     

自噬参与帕金森病发病的研究进展

近年来,蛋白质的降解障碍被认为是帕金森病（Parkinson’Sdisease,PD）发病过程中的重要因素,人们已经公认泛素一蛋白酶体系统（ubiquitin--pro—teasomesystem,UPS）功能异常或衰竭能够导致细胞内异常蛋白蓄积、细胞功能障碍,甚至细胞凋亡。与此同时,蛋白降解的另一条途径——自噬-溶酶体途径（autophagy—lysosomepathway,ALP）也已成为了生命科学领域的研究热点,自噬与神经变性疾病,尤其是PD的关系日益受到人们的重视。     

mTOR信号通路与自噬在神经退行性疾病中的 研究进展

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）是一种保守的丝氨酸/ 苏氨酸激酶，mTOR 在上游信号 分子Rheb、TSC1/2 的调控下使下游4E-BP和p70S6K 做出相应的反应，进而影响蛋白质合成来调节细胞 生长和增殖。自噬是细胞的一种自我保护机制，神经退行性疾病中某些聚集蛋白的清除主要依靠自噬 来完成。近些年研究表明，诸如阿尔茨海默病等神经退行性疾病与甲状腺功能、mTOR信号通路和自噬 的异常有关。因此，对甲状腺功能、mTOR 通路及自噬的研究有助于了解神经退行性疾病的发生机制， 以更好预防和治疗该疾病。     

脑胶质瘤的临床治疗进展

胶质瘤是颅内最常见的肿瘤,脑胶质瘤的治疗包括外科治疗、化学药物治疗、放射治疗、免疫治疗以及抗血管生成等.由于脑胶质瘤呈浸润性无限制增生,且富于血管,因此治疗十分困难,尤其是复发性脑胶质瘤的治疗更为困难.本文就脑胶质瘤的治疗进展作一综述.     

丙戊酸诱导胶质瘤细胞自噬及其机制研究

目的对丙戊酸诱导胶质瘤细胞发生自噬性死亡的过程进行观察,并初步探讨其可能的机制。方法丙戊酸处理人脑胶质瘤细胞系U87、T98G和SF295,台盼蓝染色检测细胞活性并计算细胞存活率;流式细胞仪测定细胞周期,透射电子显微镜和荧光测定仪观察细胞超微结构及自噬水平,West-ern blotting检测经丙戊酸处理后细胞内LC3-Ⅱ、Beclin-1、p-Akt和p-p70S6K等蛋白质的表达水平。结果经不同浓度丙戊酸处理后,人脑胶质瘤细胞系U87、T98G和SF295细胞活性明显受到抑制,其胶质瘤细胞半数抑制浓度分别为(2.45±0.32)、(4.78±0.62)和(6.62±0.95)mmol/L,其中丙戊酸对人脑胶质瘤细胞系U87具有较明显的杀伤作用(P<0.05)。透射电子显微镜观察可见人脑胶质瘤细胞系U87细胞胞质内有大量自噬体和自噬溶酶体,其自噬水平随丙戊酸浓度的升高而逐渐增强。经丙戊酸处理后,人脑胶质瘤细胞系U87细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和Beclin-1表达水平明显升高,而p-Akt和p-p70S6K表达水平明显降低。结论丙戊酸可诱导胶质瘤细胞发生自噬,其诱导胶质瘤细胞发生自噬的机制可能与阻断Akt信号转导通路有关。     

自噬在多发性硬化中的研究进展

多发性硬化(MS)是一种自身免疫性疾病,其发病机制尚不明确,可能是多因素共同致病的结果。自噬,即细胞内的"自食"现象,可清除细胞内多余的细胞器和蛋白质,是维持机体正常生理功能的重要机制。近年研究发现,自噬参与了MS和实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的发生发展过程,EAE是一种用中枢神经系统髓鞘抗原免疫易感动物的自身免疫性疾病模型,是目前最常用于研究MS的动物模型。对自噬的干预有望能为阐明MS的发病机制和开发更多治疗措施提供新的依据,文中就自噬在MS中的研究进展做一综述。