脂肪基质血管成分移植促进随意皮瓣成活的实验研究

目的探讨脂肪基质血管成分(Stromal vascular fraction,SVF)移植是否可以促进随意皮瓣成活,及其作用的相关机制。方法分离4周龄Wistar大鼠脂肪中的SVF及骨髓中的单个核细胞(BM-MNCs),RT-PCR检测VEGF和bFGF在两种细胞中的表达。根据移植细胞的不同,将24只Wistar大鼠分成3组,分别为对照组、BM-MNCs组和SVF组。在大鼠背部设计一个10 cm×3 cm大小的矩形皮瓣,分别将含有5×107个SVF及BM-MNCs的混悬液各1 mL均匀注射至皮下组织层,对照组单纯注射1 mL PBS。2 d后,皮瓣掀开原位缝合,术后7 d统计皮瓣的成活率。取各组皮瓣相同部位的组织,实时定量PCR检测组织中VEGF和bFGF基因的表达。结果 SVF和BM-MNCs细胞中VEGF和bFGF的表达无明显差别(P>0.05)。皮瓣原位缝合后7 d,SVF组和BM-MNCs组皮瓣的成活率分别为(72.2±2.0)%和(76.4±3.1)%,均明显高于对照组的(56.8±4.6)%(P<0.05)。实时定量PCR检测发现SVF组和BM-MNCs组皮瓣组织中VEGF和bFGF基因的表达明显升高。结论 SVF移植入皮瓣后可以通过旁分泌生长因子如VEGF和bFGF等增加皮瓣的成活面积。     

脂肪来源干细胞促进颗粒脂肪游离移植后再血管化的机制

目的对脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)促进颗粒脂肪游离移植后再血管化的机制进行综述。方法查阅近年有关ADSCs在游离脂肪移植和血管形成中的基础研究文献并进行综述。结果血管形成在时间和空间是一个序惯发生的过程,受到多种因素调控。ADSCs能分泌多种促血管生成因子,并且具有多向分化的潜能。结论 ADSCs作用于血管生成过程的每个部分,具有明确的促血管生成作用,但具体机制仍需要进一步研究。     

自体基质血管成分改善脂肪组织移植效果的实验研究

目的：分析自体脂肪基质血管成分（stromal vascular fraction cells,SVF）对脂肪颗粒（adipose granule,AG）移植的作用。方法：从6只健康新西兰家兔背部肩胛区获取脂肪组织,实验组将自体SVF与自体AG复合,植入家兔耳部皮下,对照为单纯脂肪移植。在术后1、3、6个月,用B超和游标卡尺测量移植脂肪体积;术后6个月取材常规组织学观察。结果：术后1、3、6个月对照组脂肪组织存活率分别为：（64.35±8.36）%、（58.22±2.88）%、（50.61±9.47）%;实验组脂肪组织存活率分别为：（77.42±5.1）%、（67.95±6.09）%、（72.75±4.37）%。两组比较均存在显著性差异（P〈0.05）。术后6个月组织学观察两组呈正常脂肪组织形态,未见明显差异。结论：自体SVF复合脂肪颗粒能够显著提高移植脂肪组织的成活率,为临床脂肪移植提供实验依据。     

血管基质片段细胞携血管内皮生长因子对移植颗粒脂肪血管化的影响

目的 探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)复合血管基质片段细胞( stromal vascular fraction cells,SVFs)细胞疗法对移植颗粒脂肪组织血管化的影响,寻找一种安全、有效、简单的细胞辅助脂肪移植术式.方法 取患者植皮术后废弃的皮下脂肪,提取SVFs.用DiI染色观察SVFs染色标记情况,锥虫蓝染色观察SVFs活性.将0.3 ml待移植的脂肪颗粒分别与0.2 ml下列细胞混合:①复合有VEGF的SVFs(A组);②SVFs(B组);③DMEM完全培养基(C组).按照随机化原则将3组脂肪组织混合物分别注射移植于裸鼠背部皮下,每只裸鼠背上注射3个点(共12只).观察移植物外形、成活情况、湿重、直径,HE染色及CD31染色镜下观察并计数毛细血管密度.使用SPSS 16.0进行方差分析检验.结果 新鲜提取的SVFs可被DiI标记染色,加用VEGF仍能保持较好的细胞活性,移植术后2个月3组移植脂肪的湿重为:A组(191.90 ±9.81)mg、B组( 177.01±10.50)mg、C组(92.05±8.30)mg,A组＞B组＞C组(P＜0.01).移植物直径为:A组(0.49±0.24)cm、B组(0.40±0.26) cm、C组(0.32±0.28) cm,A组＞B组＞C组(P＜0.01).CD31染色镜下,每高倍镜视野微血管密度:A组(14.58±2.06)个、B组(11.55±2.18)个、C组(7.87±1.55)个,与B组和C组比较,A组较少见纤维结缔组织增生及坏死凋亡细胞.结论 结合VEGF因子的SVFs辅助脂肪移植是一种临床可操作性强、简便可行的较理想的细胞疗法,比单纯SVFs更能有效地促进移植脂肪血管化.     

促进脂肪移植的最佳SVFs浓度的实验研究

目的 探讨应用自人脂肪组织新鲜分离的不同浓度的血管基质层细胞( stromal vasvular fraction cells,SVFs)辅助脂肪移植,从而提高移植物的存活率的方法.方法 脂肪组织来自临床行吸脂术者,提取SVFs,将0.3 ml待移植的脂肪颗粒分别与浓度为①5×105个/ml(A组);②1 × 106个/ml(B组);③2×106个/ml(C组)的SVFs混合,另设对照组为完全培养基+单纯脂肪颗粒(D组),随机注射移植于6只裸鼠背部皮下.术后3个月观察移植物情况:①湿重.②切片HE 染色计数血管密度.③方网测试系统“点计数”法检测存活脂肪细胞计数以及纤维坏死组织计数.结果 ①湿重:A组(60.000±6.325) mg,B组(81.670±7.528) mg,C组(68.330±7.528) mg,D 组(48.330±7.528) mg,B组脂肪存活率均高于A、C、D组(P<0.05),A、C2组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).②血管密度:A、B、C组血管密度均高于D组,且B组明显高于其他3组(P＜0.05),A、C2组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).③点计数:B组存活脂肪细胞计数均高于A、C、D组(P＜0.05),纤维组织计数均低于D组(P ＜0.05),A、C2组之间比较差异均无统计学意义(P＞　0.05).结论 来源于人自体SVFs复合脂肪颗粒能够显著提高移植脂肪组织的成活率,其中1×106个/ml数量级的SVFs移植脂肪的存活率最高,更适合用于脂肪移植,具有广阔的临床应用前景.     

新鲜分离的脂肪SVF细胞促进脂肪移植存活的实验研究

目的 探讨应用自脂肪组织新鲜分离的血管基质层细胞辅助脂肪移植,提高移植物存活率的可行性.方法 将0.5 ml待移植的脂肪颗粒分别与下列细胞混合:①DiI标记的新鲜分离的自体血管基质层细胞(A组);②DiI标记的培养至第4代自体脂肪来源干细胞(B组);③DMEM完全培养基(C组),随机注射移植于14只新西兰兔背部皮下.术后观察:①湿重;②切片HE染色计数血管密度;③方网测试系统"点计数"法检测存活脂肪细胞计数以及纤维组织计数;④荧光显微镜检测DiI标记的细胞在体内的分化转归.结果 ①湿重:A组(291.0±72.1)mg,B组(269.3±67.3)mg,C组(177.8±60.0)mg,A、B两组脂肪存活率均高于C组(P<0.05),两组之间比较差异无统计学意义(P>0.05);②血管密度:A、B两组血管密度均高于C组(P<0.05),两组之间比较差异无统计学意义(P>0.05).③点计数:A、B两组存活脂肪细胞计数均高于C组(P<0.05),纤维组织计数均低于C组(P<0.05),两组之间比较差异均无统计学意义(P>0.05);④荧光显微镜下观察发现自体血管基质层细胞与自体脂肪来源干细胞在体内均可向血管内皮细胞分化.结论 自体血管基质层细胞与培养的自体脂肪来源于细胞均可提高脂肪移植物存活率,但前者操作更方便,安全性更高,具有广阔的临床应用前景.     

脂肪来源干细胞辅助脂肪移植的现状、不足与展望

脂肪移植在面部年轻化、软组织重建、乳腺再造、创伤修复等整形外科领域有着广泛的应用前景.但由于脂肪组织不耐缺氧、易发生液化及"瘤"变等自身特性,目前还不能进行广泛的临床应用[1],而脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells, ADSC)为这一领域带来新的希望.近年来,针对其特性开展的一系列基础研究及临床应用研究,虽已取得了很大进展,但也暴露出许多问题.干细胞辅助脂肪移植(cell-assisted lipotransfer, CAL)是组织工程学的概念,即在脂肪移植过程中加入ADSC,用来促进移植部位的血管再生及提高移植脂肪的成活率.Matsumoto等[2]研究表明,在ADSC辅助下,可以增加35%的移植脂肪成活率,特别是与透明质酸支架作为载体或与前脂肪细胞混合等新技术的结合[3],使CAL成为新的研究热点,并已取得许多重大的突破.笔者将从ADSC提取、鉴别、临床应用、远期疗效评价等方面具体分析其现状与不足,旨在综合分析CAL从基础研究到临床应用所亟待解决的问题,希望能对本领域的进一步发展有所助益.     

脂肪干细胞应用于脂肪移植的新进展

脂肪干细胞(Adipose derived stem cells,ADSC)具有多向分化和自我复制能力,逐渐成为损伤修复及再生医学研究的热点。ADSC能够分化为脂肪细胞以及血管内皮细胞,可分泌细胞因子,促进血管新生,改善炎症损伤的微环境,并抑制细胞凋亡。在脂肪移植中应用脂肪干细胞,可以明显降低移植后脂肪组织的液化吸收,减少不良反应发生率,提高远期疗效。     

脂肪来源干细胞的特性及协同脂肪颗粒移植的研究进展

长期以来,对各种原发性和继发性软组织缺损的治疗,一直是困扰整形美容外科医师的难题之一.自体脂肪作为一种软组织填充物,因其具有来源丰富、取材容易、操作简单、填充后外形较好、无排异反应等优点,而受到了国内外整形美容医师的青睐.然而,填充后存在着感染、成活率低、脂肪液化等弊病,阻碍了其在临床上的广泛应用.     

骨髓基质干细胞及其来源的产胰岛素细胞移植对受体胰岛和新生血管的影响

目的 观察骨髓基质干细胞(MSCs)及其来源的产胰岛素细胞(IPCs)移植对受体残余胰岛和其周围新生血管增殖的影响.方法 对大鼠MSCs进行体外诱导成为IPCs.对1型糖尿病大鼠随机分为胰岛素控制血糖组(对照组)、MSCs移植组及IPCs移植组3个治疗组(每组10只).至血糖开始下降至10mmoL/L,同期移除3组大鼠右肾及胰腺,分别进行PCNA、胰岛素和CD31抗体染色,观察3组大鼠肾脏和胰腺的胰岛素及血管内皮细胞表达情况.结果 MSCs诱导生成IPCs.移植物:移植侧的右肾均可见到较多的胰岛素和CD31阳性细胞.胰腺组织:(1)对照组:胰岛萎缩.(2)细胞移植组:残余胰岛增殖率:(20.84±3.48)%和(18.43±2.84)%(P>0.05),胰岛周围均有少量CD31阳性细胞.结论 MSCs及其来源的IPCs明显促进了受体残余胰岛周围新生血管的生成,进而使残余胰岛得到增殖,而MSCs在体内也可分化成IPCs和血管内皮细胞.     

自体脂肪联合脂肪干细胞注射隆乳效果观察

目的:评价自体脂肪联合脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)隆乳的疗效,探索隆乳更安全的方法。方法:选择2011年1月至2012年1月我院的单纯自体脂肪隆乳20例(A组)及自体脂肪结合ADSCs隆乳患者20例(B组),分别应用排水法对两组的术前、术后1个月、术后3个月、术后6个月、术后12个月、术后18个月乳房体积进行测量,并计算每个患者术后各时间点与术前乳房体积的差值,将差值应用SPASS13.0软件进行处理,以P<0.05差异有统计学意义。对术后效果进行随访,了解患者满意度。结果:A、B两组间各个相对应时间点的差值均具有统计学意义。对于组内,A组术后1个月、3个月、6个月、12个月其差值均有统计学意义,12个月与18个月体积差值无统计学意义。B组术后1个月与3个月差值有统计学意思,术后3个月、6个月、12个月、术后18个月均无统计学意义。结论:自体脂肪结合ADSCs组的隆乳效果优于单纯自体脂肪隆乳组。     

人高活性血管基质层细胞快速分离及荧光标记的实验研究

目的探讨一种人高活性血管基质层细胞(stromal vascular fraction cells,SVFs)快速分离及荧光标记的有效方法,为SVFs用于临床奠定理论基础。方法取植皮手术患者自愿捐赠的腹部皮下脂肪组织,分别用0.065%、0.125%、0.185%3种浓度的Ⅰ型胶原酶消化,提取SVFs。收集细胞悬液进行细胞计数,锥虫蓝染色计算细胞成活率。用1’双十八烷-3,3,3’,3’-四甲基吲哚羧化青-高氯酸盐(1,1’-dioctadecyl-3,3,3’,3’-2-tetramethy-lindocyanine perchlorate,DiI)荧光标记0.125%浓度组SVFs,倒置荧光显微镜下观察标记情况;将DiI标记的SVFs接种培养,倒置显微镜观察细胞形态学变化,MTT法检测DiI标记前后细胞增殖能力。结果 0.065%、0.125%及0.185%浓度组SVFs细胞总数分别为(138.68±11.64)×104、(183.80±10.16)×104、(293.07±8.31)×104个,组间比较差异均有统计学意义(P<0.01);细胞成活率分别为91%±2%、90%±2%、81%±2%,0.065%浓度组和0.125%浓度组均显著高于0.185%浓度组(P<0.01),0.065%浓度组和0.125%浓度组比较差异无统计学意义(P=0.881)。倒置荧光显微镜观察示,0.125%浓度组细胞均可被DiI荧光标记,标记后的细胞膜完整,细胞质丰富,细胞形态正常,细胞核未染荧光;DiI标记的SVFs细胞悬液接种培养后,细胞能顺利贴壁及传代。MTT法检测示DiI标记前后SVFs细胞生长曲线相似,生长趋势吻合。结论 0.125%浓度的Ⅰ型胶原酶可有效消化脂肪中的胶原组织,获取大量SVFs,同时对细胞损伤较小,是理想的工作浓度;DiI可有效标记SVFs。     

脂肪干细胞辅助的自体脂肪移植隆乳术临床疗效分析

目的：评价脂肪干细胞（ADSCs）辅助的自体脂肪移植隆乳术的临床效果。方法：选取2008年11月-2009年12月于韩国首尔TIARA整形外科医院接受ADSCs辅助的自体脂肪移植隆乳术的患者100例,对其临床效果进行研究和分析。所有患者均自下腹或大腿部抽取脂肪组织,从其中100mL脂肪组织中提取ADSCs约5mL,与填充用脂肪组织均匀混合后注射于患者乳房内,每侧乳房注射约200mL脂肪。术后测量患者直立位乳头根部至前胸壁平面的垂直距离即为乳房的隆起值。测量术后2周、1个月、3个月和6个月患者乳房的隆起值,与术前隆起值之差即为隆起增加值,并以2周时的隆起值（或隆起增加值）作为基准,评价乳房隆起的保持效果。结果：1OO例患者乳腺整形手术均顺利完成,未出现严重的并发症。绝大多数患者对隆乳效果表示满意,尤其对于自然的胸部曲线与触感非常满意。术后2周测量100例患者隆起的总值是1435mm,平均隆起14．35mm;术后1个月保持率为79．08％,术后3个月保持率为66．75％,术后6个月保持率为7057％。术后1、3和6个月的隆起值与术后2周相比,差异均有统计学意义（P〈O．001）;术后1个月隆起值与术后3、6个月比较,差异有统计学意义（P〈O．05）;而术后3个月和6个月之间差异无统计学意义（P〉O．05）。不同年龄组的患者术后隆乳效果除术后2周有差异外（P〈O．05）,其他时间段的差异无统计学意义（P〉O．05）。结论：ADSCs辅助的自体脂肪移植隆乳术临床效果确切可靠。术后3个月乳房内保存的移植脂肪基本成功存活,之后乳房的隆起效果不再发生变化。不同年龄组的患者均可以通过ADSCs辅助的自体脂肪移植隆乳术获得满意的临床效果。     

Evaluation of adipose‐derived stromal vascular fraction or bone marrow‐derived mesenchymal stem cells for treatment of osteoarthritis

The purpose of this study was the assessment of clinical, biochemical, and histologic effects of intraarticular administered adipose‐derived stromal vascular fraction or bone marrow‐derived mesenchymal stem cells for treatment of osteoarthritis. Osteoarthritis was induced arthroscopically in the middle carpal joint of all horses, the contralateral joint being sham‐operated. All horses received treatment on Day 14. Eight horses received placebo treatment and eight horses received adipose‐derived stromal vascular fraction in their osteoarthritis‐affected joint. The final eight horses were treated the in osteoarthritis‐affected joint with bone marrow‐derived mesenchymal stem cells. Evaluations included clinical, radiographic, synovial fluid analysis, gross, histologic, histochemical, and biochemical evaluations. No adverse treatment‐related events were observed. The model induced a significant change in all but two parameters, no significant treatment effects were demonstrated, with the exception of improvement in synovial fluid effusion PGE2 levels with bone marrow‐derived mesenchymal stem cells when compared to placebo. A greater improvement was seen with bone marrow‐derived mesenchymal stem cells when compared to adipose‐derived stromal vascular fraction and placebo treatment. Overall, the findings of this study were not significant enough to recommend the use of stem cells for the treatment of osteoarthritis represented in this model. © 2009 Orthopaedic Research Society. Published by Wiley Periodicals, Inc. J Orthop Res 27:1675–1680, 2009     

The effect of adipose stromal vascular fraction on transverse rectus abdominis musculocutaneous flap: an experimental study

Background: Transverse rectus abdominis musculocutaneous (TRAM) flap is one of the options in reconstruction after breast cancer surgery for breast reconstruction. Tissue necrosis often occurs in the third and fourth perfusion zones of the flap. A study was planned to find out the effects of adipose stromal vascular fraction (SVF) cells on viability of TRAM flap and the experimental model was designed to be applicable in clinical practice. Methods: Right inferior epigastric artery pedicled, 5?×?2.5?cm sized TRAM flap was used as a flap model in 30 rats in three groups (group 1: sham; group 2: phosphate-buffered saline (PBS); group 3: SVF cell injected). The viability of the flaps were assessed on the postoperative 7th day with photographs and software for the calculations. Results: The mean viable flap percentage to total flap area was recorded as 51.8%?±?11.19, 49.5%?±?10.30, 82.3%?±?9.56, in group 1, group 2, and group 3, respectively (p?<?0.05). The mean capillary density was noted as 5.15?±?0.56, 4.37?±?0.58, and 12.40?±?1.17 in groups 1, 2, and 3, respectively (p?<?0.05). The fibrosis gradient indicated no difference between the groups (p?>?0.05). The in-vivo differentiation of SVF cells to endothelial cells was noted. The blood VEGF levels showed a marked increase in the experimental group (p?<?0.05). Conclusion: The adipose SVF cells were found out to improve the TRAM flap viability and decrease necrosis, especially in zone 3 and 4.