CMV感染病儿实时荧光定量PCR检测及意义

目的 探讨实时荧光定量PCR法检测病儿尿液中巨细胞病毒(CMV)-DNA含量在诊断和动态监测CMV感染中的意义.方法 应用PE 5700全自动PCR扩增分析仪,检测35例临床高度怀疑有CMV感染病儿(病儿组)尿液中的CMV-DNA拷贝数,随机选择45例同年龄段患非感染性疾病病儿作为对照组,比较两组CMV阳性标本中CMV-DNA含量,并测定治疗后的病毒载量.同时与血清CMV-IgM抗体检测结果进行比较.对部分病儿进行临床观察和随访.结果 病儿组CMV感染27例,阳性检出率为77.14%;对照组CMV感染12例,阳性检出率为26.67%.治疗后两组病儿尿液中CMV-DNA拷贝数下降幅度均较大,与治疗前比较, 差异有显著性(t=4.159、5.438,P<0.01).实时荧光定量PCR法CMV阳性检出率高于血清CMV-IgM检测方法.9 例病儿随访2年,1例胆管闭锁病儿手术后CMV病毒载量仍在较高水平,1年后发展为肝硬化;4例CMV 肝炎经治疗后, 1 例CMV-DNA转阴,3例仍阳性;4例无症状性感染病儿CMV-DNA转阴或降至低水平.结论 实时荧光定量PCR技术检测CMV感染具有快捷、灵敏度高、特异度高等优点,量化结果便于对治疗过程进行连续监测,为病儿治疗和随访提供有效帮助.     

荧光定量PCR法检测338例血清乙肝病毒DNA的结果分析

目的：用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测血清中乙型肝炎病毒(HBV)DNA拷贝数，同时用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙型肝炎病毒标志物(HBV-M)，探讨HBV-DNA与HBV-M表现模式的关系。方法：采用FQ-PCR和ELISA分别检测338例血清标本。结果：132例HBsAg( )、HBeAg( )、抗-HBc( )，其HBV-DNA阳性为130例，定量结果对数值的均值为7．7l；119例HBsAg( )、抗-HBe( )、抗-HBc( )，其HBV-DNA阳性为65例，定量结果对数值的均值为4，86；16例抗-HBc( )，其HBV-DNA阳性为4例，定量结果对数值的均值为3．12；而2例HBV-M全阴的HBV-DNA也阴性。结论：FQ-PCR能快速、特异、准确地检测标本中的HBV-DNA，可真实反映HBV感染和复制状态，对乙型肝类的诊断、疗效观察及预后判断都具有较高的指导意义。     

荧光定量聚合酶链反应在巨细胞病毒感染检测中的应用

目的 为了探讨巨细胞病毒检测的新途径及FQ-PCR技术在巨细胞病毒DNA诊断中的实用价值。方法 运用FQ-PCR技术对100例怀疑巨细胞病毒感染的患者进行DNA测定，并与微粒子发光法定量检测抗-CMV及金标免疫斑点法检测抗-CMV进行比较。结果 FQ-PCR技术阳性率为90％，微粒子发光法阳性率86％，金标法阳性率为62％。结论 FQ-PCR技术不但具有明显高于微粒子发光法及金标法的阳性率，而且具有准确定量分析的优点，为病人早期诊断与药物疗效观察提供了更为精确的病原学依据，具有更大的实用价值。     

荧光定量PCR技术及其在肿瘤研究中的现状

自Mullis1 985年发明PCR技术以来 ,PCR技术已广泛应用于生命科学研究的各个领域 ,荧光定量PCR(fluorescencequantitativepolymerasechainreaction,FQ PCR) [1] 是 1 995年由美国PE(PerkinElmer)公司研制出来的一种核酸定量技术。该技术较常规PCR具有简便、灵敏、准确等优点 ,在临床具有广阔的应用前景。本文就其原理、特点及在肿瘤研究方面的应用简要综述如下。1　荧光定量PCR技术原理及过程FQ PCR的分子生物学基础是按常规PCR方式进行体外基因扩增 ,即在PCR反应体系中加入一荧光标记的探针 ,该探针能与扩增基因的某一区域的…     

荧光定量PCR技术在小儿尿液巨细胞病毒检测中的应用

目的探讨荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)方法检测尿液巨细胞病毒在儿童CMV感染诊断中的意义。方法分别应用FQ-PCR和ELISA法检测75例确诊或高度怀疑为CMV感染和25例对照儿童尿CMV-DNA和血清CMV-IgM,比较病毒DNA与血清抗体的平行性和敏感性。结果75例确诊或疑诊CMV活动性感染患儿中,检测到CMV-DNA 66例;检测到CMV-IgM 54例。两种方法阳性符合率为77%,FQ-PCR和ELISA法阳性检出率分别为88%和72%,有统计学差异(P<0.05)。结论FQ-PCR法检测尿CMV-DNA对诊断活动性CMV感染具有良好的应用价值。     

荧光定量检测在乙型肝炎中的应用

聚合酶链反应 ( ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ ,ＰＣＲ)技术已广泛用于核酸分析 ,它可使极微量单拷贝的特定核苷酸片段在短时间内扩增上百万倍[1] 而有利于检测。荧光定量ＰＣＲ (ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲ ,ＦＱ -ＰＣＲ) ,采用荧光技术和闭管检测 ,克服了常规ＰＣＲ方法的主要缺点 ,具有更高的临床应用价值。我室使用广州中山医科大学达安基因诊断中心的乙型肝炎病毒荧光定量ＰＣＲ诊断试剂盒 ,测试了 4 0 6份临床血清标本 ,并同时采用酶联免疫吸附(ＥＬＩＳＡ)测定进行对照检测 ,报告…     

定量PCR监测骨髓移植患者人巨细胞病毒感染

目的：用定量PCR方法监测骨髓移植患者中人巨细胞病毒（human cytomegalovirus HCMV)活动性感染。方法：用双标记探针水解的荧光定量PCR方法，检测4例骨髓移植患者移植前，后随访的血标本140份（其中血浆与外周血多形核细胞各50％）中HCMV，DNA拷贝数，并作动态分析，血浆标本中HCMV DNA的检出与HCMV IgG和IgM作平行比较。结果：4例患者除病例4外，均在术后30－50d间HCMV DNA拷贝数增加，同一时间外周血多形核细胞中HCMV DNA的拷贝数高于血浆，当给予适量更昔洛韦，则能抑制其继续升高，4例患者血清中HCMV IgM始终呈阴性，IgG始终呈阳性。结论：荧光定量PCR方法是用以监测髓移植患者中HCMV活动情况，指导临床适时用药的一种快速有效的方法。     

孕妇TORCH感染与胎儿畸形的关系

目的: 探讨孕妇TORCH感染与胎儿畸形的关系. 方法: 采用酶联免疫吸附试验 (ELISA)法检测1000例孕妇血清TORCH的特异性抗体IgM,对检测抗体阳性者和有畸胎史、不良孕产史的孕妇,用PCR法来检测TORCH DNA. 结果: 孕妇TORCH IgM阳性率为11.6%,其TOX, RV, HCMV, HSV IgM阳性率分别为3.60%, 2.50%, 3.40%, 2.10%;母婴垂直传播率为33.33%,其中TOX, RV, HCMV, HSV的垂直传播率分别为43.33%, 26.32%, 34.62%, 18.18%;孕妇妊娠期间有上感症状者感染TORCH IgM阳性率21.51%显著高于无上感症状者9.34%(P<0.01);有畸胎史TORCH IgM阳性率42.10%、不良孕产史25.40%,显著高于正常妊娠者8.13%(<0.01)TORCH感染孕妇其胎儿畸形率12.37%显著高于无感染组1.07% (<0.01) 结论: 孕妇TORCH感染是导致胎儿畸形的重要因素.     

HCV-RNA实时荧光定量的临床价值

目的评价实时荧光定量聚合酶链反应(RFQ-RT-PCR)检测丙型肝炎病毒(HCV-RNA)在临床中的应用价值。方法用RFQ-RT-PCR检测325例肝炎病人标本,并同时采用ELISA检测抗-HCV,了解样本中HCV-RNA含量与抗-HCV的相关性。结果325份标本中有15例HCV-RNA含量高于1000拷贝/ml,18例抗-HCV阳性。经统计分析,两者有明显的相关性。结论RFQ-RT-PCR技术检测HCV-RNA特异性强,灵敏度高,具有良好的应用价值。     

荧光定量PCR技术测定HBV—DNA中的临床应用

2007年1月～2008年12月门诊与住院病人及外单位送来的血清4384份。其中门诊病人血清2255份，住院病人血清1968份，外单位送来的血清161份。     

荧光PCR定量检测乙型肝炎病毒的临床意义

目的 :对荧光定量 PCR(FQ- PCR)测定的 10 2例 HBV- DNA结果进行分析 ,以探讨其临床价值。方法 :对 10 2份临床血清标本用 FQ- PCR方法进行 HBV- DNA定量测定 ,并和 EL ISA两对半结果以及 AL T结果进行比较分析。结果 :2 5份 HBs Ag(+)、HBe Ag(+)、HBc Ab(+)的标本 HBV- DNA均为阳性 ,L og DNA平均值± 2 sd为 7.45± 2 .5 4;34份 HBs Ag(+)、HBe Ab(+)、HBc Ab(+)的标本 HBV- DNA阳性 15份 ,L og DNA平均值± 2 sd为 6 .33± 1.86 ;9份HBs Ag(+)、HBc Ab(+)的标本 HBV- DNA阳性 4例 ,L og DNA平均值± 2 sd为 5 .2 3± 4.6 0 ;14份 HBs Ab(+)的标本 HBV- DNA阳性 1例 ,18份全阴性的标本 HBV- DNA无阳性。以上五种两对半结果其相对应的 HBV- DNA值基本呈下降趋势 ,而且前二者之间有显著性差异 (P<0 .0 1)。急性乙型病毒性肝炎、慢性乙型病毒性肝炎、肝癌、肝硬化患者之间的 HVB- DNA定量结果无显著性差异。HBV- DNA和 AL T之间无相关性 (r=0 .17)。结论 :FQ- PCR定量测定HBV- DNA可以真实反应 HBV的感染和复制情况 ,可以用于临床治疗和疗效观察 ,但它在急性乙型病毒性肝炎、慢性乙型病毒性肝炎、肝癌、肝硬化的鉴别诊断上无帮助 ,和病情的轻重也无相关性。     

多通道实时荧光定量PCR检测HPVDNA结果分析

目的探讨多通道实时荧光定量PCR检测HPVDNA的效果,并应用于日常检测工作。方法对临床1100例宫颈分泌物标本采用多通道实时荧光定量PCR仪进行8种高危HPVDNA分型及定量检测。8种高危HPV型别为主要高危型HPV16、18、45、31和次要高危型HPV33、52、58、67。结果在1100例标本中排除了14例B球蛋白为阴性的标本,剩余1086例标本总体的内标平均值为3．71×10^6IU／ml。随机重复性试验和对每个型别的各浓度标本进行的重复性试验每次扩增均为阳性,型别符合率为100％。共检测出阳性标本287例,HPV16、HPV18／45、HPV31、次要高危型和合并感染各有46、17、14、146和64例,分别占总阳性标本的16％、6％、5％、51％和22％。所有标本绝对定量值的分布近似于正态分布。结论多通道荧光定量PCR检测HPVDNA灵敏度高、复性好,可用于临床HPV感染的筛查与宫颈病变程度预测以及患者术后疗效观察。     

荧光定量PCR检测盆腔炎性疾病生殖道支原体感染的研究

目的 探讨荧光定量聚合酶链反应(fluorescent quantitative polymerase chain reaction，FQ-PCR)检测盆腔炎性疾病(PID)生殖道支原体(Mycoplasma genitalium，MG)的临床意义。方法 利用FQ-PCR法和培养法检测92例盆腔炎症性疾病患者NG的感染率。结果 92例PID患者中FQ-PCR法测得的阳性率为40．2％，而培养法测得的阳性率为22．8％，两种方法的差异性有非常显著性意义(x^2=12．800，P=0．0003)。结论 FQ-PCR能快速、准确、定量检测MG感染，值得临床推广。     

实时荧光定量PCR法检测肾移植术后BK病毒感染及意义

目的检测肾移植患者术后BK病毒DNA并探讨其临床应用价值。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)对86例同种异体肾移植患者术后血液及尿液标本进行BK病毒DNA检测。结果 86例肾移植患者中,尿BK病毒DNA阳性12例(14.0%),血液BK病毒DNA阳性6例(7.0%)。BK病毒DNA血、尿均为阳性5例患者中有4例经肾脏穿刺病理活检确证为BK病毒相关性肾病(BKVAN)。结论尿液BK病毒检测能够早期发现BK病毒感染,结合血液BK病毒检测为早期诊断、治疗并预防肾移植术后BKVAN提供重要的依据。     

实时跟踪荧光PCR定量检测乙型肝炎病毒DNA的临床意义

目的探讨实时跟踪荧光PCR定量检测乙型肝炎病毒DNA临床价值。方法对2367例临床血清标本用FQ-PCR方法进行HBV—DNA定量测定，并和ELISA两对半以及ALT结果进行比较。结果HBV—DNA阳性率为60．9％（1442／2367），其中大三阳HBV-DNA检出率为89．04％（845／949）、ALT升高47．84％（454／949）、小三阳HBV—DNA检出率为39．08％（408／1044）、ALT升高33．42％（349／1044）、单HBSAg63．8％（185／290）；单抗HBeHBV—DNA检出率4．54％（1／22）。结论实时跟踪定量检测的荧光定量PCR技术可以检测HBV的真实感染和复制情况是乙型肝炎病毒复制和传染性的直接病原学依据。     

荧光探针定量PCR在检测HBV-DNA的应用

目的　用荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)方法准确地定量检测血清中的HBV DNA数量和免疫指标 ,以指导临床。方法　用FQ PCR方法和酶联免疫吸附试验 (ELISA)方法分别检测 184份临床血清标本的HBVDNA和免疫指标。结果　用 (ELISA)作对照 ,经FQ PCR检测 ,HBeAg(+)组 (82份 )的阳性率为 10 0 % ,HBV DNA阳性拷贝数范围在 10 5～ 10 10 /ml;HBeAb(+)组 (5 2份 )的阳性率为 5 5 8% ,HBV DNA阳性拷贝数范围在 10 4～ 10 7/ml;HBsAb(+)组 (2 0份 )的阳性率为 15 % ,HBV DNA阳性拷贝数范围在 10 4～ 10 5/ml;对照组 (30份 )的阳性率为 0。HBeAg(+)组血清中HBV DNA含量 (10 7 2± 1 13 )显著高于HBeAb(+)组 (10 5 8± 1 4)和HBsAb(+)组 (10 4 67± 0 58)。结论　FQ PCR检测HBV DNA具有较高的灵敏度和特异性 ,且能准确定量 ,FQ PCR可以检测HBV的真实感染和复制情况 ,对乙型肝炎临床诊断 ,治疗及疗后观察有重要意义。     

荧光定量PCR在丙型肝炎病毒感染检测中的应用

目的　观察荧光定量聚合酶链反应 (FQ -PCR)在丙型肝炎病毒 (hepatitisCvirus ,HCV )感染检测中的临床应用情况。方法　用FQ PCR检测 3 15份怀疑HCV感染的临床血清标本 ,并同时采用酶联免疫吸附测定法 (ELISA)检测抗HCV ,用生化仪测定血清丙氨酸氨基转移酶 (ALT)水平 ,了解样本中HCV RNA含量与抗HCV及ALT的相关性。结果　 3 15份标本中有 2 2 5份HCV RNA含量高于 80拷贝·ml-1,2 5 0份抗HCV阳性 ,14 5例ALT异常 ,HCV RNA含量与抗HCV阳性率间有显著的相关性 (r =0 .682 ,P =0 .0 0 2 ) ;HCV RNA含量与ALT异常率间也有显著的相关性 (r =0 .92 3 ,P =0 .0 3 2 )。结论　FQ PCR技术检测HCV RNA特异性强 ,灵敏度高 ,具有良好的临床应用价值。