长链非编码RNA LINC01001 在乳腺癌中的表达及其对MCF-7细胞增殖的影响

目的：探讨长链非编码RNA LINC01001 在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌MCF-7 细胞增殖能力的影响。方法：筛选2016 年3 月至2017 年6 月于湖北医药学院附属人民医院甲状腺乳腺外科行手术切除的乳腺癌患者癌及癌旁组织12 例,qRTPCR检测乳腺癌组织及癌旁组织LINC01001 的相对表达量;通过重组质粒在人乳腺癌MCF-7 细胞中过表达LINC01001,采用流式细胞术和MTT 法检测过表达LINC01001 后MCF-7 细胞周期分布和增殖能力变化。qRT-PCR 检测miR-485-5p 和CDKN1A mRNA的表达变化,Western blotting 检测CDKN1A、CDK4、CDK6 和Cyclin D1 蛋白表达变化。结果：LINC01001 在乳腺癌组织中表达水平低于对应的癌旁组织（P<0.01）。LINC01001 重组质粒转染MCF-7 细胞后可显著抑制细胞周期进展（P<0.05）,抑制细胞的增殖能力（P<0.05）。过表达LINC01001 后,MCF-7 细胞的miR-485-5p 的表达水平降低（P<0.01）,CDKN1A mRNA表达水平升高（P<0.01）;可促进CDKN1A蛋白的表达和抑制CDK4、CDK6 和Cyclin D1 蛋白的表达。结论：LINC01001 在乳腺癌组织中表达降低,其可能通过下调miR-485-5p 的表达上调CDKN1A的表达来抑制乳腺癌MCF-7 细胞的增殖能力,为lncRNA 的临床应用提供实验基础。     

肿瘤抗原MAGE-A4在乳腺癌组织和细胞系中的表达及其作用

目的检测正常乳腺组织及乳腺癌组织中MAGE-A4 (melanoma antigen-A4) mRNA的表达,探讨其与乳腺癌临床参数、生物学行为的关系以及对乳腺癌细胞增殖的影响。方法用RT-PCR方法检测77例正常乳腺组织及乳腺癌组织中MAGE-A4 mRNA的表达状况,用χ2检验分析其表达与乳腺癌临床参数及生物学行为的关系;用集落形成实验研究MAGE-A4对乳腺癌细胞增殖的影响。结果77例正常乳腺组织中没有检测到MAGE-A4 mRNA的表达;77例乳腺癌组织有33例MAGE-A4 mRNA阳性表达,阳性率为42.9%。60（含60岁）岁以上乳腺癌患者MAGE-A4 mRNA阳性表达率明显高于60岁以下患者(P<0.05);但MAGE-A4 mRNA表达与乳腺肿瘤的大小、临床分期、病理类型、组织学分级、淋巴结转移、有无瘤栓、ER/PR及HER-2状态之间无明显相关性 (P>0.05)。乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231均不表达MAGE-A4 mRNA,而乳腺癌细胞系MDA-MB-436中MAGE-A4 mRNA呈高表达。转染MAGE-A4基因可以抑制MCF-7和MDA-MB-231细胞克隆的形成(P<0.05)。结论MAGE-A4在正常乳腺组织不表达,在乳腺癌组织中表达率为42.9%,提示MAGE-A4是一种肿瘤特异性抗原。该基因的表达与乳腺癌患者的年龄有关,与其他临床参数及生物学行为无明显相关性。在MAGE-A4阴性表达的乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231中转染MAGE-A4基因可抑制该细胞的克隆形成。     

基于数据库挖掘分析SLC12A8在乳腺癌组织中的表达及与细胞耐药的关系

目的:探讨SLC12A8在乳腺癌组织中的表达及临床意义,并分析其在乳腺癌耐药细胞中的表达。方法:利用Oncomine数据库分析SLC12A8在乳腺癌组织中mRNA表达情况,利用HPA数据库分析SLC12A8在乳腺癌组织中蛋白表达情况,采用Kaplan-Meier法分析SLC12A8表达水平与乳腺癌患者总生存期、无复发生存期和无远处转移生存期的关系。利用GEO数据库分析乳腺癌耐药细胞中SLC12A8的表达,进一步利用cBioPortal数据库分析乳腺癌耐药细胞中与SLC12A8共表达基因。结果:与正常乳腺组织相比,乳腺癌组织中SLC12A8 mRNA具有高表达(P＜0.000 1)且其蛋白表达水平也较高。通过生存分析发现低表达SLC12A8基因的乳腺癌患者总生存期（OS）、无复发生存期（RFS）和无远处转移生存期（DMFS）明显长于高表达者,高表达患者的预后更差(P＜0.01)。乳腺癌耐阿霉素细胞MCF7/ADR中SLC12A8 mRNA表达高于非耐药细胞MCF7(P＜0.05),SLC12A8表达与MCF/ADR中表达降低的GREB1、PDZK1、GFRA1基因呈负相关,且这三个基因与乳腺癌耐药密切相关。结论:SLC12A8基因在乳腺癌组织中呈现高表达,其表达水平与乳腺癌患者预后呈负相关,该基因可能通过与GREB1、PDZK1、GFRA1相互作用参与乳腺癌耐药过程。     

锌指蛋白883在胃癌组织中的表达及生物学功能

目的:探讨锌指蛋白883（ZNF883）在胃癌组织中的表达及预后意义,并观察其对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:基于TCGA数据,通过GEPIA网络平台分析ZNF883 mRNA在胃癌组织和正常胃组织中的表达差异及其与患者生存率的相关性。通过蛋白免疫印记（Western blotting,WB）检测ZNF883蛋白在胃癌组织及对应癌旁组织中的表达水平。ZNF883 shRNA转染人胃癌细胞AGS和NCI-N87,WB检测敲低效率,CCK-8和Transwell小室检测细胞增殖、迁移和侵袭,并通过WB检测细胞周期蛋白D1（CCND1）、细胞周期依赖性激酶4（CDK4）和基质金属蛋白酶2/9（MMP2/9）蛋白表达。结果:TCGA数据分析发现ZNF883 mRNA在胃癌组织中的表达显著高于正常胃组织,其蛋白表达在胃癌组织中亦显著上调。生存分析证实ZNF883 mRNA高表达胃癌患者的无病生存率和总生存率均明显降低。敲低ZNF883显著抑制AGS和NCI-N87细胞增殖、迁移和侵袭。另外,敲低ZNF883显著减少胃癌细胞中CCND1、CDK4和MMP2/9蛋白水平。结论:ZNF883是一个新的胃癌驱动基因,胃癌组织中其高表达提示患者预后不良,ZNF883可能通过促进CCND1、CDK4和MMP2/9表达增强胃癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

辛基酚对MCF-7乳腺癌细胞周期及周期蛋白表达的影响

目的观察辛基酚对MCF-7乳腺癌细胞周期及周期蛋白表达的影响。方法以MTT试验、流式细胞分析、免疫细胞化学和RT-PCR等方法观察辛基酚对MCF-7乳腺癌细胞增殖、细胞周期相和细胞凋亡、CDK2和CDK4 mRNA表达、Cyclin D1 mRNA及蛋白表达的影响。结果4、8、16μmol/LOP作用MCF-7乳腺癌细胞72h时,细胞增殖率分别为107.31%、168.06%、62.00%,G0/G1期细胞分别为(52.46±6.67)%、(50.19±7.39)%、(67.31±5.47)%,对照组(55.27±7.53)%,细胞凋亡率分别为(4.84±1.12)%、(6.48±1.36)%、(19.26±3.57)%,对照组(5.56±1.125)%,16μmol/LOP减少了细胞中CDK2、CDK4、Cyclin D1 mRNA及Cyclin D1的表达。结论4、8μmol/LOP促进MCF-7乳腺癌细胞增殖,16μmol/LOP则抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,这可能与OP影响细胞中CDK2、CDK4、Cyc-lin D1 mRNA及Cyclin D1表达有关。     

小干扰RNA阻断周期蛋白依赖激酶4对子宫内膜癌细胞生物学行为的影响

背景与目的：细胞周期蛋白依赖激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)是调控细胞周期进程的重要激酶之一,有实验报道其在子宫内膜癌中呈高表达,但是其在子宫内膜癌细胞中的生物学功能及其可能机制还不十分明确。本研究旨在通过小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默CDK4表达,并检测其对人子宫内膜癌HEC-1B细胞生物学行为的影响及其可能机制。方法：将化学合成的CDK4-siRNA转染至HEC-1B细胞;实时荧光定量PCR法检测转染前后细胞中CDK4的mRNA表达量变化;Western blot检测转染前后细胞CDK4、视母细胞瘤基因(retinoblastoma gene,Rb)及其下游p-Rb的蛋白表达量的变化;分别采用CCK-8法、流式细胞仪、Transwell肿瘤细胞侵袭实验检测细胞增殖、周期、凋亡以及侵袭能力的变化。结果：转染后HEC-1B细胞中CDK4 mRNA及蛋白表达均明显下降(P<0.01);抑制CDK4表达后,抑制HEC-1B细胞的增殖及侵袭,转染si-CDK4组细胞发生侵袭数为(117±21)个,而转染si-control组及未处理组分别为(269±39)个和(262±35)个,差异具有统计学意义(P<0.01);细胞转染后早期凋亡率为(21.7±3.5)%,较未处理组［(12.4±2.1)%］和si-control组［(11.8±1.9)%］明显增加(P<0.01);细胞周期分布发生变化,G₁期比例增加(P<0.01),S期细胞比例降低(P<0.01);进一步的Western blot结果显示,抑制CDK4表达后,细胞内p-Rb表达下降,但是总Rb表达无明显变化。结论：针对CDK4基因的特异性小RNA干扰片段能够下调CDK4基因在子宫内膜癌细胞中的表达,抑制肿瘤生物学进程。     

趋化因子受体CXCR4在乳腺癌中表达的研究

目的探讨趋化受体CXCR4在乳腺癌中的表达及其与肿瘤转移的关系,以及脂多糖(LPS)对其表达的影响.方法采用流式细胞仪和RT-PCR法检测23例乳腺癌患者的癌组织、癌旁组织、正常组织以及MDA-MB-231细胞中CXCR4在蛋白质和mRNA水平的表达情况,以及LPS对MDA-MB-231细胞 CXCR4表达的影响;用Transwell板检测经LPS作用前后MDA-MB-231对趋化因子SDF-1趋化活性的影响.结果乳腺癌组织MDA-MB-231细胞的趋化因子受体CXCR4在蛋白质和mRNA水平的表达均显著高于癌旁组织和正常组织(P<0.05),并且CXCR4的表达与乳腺癌的转移密切相关;脂多糖(LPS)能下调CXCR4的表达,经LPS作用后乳腺癌细胞趋化活性降低.结论趋化因子受体在乳腺癌的转移中起重要作用,下调乳腺癌细胞CXCR4的表达水平,可减少或抑制其转移.     

基于TCGA、THPA、GEO数据库挖掘PTTG1在乳腺癌中的表达及预后意义

目的:通过对癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)、人类蛋白组图谱(The Human Protein Atlas,THPA)和人类肿瘤相关的基因表达汇编(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库的数据挖掘,探索垂体肿瘤转化基因1（pituitary tumor-transforming gene 1,PTTG1）在乳腺癌中的表达及预后意义。方法:从TCGA、THPA和GEO数据库提取PTTG1在乳腺癌及正常组织中mRNA和蛋白水平的变化和患者临床病理资料,GEO在线预后分析数据库Kaplan-Meier Plotter(http://kmplot.com)检索PTTG1乳腺癌预后的相关性。结果:在数据库中,PTTG1 mRNA和蛋白水平在乳腺癌队列中表达显著高于正常乳腺组织(P<0.01);PTTG1 mRNA在不同的分子亚型中表达存在显著差异(P<0.05);PTTG1 mRNA在ER和PR阳性乳腺癌患者组织中表达显著低于ER和PR阴性乳腺癌患者(P<0.05);PTTG1 mRNA在进展期乳腺癌患者组织中表达显著高于早期乳腺癌患者(P<0.05);PTTG1 mRNA随着乳腺癌患者组织学分级程度升高而降低(P<0.05)。PTTG1低表达乳腺癌患者的预后显著好于其高表达患者(P<0.001);PTTG1高表达的ER和PR阳性、HER-2阴性乳腺癌患者的预后均显著差于其低表达者(P<0.05)。PTTG1高表达乳腺癌样本富集到细胞因子受体相互作用、趋化因子信号通路、细胞周期、自然杀伤细胞介导细胞毒性、Toll样受体信号通路和T细胞受体信号通路等相关基因集。结论:PTTG1 mRNA和蛋白在乳腺癌组织中高表达,PTTG1 mRNA表达与乳腺癌预后相关且在不同分子分型的乳腺癌中具有不同的预后监测意义,可以作为乳腺癌预后判断的标志物。     

抑癌基因RSK4的表达与乳腺癌细胞体外侵袭力的相关性研究

目的:探讨RSK4 mRNA在4株乳腺癌细胞MDA-MB-231、T47D、Bcap-37、MCF-7中的表达,分析RSK4 mRNA表达情况与4组细胞侵袭力之间的关系,进而探讨RSK4的抑癌机制.方法:通过RT-PCR方法检测4组乳腺癌细胞MDA-MB-231、T47D、Bcap-37、MCF-7中RSK4 mRNA的表达情况,用Transwell小室法检测4组细胞的侵袭力、运动力,分析二者之间的关系.结果:4组乳腺癌细胞株体外侵袭力、迁移力高低顺序依次为:MDA-MB-231＞T47D＞Bcap-37＞MCF-7(P＜0.001),4组细胞两两之间比较,有显著性差异;相关性分析显示,其侵袭力与迁移力呈显著性正相关(r=0.822,P＜0.001＝.RSK4 mRNA表达水平的顺序依次为:MDA-MB-231＜T47D＜Bcap-37＜MCF-7(P＜0.001),4组细胞两两之间比较,有显著性差异.RSK4 mRNA相关表达与乳腺癌细胞体外侵袭能力呈负相关(r=-0.948,P＜0.001),RSK4 mRNA表达越高的细胞其体外侵袭能力越弱.结论:RSK4基因参与乳腺癌的发展过程,并与乳腺癌的生物学行为有关,RSK4 mRNA的表达水平在评价乳腺癌细胞体外侵袭力方面具有重要意义.     

mdm2／p53通路相关的乳腺癌差异表达基因分析

目的比较乳腺癌和正常乳腺组织的基因表达差异，探讨与mdm2／p53通路相关的差异表达基因。方法提取11例乳腺癌和将5例正常乳腺组织等比例混合的组织总RNA进行芯片杂交，用SAM软件筛选差异表达基因，用GoMiner软件检索差异表达基因的功能，挑选参与细胞周期和凋亡的基因，通过Pathway分析方法检索与mdm2／p53通路相关的差异基因；用免疫组化方法验证差异基因cyclin A2及其相关基因CDK2在乳腺癌（38例）和正常乳腺组织（16例）中的表达。结果乳腺癌与正常乳腺组织的差异表达基因共548个，其中参与细胞周期的基因有35个，参与凋亡的基因有23个；与mdm2／p53通路相关的差异基因有4个，分别是cyclin A2，cyclin B1，PCNA，YWHAZ；经免疫组化验证的38例乳腺癌和16例正常乳腺组织的cyclin A2表达阳性率分别为42．1％（16／38，和6．25％（1／16）；CDK2表达阳性率分别为47．3％（18／38）和6．25％（1／16），两者均有统计学差异（P〈0．05）；在乳腺癌中cyclin A2与CDK2的表达呈正相关，特别值得一提的是如果以≥2^＋为阳性在乳腺癌cyclin A2为26．3％，CDK2为31．5％，而在正常组几乎看不到≥2^＋的表达。结论乳腺癌组织与正常乳腺组织相比存在着差异表达基因，与mdm2／p53通路相关的差异基因的异常高表达促进细胞增殖，与乳腺癌的发生密切相关，而cyclin A2和CDK2在乳腺癌共表达并明显高于正常组织其意义还不清楚。     

Survivin shRNA干扰对食管癌细胞CDK4 mRNA表达的影响

目的： 以shRNA抑制食管癌ECA109细胞内Survivin的表达,探讨Survivin shRNA干扰对CDK4基因表达的影响。方法：ECA109细胞分为Survivin shRNA干扰组、质粒对照组和空白细胞组,采用RNA干扰技术沉默ECA109细胞株中Survivin基因的表达,RT-PCR检测各组细胞中Survivin和CDK4 mRNA的表达,Western blot方法检测各组细胞Survivin蛋白的表达,流式细胞术检测细胞周期的改变。结果：与质粒对照组及空白细胞组比较,Survivin shRNA干扰组细胞Survivin mRNA及蛋白表达下调,CDK4 mRNA表达明显降低,差异均具有统计学意义(P均<0.05);Survivin shRNA干扰组G2期延长,G2期细胞比例增加,细胞G2期增殖阻滞。结论：Survivin基因可能在转录水平对CDK4具有调控作用,其具体调控机制有待进一步研究。     

CO2对宫颈癌Hela细胞CDK9基因表达的影响

目的 研究CO2对宫颈癌Hela细胞株CDK9基因表达的影响,分析其在癌细胞生长与转移中的作用.方法 将宫颈癌Hela细胞株随机分为3组:A组Hela细胞株在压力为8mmHg的纯CO2下通气4h,培养24h;B组Hela细胞株在压力为8mmHg的纯CO2下通气4h,培养120h;C组Hela细胞株未进行CO2处理,细胞株置于常规细胞培养箱中培养120h.采用RT-PCR法检测A、B、C组宫颈癌Hela细胞CDK9 mRNA的表达.结果 A、B组与C组比较,A、B组CDK9 mRNA的相对表达量明显下调(P＜0.05)；B组与A组比较,B组CDK9 mRNA的相对表达量比A组下调更显著(P＜0.01).结论 宫颈癌Hela细胞CDK9基因在CO2作用下受抑制出现表达下调,且随CO2作用时间越长,CDK9基因相对表达量降低越明显.     

乳腺癌组织中Fas和CTLA-4及RhoBTB2基因表达及其与临床病理因素的关系

目的 探讨乳腺癌组织中Fas、CTLA-4和RhoBTW2基因表达的临床意义.方法 应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),检测60例原发乳腺癌患者癌组织和30例乳腺正常腺体组织中Fas、CTLA-4和RhoBTB2基因的mRNA表达,分析其与患者临床病理因素的关系.结果 乳腺癌组织中Fas、CTLA-4及RhoBTB2基因的相对表达量分别为0.699±0.285、1.045±0.302和0.625±0.160,而在乳腺正常腺体组织中分别为0.502±0.178、0.418±0.140和0.843±0.218,差异有统计学意义(P<0.01).腋淋巴结转移患者乳腺癌组织中Fas基因的表达(0.782±0.313)显著高于无转移患者(0.557±0.146,P<0.01),Ⅱ期患者乳腺癌组织中CTLA-4基因的表达(0.978±0.330)低于Ⅲ期患者(1.134±0.240,P<0.05),浸润性导管癌患者乳腺癌组织RhoBTB2基因的表达(0.597±0.157)低于浸润性小叶癌(0.717±0.145,P<0.05).Fas、CTLA-4和RhoBTB2的mRNA表达均与乳腺癌患者年龄、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人表皮生长因子受体2(Her-2)状态和生存时间无关,且3者间亦无显著相关(P>0.05).结论 Fas、CTLA-4和RhoBTB2的mRNA表达均与乳腺癌发生、发展有关.Fas mRNA表达与腋淋巴结转移有关,CTLA-4 mRNA表达与乳腺癌分期有关,RhoBTB2 mRNA表达与乳腺癌病理类型有关.     

铜死亡相关基因COX17 在乳腺癌组织和细胞中的表达及其与临床特征和患者预后的关系

目的：探究铜死亡相关基因COX17在乳腺癌组织和细胞中的表达及其与肿瘤免疫细胞浸润、临床特征和患者预后的关系。方法：通过多种数据库数据分析COX17 在人体正常组织和泛癌组织与细胞中的表达及其与患者预后的关系、COX17 基因突变情况、COX17表达水平与肿瘤免疫微环境的相关性、COX17在浸润性乳腺癌中表达水平及其与患者临床病理特征的相关性、在乳腺癌细胞中COX17基因遗传突变及甲基化情况、COX17差异共表达基因的功能富集分析，构建COX17蛋白质相互作用网络及功能分析。采用免疫组化法检测COX17蛋白在国人乳腺癌组织中的表达以验证数据库分析结果。结果：COX17 mRNA广泛分布于全身组织中且在多数癌组织中呈高表达，COX17蛋白在乳腺癌等癌组织中呈高表达，COX17 mRNA表达水平明显影响乳腺癌等癌症患者的预后，COX17 基因在多种癌组织中突变频率高且其主要突变类型为错义突变、扩增和深度缺失，COX17mRNA表达水平与多种肿瘤的肿瘤纯度和多种免疫细胞浸润存在相关性，COX17蛋白水平与乳腺癌临床分期、病理分型、淋巴结转移、患者性别和年龄有关联。免疫组化法检测结果证实在国人乳腺癌组织中COX17蛋白也呈高表达，COX17基因在乳腺癌中遗传突变和修饰特征分别是截断突变和启动子区高度甲基化。COX17蛋白与ATOX1等多种蛋白表达相关且构成复杂的相互作用网络，COX17在乳腺癌中差异表达基因主要涉及氧化还原酶活性、蛋白翻译、氧化磷酸化及TNF信号通路等生物过程。结论：COX17在乳腺癌组织和细胞中呈高表达，且与癌组织的免疫细胞浸润和患者预后相关，COX17是临床治疗乳腺癌的潜在靶点。     

乳腺癌中NDRG-1基因甲基化及其体外逆转研究

目的:探讨N-myc下游调节基因(N-myc downstream regulated gene-1,NDRG-1)基因在乳腺癌组织中的甲基化状态,研究甲基化酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine, 5-Aza-CdR)对乳腺癌细胞株T47D的生长增殖及NDRG-1 mRNA表达的影响.方法:采用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)法检测乳腺癌组织、相应癌旁组织和乳腺良性病变组织中NDRG-1基因启动子甲基化状态;5-Aza-CdR处理T47D细胞后,MTT法观察细胞生长活性的变化,RT-PCR法检测处理前后抑癌基因NDRG-1的mRNA表达变化.结果:NDRG-1基因在乳腺癌组织中甲基化率为46.8%,癌旁组织中甲基化率为21.3%,而乳腺良性病变组织均未检测到甲基化.T47D细胞经5-Aza-CdR处理后,与对照组相比,细胞生长受到明显抑制.RT-PCR检测发现,与对照组相比,不同浓度处理组细胞的NDRG-1 mRNA表达增多. 结论:NDRG-1基因甲基化状态与乳腺癌发生有密切关系.5-Aza-CdR逆转T47D细胞NDRG-1基因甲基化,恢复该基因的表达,从而抑制肿瘤细胞生长.     

PIP mRNA在乳腺癌组织中的表达

目的:本研究探讨乳腺组织特异性基因PIP(prolactin-inducible protein)mRNA在乳腺癌组织中的表达及其作为检测乳腺癌微小转移指标的可能性.方法:利用RT-PCR检测PIP mRNA乳腺癌患者癌组织和相应癌旁正常乳腺组织44例,以及胃癌、大肠癌、食管癌、肺癌、卵巢癌标本各5例中的表达.分析PIP mRNA表达与乳腺癌临床病理特点之间的关系.结果:44例乳腺癌组织和相应癌旁组织中43例表达PIP mRNA,其中有69.8%(30/43)的癌组织相对正常组织低表达;而胃癌、大肠癌、食管癌均未表达.肺癌、卵巢癌各1例PIP阳性.在乳腺癌组织和其它癌组织中表达有显著性差异(P＜0.01).PIP表达与乳腺癌病理类型、临床分期、ER、PR状态不相关(P＞0.05).结论:PIP mRNA作为乳腺组织特异性标志物可能成为检测乳腺癌微小转移的指标.     

类固醇硫酸酯酶在乳腺癌和正常乳腺组织中的表达及其意义

目的:探讨类固醇硫酸酯酶(steroid sulfatase,STS)蛋白及其mRNA在乳腺癌组织及相对应的正常乳腺组织中的表达,以及与临床病理特征之间的关系.方法:分别应用免疫组织化学SP法和RT-PCR法检测40例乳腺癌患者乳腺癌组织及其对应的癌旁正常乳腺组织中STS蛋白和mRNA的表达水平,并进行比较,同时分析STS蛋白表达与临床病理特征之间的关系.结果: STS蛋白主要表达于乳腺癌细胞和正常乳腺组织上皮细胞的细胞质内,有3例患者乳腺癌细胞的细胞核中可见STS蛋白的表达,乳腺间质组织未见STS蛋白表达.乳腺癌组织及正常乳腺组织中STS蛋白的表达水平与其mRNA的表达水平均呈正相关.乳腺癌组织中STS蛋白的阳性表达率(70.0%)明显高于其对应的正常乳腺组织(42.5%),差异有统计学意义(P=0.013).分层分析显示,绝经前、淋巴结转移和病理分期较晚的乳腺癌患者,其乳腺癌组织中STS蛋白的阳性表达率明显高于其对应的正常乳腺组织(P<0.05).结论:乳腺癌组织可能通过高表达STS以促进自身合成雌激素,提高肿瘤局部的雌激素水平,从而促进肿瘤的生长和转移.同时,随着肿瘤的生长,肿瘤局部合成的雌激素在肿瘤生长中的作用可能越来越重要.     

BRCA1基因甲基化及甲硫氨酸合成酶与乳腺癌发病的关系

背景与目的:启动子异常甲基化是肿瘤发生的早期事件,肿瘤组织中存在的DNA甲基化异常可以概括为广泛低甲基化伴局部高甲基化.甲硫氨酸合成酶(methionine synthase,MS)是参与甲基供体生成的关键酶,为DNA的甲基化提供甲基.本研究探讨抑癌基因BRCA1 mRNA在乳腺癌组织中的表达及启动子区甲基化状态,及MS基因mRNA表达与BRCA1基因甲基化的关系.方法:应用RT-PCR及甲基化特异性PCR(methylationspecific PCR,MSP)技术检测乳腺癌组织、相应癌旁组织(距癌>3 cm)和乳腺良性病变组织中BRCA1 mRNA的表达及其启动子甲基化状态,并检测MS mRNA的表达水平.结果:乳腺癌组织、癌旁组织及良性病变组织BRCA1mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05);乳腺癌组织中BRCA1基因启动子区甲基化检出率明显高于癌旁组织和良性病变组织(χ2=7.631,P<0.05),BRCA1基因启动子区甲基化与散发性乳腺癌组织学分级、雌激素受体(estrogen receptor,ER)相关(P<0.05).乳腺癌组织MS基因表达量明显低于乳腺良性病变及乳腺癌旁组织(P<0.05).MS mRNA的表达与BRCA1基因甲基化的发生有相关性(r=0.419,P<0.05).结论:BRCA1甲基化能够增加乳腺癌的患病风险,MS基因可能通过影响部分肿瘤相关基因发生甲基化而调控其表达.     

乳腺癌组织中PDK4的表达及其与预后的关系

 目的 探讨影响乳腺癌组织中PDK4的表达与预后的相关性。方法 PubMed数据库The Gene Expression Omnibus（GEO, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/）分析PDK4在正常乳腺及乳腺癌组织中的表达水平。使用The Kaplan–Meier plotter（www.kmplot.com）分析工具评估PDK4表达水平与乳腺癌临床预后的相关性。TGF-β细胞因子处理MCF-7细胞系,Real-time PCR技术检测经处理后MCF-7细胞系中PDK4 mRNA表达水平。siRNA干扰技术降低细胞内PDK4的表达水平,Transwell检测MCF-7细胞的侵袭能力。结果 PDK4在乳腺癌组织中的表达水平低于正常乳腺组织,并且PDK4低表达与乳腺癌预后差呈正相关;在乳腺癌细胞系中,TGF-β降低PDK4 mRNA表达水平,且PDK4的低表达增强了MCF-7细胞的侵袭能力。结论 PDK4低表达是乳腺癌预后差的一个重要指标。     

乳腺癌中Livin的表达与癌细胞凋亡相关性的研究

目的:探讨凋亡抑制基因Livin在乳腺癌组织中的表达与细胞凋亡的关系.方法: 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测乳腺癌组织中Livin mRNA的表达,并用western blot分析Livin蛋白的表达.应用流式细胞术检测乳腺癌细胞的凋亡水平.结果: 40例乳腺癌组织中有26例Livin表达,阳性率为 65.00%,而13例癌旁正常乳腺组织中Livin低表达,阳性率为15.39%(P<0.01).40例乳腺癌组织中,26例乳腺癌组织Livin表达阳性者,肿瘤细胞早期细胞凋亡率为(4.27±0.72)%;14例Livin表达阴性者,肿瘤细胞早期细胞凋亡率为(4.56±0.76)%,两者比较差异有显著性(P<0.05).结论: Livin在乳腺癌组织中的异常表达与乳腺癌细胞凋亡有关,有望成为乳腺癌基因治疗的新靶点.