大鼠局灶性脑缺血神经细胞凋亡与坏死的研究

用凝胶电泳及原位末端标记研究大鼠脑缺血再灌流后神经元的凋亡与坏死。采用可逆性大脑中动脉阻塞２ 小时,再灌流０．５～４８ 小时,造成脑缺血再灌流模型（３０ 只）,用ＨＥ、原位末端标记（ＴＵＮＥＬ）和琼脂糖凝胶电泳观察神经元的改变。结果：缺血损伤区位于视前区、纹状体和皮质,再灌流０．５ 小时,视前区的缺血损伤区有较多的凋亡细胞,而皮质、纹状体仅有散在的凋亡细胞。再灌流３～６小时,凋亡细胞数量增多,并可见坏死细胞,１２小时达高峰,持续到２４ 小时,并可见凋亡细胞各种形态,凋亡细胞主要位于缺血损伤区内界,坏死细胞也增多。４８小时完全坏死区周围有成群的凋亡细胞。电泳显示涂片状背景上有明显的ＤＮＡ带。细胞凋亡参与缺血再灌流所致的神经元损伤,凋亡细胞与坏死细胞并存,细胞凋亡使梗塞区面积扩大。     

脑缺血后细胞凋亡与PARP的关系

目的 观察多聚ADP—核糖聚合酶(PARP)在脑缺血再灌流损伤中的表达，探讨PARP在细胞凋亡中的作用。方法 应用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞再灌流模型(MCAO)。用原位TUNEL和原位杂交技术探求脑缺血后PARP与细胞凋亡的变化关系。结果 缺血再灌流组凋亡细胞主要位于皮质和纹状体的缺血周围区，至24h达高峰。PARP的表达在皮质于脑缺血再灌流6h达高峰，在纹状体于再灌流后2h已达高峰。结论 PARP的mRNA表达发生在细胞凋亡之前，表明PARP促进缺血性脑损伤后神经细胞凋亡。     

脑缺血后海马CA1区细胞凋亡现象的观察

观察大鼠完全性前脑缺血再灌注损伤过程中海马ＣＡ１区神经元死亡的另一种形式－细胞凋亡。采用琼酯糖凝胶电泳及原位缺口翻译法，观察海马ＣＡ１区神经元是否有凋亡特征性改变。结果；脑缺血损伤后５ｄ，从海马ＣＡ１区神经元提取ＤＮＡ，其琼酯糖凝胶电泳呈现典型梯状结构。而采用原位缺口翻译法，发现缺血损伤后３ｄ，海马ＣＡ１区开始出现胞核染色体阳性的凋亡细胞，缺血损伤后５ｄ，凋亡细胞达到高峰。结论：海马ＣＡ１区尽管     

可逆性大脑中动脉阻塞时神经元凋亡与坏死的形态学特点

目的;观察可逆性大脑中动脉阻塞时神经元凋亡与坏死的形态学特点及其发生过程,探讨缺血性神经元损伤的病理机制。方法 阻塞大鼠大脑中动脉２小时,再灌流０．５￣４８小时制成局灶性脑缺血模型,ＨＥ和ＴＵＮＥＬ染色观察凋亡细胞和坏死细胞形态,图象分析并计数。结果：ＨＥ染色可见凋亡细胞有四种形态;核固缩深染细胞大而肿胀或胞质无明显异常的凋亡细胞,细胞核裂解但胞膜完整的凋亡细胞,凋亡小体,出现于再灌注３小时;再灌     

大鼠局灶性脑缺血后再灌流时神经元的改变与巨噬细胞应答

取ＳＤ大鼠２９只，制成大鼠局灶性脑缺血模型，观察再灌流０．５～４８小时时神经元的改变与巨噬细胞应答，并探讨两者间的相互关系。结果：再灌流３小时内，神经元主要表现为收缩或肿胀；再灌流６小时组，有散在的红神经元及鬼影细胞；再灌流４８小时组，缺血半影区有大量的凋亡细胞及凋亡小体。凝集素ＧＳＩ－Ｂ４标记巨噬细胞表明，１２小时时出现小胶质细胞活化及来自脑膜的巨噬细胞，２４小时时出现脑实质内血单核细胞浸润；４８小时时脑内巨噬细胞在缺血半影区大量聚集。上述结果表明：①脑缺血后阻止细胞凋亡和减少脑梗塞体积对脑梗塞患者有极重要的意义；②不可逆的神经元损伤早于小胶质细胞活化，来自脑膜的巨噬细胞早于脑实质血单核细胞浸润。该研究结果也为脑梗塞最佳药物治疗时间的选择提供了参考资料。     

大鼠小脑缺血再灌注损伤的细胞凋亡航尼莫通的保护作用

目的：探讨小脑缺血再灌注损伤神经元的死亡方式及尼莫通的保护作用。方法：将实验用ＳＤ大鼠１５只分为三组，即缺血再灌组、药护组、正常对照组。采用四血管闭塞法制作全脑缺血再灌注动物模型，再灌后４８小时取小脑，石蜡包埋切片。应用末端转移酶介导的缺口末端标记法原位检测凋亡细胞。药护组缺血前３０分钟腹腔注射尼莫通。结果：在小脑皮质及小脑核均见反应阳性的凋亡细胞，药护组的凋亡细胞数显著少于缺血组。结论：细胞凋亡     

全身亚低温对脑缺血再灌流损伤神经细胞凋亡及Caspase-3的影响

目的 探讨亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌流后神经细胞凋亡及Caspase-3基因表达的影响。方法 应用原位末端标记(TUNEL)和原位杂交技术分别观察亚低温组、常温组脑缺血再灌流不同时间点神经细胞凋亡的变化及Caspase-3 mRNA的表达。结果 (1)常温组脑缺血再灌流后凋亡神经细胞主要分布于缺血周围区，随着再灌流时间的延长凋亡细胞数逐渐增加，至24小时达高峰，2天后开始下降，14天时仍高于假手术组；(2)亚低温组脑缺血再灌流后，凋亡神经细胞也主要位于缺血周围区，数量相对较少，其变化规律与常温组相似，同一时间点相比较，亚低温组均显著低于常温组；(3)常温组脑缺血再灌流2小时后，神经细胞Caspase-3 mRNA开始表达，并随着再灌流时间的延长而增强，24小时达高峰，2天后逐渐下降，至14天略高于假手术组；(4)亚低温组脑缺血再灌流后，神经细胞Caspase-3 mRNA的表达也主要位于缺血周围区，其变化规律与常温组相似，同一时间点相比较，亚低温组均显著低于常温组。结论 脑缺血再灌流后。缺血周围区神经细胞的凋亡是一个动态的渐进过程，Caspase-3基因在介导脑缺血损伤神经元凋亡过程中起关键作用。亚低温对短暂性脑缺血后的神经元凋亡有明显的抑制作用，亚低温可能通过Caspase-3 mRNA途径抵抗脑缺血损伤。     

大鼠局灶性脑缺血后再灌流时神经元的改变与巨噬细胞 …

取ＳＤ大鼠２９只，制成大鼠局灶作脑缺血模型，观察再灌流０．５～４８小时时神经元的改变与巨噬细胞应答，并探讨两者间的相互关系，结果，再灌注３小时，神经元主要表现为收缩或肿胀，再灌流６小时组，有散在的神经元及鬼影细胞，再灌注４８小时组在钙离子致缺血半影区有大量的凋亡细胞及凋亡小体，凝集素ＧＳＩ－Ｂ４标记巨噬细胞表明１２小时时出现小胶质细胞活化及来自脑膜的巨噬细胞，２４小时的出现脑实质内血单核细胞浸润４     

藻蓝蛋白对大鼠脑缺血再灌流后神经元损伤的保护作用

目的　探讨大鼠脑缺血再灌流后神经元损伤的机制以及藻蓝蛋白对神经元的保护作用。方法　用线栓法制作大鼠左侧大脑中动脉阻塞再灌流模型 (MCAO) ,分别对假手术组、模型对照组、藻蓝蛋白组进行神经功能缺失评分 ,用TTC染色法测量脑梗死体积 ,用干湿重法计算脑的含水量 ,应用原位末端标记 (TUNEL)观察脑缺血再灌流不同时间点神经元凋亡的变化。结果　 (1)在大鼠脑缺血再灌流后 2小时应用藻蓝蛋白 ,能够明显改善神经功能缺失症状 ,脑缺血再灌流后 2 4小时 ,藻蓝蛋白组的Bederson神经功能评分与模型对照组间差别有显著性意义 (P <0 0 5 ) ,且这种差异一直持续到脑缺血再灌流后 4 8小时。藻蓝蛋白还能够缩小脑梗死的体积 ,脑缺血再灌流后 4 8小时 ,藻蓝蛋白组的脑梗死体积与模型对照组间差别有显著性意义 (P <0 0 5 )。藻蓝蛋白还能够减轻脑水肿 ,使脑组织的含水量明显减少。 (2 )模型对照组 ,脑缺血再灌流后凋亡神经元主要分布于缺血周围区 ,随着再灌流时间的延长 ,凋亡细胞数逐渐增加 ,至 2 4小时达高峰 ,2天开始下降 ,14天时与假手术组间差别仍有显著性意义 (P <0 0 5 )。藻蓝蛋白组凋亡细胞的数量相对较少 ,其变化规律与模型对照组相似 ,同一时间点相比较 ,藻蓝蛋白组与模型对照组间差别有显著性意义     

预缺血处理对家兔全脑缺血保护效应的实验研究(摘要)

为探讨预缺血处理脑保护效应,以及神经细胞凋亡与缺血性脑损害的关系．用家兔１５只,随机分为３组,对照组（Ａ,ｎ＝５）,缺血组（Ｂ,ｎ＝５）,预缺血处理组（Ｃ,ｎ＝５）．Ａ组只作手术操作;Ｂ组采用二血管夹闭（双侧颈总动脉夹闭,ＭＡＰ＜４０ｍｍＨｇ）全脑缺血１０ｍｉｎ;Ｃ组在缺血前增加预缺血处理２ｍｉｎ,再灌注半小时．对比观察缺血后３ｄ海马ＣＡ１区神经元密度和缺血细胞数变化,同时使用ＴＵＮＥＬ原位标记法,检测缺血３ｄ后海马区的凋亡细胞．结果：（１）Ｃ组神经元密度与Ａ组相比差异无显著性（Ｐ＞００５）,…     

大鼠海马缺血再灌注损伤的细胞凋亡电镜及尼莫通的保护作用

目的：探讨海马缺血再灌注损伤神经元的死亡方式及尼莫通的保护作用。方法：将实验用SD大鼠15只分为三组，即缺血再灌组、药护组、正常对照组。采用四血管闭塞法制作全脑缺血再灌注动物模型，再灌后48小时取海马，石蜡包埋切片。应用末端转移酶介导的缺口末端标记法原位检测凋亡细胞。药护组缺血前30分钟腹腔注射尼莫通。结果：在海马CA1、CA4区锥体细胞层可见反应阳性的凋亡细胞，药护组的凋亡细胞数显著少于缺血组。结论：钿胞调亡是迟发性神经元损伤的主要形式，尼莫通能抑制细胞凋亡，对海马缺血再灌注损伤有显著性保护作用。     

缺氧缺血大鼠脑细胞凋亡的研究

目的探讨脑细胞凋亡在缺氧缺血脑病（ＨＩＥ）发病机理中的作用。方法用ＨＥ染色、电镜、原位末端标记（Ｔｕｎｅｌ）手段,分别对缺氧３小时后缺血１、４、１８、２４、４０及７２小时和７天组大鼠的脑组织中凋亡细胞的形态、出现时间及密度进行观察和比较。结果光、电镜下显示实验侧脑皮质、海马及丘脑神经元皱缩、染色质凝集并出现凋亡小体;Ｔｕｎｅｌ方法证实有裂解ＤＮＡ存在;缺氧缺血后１８小时皮质凋亡最明显。结论在ＨＩＥ大鼠,脑细胞凋亡出现不但早于坏死,而且与坏死存在着诱导剂量相关性     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑缺血半影区的界定

①目的 界定大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑缺血半影区的范围。②方法 应用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型，氯化三苯基四氮唑(TTC)染色、甲苯胺蓝染色、焦油紫染色和苏木精-伊红染色界定脑缺血半影区和中心区。③结果 脑缺血再灌注2h，缺血病灶位于纹状体外侧区和额顶叶皮质下部，随着缺血再灌注时间的延长病灶范围逐渐扩大；再灌注1～2d最大，波及纹状体内侧区和额顶叶皮质上部以及梨状区皮质，之后逐渐缩小；再灌注7～14d恢复到再灌流2h的水平。缺血病灶与周围正常脑组织之间有一形态和结构过渡区，该区的着色和细胞形态结构界于病灶和正常脑组织之间，即缺血半影区。缺血中心区神经细胞明显减少，呈现坏死特征；缺血半影区细胞主要呈现核固缩、染色质凝聚等凋亡特征。④结论 脑缺血再灌注缺血中心区位于纹状体外侧区和额顶叶皮质下部，缺血半影区位于纹状体内侧区和额顶叶皮质上部以及梨状区皮质。     

大鼠前脑缺血神经元损伤

目的 :观察脑缺血再灌流后海马、纹状体、皮层细胞损伤情况。方法 :夹闭wister大鼠双侧颈总动脉制造脑缺血模型 ,应用TUNEL染色。结果 :短暂性脑缺血不同时间脑细胞发生坏死及凋亡 ,海马最明显 ,神经元坏死从第二天后不再增加。结论 :脑缺血可致神经元坏死和凋亡 ,不同神经元耐受缺氧能力差异很大。     

大鼠前脑缺血神经元损伤

目的：观察脑缺血再灌流后海马、纹状体、皮层细胞损伤情况。方法：夹闭wister大鼠双侧颈总动脉制造脑缺血模型，应用TUNEL染色。结果：短暂性脑缺血不同时间脑细胞发生坏死及凋亡，海马最明显，神经元坏死从第二天后不再增加。结论：脑缺血可致神经元坏死和凋亡，不同神经元耐受缺氧能力差异很大。     

脑缺血再灌流后p53基因表达与细胞凋亡间的关系

用原位杂交、免疫组化及原位末端标记(TUNEL)的方法观察大鼠大脑中动脉闭塞2h后再通0～72h脑组织p53基因的表达与凋亡细胞的分布.结果发现缺血2h及再灌流1h即可见p53mRNA及其蛋白的表达和凋亡细胞,p53mRNA及其蛋白的表达高峰在缺血再灌流后24h,凋亡细胞数高峰在再灌流24h～48h.提示脑缺血再灌流后诱导p53mRNA及其蛋白的表达和细胞凋亡.     

大鼠前脑缺血再灌注不同时间神经元损伤情况

目的：观察前脑缺血再灌注后海马，纹状体，皮层神经元损伤情况。方法：夹闭Wistar大鼠双侧颈总动脉5min制造脑缺血再灌注模型，应用电镜，Tunel染色观察前脑神经元损伤情况。结果：短暂性脑缺血再灌注第2d，纹状体和皮层神经元坏死，凋亡情况较明显，第4d，海马神经元坏死轻微，凋亡情况最明显，神经元凋亡形态学典型表现持续时间较短，呈色深浅不一。第2d后坏死神经元数量不再增加。结论：脑缺血可致神经元坏死和凋亡，凋亡持续时间较短，以后细胞的形态改变与坏死近似，不同神经元耐受缺氧能力差异很大。     

大鼠脑缺血再灌流时脑组织病理改变的特点

目的 :观察大鼠脑缺血再灌流时 ,脑组织病理改变的特点和时程。方法 :采用改良的大鼠脑缺血再灌流模型 ,阻塞大脑中动脉 2小时 ,再灌流 0 5～ 48小时 ,TTC和HE染色观察缺血部位、面积 ,神经元渐进性改变的特点。结果 :再灌流 0 5小时有灶性缺血区 ,2 4小时缺血性损伤面积最大 ;6小时内神经元主要为急性期改变即神经元肿胀和浓缩 ;后出现神经元不可逆变性 ,2 4小时形成梗塞区。结论 :本研究结果表明缺血性神经元损伤不仅与缺血的时间、程度且与再灌流时间有关 ,缺血再灌流时神经元经历了可逆变性、不可逆变性和梗塞区形成的变化过程。因此本结果为脑梗塞治疗时间窗的选择提供了参考资料。     

细胞凋亡在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中的作用

目的：研究细胞凋亡在新生儿缺氧缺血性脑损伤（ＨＩＢＤ）中的作用。方法：结扎新生７ｄ龄大鼠左颈总动脉后吸８％浓度氧２ｈ制成ＨＩＢＤ模型,应用苏木素－伊红（ＨＥ）染色、原位缺口末端标记（ＴＵＮＥＬ）、ＤＮＡ电泳分析综合研究新生大鼠ＨＩＢＤ后脑细胞的死亡形式。结果：缺氧缺血（ＨＩ）后０ｈＨＥ染色即发现左侧纹状体有一些神经元呈凋亡早期的改变;ＨＩ后１８ｈＴＵＮＥＬ染色在左脑皮质及纹状体见到阳性凋亡细胞;ＨＩ后２ｄＤＮＡ电泳见到ＤＮＡ梯形带;ＨＩ后２～３ｄ凋亡达高峰;持续至少２１ｄ。结论：３种方法均表明细胞凋亡为ＨＩＢＤ后神经元的主要死亡形式,也是加重脑损伤的一个因素。     

碱性成纤维细胞生长因子抗局灶性脑缺血/再灌注引发神经细胞凋亡作用的实验研究

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）抗局灶性脑缺血／再灌注引发神经元凋亡作用。方法 采用线栓法制备大脑中动脉缺血／再灌注模型。术后首次即刻分别腹腔注射ｂＦＧＦ和生理盐水，以后每天一次，连用７天。ＴＵＮＥＬ法原位检测缺血后第１、２、３、５、７天脑石蜡切片含ＤＮＡ碎片的凋亡细胞。结果 正常组、假手术组、缺血组对侧半球每张切片有０～８个凋亡细胞，缺血／再灌注后缺血区凋亡细胞明显增多，缺血４８ｈ达