人源新基因hGlyrichin的克隆及其功能的初步研究

目的：克隆获得与mL52新基因（GenBank：AY028425）同源人类新基因hGlyrichin，并研究其功能。方法：采用PCR法从人胎肝cDNA文库中扩增出该新基因，因富含甘氨酸而命名为hGlyrichin，以RT—PCR和Northem杂交分析在多种细胞株中的表达及转录本大小，并对该基因进行生物信息学分析，利用pE他2b表达载体构建重组质粒pET22b-hGlyrichin，转化大肠杆菌BL-21（DE3）中进行IPTG诱导表达。结果与结论：电子PCR证实该基因定位于人染色体20q11．22，包含3个外显子和2个内含子。Northern杂交结果显示为单一转录本，大小约600bp，与mL52全长cDNA长度相符。所编码的蛋白为含有疏水区的小分子阳离子蛋白，相对分子质量和等电点分别为8182．83和9．58，二级结构（Garnier-Robson模型）预测是以B折叠型为主，这些特点与目前已知的大多数阳离子抗菌肽的结构及部分理化特性极为类似，该基因转化后的大肠杆菌在IPTG诱导表达时的生长受到明显抑制，初步证实了hGlyrichin具有明显的抗菌活性。     

人细小病毒B19感染与死胎关系的初步研究

人细小病毒Ｂ１９是动物病毒中体积最小、结构最简单的一种单链线状ＤＮＡ病毒，是引起非免疫性胎儿水肿和死胎的重要病原。国外研究已有１０年，国内研究则刚刚起步。作者收集了２３例不明原因死胎组织进行Ｂ１９ＤＮＡ检测，并取同期人工流产胎组织４０例作对照。旨在探...     

人格拉利素新抗菌肽的抗菌作用研究

目的:进一步证实人格拉利素(hGlyrichin)抗菌肽的抗菌功能.方法:根据人格拉利素的氨基酸序列,设计并合成了19个氨基酸长度的多肽(pCM-19),采用试管法和菌落生成法分析该肽对靶细菌生长的影响.结果与结论:pCM-19溶液与不同靶细菌共孵育后,明显抑制了细菌的生长,对实验室常用的BL-21工程菌和多种致病菌(包括杆菌、球菌)的生长都有抑制作用.更为有趣的是对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的生长有明显抑制作用,显示了其在抗耐药菌感染中的良好前景.     

人源性肿瘤组织异种移植模型的研究进展

人源性肿瘤组织异种移植（patient derived tumor xenografts,PDTX）是指将患者的新鲜肿瘤组织处理后移植到免疫缺陷鼠上,依靠小鼠提供的微环境进行生长,其特点和价值不同于人源性肿瘤细胞系异种移植模型。PDTX模型保持了肿瘤细胞的分化程度、形态特征、结构特点以及分子特性。这种小鼠模型肿瘤的血运特点、基质特征、坏死状况等与人本身的肿瘤特点更为接近,这为肿瘤的生物学研究、诊断标志物的寻找和药物筛选提供了一个重要的体内模型。此外,根据移植部位的不同,PDTX模型能够体现标本来源患者肿瘤的各自特点,包括对药物反应的特异性等。因此,这种模拟人肿瘤特异性的模型对肿瘤临床前期评估、治疗和预后具有重要的转化意义,特别是对于肿瘤的个体化诊断和治疗具有不可代替的价值。     

新型人阳离子抗菌蛋白18的构建及其表达

目的：构建新型人阳离子抗菌蛋白18（NHCAP18）的氨基酸序列,合成其编码基因并在原核细胞表达.方法：设计NHCAP18氨基酸序列,经生物信息学分析后,合成其编码基因,将该基因插入表达载体pGEX-4T-1,尔后在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导表达.结果：NHCAP18经生物信息学分析符合改造要求,构建的重组表达质粒pGEX-4T-1/ NHCAP18在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导4 h表达量约占菌体总蛋白量的39%,NHCAP18经谷胱甘肽-Sepharose 4B亲合层析纯化后对大肠杆菌有杀灭作用.结论：NHCAP18的成功改造,重组蛋白pGEX-4T-1/HCAP18在大肠杆菌BL21中高效表达及纯化,为研究NHCAP18功能打下了良好的基础.     

人细小病毒B19感染与死胎关系的初步研究

人细小病毒Ｂ１９是动物病毒中体积最小、结构最简单的一种单链线状ＤＮＡ病毒，是引起非免疫性胎儿水肿和死胎的重要病源。国外研究已有１０年，国内研究则刚刚起步。作者收集了２３例不明原因死胎组织进行Ｂ１９ＤＮＡ检测，并取同期人工流产胎组织４０例作对照。旨在探...     

人源性胰腺肿瘤异种移植模型建立与临床意义

目的评估影响建立胰腺癌人源性肿瘤异种移植(PDX)模型的临床病理因素,并初步进行药敏实验。方法选取2018年1—12月在海军军医大学附属长海医院胰腺肝胆外科就诊的胰腺导管腺癌患者,将手术获取的肿瘤组织移植至NSG小鼠(NOD-SCID)侧腹部皮下,建立PDX模型。单变量和多变量分析寻找可影响PDX成瘤的临床和病理因素。评估移植肿瘤生长速度与原发肿瘤的相关性,并进行组织学比较。药敏实验方案包括吉西他滨、替吉奥、丝裂霉素、GS方案、FOLFIRINOX方案和GP方案等。结果本研究共纳入101例胰腺导管腺癌患者,PDX模型建立成功74例,成功率73.3%(74/101);74例PDX模型平均成瘤时间(100.5±44.8) d。在多变量分析中,T分期是唯一可影响PDX模型建立成功与否的独立危险因素(P=0.030)。PDX生长与原发肿瘤大小存在相关性,并能较好的保持原发肿瘤的病理形态特征。36例PDX模型的药敏结果为:吉西他滨10例,替吉奥11例,丝裂霉素3例,GS方案14例,FOLFIRINOX方案14例和GP方案16例。结论胰腺癌PDX模型成瘤率高,并较好保持了原发肿瘤的生物学特性和病理特征,可作为胰腺癌个体化治疗的参考模型。     

胶质源性神经营养因子在人外周血白细胞中的表达

胶质源性神经营养因子 (ＧＤＮＦ)因最初在大鼠胶质细胞系Ｂ49细胞中发现而得名。ＧＤＮＦ显著的生物学功能是能促进多种神经元细胞的生长和分化 ,包括多巴胺能神经元、外周自主性神经元亚群和感觉神经元 ,中枢神经系统的运动神经元 ,去甲肾上腺素能神经元等。ＧＤＮＦ的组织分布比较广泛 ,在发育个体的脑组织包括海马、脑皮层和中脑及外周组织的皮肤、肾脏、胃、精囊、骨骼肌、卵巢、肺、肾上腺有一定程度的表达 ,在心脏、脾、胸腺、甲状腺、垂体和唾液腺检测到极低水平的ＧＤＮＦｍＲＮＡ。成年动物中 ,ＧＤＮＦ在小肠中的表达水平上升 ,…     

新型人源化抗CD20单克隆抗体的表达和活性检测

目的：制备新型人源化抗CD20单克隆抗体并检测其与CD20抗原的亲和力和抗肿瘤活性。方法通过计算机模建技术,在蛋白质结构数据库中找到与利妥昔单抗（ rituximab）空间结构最相近的人IgG1为骨架,将利妥昔单抗的互补决定区（ complementarity determining region ,CDR）进行移植和改造,通过重叠PCR方法,扩增出目的基因片段。分别将轻链（L）、重链（H）基因片段克隆到载体pcDNA3．3、pOptiVEC质粒上。瞬时转染至293F细胞,收取细胞上清,用rProteinA亲和层析法纯化目的抗体,并用十二烷基硫酸钠（SDS）-聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）检验抗体的纯度和表达量,采用Fortebio技术检测抗体与抗原的结合能力,最后通过裸鼠移植瘤生长抑制实验检测抗体的抗肿瘤活性。结果构建了3种抗CD20人源化抗体。抗体在还原SDS-PAGE中表现为两条相对分子质量约为25×103和55×103的条带,与预计条带大小相符;Fortebio实验结果表明,3组抗体与抗原具有良好的亲和活性：利妥昔单抗、L4H7抗体、L5H5抗体和L5H7抗体的Kd值分别为6．48×10－9、1．91×10－9、7．35×10－10和1．91×10－9 mol／L。裸鼠移植瘤生长抑制实验表明,L5H7抗体的抗肿瘤活性优于利妥昔单抗。结论成功构建并表达了3种抗CD20人源化抗体,其中L5H7抗体具有良好的抗原结合能力和抗肿瘤活性。     

椎间盘源性疼痛的机制及其治疗进展

椎间盘源性疼痛的机制及其治疗是近年来的研究热点之一.研究表明疼痛的发生涉及到椎间盘变性、神经纤维的异常增殖、生物化学因素,甚至包括生理、情绪以及遗传因素的影响;有关椎间盘源性疼痛的治疗,除了保守治疗及传统的外科手术外,各种经皮微创介入技术因其操作简单,创伤小,并发症少,术后恢复期短等优势,已在临床上广泛应用.此外,各种新型的治疗方法目前也逐渐发展起来,但是其临床疗效尚需进一步的研究加以证实.     

格拉利素抗菌肽家系的发现及部分功能验证

目的:继发现人源性新抗菌肽基因并进行功能验证后,进一步发现高度同源蛋白质家系并进行功能验证.方法:利用生物信息学分析手段对该蛋白家系各成员进行系统分析,人工合成具有代表性的不同肽段,采用比浊法和菌落计数法测定人工合成肽段的抗菌活性.结果及结论:发现了富含甘氨酸并且序列高度同源的抗菌肽家系,命名为格拉利素(Glyrichin),目前含有来自不同生物的29个成员,所有成员均无相关功能研究报道;根据多序列比对结果所合成的、代表家系中9个成员的4条多肽均有不同程度的抗菌作用.上述生物信息学分析和实验研究结果强烈提示了新抗菌肽家系的存在,其中跨越哺乳动物的抗菌肽家系的存在已得到充分证实.     

用新方法进行大黄对308株临床菌株抗菌活性研究

方法：采用新的中药抗菌实验方法，对大黄进行了308株临床菌株的体外抗菌活性研究。结果：表明大黄对112株金葡菌的MIC50为1．5mg／ml，MIC50为6mg／ml，对112株表皮葡萄球菌的MIC50和MIC50均为3mg／ml，对28株肠球菌的MIC50为3mg/ml，MIC90为6mg／ml时，大黄对28株肺炎克雷伯杆菌和28株大肠杆菌几乎无抑菌作用。     

新型纳米银基抗感染敷料的研制及生物学效应评价

目的 研制具有优良抗菌性能的纳米银抗感染敷料,探索其组成对抗菌活性及创面愈合的调控作用.方法 利用化学交联和冷冻干燥技术制备葡聚糖修饰纳米银(DAgNPs)/壳聚糖-明胶(SCG)抗感染敷料,体外评价其对革兰阴性大肠杆菌(E.coli和革兰阳性金黄色葡萄球菌(S.aureus)的抑制作用,体内用SD大鼠全层创伤感染模型进行临床预先研究.在伤口愈合的过程中采用SCG创伤敷料并且进行伤口愈合的观察、血流灌注和组织学染色分析.结果SCG敷料的孔隙率高达87％.与CG敷料相比,SCG敷料能更加明显地抑制E.coli和S.aureus的活性.与商用敷料和纱布相比,SCG敷料可显著减少伤口感染,促进表皮和真皮的再生.此外,DAgNPs还能缩短创面愈合时间.结论SCG敷料在感染性伤口愈合中具有潜在的应用前景.     

应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱研究细菌性血流感染的血清多肽指纹图谱

目的 应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱系统(MALDI-TOF MS)分析金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌引起的血流感染血清多肽指纹图谱,寻找差异多肽峰并建立相应的诊断模型.方法 建立ICR小鼠金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌血流感染模型,收集血清标本,经弱阳离子交换磁珠纯化,MALDI-TOF MS检测及BioExplorer生物软件分析研究金葡菌感染组与正常对照组、大肠埃希菌感染组与正常对照组间血清多肽指纹图谱.结果 比较金葡菌感染组与正常对照组发现,表达上调的多肽有6个,表达下调的多肽有7个,表达呈先上调后下调的多肽有8个.比较大肠埃希感染组与正常对照组发现,表达下调的多肽有5个,表达呈先下调后上调的多肽有4个,表达呈先上调后下调的多肽有8个.结论 利用MALDI-TOF MS技术和BioExplorer软件研究大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌血流感染的血清多肽,可以发现感染组与正常对照组间的差异多肽并有效地建立这两种细菌感染的诊断模型,对于细菌性血流感染的诊断具有一定的价值.     

低剂量放疗治疗8例重型/危重型新冠肺炎的初步临床观察

目的 探讨全肺低剂量放疗(LDRT)治疗重型/危重型新型冠状病毒(COVID-19)肺炎的疗效和不良反应。方法 本研究为单臂Ⅰ期临床研究,对2023年1月至6月南通大学附属江阴医院收治的经内科治疗后病情恶化或无改善的8例重型/危重型新型COVID-19肺炎患者行全肺LDRT。患者取仰卧或俯卧位,前后对穿照射,剂量权重为1∶1,全肺LDRT剂量0.5~1.5 Gy。分析患者放疗前后氧合状况、炎症指标和影像学变化,观察患者急性放射性不良反应。结果 LDRT后1周,7例(87.5%)患者的SaO₂/FiO₂或PaO₂/FiO₂指标上升,7例(87.5%)患者C反应蛋白(CRP)、白介素6(IL-6)等炎性指标下降,胸部CT/胸片扫描显示5例(62.5%)肺部炎症受累范围显著减少。未观察到明显急性放射性不良反应。结论 对内科治疗效果欠佳的重型/危重型新型COVID-19肺炎患者进行全肺0.5~1.5 Gy剂量的LDRT治疗,有助于降低炎症指标,改善临床症状,促进炎症吸收且无明显急性不良反应。     

血浆脑利钠肽在快速鉴别诊断心源性和肺源性呼吸困难中的价值

目的 评价血浆脑利钠肽(BNP)水平在心源性和肺源性呼吸困难时鉴别诊断的价值.方法 采用美国拜尔公司生产的化学发光检测仪及其BNP试剂,检测248例因呼吸困难住院的肺疾病患者血浆BNP水平,对单纯肺疾病患者、肺疾病并发左心功能不全患者、肺疾病未并发左心功能不伞患者、肺疾病并发右心衰患者各组间BNP水平进行比较.结果 肺疾病并发左心功能不全的呼吸困难患者的BNP水平明显高于未并发左心功能不全的呼吸困难患者(x2=25.597,P<0.001);肺疾病并发右心衰患者BNP水平高于单纯肺疾病患者,但差异没有统计学意义(t=1.614,P0.05);肺疾病并发左心功能不全患者的BNP水平明显高于肺疾病并发右心衰患者(t=2.531,P<0.05);肺疾病并发左心功能不全患者的心功能越差,BNP水平就越高,心功能Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级三组间BNP水平的差别有统计学意义(x2=29.463,P<0.001).结论 血浆BNP是快速鉴别诊断心源性和肺源性呼吸困难的重要实验窜检测指标,同时可判断肺疾病并发左心功能不全患者心衰的严重程度.     

低分子量尿激酶与血纤蛋白粘附肽(12肽)融合表达及特性分析

人工合成血纤蛋白粘附肽（１２肽）ｃＤＮＡ，与低分子量单链尿激酶基因重组，获得血纤蛋白粘附肽与低分子量单链尿激酶的融合基因。将此融合基因重组入ｐＢＶ２２０表达载体并在大肠杆菌中表达，表达产物具有与天然尿激酶相同的抗原性和溶纤活性，同时兼具血纤蛋白粘附肽（１２肽）的抗血纤蛋白单体聚合的活性     

钛表面TiO2纳米管抗菌覆膜药物释放动力学表征及其抗菌活性体外研究

 目的 明确钛表面TiO₂纳米管抗菌覆膜药物释放动力学特征,并通过体外试验测试其抗菌活性。方法 电化学氧化法在钛金属表面构建TiO₂纳米管表层,利用冻干法加载庆大霉素,在磷酸盐缓冲液中进行药物释放动力学研究。选择标准表皮葡萄球菌菌株,分别在负载和未负载药物纳米管及纯钛3种钛表面进行培养,通过观察细菌粘附和活性菌落存活情况进行表面抗菌活性对比研究。结果 NTS-G庆大霉素药物释放可分为两部分:初始突发释放和后期缓慢释放,初始释放浓度为51.50 μg/mL,第6 h为73.13 μg/ml,大多数负载的庆大霉素大约在9 h内释放。经过一个爆发性初始释放后,庆大霉素从纳米管释放呈现一个平台期,释放量几乎保持不变,维持在89.10 μg/ml水平。3种钛表面体外抗菌活性检测发现,TiO₂纳米管抗菌覆膜假体表面死亡细菌菌落显著增加(P<0.05)。结论 钛表面TiO₂纳米管抗菌覆膜为人工关节相关感染预防提供了新途径,骨科植入材料表面纳米管抗生素覆膜具有广泛的应用潜力。