人格拉利素新抗菌肽的抗菌作用研究

目的:进一步证实人格拉利素(hGlyrichin)抗菌肽的抗菌功能.方法:根据人格拉利素的氨基酸序列,设计并合成了19个氨基酸长度的多肽(pCM-19),采用试管法和菌落生成法分析该肽对靶细菌生长的影响.结果与结论:pCM-19溶液与不同靶细菌共孵育后,明显抑制了细菌的生长,对实验室常用的BL-21工程菌和多种致病菌(包括杆菌、球菌)的生长都有抑制作用.更为有趣的是对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的生长有明显抑制作用,显示了其在抗耐药菌感染中的良好前景.     

海马神经元损伤及保护的纳米级三维构像变化研究

目的：观察海马神经元细胞表面形态的三维构像变化，探讨抑制p38 MAPK信号通路对减轻红藻氨酸(KA)毒性作用引起大鼠海马神经元所造成损伤的作用和机制。方法：原代培养海马神经元给予SB203580(0．2μmol／L)预处理，30min后再予不同浓度(0，25和250μmoL／L)红藻氨酸分别作用10min和100min，利用原子力显微镜(AFM)对胞膜表面结构进行纳米级水平扫描和观测。结果：正常海马神经元表面光滑，起伏均匀、规律；红藻氨酸作用后神经元呈损伤性改变，表现为胞体肿胀，胞膜表面粗糙，出现“孔洞”样结构，并且其变化程度分别与作用时间和红藻氨酸浓度呈量-效关系；预先给予SB203580处理，以上变化有所减轻。结论：抑制p38MAPK信号通路，对红藻氨酸诱导海马神经元胞膜的损伤起一定保护作用。     

口腔种植体阳极氧化涂层富水环境下形貌稳定性变化研究

目的 探讨种植体表面无机配方下阳极氧化涂层在富水环境中的稳定性.方法 配制0.5 wt％氢氟酸水溶液作为阳极氧化电解液,在20 V电压的直流电作用下行阳极氧化处理后,再在富水环境浸泡1、3、7 d,分别应用体式显微镜和扫描电子显微镜观察种植体表面涂层的宏观及微观形貌特征改变.结果 种植体表面涂层在富水环境下,表面折光性...     

几种常用金属对大肠埃希菌杀灭作用观察

采用悬液定量浸泡杀菌试验和电镜技术，在实验室进行了常用金属对细菌的杀灭作用及作用机理观察。结果：将不同金属置于含菌悬液内浸泡作用不同时间，金属铜对大肠埃希菌作用30min，平均杀灭率为97％：金属银和金作用30min，平均然灭率分别是35．6％和30．3％；不锈钢，金属铝、铁和锡等对细菌作用很弱。透射电镜观察发现，经金属铜作用30min的大肠埃希菌，其细胞壁出现凹凸不平，局部细胞膜有分离现象，细胞质明显减少甚至消失，细胞核质浓缩呈块状。结论：常用金属中以铜、银对细菌作用明显，作用后的细胞结构有改变，其他常用金属对细菌作用不明显。     

激光共聚焦显微技术在急性肾盂肾炎发生发展中的应用

目的：采用激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)技术观察上行性泌尿感染引起的急性肾盂肾炎中细菌在膀胱肾脏的定殖，探讨疾病发生的机制。方法在雌性小鼠建立荧光标记细菌引起的急性肾盂肾炎感染模型，感染后3 h 收取小鼠膀胱，感染后6 h、24 h 和48 h 分别收集小鼠肾脏，采用细菌涂板检测肾组织细菌含量，利用 CLSM 观察荧光标记细菌的分布情况，并通过 CLSM 进一步研究荧光标记细菌对原代培养的肾小管上皮细胞的作用。结果感染早期细菌主要通过黏附膀胱上皮组织进一步入侵肾脏；感染后6 h 肾脏的细菌负荷最重，随后感染逐渐减轻；通过 CLSM 精确观察到细菌在肾脏皮质的定殖，并定量分析不同时间点肾脏中定殖的细菌数。同时通过 CLSM 观察到在大肠杆菌 J96的作用下肾小管上皮细胞骨架的形态结构。结论成功建立荧光标记细菌感染的急性肾盂肾炎模型，确证细菌定殖于肾小管管腔内，细菌对肾小管上皮细胞间紧密连接蛋白具有破坏作用，为探讨急性肾盂肾炎的发病机制提供更直观的形态学依据。     

电磁脉冲辐照所致下丘脑神经细胞膜穿孔的原子力显微镜研究

目的 :应用原子力显微镜检查术 (atomicforcemicroscopy,AFM)对电磁脉冲辐照前后培养的下丘脑神经细胞膜进行观察 ,以探讨电磁脉冲对其细胞膜影响的直接证据。方法 :对新生的Wistar乳大鼠下丘脑神经细胞在 6孔板中进行原代培养 ,在培养 14d时 ,用高场强电磁脉冲模拟源 (场强为 6× 10 4 V m ,脉冲上升时间 2 0ns,脉宽 30 μs)以 2 .5次 min ,辐照 2min。辐照后即刻固定细胞 ,应用AFM对细胞表面进行接触式连续扫描。结果 :电磁脉冲辐照后即刻就可引起下丘脑神经细胞膜表面大小不一、深度不同、类圆形和不规则形的穿孔 ,穿孔最大直径为 2 73.2 1～330 .10nm ,深度达 13.5 7nm。结论 :电磁脉冲辐照后可直接导致下丘脑神经元细胞膜的穿孔 ,提示其可能是电磁脉冲生物效应的损伤机制之一。     

影响高氧化还原电位酸性水在内镜消毒中的因素

目的：为了解高氧化还原电位酸性水(简称EOW)在胃镜消毒中的杀菌效果及存在的影响因素，进行了临床试用观察。结果显示：对细菌类作用3min后将胃镜表面的细菌全部杀灭，对真菌和枯草杆菌黑色变种芽孢10min全部杀灭，乙肝表面抗原阳性病人用后的胃镜消毒后，16000mlEOW原液在8条胃镜之内未检出乙肝表面抗原阳性。影响因素很多，特别是胃镜表面的有机物应彻底去除，EOW应现制现用，流动EOW消毒效果更佳。     

不同浓度碘作用下Graves病患者甲状腺上皮细胞的原子力显微镜观察

 目的 利用原子力显微镜(atomic force microscopy,AFM)观察并分析不同浓度碘化钠(0、10-3、10-2、10-1、1 μg/ml)作用下Graves病(graves′disease,GD)患者甲状腺上皮细胞膜表面纳米级形态学改变和差异,进而探讨碘在GD发病中的可能机制. 方法 外科手术中取GD患者组织,加入不同浓度的NaI溶液进行体外甲状腺细胞培养,收集各浓度组细胞后利用AFM扫描并分析膜表面相关参数.结果 (1)NaI浓度在0、10-3、10-2 μg/ml时,培养的甲状腺上皮细胞膜表面形态表现为高低不平的山峦样凸起,部分区域相互融合,个别区域凸起呈"屏风状"排列;而在10-1 μg/ml和1μg/ml浓度时,细胞膜表面的凸起明显减少,排列极不规则且呈扁平状,每个扫描范围内表面均较粗糙,个别区域发现空洞和"沟渠状"裂隙.(2)0 μg/ml和10-3 μg/ml浓度组甲状腺细胞膜表面凸起的平均粗糙度、平均峰高度和表面积差值的参数分析比较无统计学意义(P>0.05),而10-2、10-1、1 μg/ml浓度组甲状腺细胞膜表面蛋白的参数分析与0 μg/ml和10-3 μg/ml浓度组相比较差异有统计学意义(P<0.0l或P<0.05).结论 AFM对高浓度碘作用下GD患者甲状腺细胞的观察,其形态学上产生损伤性改变,从纳米级水平揭示了高碘在GD发病机制中具有重要作用.     

人源性抗菌肽hGlyrichin中保守结构域肽段功能验证

目的：抗菌肽中存在的“固有基序”或“保守结构域”可决定其生物学活性,该研究拟验证包含人源性抗菌肽hGlyrichin中保守结构域肽段的生物学活性。方法在前期研究基础上,分别设计合成了hGlyrichin来源且包含其保守结构域的多肽1与多肽2,分别利用菌落计数法及细菌生长曲线对其抗菌活性进行评价。结果上述包含保守结构域的多肽均具备较好抗菌活性,且在保持保守结构域完整的前提下,所合成多肽长度越短,其抗菌活性越强。除可有效抑杀细菌之外,所合成多肽对人红细胞未产生溶血作用。结论 hGlyrichin中同样存在保守结构域,含有此保守结构域的多肽具备良好杀菌活性,且对正常人体细胞无害。     

模拟微重力环境下细菌生物学效应的初步研究

目的 研究模拟微重力环境下细菌的生物学效应.方法 应用回转器处理实验菌株(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌、鼠伤寒沙门氏菌),检测其生长曲线,抗生素敏感性,以及抗生素敏感性变化株与野生株间脂肪酸图谱的差别.结果 模拟微重力条件下,细菌对数期提前、生长曲线形状改变.回转器处理30 d后可检测到大肠杆菌抗生素敏感性突变株,并且突变株的数量与处理时间呈现正相关趋势;鼠伤寒沙门氏菌处理120 d后,检测到氨苄西林和左氧沙星耐受株突变为敏感株;脂肪酸图谱分析显示,突变株与对照株相比脂肪酸的种类和含量存在一定差异.结论 回转器模拟微重力条件下,细菌生物性状受到影响,抗生素敏感性的改变可能与细菌脂肪酸图谱的变化有关.     

KDR启动子驱动双自杀基因诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨KDR启动子驱动双自杀基因体系对胃癌细胞凋亡的诱导作用。方法以重组腺病毒AdEasy-KDR-CDglyTK体外感染表达KDR的SCG7901细胞株和不表达KDR的HepG2细胞株,并给予不同浓度的前药GCV和（或）5-FC,观察该体系对SCG7901细胞的杀伤效应。分别应用透射电镜、Hoechest33258／PI染色、流式细胞仪观察细胞超微结构、细胞凋亡率和细胞周期的变化。结果携带双自杀基因（CDglyTK）和报告基因（GFP）的重组腺病毒载体转染后,95％以上SCG7901和HepG2细胞中有GFP表达。表达KDR的SCG7901细胞对前药具有较高的敏感性,不表达KDR的HepG2细胞对前药不敏感（P〈0．01）。两种前药联合应用优于任一前药单独应用的疗效（P〈0．01）。流式细胞术检测表明该体系可抑制SCG7901细胞DNA的合成,表现为s期细胞比例增高及G2期细胞减少。同时,Hoechest33258／PI染色和电镜下可见SCG7901有凋亡改变。结论KDR启动子可以调控融合基因体系选择性地杀伤人胃癌SCG7901细胞,并且该体系可以诱导胃癌细胞凋亡。     

贲门癌根治术后返流性食管炎粘膜扫描电镜观察

 为探讨返流性食管炎粘膜改变,采用扫描电镜的方法,对贲门癌切除术后病人食管粘膜与正常人作对比观察.结果:正常食管粘膜细胞的更新呈程序性死亡,即凋亡;而返流性食管炎则表现为粘膜细胞泡样水肿、团状脱落、甚至细胞穿孔.提示:返流性食管炎可直接引起食管粘膜上皮细胞的变性、脱落及细胞膜微嵴紊乱和炎性水肿,此种改变与正常人食管粘膜上皮细胞凋亡完全不同,且此种改变不因术后的时间长短而有差别.     

Adaptation of culture methods for NMR studies of anchorage-dependent cells

Two methods for growing anchorage-dependent cells were adapted for nuclear magnetic resonance (NMR) measurements: growing cells on agarose polyacrolein microsphere beads and on "filters" made of nonwoven polyester fabric. Both were found to be convenient and most suitable for NMR studies in any conventional spectrometer without probe modification. These methods were employed in studies of human breast cancer T47D-A11 cells, using scanning electron microscopy and 31P NMR spectroscopy. The results show that the contents per cell of phosphorylcholine, phosphorylethanolamine, and their glycerol derivatives depend on the mode of cell assembly and decrease gradually with the increase in cell-cell interaction along the growth curve.     

免疫磁珠体外提纯胚胎大鼠神经干细胞的实验研究

为建立免疫磁珠体外提纯胚胎神经干细胞 (NSC)的方法 ,制备胚胎SD大鼠的大脑皮质组织悬液 ,采用磁珠分选法选择Nestin阳性细胞群 ,台盼蓝染色观察活力 ,扫描电镜下行形态学观察 ,流式细胞仪检测荧光标记细胞的Nestin表达阳性率。结果发现 ,分选后所得细胞纯度达 (87 8± 2 4 ) % ,细胞活力 (94 8± 2 3) % ,流式细胞仪检测细胞Nestin阳性表达率为 (88 3± 1 0 4 ) % ,符合NSC的特点 ,扫描电镜观察可见细胞表面有数目不等的磁珠紧密结合。研究表明 ,磁性分选系统是一种有效的神经干细胞分离提纯方法 ,且对细胞活力无影响     

A physiological barrier distal to the anatomic blood-brain barrier in a model of transvascular delivery

BACKGROUND AND PURPOSE: Osmotic disruption of the blood-brain barrier (BBB) provides a method for transvascular delivery of therapeutic agents to the brain. The apparent global delivery of viral-sized iron oxide particles to the rat brain after BBB opening as seen on MR images was compared with the cellular and subcellular location and distribution of the particles. METHODS: Two dextran-coated superparamagnetic monocrystalline iron oxide nanoparticle contrast agents, MION and Feridex, were administered intraarterially in rats at 10 mg Fe/kg immediately after osmotic opening of the BBB with hyperosmolar mannitol. After 2 to 24 hours, iron distribution in the brain was evaluated first with MR imaging then by histochemical analysis and electron microscopy to assess perivascular and intracellular distribution. RESULTS: After BBB opening, MR images showed enhancement throughout the disrupted hemisphere for both Feridex and MION. Feridex histochemical staining was found in capillaries of the disrupted hemisphere. Electron microscopy showed that the Feridex particles passed the capillary endothelial cells but did not cross beyond the basement membrane. In contrast, after MION delivery, iron histochemistry was detected within cell bodies in the disrupted hemisphere, and the electron-dense MION core was detected intracellularly and extracellularly in the neuropil. CONCLUSION: MR images showing homogeneous delivery to the brain at the macroscopic level did not indicate delivery at the microscopic level. These data support the presence of a physiological barrier at the basal lamina, analogous to the podocyte in the kidney, distal to the anatomic (tight junction) BBB, which may limit the distribution of some proteins and viral particles after transvascular delivery to the brain.     

华蟾素对喉癌细胞株癌基因抑制研究

目的：探讨中药华蟾素对体外培养人喉癌的喉癌细胞株（Ｈｅｐ－２）细胞生长作用及癌基因变化。方法：应用光镜,电镜;四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）检测技术;链霉素抗生物素蛋白过氧化物连接法免疫组化技术,对药物作用后Ｈｅｐ－２细胞的数量,形态,癌基因Ｐ５３,Ｃ－ｍｙｃ蛋白的表达进行研究。     

(32)P-磷酸铬体外诱导人非小细胞肺癌A549细胞凋亡

目的观察^32P-磷酸铬(^32P胶体)体外诱导人非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞周期变化和发生细胞凋亡的现象，建立剂量-效应和时间-效应关系。方法将^32P胶体加入A549细胞培养体系进行内照射，初始放射性浓度分别为0，93，180，278，370和463MBq／L，采用Giemsa染色、透射电镜、末端原位标记(TUNEL)等方法进行凋亡细胞的形态学、超微病理、生化特征检测，应用流式细胞术定量检测细胞周期变化和细胞凋亡率。结果A549细胞受照射后S期 G2-M期细胞比率在96h以内呈上升趋势，之后逐渐下降。A54g细胞受照射后72h左右出现兴奋性表现，96h起各受照组均检出凋亡，各剂量组在照射后120h达到凋亡高峰。结论在较低剂量范围内，^32P胶体内照射可以体外诱导人NSCLC A54g发生72h以后的迟发相凋亡，细胞凋亡率与内照射初始放射性浓度呈正相关。     

食管癌细胞来源的外泌体对肿瘤细胞迁移及侵袭能力的影响及机制研究

目的 探讨食管癌KYSE410细胞来源的外泌体对肿瘤细胞迁移及侵袭能力的影响及其机制.方法 超速离心法分离食管癌KYSE410细胞培养上清中的外泌体;采用透射电镜及Western blotting观察所获得的外泌体的形态及其标志物;共聚焦显微镜观察KYSE410、KYSE510和YES2细胞摄取荧光染料标记的KYSE410外泌体;采用Transwell小室实验分析3种食管癌细胞的迁移及侵袭能力以及KYSE410外泌体对3种食管癌细胞迁移及侵袭能力的影响;Western blotting检测Wnt/β-catenin和PI3K/Akt信号通路相关蛋白的变化.结果 透射电镜下观察KYSE410外泌体具有膜结构,直径分布在30～100nm;3种食管癌细胞的迁移及侵袭能力从大到小依次为KYSE410、KYSE510、YES2;KYSE410外泌体能够促进KYSE410、KYSE510、YES2细胞迁移及侵袭能力并增强3种食管癌细胞中β-catenin和p-Akt的表达.结论 来源于高迁移及侵袭能力的食管癌KYSE410细胞的外泌体能够促进自身和低迁移及侵袭能力的食管癌KYSE510、YES2细胞的迁移和侵袭,并且可能通过激活Wnt/β-catenin和PI3K/Akt信号通路发挥上述作用.     

大鼠肝干细胞体外诱导分化的实验研究

目的 分离成体大鼠肝干细胞,观察体外培养条件下肝干细胞分化为肝细胞和胆管细胞的过程以及形态学变化.方法 采用AAF/PH肝干细胞刺激模型,通过胶原酶Ⅳ分步消化分离和Percoll梯度离心纯化的方法得到肝干细胞,联合应用地塞米松、DMSO和EGF、HGF、SCF等生长因子诱导肝干细胞增殖并分化为肝实质细胞.结果 分离得到的肝干细胞呈卵圆型,直径是肝细胞的1/4～1/6,免疫荧光检测显示其表达c-kit和OV6两种干细胞抗原,PCR分析显示其表达CK19和白蛋白mRNA.体外诱导培养条件下细胞首先分化成大而圆的成熟肝细胞,继而出现分支样的胆管细胞,而且可见从卵圆形细胞到成熟肝细胞的中间变化过程.结论 新分离的肝干细胞同时表达c-kit、OV6、CK19和白蛋白多种抗原,诱导分化条件下可见从体积较小的卵圆形肝干细胞到体积大许多倍的肝细胞的形态学变化过程.