人胰岛提取物与大鼠β肿瘤细胞具有共同抗原决定簇

鉴定抗大鼠β肿瘤细胞系Rin5F细胞膜单克隆抗体所结合的胰岛特异性抗原。采用匀浆后超速离心的方法提取动物胰腺及胰岛细胞膜蛋白。经SDS-PAGE、电转移后，分别与大鼠β肿瘤细胞系Rin5F细胞膜单克隆抗体1A2(第一抗体)和羊抗鼠(第二抗体)反应。用放射自显影、Dot blot、western blot方法显示结果。除单抗1C7以外的其他6株抗大鼠β肿瘤细胞系Rin5F细胞膜单克隆抗体能与正常大鼠胰腺提取物不同成分结合。其中单抗1A2能与大鼠、狗、猪、猴、人的胰腺提取物及人、猪胰岛提取物不同分子量的抗原结合。大鼠β肿瘤细胞系Rin5F细胞与正常大鼠胰腺有共同的抗原决定簇。单抗1A2所结合抗原在不同动物胰腺，尤其是在人和猪胰岛上具有共同抗原决定簇。为1型糖尿病自身免疫发病机制及临床前早期诊断带来了新的希望。     

单克隆抗体IA2结合胰岛细胞膜155kD和160kD抗原蛋白的纯化

免疫吸附实验表明87％ 1型糖尿病人血清自身抗体能替代单克隆抗体IA2与大鼠胰岛β-肿瘤细胞结合,并且单抗1A2能与人胰岛及大鼠胰腺提取物中的抗原结合。由于抗原含量很低,用亲和沉析、免疫沉淀、HPLC的方法均未得到可检测量的抗原蛋白。我们尝试用凝胶洗脱的办法得到了足够的大鼠胰腺提取物抗原蛋白。银染及Western Blot显示为155kD和160kD两条带。用胰蛋白酶部分消化后N末端氨基酸序列分析得到了12个氨基酸,初步认为该抗原不同于谷氨酸脱羧酶(GAD)、酪氨酸磷酸酶(IA2)等已发现的抗原。本实验为该抗原蛋白的分子克隆及1型糖尿病发病机制的研究打下了基础。     

单克隆抗体IA2结合胰岛细胞膜155kD和160kD抗原蛋白的纯化

免疫吸附实验表明87％1型糖尿病人血清自身抗体能替代单克隆抗体IA2与大鼠胰岛β-肿瘤细胞结合^[1]，并且单抗1A2能与人胰岛及大鼠胰腺提取物中的抗原结合。由于抗原含量很低，用亲和沉析、免疫沉淀、HPLC的方法均未得到可检测量的抗原蛋白。我们尝试用凝胶洗脱的办法得到了足够的大鼠胰腺提取物抗原蛋白。银染及Western Blot显示为155kD和160kD两条带。用胰蛋白酶部分消化后N末端氨基酸序列分析得到了12个氨基酸，初步认为该抗原不同于谷氨酸脱羧酶(GAD)、酪氨酸磷酸酶(IA2)等已发现的抗原。本实验为该抗原蛋白的分子克隆及1型糖尿病发病机制的研究打下了基础。     

人与多种动物胰腺底物抗原检测胰岛细胞抗体的比较研究

胰岛细胞抗体（Ｉｓｌｅｔ ｃｅｌｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ＩＣＡ）是一种胰岛细胞胞浆抗体。本文比较研究Ｏ型血成人胰腺与五种动物胰腺（大鼠、猫、猪、狗和豚鼠）作为抗原底物检测胰岛素依赖型（Ｉ型）糖尿病患者ＩＣＡ阳性血清的敏感性和特异性。结果表明大鼠、猪与猫的胰腺作为抗原底物可检测到Ｉ型糖尿病患者中ＩＣＡ强阳性血清（〉４０ＪＤＦ单位），其中以大鼠胰腺抗原的敏感性最强，有可能替代成人胰腺抗原底物进行ＩＣＡ检     

应用识别癌胚抗原协同决定簇单克隆抗体增强其免疫毒素细胞毒作用研究

系列抗CEA单克隆抗体决定簇图谱分析已显示了抗体的特异性与决定簇的协同性。据此,我们构建了一种抗CEA特异决定簇单抗C_(228)蓖麻毒素A链的免疫毒素。体外细胞毒检测发现,表达对应抗原的人     

单克隆抗体药物在抗肿瘤治疗中的应用

通过淋巴细胞杂交技术或基因工程技术制备单克隆抗体药物已经成为生物制药领域的一个重要方面,由于单克隆抗体药物专一性强、疗效显著,为抗肿瘤治疗开辟了一条新的途径,因此成为近年来研究的热点药物之一.本文就目前应用于临床且疗效确切的单抗药物作一综述. 1 单克隆抗体 抗体是由B淋巴细胞转化而来的浆细胞分泌的,每个B淋巴细胞株只能产生一种它专有的、针对一种特异性抗原决定簇的抗体.这种从一株单一细胞系产生的抗体就叫单克隆抗体,简称单抗[1].这些抗体具有相同的结构和特性.抗体与特异性表达的肿瘤细胞表面蛋白质结合,从而阻碍蛋白质的表达,起到抗肿瘤作用.抗体还可使B淋巴细胞产生免疫反应,诱导癌细胞凋亡.早期单抗为鼠源性单抗,易被人体免疫系统识别,应用受到限制.     

BTBD10蛋白在大鼠胰岛和INS-1细胞株的表达

目的观察BTBD10蛋白在大鼠胰岛和INS-1细胞株的表达。方法利用构建好的BTBD10多克隆抗体,采用多重免疫荧光技术和激光共聚焦显微镜观察BTBD10在3月龄Fischer344大鼠的胰腺组织和大鼠胰岛β细胞株INS-1细胞中的表达。结果 BTBD10蛋白定位在大鼠胰腺组织的胰岛β细胞中,与胰岛素的定位重叠,而在胰腺的外分泌腺和胰岛α细胞中无表达,同时显示BTBD10定位在大鼠胰岛β株INS-1细胞的细胞浆中,表达量高。结论 BTBD10特异性表达于大鼠胰岛β细胞中,提示BTBD10可能与胰岛β细胞功能和胰岛素分泌有关。     

流式细胞术检测肿瘤耐药细胞中P-糖蛋白细胞前处理方法的优化

目的:优化流式细胞术(FCM)检测肿瘤耐药细胞中P-糖蛋白(P-gp)的细胞前处理方法,提高细胞中P-gp的检出率。方法:采用抗原决定簇在细胞膜内的单抗JSB-1,以阳性百分比为优化指标,耐阿霉素人乳腺癌细胞系MCF-7/A为模型细胞,对FACSTM透化溶液的有无、FACSTM透化溶液的浓度、FACSTM透化溶液处理细胞的时间、鼠抗JSB-1抗体的孵育时间、羊抗鼠IgG-FITC(GAMIF)抗体的孵育时间、JSB-1抗体工作液的保存条件、以及细胞数量进行优化。结果:上述细胞处理方法对MCF-7/A的阳性百分比均有不同程度的影响;相对最佳的细胞处理方法为:5×105-20×105个细胞用FACSTM透化溶液的6倍稀释液处理10min,37℃下与JSB-1抗体孵育75min、与GAMIF抗体孵育30min,JSB-1抗体工作液于4℃保存或新鲜配制。结论:对FCM检测前的细胞处理方法进行优化,能显著提高肿瘤耐药细胞中P-gp的检出率,因而更能真实、客观地反映肿瘤耐药细胞的P-gp表达水平及耐药程度。     

韦格纳肉芽肿病自身抗原蛋白酶3的抗原决定簇研究

目的　研究韦格纳肉芽肿病患者血清中抗蛋白酶 3自身抗体的抗原决定簇。方法　应用免疫印记分析法 ,研究在还原和非还原条件下蛋白酶 3的抗原活性。应用竞争性抑制ELISA和免疫印记分析法 ,研究两个抗蛋白酶 3的单克隆抗体HZ1F12和HZ1H3之间 ,及单克隆抗体和 2 2份韦格纳肉芽肿活动期的抗蛋白酶 3血清之间 ,对蛋白酶 3的竞争抑制能力 ,并分析其可能的抗原决定簇。结果　患者血清及单克隆抗体均识别非还原条件下的蛋白酶 3。HZ1F12可以被HZ1H3抑制 74 %。 2 2份血清中 ,10份 (46 % )可以完全或部分被HZ1F12抑制 ,9份 (41% )可以部分被HZ1H3抑制 ,6份 (2 7% )可以被HZ1F12和HZ1H3二者抑制。单克隆抗体也可以明显抑制患者血清的结合能力。结论　韦格纳肉芽肿病自身抗体的抗原决定簇是三维立体构型。单克隆抗体HZ1F12和HZ1H3识别相似或相近的抗原决定簇。韦格纳肉芽肿病患者的抗蛋白酶 3阳性血清识别的抗原决定簇是不一致的。     

抗促卵泡刺激素单克隆抗体的制备及其免疫特异性研究

用杂交瘤技术制备了4株抗羊垂体促卵泡刺激素(FSH)的单克隆抗体。经琼脂双向扩散法鉴定,其中3株为IgG_(2a),1株为IgM。竞争性抗体结合试验表明这4株单克隆抗体分别针对FSH分子上3个不同的抗原决定簇。交叉反应试验的结果表明抗体1A_1和4C_1为分别作用于FSH分子α及β亚单位上抗原决定簇的抗体。     

多巴胺受体在胰岛β细胞系和原位组织中的差异性表达

目的 通过研究大鼠胰腺组织和胰岛β细胞系INS-1（大鼠源）和HIT-T15（仓鼠源）细胞中多巴胺（dopamine,DA） 受体的分布以及INS-1细胞系的内分泌功能,为DA调节胰岛β细胞功能研究结果不一致的可能原因提供一定的实验依据。方法 应用双标记免疫荧光染色方法观察在大鼠胰腺组织和胰岛β细胞系中DA受体分布的异同,以及胰岛素和胰高血糖素免疫荧光双标记结果的差异。应用放射免疫法检测INS-1细胞孵育液中胰岛素及胰高血糖素的浓度,观察细胞系的内分泌功能的改变。结果 在大鼠胰腺组织中,DA受体D1、D2和D5分别表达在β细胞、δ细胞、α细胞和PP细胞上,β细胞只表达D1受体。然而在两种胰岛β细胞系INS-1和HIT-T15细胞上不仅有D1受体,还有D2和D5受体的分布。两种胰岛β细胞系均同时表现胰岛素和胰高血糖素免疫阳性,而在原位胰岛中分布于不同的细胞,进一步检测显示INS-1细胞系的孵育液中不仅含有胰岛素,也含有胰高血糖素。结论 胰岛β细胞系DA受体分布及内分泌功能不同于原位β细胞。     

同CA19-9抗原有交叉反应的抗人胰腺癌单克隆抗体的制备及初步鉴定(简报)

本研究应用人胰腺癌细胞株PANC-1免疫BABL/C小鼠,取其脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,获得一批抗人胰腺癌单克隆抗体(单抗),其中有一个单抗的特异性相对较好.该单抗可与抗CA19-9单抗竞争性结合CA19-9抗原,提示二者有可能识别相同的抗原决定簇.而抗CA19-9单抗是目前世界上用于胰腺癌诊断较佳的抗体,在胰腺癌的早期诊断、病情监测及预后等方面均有重要价值.经进一步观     

Aβ1-15多价DNA疫苗的构建及其对体液免疫的效果

[目的]构建Aβ1-15多价DNA疫苗,研究其诱导体液免疫的效果.[方法]基因合成和PCR技术扩增以多个甘氨酸连接的Aβ1-15二价基因片段;在N端引物延伸加上IgG κ轻链信号肽序列;GSGGSGlinker再串连两段Aβ1-15二价基因片段,克隆入pcDNA3.1表达载体,构建pcDNA3.1-s4×Aβ15真核表达质粒;质粒转染COS-7细胞,Western blot检测4×Aβ15的表达;质粒肌肉注射接种BALB/c鼠,共6次,18周加强免疫,ELISA法检测抗体效价以及抗体分型;免疫组织化学和Aβ42肽抗原的中和实验检测抗血清与转基因鼠Tg2576脑切片中老年斑的特异结合.[结果]测序证实所构建的pcDNA3.1-s4×Aβ15载体序列正确,在COS-7细胞中表达分子质量约8 ku的分泌型4×Aβ15蛋白.pcDNA3.1-s4×Aβ15疫苗于第2次加强免疫后产生Aβ抗体,随加强免疫次数增多,抗体滴度增加,在19周,抗体平均滴度为1:6 400,抗体以IgG1型为主,且可以与转基因鼠Tg2576脑切片中的老年斑免疫结合并被Aβ42肽抗原的中和.[结论]所构建的pcDNA3.1-s4×Aβ15疫苗可在小鼠体内产生高效价的Aβ抗体,为下一步免疫老年性痴呆转基因动物的研究提供条件.     

PDGFR单克隆抗体的制备和鉴定

目的 通过谷胱甘肽转硫酶偶联的血小板衍生因子受体氮端的融合蛋白(GST-PDGFR-N)制备有生物活性的单克隆抗体.方法 用GST-PDGFR-N融合蛋白作为免疫原,通过杂交瘤技术制备抗PDGFR的单克隆抗体,用间接ELISA、Western blot、免疫组化等方法对抗体的抗原结合特性进行鉴定.结果 获得两株能稳定分泌抗PDGFR单克隆抗体的细胞3B12F5和3C6H7C11,亚类鉴定两种单抗均为IgG1.间接ELISA法测定两株细胞腹水抗体的效价分别为1:102400为和1:25600.Western blot法显示PDGFR单克隆抗体特异性地识别免疫原和胶质瘤细胞株U251中的抗原成分.细胞免疫组化显示此单抗可以特异的识别胶质瘤细胞株U251和膀胱癌细胞株BIU87中表达的PDGFR抗原.结论 成功制备PDGFR单克隆抗体,为研究PDGFR的表达情况和临床检测提供了一个有用的工具.     

人Ⅰ型丙氨酸氨基转移酶单克隆抗体的制备及鉴定

目的 通过构建人Ⅰ型丙氨酸氨基转移酶(ALT1)的原核表达载体,并用纯化的ALT1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备有生物活性的单克隆抗体.方法 用GST-ALT1融合蛋白作为免疫原,通过杂交瘤技术制备抗ALT1的单克隆抗体,用间接ELISA、Dot-Elisa、Western blot等方法对抗体的抗原结合特性进行鉴定.结果 获得1株能稳定分泌抗ALT1单克隆抗体的细胞株8A9,亚类鉴定这种单抗为IgG2.间接ELISA法测定细胞株腹水抗体的效价为10×10~5.Dot-ELISA、Western blot显示ALT1单克隆抗体能特异性地识别免疫原.结论 成功制备ALT1单克隆抗体.     

单克隆抗体识别的癌胚抗原决定簇及其生化特性

本文应用系列抗CEA及相关抗原的单抗系列,探测了其抗原决定簇、生化特性及抗体反应的特异性。并以物理、化学因素处理、鉴定了抗原的化学稳定性及相关结构。以亚细胞膜结合-微量固相放免分析试验,分析了此系列单抗与结直肠癌组织细胞反应的限定性。     

胰岛β—细胞衰老与血糖异常

随着增龄,抗体血糖水平逐渐升高,糖耐量试验也出现改变。这无疑与胰岛β-细胞的功能活动有着密切关系。因此研究胰岛β-细胞的衰老变化,有助于了解老年性血糖异常的发生机制。1 胰岛数量、结构的增龄变化 胰岛是胰腺的内分泌部,由四种分泌细胞组成,其中β-细胞占75％,因而胰岛的形态结构变化,同时反应出β-细胞的变化。在动物实验中出现这样的结果,即随着增龄胰岛的数目增加,在12月龄或更老的大鼠,显示特征性的胰岛数量、体积增加,在小鼠和人的研究中也得出类似的结果。在4～7月龄的成龄雌性鼠,胰岛的形态是椭圆形,有大小不同的直径,呈随意分布。至10～18     

递呈BAE5单抗相关表位的M13噬菌体克隆系及其鉴定

[目的]获得可递呈BAE5单克隆抗体抗原表位的M13噬菌体克隆系.[方法]应用生物淘洗(Biopanning)方法,从M13噬菌体随机12肽文库中筛选出能与BAE5单克隆抗体有阳性反应的噬菌体克隆系.通达ELISA竞争反应确定与BAE5单抗结合率较高的克隆,鉴定这些阳性克隆与正常鼠血清,鼠抗M13血清和健康人IgG,IgA抗体的反应差异.[结果]经过3轮淘洗,与BAE5单克隆抗体有阳性反应的克隆占83%(15/18).其中竞争结合率>50%克隆有1、2、7、9、13、14号6个克隆,它们与BAE5单抗的竞争结合率分别为56.3%、59.5%、58.0%、62.8%、56.4%、63.4%.其中只有1、9、14.号克隆的噬菌体与正常小鼠血清不显示交叉反应.[结论]来自1、9、14.号克隆的噬菌体递呈的抗原表位有别于其它克隆,适用于BAE5单抗相关表位的研究.     

应用电转移免疫印迹法分析登革病毒的非结构蛋白抗原

以免疫印迹法分析登革病毒感染的鼠脑抗原和白纹伊蚊细胞抗原,用单克隆抗体及多克隆抗体作探针。结果显示:登革病毒的非结构蛋白NV5存在有群及型特异的抗原决定簇。     

用细菌hCG结合蛋白抗体对比研究大鼠睾丸LH/CG受体和细菌hCG结合蛋白

作者以嗜麦芽假单胞菌(简称细菌)hCG结合蛋白抗体为探针,对比研究细菌hCG结合蛋白和大鼠睾丸细胞膜LH/CG受体的免疫特性。结果前者特异沉淀[~(125)I]hCG与hCG结合蛋白结合复合物;后者亦获得相同的结果。以上结果表明,细菌hCG结合蛋白与大鼠睾丸LH/CG受体蛋白有相同抗原决定簇,抗体识别该受体hCG结合位点以外的抗原决定簇。