切断部分背根神经对脊神经节和脊髓Ⅱ板层一氧化氮合酶表达的影响

目的：观察部分背根神经切断对猫脊神经节（SG）和脊髓II板层一氧化氮合酶（NOS）表达的影响。方法：采用尼克酰胺嘌呤二核苷酸脱氢酶（NADPH－d）法显示单侧部分背根切断（切断一侧L1－L5，L7－S2背根节，保留L6为备用根）后10d的猫L6SG和L6脊髓II板层NOS的分布及变化。结果：NOS的阳性物主要分布于SG胞体偏小的神经元和脊髓II板层的神经膨体内，部分背根切断后10d，手术侧SG内胞体偏小的NOS阳性神经元数量及II板层NOS阳性神经膨体密度均较非手术侧者增多（P＜0．05）。结论：部分背根切断不仅致备用SG胞体偏小的神经元NOS表达增加，且II板层NOS的阳性膨体数量亦有增多。提示由NOS产生的一氧化氮（NO)可能在部分背根切断后猫脊髓可塑性中发挥作用。     

切断L4背根对脊髓Ⅱ板层一氧化氮合酶表达的影响

为探讨背根切断对脊髓Ⅱ板层一氧化氮合酶(NOS)的影响,采用NADPH-d酶组织化学方法,观察了切断L4背根7天后脊髓Ⅱ板层NOS的分布及变化.结果:NOS主要分布于脊髓Ⅱ板层的神经膨体及少数神经元胞浆内.切断背根7天后,手术侧L4脊髓Ⅱ板层NOS的平均灰度较非手术侧明显增加(P<0.05),神经膨体密度则较非手术侧明显减少(P<0.01),表明切断背根可致相应节段脊髓Ⅱ板层NOS含量明显减少.提示由NOS产生的一氧化氮(NO)可能在背根切断后脊髓Ⅱ板层的病理过程中发挥作用.     

切断L_4背根对脊髓板层一氧化氮合酶表达的影响

为探讨背根切断对脊髓 板层一氧化氮合酶 (NOS)的影响 ,采用 NADPH- d酶组织化学方法 ,观察了切断 L4背根 7天后脊髓 板层 NOS的分布及变化。结果 :NOS主要分布于脊髓 板层的神经膨体及少数神经元胞浆内。切断背根 7天后 ,手术侧 L4脊髓 板层 NOS的平均灰度较非手术侧明显增加 (P<0 .0 5 ) ,神经膨体密度则较非手术侧明显减少 (P<0 .0 1) ,表明切断背根可致相应节段脊髓 板层 NOS含量明显减少。提示由 NOS产生的一氧化氮 (NO)可能在背根切断后脊髓 板层的病理过程中发挥作用。     

部分背根神经切断对脊髓Ⅱ板层GDNF表达的影响

目的：为探讨胶质源性神经营养因子（GDNF）与脊髓Ⅱ板层可塑性的关系。方法：将成年雄猫5只行单侧部分背根切断术（切除一侧的L1-L5，L7-S2DRG，保留L6DRG为备用根）。术后动物存活10d，取L3脊髓制作20цm厚冰冻切片。用GDNF抗体（1：1500）按常规ABC法染色，观察GDNF样免疫反应在脊髓的分布，计数Ⅱ板层GDNF阳性神经膨体密度。测定Ⅱ板层GDNF的平均灰度值以间接反映其相对含量。结果：正常侧，GDNF的免疫阳性反应物主要分布在脊髓灰质神经元，胞浆染色，Ⅱ板层亦见少量GDNF阳性神经膨体，白质胶质细胞亦有GDNF阳性反应，部分去背根后10d，L3平面手术侧Ⅱ板层GDNF含量及神经膨体密度均明显较非手术侧减少。结论：部分背根切断后，手术侧Ⅱ板层GDNF的含量减少提示GDNF不仅与脊髓的生理功能有关，且可能在脊髓Ⅱ板层可塑性中发挥作用。     

切断L4背根对脊髓Ⅱ板层一氧化氮合酶表达的影响

为探讨背根切断对脊髓Ⅱ板层一氧化氮合酶（ＮＯＳ）的影响,采用ＮＡＤＰＨ－ｄ酶组织化学方法,观察了切断Ｌ４背根７天后脊髓Ⅱ板层ＮＯＳ的分布及变化。结果：ＮＯＳ主要分布于脊髓Ⅱ板层的神经膨体及少数神经元胞浆内。切断背根７天后,手术侧Ｌ４脊髓Ⅱ板层ＮＯＳ的平均灰度较非手术侧明显增加（Ｐ〈０．０５）,神经膨体密度则较非手术侧明显减少（Ｐ〈０．０１）,表明切断背根可致相应节段脊髓Ⅱ板层ＮＯＳ含量明显减少。提示由ＮＯＳ产生的一氧化氮（ＮＯ）可能在背根切断后脊髓Ⅱ板层的病理过程中发挥作用。     

猫部分背根切断后背根节一氧化氮合酶的表达变化

目的 了解一氧化氮合酶(NOS)在背根损伤的背根节及邻近未受损之背根节中表达的变化。方法 采用部分去背根传入动物模型,通过免疫组织化学ABC法,观察猫背根节中nNOS及eNOS同工酶阳性免疫产物的分布、阳性神经元的数量及变化。结果 猫背根节中nNOS阳性反应物主要分布于小神经元中;背根被切断的L。背根节及邻近完好的L。备用背根节中nNOS阳性小神经元数量较非术侧均有增加;eNOS在成年猫背根节神经元中未见表达。结论 在背根节神经元中表达的nNOS及由nNOS催化产生的NO可能与神经损伤和修复的生理病理过程有关。     

脑源性神经营养因子在猫备用背根节的表达变化

为探讨脑源性神经营养因子(BDNF)在备用背根节(DRG)的表达变化情况,对20 只成年雄性家猫(其中15只行单侧L6备用根手术后分别存活3、6、12天)L6 DRG行BDNF免疫组化染色.结果:①正常猫L6 DRG神经元以胞体直径32μm和44μm为分界划分出大中小三类;②正常L6 DRG内有50.87%的神经元呈BDNF阳性反应,备用根手术侧其BDNF阳性神经元数量增多,反应增强,以术后6天变化最显著(76.7%).正常及术后BDNF阳性神经元均以小神经元为主.去部分背根后备用L6 DRG神经元BDNF表达的增多、增强可能参与促进其神经元 ( 尤其是小神经元)中枢支在脊髓背角的侧支出芽,并可能参与营救一些失去部分神经支配的背角神经元.     

猫脊髓部分去传入后神经营养素家族表达的时空变化

目的　探讨部分去传入后猫脊髓背角 板层内 NGF、BDNF、NT- 3及其 m RNA的时空变化规律。方法　用免疫组化和原位杂交技术检测部分去传入 (切断 L1 ～ L5、L7～ S2 背根 ,保留 L6背根为备用根 ) 3～ 5天、10～ 11天后 ,猫脊髓 L3 、L5、L6或 L7节段背角 板层内三种神经营养素及其 m RNA的表达变化。结果　 1正常猫 NGF及其 m RNA分布于 板层神经元内 ;BDNF分布于神经纤维终末、膨体和神经元内 ,m RNA阴性 ;NT- 3分布于神经元、胶质细胞和少量神经纤维及膨体中 ,m RNA阴性。 2去传入后 3～ 5天 ,NGF及其 m RNA阳性神经元数明显增多 ,NT- 3阳性神经元和胶质细胞数也明显增多 ,而 BDNF含量及阳性膨体数却明显减少 ;10～ 11天时 ,NGF及其 m RNA阳性神经元数仍维持高峰水平 ,NT- 3者虽仍高于正常但已有所下降 ,而 BDNF含量除 L7节段外已恢复到正常 ,但阳性膨体数仍未恢复。 BDNF和 NT- 3的 m RNA仍呈阴性。 3NGF达高峰的时间在 L5、L6节段较早 ,L3 较晚 ;BDNF含量的恢复以 L7最迟 ;NT- 3阳性胶质细胞数量的变化在各节段一致 ,唯 L5、L7节段的阳性神经元数在 10～ 11天时即降致正常水平 ,L3 节段仍维持较高水平。结论　三种因子均参与部分去传入后脊髓的可塑性反应 ,但其发挥作用的早晚及维持时间却不尽相     

大鼠颈神经根受压后一氧化氮合酶Ⅰ型在脊髓及背根神经节中的变化

目的:通过观察大鼠颈神经受压后一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元及神经末梢在背根神经节(DRG)及脊髓中的分布变化,探讨颈神经受压后致颈肩痛发生的可能机制.方法:选用12只Wistar大鼠,随机分为2组:实验组,选用直径1 mm硅胶管,纵形切开,于接近背根神经节远端套入颈6脊神经根,以丝线在硅胶管外结扎;对照组,不作任何处理.4周后取双侧颈4～7背根神经节及相应节段脊髓,用免疫组化ABC法观察一氧化氮(NO)阳性神经元的形态特点,并应用图像分析,分析NOS1阳性神经元及神经末梢在颈部背根神经节及颈髓中的分布,比较两组NOS1阳性细胞数的平均面积和及平均光密度.结果:大鼠颈神经受压4周后,实验组背根神经节中NOS1阳性神经元明显增多,脊髓背角NOS1阳性神经元及神经末梢明显增多,细胞以中、小神经元为主,实验组阳性细胞数、阳性神经末梢的平均面积和及平均光密度始终多于对照组.结论:NO参与外周及中枢水平的痛觉调制,可能与大鼠颈神经受压致颈肩痛的产生有关.     

部分背根切断对备用背根节和脊髓NT-4表达的影响

目的探讨NT-4在正常猫和部分去背根猫的L6背根节(手术侧和非手术侧)和脊髓Ⅱ板层与背核表达的变化。方法成年健康雄猫15只分为正常组、备用根术后7d组和14d组(动物行单侧部分去背根手术,即切除一侧L1-L5、L7-S2背根节,保留L6为备用根),采用免疫组化ABC法,观察、计数各组背根节、脊髓实验侧Ⅱ板层(L3、L5、L6)和背核(L3)中NT-4的分布及含量。结果①去部分背根后7d,备用背根节(术侧)中NT-4阳性神经元数比正常组显著减少（P＜0．05),但较非术侧明显增多(P＜0．05);至术后14d,术侧备用背根节NT-4阳性神经元比正常组、7d组和非术侧均减少(P＜0．05)。②正常组、术后两时相L3、L5、L6术侧脊髓Ⅱ板层和L3背核内NT-4阳性神经元数均无明显变化。结论去部分背根主要导致备用背根节NT-4的表达发生变化。     

猫脊髓部分去传入后神经营养素家族表达的时空变化

目的 探讨部分去传入后猫脊髓背角Ⅱ板层内NGF、BDNF、NT-3及其mRNA的时空变化规律，方法 用免疫组化和原位杂交技术检测部分去传入（切断L1-L5、L7-S2背根，保留L6背根为备用根）3-5天、10-11天后，猫脊髓L3、L5、L6或L7节段背角Ⅱ板层内三种神经营养素及其mRNA的表达变化。结果 （1）正常猫NGF及其mRNA分布于Ⅱ板层神经元内；BDNF分布于神经纤维终末，膨体和神经元内，mRNA阴性，NT-3分布于神经元，胶质细胞和少星神经纤维及膨体中，mRNA阴性，（2）去传入后3-5天，NGF及其mRNA阳性神经元数明显增多，NT-3阳性神经元和胶质细胞数也明显增多，而BDNF含量及阳性膨体数却明显减少；10-11天时，NGF及其mRNA阳性神经元数仍维持高峰水平，NT-3者虽仍高于正常但已有所下降，而BDNF含量除L7节段外已恢复到正常，但阳性膨体数仍未恢复，BDNF和NT-3的mRNA仍呈阴性。（3）NGF达高峰的时间在L5、L6节段较早，L3较晚，BDNF含量的恢复以L7最迟；NT-3阳性胶质细胞数量的变化在各节段一致，唯L5、L7节段的阳性神经元数在10-11天时即降致正常水平，L3节段仍维持较高水平。结论 三种因子均参与部分去传入后脊髓的可塑性反应，但其发挥作用的早晚及维持时间却不尽相同。     

脊髓Ⅱ板层NOS,BDNF和GDNF阳性神经膨体的组织化学双标研究

目的：为探讨神经膨体是否同时含有NOS和BDNF或BDNF和GDNF，以间接了解背根节（dorsal root ganglion,DRG)小细胞是否同时含有这些物质。方法：用成年猫L3脊髓节段制作20μm厚的冰冻切片并分两组。一组先行NOS酶组化染色，NBT兰色反应显色；继之用BONF抗血清以免疫组化ABC法行双标染色，DAB棕色反应显色。另组先用BDNF抗血清以免疫组化ABC法染色，显色同前；随后用GDNF抗血清同前染片，TMB兰色反应显色。常规脱水透明封片。结果：在NOS与BDNF双标组，脊髓Ⅱ板层内有大量NOS阳性（呈兰色反应）和BDNF阳性（呈棕色反应）神经膨体，但大多为单标染色，双标染色者极少；BDNF和GDNF双标组阳性神经膨体的标记与NOS和BDNF组相类似，均主要是大量单标的神经膨体，双标者少。结论：脊髓Ⅱ板层虽有NOS，BDNF和GDNF阳性神经膨体，但各自来源有所不同，即大多数DRG小细胞并非同时含有NOS和BDNF或BDNF。提示以上3种阳性神经膨体可能分别来源于不同功能类型的DRG小细胞。     

部分背根切断对备用背根节和脊髓IGF-Ⅰ表达的影响

目的探讨IGF-Ⅰ在正常猫和部分去背根猫的L6双侧背根节和脊髓Ⅱ板层(L3、L5、L6)与背核(L3)表达及变化, 以了解IGF-Ⅰ与脊髓可塑性的关系.方法成年健康雄猫15只分为正常组、备用根术后7 d组与14 d组,每组5只.用兔抗IGF-Ⅰ(1∶200)抗体行免疫组化ABC法染色.观察、计数并比较各组背根节、脊髓实验侧Ⅱ板层(L3、L5、L6)和背核(L3)中IGF-Ⅰ的分布、含量.结果①IGF-Ⅰ在去部分背根后7 d,术侧背根节阳性细胞数比正常组显著减少(P<0.05),与非术侧比无差异(P>0.05);术后14 d,术侧背根节IGF-Ⅰ阳性神经元数比正常组亦显著减少(P<0.05),与术后7 d组比无差异(P>0.05),较非术侧者明显减少(P<0.01).②各组L3、L5、L6术侧脊髓Ⅱ板层内IGF-Ⅰ阳性神经元数均无明显差异(P>0.05).L3背核IGF-Ⅰ阳性神经元数在术后两时相则先减少后增加(P<0.05),且在术后14 d时恢复至正常水平(P>0.05).结论部分背根切断导致双侧背根节IGF-Ⅰ表达改变和脊髓背核IGF-Ⅰ表达改变,提示IGF-Ⅰ与脊髓可塑性有关.     

针刺对备用根猫背根节神经元IGF-Ⅰ表达的影响

目的观察胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)在正常猫、部分去背根猫及针刺部分去背根猫的L6手术侧背根节(DRG)表达的时空变化,以了解IGF-Ⅰ与针刺促进脊髓可塑性的关系.方法 25只成年健康雄猫随机分为5组:即正常组、备用根术后7 d组与14 d组(动物行单侧部分去背根手术,即切除一侧L1～L5、L7～S2背根节,保留L6为备用根)、针刺备用根术后7 d组与14 d组(动物行单侧部分去背根术后针刺L6脊神经外周支配区内的两组穴位).动物于术后7 d、14 d分别处死,取各组(手术侧)L6背根节,-20 ℃恒冷箱切片,片厚20 μm,用兔抗IGF-Ⅰ(1∶200)抗体行免疫组化ABC法染色.观察、计数并比较各组背根节IGF-Ⅰ阳性神经元的分布、含量及时空变化.结果针刺备用根7 d组,DRG IGF-Ⅰ阳性神经元数较术后7 d组明显增加( P <0.05),但仍低于正常水平;针刺14 d,DRG阳性神经元比术后14 d亦增多( P <0.01),且恢复至正常水平.与针刺7 d组比较,DRG IGF-Ⅰ阳性神经元在针刺14 d时明显增多( P <0.05).结论针刺可增加针刺侧DRG内IGF-Ⅰ阳性中小神经元数.提示针刺后IGF-Ⅰ在背根节的表达变化可能与针刺促进脊髓可塑性有关.     

人胎中后期大脑额叶一氧化氮合酶阳性神经元发育的免疫组织化学观察

目的探讨人胎发育中后期大脑额叶内一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元的生长发育规律。方法采用免疫组织化学方法对人胎大脑额叶NOS阳性神经元的发育进行观察。结果第7～8个月龄时,大脑额叶皮质板深层NOS阳性神经元大小不一,形态多样,呈散在分布,NOS阳性反应较强;在神经元之间脑组织内有膨体神经纤维分布。第9～10个月龄时,大脑皮质板深层NOS阳性神经元胞体略大,胞质丰富,形态饱满,染色深;膨体神经纤维明显;在皮质板浅层出现散在分布的NOS阳性神经元,胞体呈圆形或椭圆形,核大,胞质少,神经突起明显。结论大脑额叶皮质深层NOS阳性神经元基本形成神经网络系统,产生较高浓度的一氧化氮微环境,有利于各种类型神经元的分化、增殖、迁移和发育。     

针刺对神经营养素3在脊髓可塑性中表达的影响

目的　探讨针刺对神经营养素 3(NT3)在脊髓可塑性中表达的影响。方法　用 NT3 抗血清和NT3c RNA探针 ,以免疫组化和原位杂交技术观察针刺前后备用背根节及脊髓 板层中 NT3表达的变化。结果　针刺侧备用背根节 (DRG) NT3及其 m RNA阳性大神经元 (>5 7μm)和小神经元 (<42μm )百分数均较非针刺侧者明显增多 (P<0 .0 5 )。此外 ,脊髓针刺侧 板层 NT3阳性神经元及胶质细胞百分数针刺侧亦较非针刺侧明显增多(P<0 .0 5 ) ,但两侧均未见 NT3m RNA的杂交信号。结论　针刺促进脊髓可塑性可能与 DRG大、小神经元表达NT3和脊髓 板层 NT3阳性神经元和胶质细胞百分数的增多有关     

部分背根切断对备用背根节和脊髓IGF—I表达的影响

目的探讨IGF—I在正常猫和部分去背根猫的L6双侧背根节和脊髓Ⅱ板层(L3、L6、L5)与背核(L3)表达及变化，以了解IGF—I与脊髓可塑性的关系。方法成年健康雄猫15只分为正常组、备用根术后7d组与14d组，每组5只。用兔抗IGF—I(1：200)抗体行免疫组化ABC法染色。观察、计数并比较各组背根节、脊髓实验侧I板层(L3、L5、L6)和背核(L3)中IGF—I的分布、含量。结果①IGF—I在去部分背根后7d，术侧背根节阳性细胞数比正常组显著减少(P＜0．05)，与非术侧比无差异(P＞0．05)；术后14d，术侧背根节IGF—I阳性神经元数比正常组亦显著减少(P＜0．05)，与术后7d组比无差异(P＞0．05)，较非术侧者明显减少(P＜0．01)。②各组L3、L5、L6术侧脊髓Ⅱ板层内IGF—I阳性神经元数均无明显差异(P＞0．05)。L。背核IGF—I阳性神经元数在术后两时相则先减少后增加(P＜0．05)，且在术后14d时恢复至正常水平(P＞0．05)。结论部分背根切断导致双侧背根节IGF—I表达改变和脊髓背核IGF—I表达改变，提示IGF—I与脊髓可塑性有关。     

针刺对备用背根节和脊髓NT-4表达的影响

目的 观察NT-4在针刺部分去背根猫的L6背根节（手术侧和非手术侧）和脊髓表达的时空变化,以了解NT-4与针刺促进脊髓可塑性的关系。方法 25只成年健康雄猫随机分为5组：即正常组,备用根术（动物行单侧部分去背根手术,即切除一侧L1-L5、L7-S2背根节,保留L6为备用根）后7d组与14d组、针刺备用根术（动物行单侧部分去背根术后针刺）后7d组与14d组。动物处死后,取L6背根节及L3、L5、L6节段脊髓,用兔抗NT-4（1：200）抗体行免疫组化ABC法染色。观察、计数并比较各组背根节、脊髓实验侧Ⅱ板层（L3、L5、L6）和背核（L3）中NT-4的分布及含量。结果 针刺备用根7d组,针刺侧DRG内NT-4阳性神经元数较正常组和术后7d组减少（P＜0．05）,较相应非针刺侧多（P＜0．05）;针刺14d组,针刺侧DRG阳性神经元数比针刺7d组术后14d和同组非针刺侧增高（P＜0．05）,且恢复至正常水平。针刺7d,针刺侧脊髓L6Ⅱ板层NT-4阳性神经元数较术后7d组及正常组增加（P＜0．01）。针刺14d时,L5、L6Ⅱ板层阳性神经元数较正常组及术后14d组相应节段均增加（P＜0．01）。针刺后L3背核NT-4阳性神经元数无明显变化（P＞0．05）。L5Ⅱ板层NT-4阳性神经元在针刺后14d时比针刺后7d时增多（P＜0．05）。结论 以上结果提示NT-4与针刺促进脊髓可塑性有关;针刺备用背根对非针刺侧DRG NT-4的表达亦有影响,提示非针刺侧背根节NT-4亦可能参与了脊髓可塑性和针刺促进脊髓可塑性。     

TrK C在成年猫脊髓和背根节的分布

采用免疫组织化学方法探讨trKC在成年猫脊髓L3,L5节段和L6 背根节的分布 .结果 :trKC的免疫阳性反应物 (trKC -IR)主要分布于脊髓腹角、中间带、背角深部以及背根节 (DRG)的大神经元胞浆内 .此外 ,脊髓Ⅱ板层还可见均质状的trKC -IR ,染色明显深于其它各层 ;而DRG的少数中、小神经元亦呈trKC阳性反应 .提示 ,trKC可能与成年猫脊髓和DRG某些神经元的生理功能有关 .     

部分背根切断对备用背根节trkC表达的影响

为探讨去部份背根（切除一侧L1－L5, L7－S2背根节,保留L6背根为备用根）猫备用L6背根节（DRG）trkC表达的变化,用特异的trkC兔抗血清以免疫组织化学方法染片,观察trkC在DRG的分布。计数正常组一侧,术后3天及10天组手术侧L6 DRG大、小神经元trkC的阳性细胞数,结果用q检验进行统计分析。结果：trkC的免疫阳性反应（trkC－IR）主要分布于DRG的大细胞及少数小神经元胞浆内。部分去背根后3天, L6 DRG大、小 trkC－IR阳性神经元数与正常组者比较无显著变化（P＞0.05）。但10天组者,trkC阳性大神经元的数量明显减少,而小神经元数则明显增多（P＜0.05）,表明部分背根切断使备用DRG trkC的表达在大神经元减少,而小神经元则增加。以上提示,备用DRG trkC的表达变化可能与脊髓可塑性有关系。