木兰花碱对HERG钾通道蛋白表达的影响

目的探讨木兰花碱抗心律失常的作用及机制。方法将低浓度（1、3μmol／L）及高浓度（10、30μmol／L）木兰花碱分别作用于转染HERG基因重组载体的HEK-293细胞，采用Westernblot法、免疫荧光化学染色法分别定量、定性检测HEK-293细胞中HERG钾通道蛋白（以下简称HERG蛋白）表达。结果低浓度木兰花碱对HERG蛋白表达无明显影响；高浓度木兰花碱作用后HERG蛋白表达明显受抑。结论高浓度木兰花碱能够抑制HERG蛋白表达，此可能为木兰花碱抗心律失常的作用机制。     

HERG基因转染HEK293细胞及其编码通道电流的记录

目的建立HERG基因在HEK293细胞稳定表达的方法。方法利用Lipofectamine2000将pCDNA3.0-HERG转染进入HEK293细胞,通过G418筛选阳性克隆细胞系,采用免疫荧光细胞化学方法检测该蛋白的表达,用全细胞膜片钳技术测定HERG基因介导的快速激活延迟整流钾电流(Ikr)。结果免疫荧光细胞化学检测证实转染HEK293细胞中HERG通道蛋白的表达,膜片钳全细胞实验记录到Ikr。结论该方法有效地将HERG基因转染进入HEK293细胞,并稳定表达HERG通道蛋白及介导Ikr。     

胃腺癌组织中Snail、E-cadherin蛋白的表达变化及意义

目的观察胃腺癌组织中Snail、E-cadherin蛋白的表达变化,并探讨其意义。方法采用免疫组化SP法检测112例胃腺癌患者肿瘤组织和79例癌旁组织中的Snail、E-cadherin蛋白。结果胃腺癌组织中Snail阳性92例（82.1%）,E-cadherin阳性38例（33.9%）,癌旁组织中分别为28例（35.4%）、79例（100%）,胃腺癌组织中Snail、E-cadherin蛋白阳性表达率相比P均〈0.05。胃腺癌组织中Snail的表达与肿瘤浸润深度、分化类型、是否有淋巴结转移以及远处转移相关（P均〈0.05）。E-cadherin的表达与肿瘤浸润深度、分化类型、是否有淋巴结转移、远处转移以及临床分期相关（P均〈0.05）。Snail蛋白和E-cadherin蛋白在胃腺癌组织中的表达呈明显负相关（r=-0.212,P〈0.05）。结论胃腺癌组织中Snail蛋白表达上调,E-cadherin蛋白表达下调。联合检测Snail、E-cadherin蛋白可以作为预测胃癌恶性程度的指标     

胃癌组织中Ptc蛋白的表达变化及意义

目的观察胃癌组织中Ptc蛋白的的表达情况，并探讨其与胃癌分化和转移的关系。方法采用West—ern—Blot法检测15例胃癌患者肿瘤和癌旁组织中的Ptc蛋白。采用免疫组化SP法检测45例胃癌患者肿瘤组织标本中的Ptc蛋白，并分析其与胃癌临床病理参数的关系。结果胃癌组织中Ptc蛋白表达量为0．375±0．117，低于癌旁组织的0．697±0．158，P〈0．05。胃癌组织中Ptc的表达水平与肿瘤组织分化程度、临床分期和远处转移有相关性（P均〈0．05）。结论胃癌组织Ptc蛋白表达降低，其与胃癌分化与转移程度密切相关。     

胃腺癌组织中PINCH、COX-2蛋白的表达变化及意义

目的观察胃腺癌组织中PINCH蛋白、环氧合酶（COX）-2蛋白的表达变化,并探讨其临床意义。方法采用免疫化SP法检测30例正常胃黏膜组织和73例胃腺癌组织中的PINCH、COX-2蛋白。结果胃腺癌组织中PINCH、COX-2蛋白阳性表达率分别为75.34%、76.71%,明显高于正常胃黏膜组织的43.30%、40.00%,P均〈0.05。胃腺癌组织中PINCH、COX-2阳性表达与淋巴结转移有关（P均〈0.05）。胃腺癌组织中PINCH、COX-2的表达呈正相关性（r=0.587,P〈0.05）。结论胃腺癌组织中PINCH、COX-2高表达,其可能参与了胃腺癌的发生和转移。     

兔肥厚心肌慢反应延迟整流钾通道表达的变化

目的:慢反应延迟整流钾通道(IKs)是心肌细胞复极的重要组成部分,本实验观察左心室肥厚对心外膜下心肌(Epi)和心内膜下心肌(Endo)IKs的mRNA表达水平变化。方法:家兔16只随机分为假手术组和心肌肥厚组。心肌肥厚组通过部分结扎腹主动脉的方法造成兔压力负荷性心肌肥厚模型,假手术组只暴露腹主动脉而不行缩窄术。应用RT-PCR技术检测IKs通道基因KvLQT1(α亚单位)和minK(β亚单位)的mRNA表达。结果:假手术组EpiIKs通道α亚单位基因KvLQT1为Endo的2.5倍,EpiIKs通道β亚单位基因minK为Endo的3.3倍。与假手术组相比,心肌肥厚组Epi和EndoIKs通道α亚单位基因KvLQT1表达分别降低40%和25%,心肌肥厚组Epi和EndoIKs通道β亚单位基因minK表达分别降低50%和33%。结论:IKs通道基因KvLQT1和minK的mRNA表达存在跨室壁的差异。心肌肥厚可造成Epi和EndoIKs的mRNA表达不均一的下降。     

胃癌组织中DMBT1蛋白的表达变化及意义

目的 观察胃癌组织中DMBT1蛋白的表达变化,并探讨其在胃癌发生、发展中的作用.方法 采用免疫组化法检测50例人胃癌组织及其相应癌旁正常胃黏膜组织中的DMBT1蛋白.结果 胃癌组织中DMBT1蛋白表达明显低于癌旁正常组织(P＜0.01);低、未分化癌组织中DMBT1蛋白表达明显低于高、中分化癌,Ⅲ～Ⅳ期明显低于Ⅰ～Ⅱ期,伴淋巴结转移者明显低于无淋巴结转移者(P均＜0.05).结论 胃癌组织中DMBT1表达变化与胃癌分化程度、TNM分期及淋巴结转移有关,DMBT1可能参与胃癌的浸润、转移及恶性转化.     

胃癌组织中Runx3、p21蛋白的表达变化及意义

目的观察胃癌组织中Runx3、p21蛋白的表达变化,并探讨其意义。方法采用免疫组化二步法检测66例胃癌（观察组）和30例正常胃黏膜（对照组）组织中的Runx3、p21。结果对照组24例（80%）Runx3蛋白表达阳性,17例（56.7%）p21蛋白表达阳性;观察组分别为30例（45.5%）、22例（33.3%）。两组Runx3、p21蛋白阳性表达率相比P均〈0.05。观察组Runx3、p21蛋白阳性表达率与胃癌分化程度、浸润深度、淋巴结远转移有关（P均〈0.05）。胃癌组织中Runx3、p21蛋白表达呈正相关（r=0.452,P〈0.05）。结论胃癌组织中Runx3、p21蛋白表达下降。Runx3可能通过影响p21蛋白的表达影响胃癌的发生发展。     

关附庚素对HERG钾通道电流及通道动力学的影响

目的 用膜片钳全细胞记录法评价关附庚素（GFG）对HERG基因表达的快速激活延迟整流钾通道电流（IKr）及通道动力学的影响。方法 使用脂质体介导的瞬时转染法把野生型HERG基因转染入人胚肾细胞（HEK293）,采用标准的全细胞膜片钳技术记录IKr通道电流,观察不同浓度（3、12.5、50、200 和1000 Umol/L）的GFG对IKr和通道动力学的作用。 结果GFG对IKr的尾电流（Itail）具有浓度依赖性抑制作用,半数最大抑制浓度为17.9滋mol/L,Hill常数为0.75。 50 Umol/L GFG使得刺激电流（Istep）和Itail的最大峰值电位前移,呈电压依赖性,但不改变激活电位。 50 Umol/L GFG对IKr具有时间依赖性阻断效应,时间延长抑制效果增强。 50 Umol/L GFG使激活曲线左移,半数激活电压从（-2.15±1.94） mV改变为（-9. 22±2.43） mV（n = 5,P〈0. 05）,但对曲线的斜率因子k无显著影响;50 Umol/L GFG使得稳态失活曲线左移,半数失活电压从（-56.9±1.2） mV改变为（-64.2±1.5） mV（n=6,P〈0. 05）,但不影响曲线斜率因子k。50 Umol/L GFG加快通道的失活,在-60 mV以上能加快通道的失活后恢复时间,并可显著减慢通道的去激活时间。 结论 GFG对HERG基因表达的IKr通道电流具有浓度、电压和时间依赖性阻断作用,主要是通过结合通道的激活态和失活态发挥抑制效应。     

西沙比利对HERG基因表达的快速激活延迟整流钾通道电流及蛋白的影响

目的评价西沙比利对转染HERG基因表达的快速激活延迟整流钾电流(IKr)和蛋白的影响,探讨其致心律失常的机制。方法使用脂质体介导的瞬时转染法把野生型HERG基因转染进人胚肾细胞(HEK293),采用全细胞膜片钳技术评价西沙比利对IKr通道电流和动力学的影响;使用G418筛选出稳定转染HERG的细胞,并用西沙比利进行干预,应用免疫蛋白印迹技术评价药物对蛋白的影响。结果西沙比利对IKr通道的刺激电流(IHERG)和尾电流(Itail)具有浓度和电压依赖性抑制作用,半数最大抑制浓度分别14.5和3.9nmol/L。西沙比利使IHERG和Itail的最大峰值电位前移,但不改变激活电位;使激活曲线左移并加快通道的失活,但不改变通道失活后的恢复时间;西沙比利对转染后的HEK293细胞上的IKr通道蛋白无明显抑制。结论西沙比利通过作用于通道的失活态抑制HERG钾电流,但不影响HERG通道蛋白的表达。     

Fas基因转导胃癌细胞的表达

目的将Ｆａｓ基因导入胃癌细胞，建立Ｆａｓ基因表达株，并比较转导前后ｍＲＮＡ与蛋白的表达水平．方法采用分子克隆技术将Ｆａｓ基因插入真核表达载体ｐＢＫＣＭＶ的多克隆克隆位点之间，以脂质体介导法将目的基因导入受体细胞ＳＧＣ７９０１，用Ｇ４１８筛选克隆细胞；以Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测Ｆａｓ基因的表达．结果成功地构建了真核表达载体ｐＢＫＦａｓｃＤＮＡ．转导细胞后，从１×１０５细胞中筛选出１００个抗性克隆以上，转导率大于０１％，随机挑选２个克隆扩增培养，获得了１株稳定的抗性细胞，从而有效地建立了Ｆａｓ基因表达株（ＳＧＣ７９０１Ｆａｓｃｅｌｓ）．杂交结果表明，转导株与非转导株均有ｃＤＮＡ的表达，但转导株在ｍＲＮＡ及蛋白水平的表达均明显高于非转导株．结论Ｆａｓ基因在胃癌细胞中处于低表达状态；通过真核表达载体的介导，Ｆａｓ基因导入胃癌细胞后，能有效地表达ＦａｓｍＲＮＡ及其蛋白．     

肿瘤易感基因101在胃癌耐药细胞中的表达及作用

目的 探讨肿瘤易感基因(TSG)101在多药耐药胃癌细胞中的表达和作用。方法 应用半定量RT-PCR和Western blot方法观察TSG101在胃癌细胞SGC7901及其长春新碱(VCR)耐药亚系SGC7901／VCR中的表达。将TSG101真核表达载体转染SGC7901细胞，通过Western blot方法鉴定转染细胞TSG101蛋白的表达。用流式细胞仪检测细胞周期的变化和细胞内阿霉素(ADR)的平均荧光强度。用MTT法检测细胞生长曲线和对VCR、ADR的药敏性。结果 胃癌耐药细胞SGC7901／VCR与亲本细胞SGC7901相比，TSG101的表达明显增高。SGC7901细胞转染TSG101真核表达载体后其表达较对照细胞明显增高，G1期细胞比例减少而S期比例增加，细胞增殖加快，且对VCR、ADR的敏感性减低，细胞内阿霉素蓄积和潴留减少。结论 TSG101真核表达载体转染SGC7901后其耐药性明显增强，提示TSG101在胃癌多药耐药中发挥了一定的作用。     

Expression, deleton and mutation of p16 gene in human gastric cancer

AIM To investigate the relationship between the expression of p16 gene and the gastric carcinogenesis,depth of invasion and lymph node metastases, and to evaluate the deletion and mutation of exon 2 in p16 gene in gastric carcinoma. METHODS The expression of P16 protein was examined by streptavidin-peroxidase conjugated method (S-P); the deletion and mutation of p16 gene were respectively examined by polymerase chain reaction (PCR) and polymerase chain reaction single-strand conformation polymorphism analysis (PCR-SSCP) in gastric carcinoma. RESULTS Expression of P16 protein was detected in 96.25% (77/80) of the normal gastric mucosa, in 92.00% (45/50) of the dysplastic gastric mucosa and in 47.54% (58/122) of the gastric carcinoma. The positive rate of P16 protein expression in gastric carcinoma was significantly lower than that in normal gastric mucosa and dysplastic gastric mucosa (P＜0.05). The positive rate of P16 protein expression in mucoid carcinoma 10.00% (1/ 10) was significantly lower than that in poorly differentiated carcinoma 51.22% ( 21/ 41 ),undifferentiated carcinoma 57.69% (15/26) and signet ring cell carcinoma 62.50% (10/ 16) (P＜0.05). The positive rate of p16 protein in 30 cases paired primary and lymph node metastatic gastric carcinoma: There was 46.67% (14/30) in primary gastric carcinoma, 16.67% (5/30) in lymph node metastatic gastric carcinoma. The positive rate of lymph node metastatic carcinoma was significantly lower than that of primary carcinoma (P＜0.05). There was of p16 gene mutation in exon 2, but 5 cases displayed deletion of p16 gene in exon 2 in the 25 primary gastric carcinomas. CONCLUSIONS The expression loss of P16 protein related to the gastric carcinogenesis, gastric carcinoma histopathological subtypes and lymph metastasis. The mutation of p16 gene in exon 2 may not be involved in gastric carcinogenesis. But the deletion of p16 gene in exon 2 may be involved in gastric carcinogenesis.     

胃癌组织中Survivin、PTEN、P53基因的表达及意义

目的　探讨凋亡抑制基因 Survivin和抑癌基因 PTEN、P53在胃癌组织中的表达及其与胃癌发生发展、临床病理特征之间的关系。方法　应用免疫组织化学链霉亲和素方法 (SABC) ,检测 Survivin、PTEN和 P53基因在 6 5例胃癌、2 6例不典型增生胃黏膜、10例浅表性胃炎和 30例正常胃黏膜组织中的表达。结果　胃癌组织中Survivin、PTEN、突变型 P53基因的阳性表达率分别为 70 %、4 8%、6 5 % ,不典型增生胃黏膜中分别为 4 2 %、85 %、31% ,Survivin和突变型 P53基因在正常胃黏膜和浅表性胃炎组织中不表达 ,PTEN基因在正常胃黏膜和浅表性胃炎组织中全部呈阳性表达。胃癌组织中 PTEN基因的表达与正常胃黏膜组织中的表达差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ,胃癌组织、不典型增生胃黏膜以及正常胃黏膜中 Survivin和突变型 P53基因的表达差异均有显著性 (P<0 .0 5 )。随临床分期增加、胃癌分化程度降低、浸润深度加深、淋巴结的转移 ,突变型 P53基因的阳性表达率逐渐上升 (P<0 .0 5 ) ,PTEN基因的阳性表达率逐渐降低 (P<0 .0 5 )。在胃癌组织中 Survivin与突变型 P53基因的表达呈正相关 (P<0 .0 5 ) ,与 PTEN基因的表达呈负相关 (P<0 .0 5 ) ,PTEN基因与突变型 P53基因的表达呈负相关 (P<0 .0 5 )。结论　 Survivin、PTEN和 P53     

胃癌细胞和胃癌多药耐药细胞中P-gp及GST的表达

目的比较胃腺癌SGC-7901细胞和多药耐药细胞SGC-7901/ADR中P-gp和GST表达的差异,进一步探讨胃癌多药耐药机制。方法常规培养人胃癌SGC-7901细胞和多药耐药细胞SGC-7901/ADR。制备细胞爬片,免疫细胞化学方法和灰度测定检测SGC-7901细胞和SGC-7901/ADR中P-gp及GST的表达。结果免疫细胞化学SP法染色后,P-gp蛋白阳性者在胃癌细胞的胞浆和胞膜中可见棕黄色颗粒沉着,GST在胃癌细胞的胞浆中可见棕黄色颗粒。P-gp、GST在胃癌SGC-7901细胞中呈中度表达,在胃癌SGC-7901/ADR细胞中呈高表达,两者比较有显著性差异（P〈0.05）。免疫细胞化学灰度定量测定显示同样的结果。结论 P-gp、GST在胃癌SGC-7901/ADR细胞中的表达较SGC-7901细胞明显增加,可能是胃癌多药耐药的原因之一。     

PUMA、caspase-3蛋白在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的通过检测PUMA、caspase-3蛋白在胃癌组织和癌旁正常组织中的表达水平,从而探讨两者在胃癌发生、发展中的作用及其临床意义。方法针对40例胃癌组织标本及30例癌旁正常组织标本,通过免疫组化方法对其PUMA、caspase-3蛋白的表达进行测定。结果 PUMA蛋白在胃癌组织中的表达阳性率为22.5%(9/40),在癌旁正常胃组织中表达阳性率为66.7%(20/30),两者比较差异具有统计学意义;caspase-3在胃癌组织中的表达阳性率为25.0%(10/40),在癌旁正常胃组织中表达阳性率为70.0%(21/30),两者比较差异具有统计学意义。PUMA的表达与临床病理分期、肿瘤病理分化程度、是否伴有淋巴结转移有关,PUMA与caspase-3蛋白在胃癌组织中表达呈正相关。结论 PUMA与caspase-3蛋白在胃癌的发生发展中起重要作用,可能会成为胃癌的分子标记物或胃癌治疗的新分子靶点。