胆道闭锁肝内外胆系免疫炎性反应与临床预后相关分析

目的 测定胆道闭锁(BA)肝组织和肝门纤维块中白细胞分化抗原(CD68)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和细胞间粘附因子-1(ICAM-1)的含量,分析肝内外组织免疫炎性改变与临床预后相关性,旨在了解其在发病过程的重要性.方法 取2005年7月至2006年5月在本院行BA Kasai根治术的21例患儿的肝门纤维块及肝脏组织标本;对照组为5例胆汁淤积综合征患儿和10例胆总管囊肿患儿的肝脏组织标本.采用免疫组化染色法进行CD68、MCP-1和ICAM-1染色.选用LEICA DM研究级生物显微镜,QWIN软件环境下测量抗体阳性细胞面积百分比和平均光密度.随访19例BA患儿术后3个月直接胆红素下降比率,与肝组织CD68、MCP-1和ICAM-1表达量进行相关性分析.结果 BA组肝组织CD68、MCP-1、ICAM-1表达较对照组明显增强,但肝门纤维块几乎没有表达;CD68、MCP-1、ICAM-1阳性表达量和表达强度明显高于对照组,其中ICAM-1最为显著;除了MCP-1外,CD68、ICAM-1在肝脏表达的表达量与表达强度呈线性正相关,相关系数分别是r=0.838,P=0.0002;r=0.565,P=0.035;BA组肝组织CD68阳性表达面积百分比与术后3个月直接胆红素下降率呈负相关(r=-0.645,P=0.023).结论 CD68阳性表达是BA免疫炎性反应过程的一个重要环节,MCP-1和ICAM-1在这一环节中起了一定的作用;肝组织CD68阳性表达可能提示预后不佳.     

胆道闭锁肝内外胆系组织病理形态学分析

目的 通过胆道闭锁（BA）肝门纤维块、肝脏组织的病理及其超微结构观察，对肝门成纤维细胞分化程度进行评分，并与肝纤维化分级进行相关分析。方法 选取BA患儿作为研究对象，术中取肝门纤维块及肝脏组织标本；研究同期选取疑似BA经术中胆道造影除外BA，诊断为胆汁淤积综合征和先天性胆管扩张症患儿作为对照组，留取肝脏组织标本。在光镜和电镜下观察标本的病理改变，以及肝细胞、毛细胆管和肝门成纤维细胞的超微结构。采用SPSS 14.0软件，半定量比较BA与对照组肝脏纤维化的差异，检验肝门纤维块成纤维细胞活跃程度与肝纤维化分级的相关性。结果 2005年7月至2006年5月复旦大学附属儿科医院收治的21例BA Kasai根治术病例，手术平均年龄（66±20）d；对照组为5例胆汁淤积综合征和10例先天性胆管扩张症患儿。BA组肝组织病理改变主要是肝内门脉区胆管炎症及纤维化形成，肝纤维化程度明显高于同年龄胆汁淤积综合征和先天性胆管扩张症患儿；肝门纤维块毛细胆管增生，部分管腔闭锁、狭窄，腔内炎细胞浸润及部分淤胆，大量间质成分增生；电镜下肝门成纤维细胞活跃、肝脏毛细胆管上皮微绒毛缺失、肝细胞及肝血窦内电子致密物质增多及部分毛细胆管扩张；肝门成纤维细胞分化程度与肝组织纤维化程度相关（P=0.04）。结论 BA肝组织病理改变主要是肝内门脉区胆管炎症及严重纤维化形成；超微结构改变提示肝门部成纤维细胞活跃，其分化程度与肝纤维化程度相关。     

HIF-1α和VEGF在胆道闭锁患儿肝组织中的表达及意义

目的研究胆道闭锁(biliary atresia,BA)患儿肝组织中缺氧诱导因子(HIF-1α)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达及与血管生成和纤维化的关系,探讨其在BA发病中可能的作用机制。方法选取胆道闭锁患儿(BA组)肝组织15例、胆管扩张症患儿(CBD组)肝组织10例、BA发展为肝硬化接受肝移植患儿(LT组)肝组织10例。HE、Vimentin染色观察各标本的组织学改变并判定纤维化程度,CD34染色标记血管计数微血管密度(MVD),免疫组化法检测HIF-1α和VEGF在各组肝组织中的表达。结果 CBD组、BA组、LT组微血管密度分别为16.8±1.9、23.2±3.8、25.9±2.1。HIF-1α在肝细胞胞浆和部分胞核中表达,BA组HIF1-α的光密度(0.160 7±0.029 7)高于CBD组(0.150 4±0.146 3)和LT组(0.151 3±0.005 9),P0.05。VEGF在肝细胞、胆管、动脉壁的表达,BA组VEGF的光密度(0.162 9±0.012 9)高于CBD组(0.132 2±0.025 7)和LT组(0.146 2±0.015 2),P0.05。结论 HIF-1α、VEGF可能通过参与BA中的血管生成过程,促进肝纤维化。     

胆道闭锁汇管区炎性细胞浸润及其细胞因子的表达研究

目的 了解胆道闭锁(biliary atresia,BA)肝内汇管区炎症反应类型及细胞因子表达和具体作用机制.方法 应用免疫组织化学、免疫荧光和免疫印迹的方法对18例胆道闭锁患儿与15例先天性胆管扩张症(congenital biliary dilatation ,CBD)患儿肝脏标本进行对比研究.结果 BA患儿肝内汇管区大量CD4+、CD8+、CD68+细胞浸润(与CBD组相比均P＜0.01).肝内Th1通路相关细胞因子IFN-γ(干扰素-γ)、TNF-α(肿瘤坏死因子-α)表达,而CBD组为阴性.Th2相关细胞因子IL-4(白介素-4)、IL-5(白介素-5)及CD8+相关细胞因子粒酶、穿孔素表达在BA组与CBD组均为阴性.BA组肝内iNOS(诱导型一氧化氮合酶)检测阳性,胆管上皮Fas(自杀相关因子)表达(0.60±0.13)与CBD组(0.29±0.16)相比明显上调(P＜0.01),上皮细胞凋亡指数(49±13)%远大于CBD组(22±16)%(P＜0.01).结论 BA肝内汇管区炎症反应强烈,是由CD4+细胞Th1亚型及其相关细胞因子所介导的原发特异性炎症.巨噬细胞参与的Th1炎症通路可能在BA胆管上皮进行性损伤中起着关键作用.     

热休克蛋白70 在胆道闭锁肝组织纤维化中作用及对预后影响

目的探讨热休克蛋白70在胆道闭锁(BA)肝组织纤维化中的作用及对预后的影响。方法选取择期行Kasai术治疗的BA患儿46例、胆总管囊肿患儿30例和门静脉海绵样变患儿17例;免疫组化染色检测肝组织中HSP 70蛋白表达,利用天狼星红-饱和苦味酸染色液检测BA患儿肝组织纤维化,双重染色法检测BA患儿不同纤维化肝组织中HSP 70蛋白表达,所有BA患儿术后均获得随访。结果 BA、胆总管囊肿以及静脉海绵样变患儿三组,HSP 70蛋白高表达比例的差异有统计学意义(χ~2=7.99,P=0.018),以BA组的HSP 70蛋白高表达比例为最高。等级相关分析显示,肝组织中HSP70蛋白表达强度与肝纤维化程度呈正相关(r=0.861,P0.001);46例BA患儿中,死亡15例,生存分析显示,轻度BA患儿术后生存率82.4%,中位生存时间(34.6±2.3)月;中重度患儿术后生存率58.6%,中位生存时间(25.5±2.8)月;Log-Rank检验显示,两组生存函数的差异有统计学意义(χ~2=5.27,P=0.012)。BA患儿中,HSP 70蛋白低表达者的生存率85.0%,术后中位生存时间(34.0±2.6)月,HSP70蛋白高表达者生存率53.8%,术后中位生存时间(18.3±2.2)月;Log-Rank检验显示,两组生存函数差异有统计学意义(χ~2=4.77,P=0.029)。结论 BA患儿肝组织中HSP70蛋白呈高表达,且与肝组织纤维化程度呈正相关,推测其可能参与了肝纤维化进程,HSP70表达上调往往预示患儿预后不良。     

纤维连接蛋白1经PI3K/Akt途径调控肝星状细胞活化影响胆道闭锁肝纤维化

目的研究纤维连接蛋白1(fibronectin 1, FN1)在胆道闭锁(biliary atresia, BA)肝纤维化进程中的作用, 阐述其作用机制与调控细胞凋亡肌醇磷脂-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路相关因子的关系。方法利用基因数据库数据对FN1在肝纤维化中的作用进行生物信息学分析。收集2017年4月至2020年10月在天津市儿童医院普外科手术时留取的患儿肝组织标本31例, 其中因非肝胆疾病导致死亡的婴儿肝脏组织样本3例、先天性胆总管扩张症(congenital biliary dilatation, CBD)5例和BA 23例;根据日本Ohkuma’’s肝纤维化分级标准对所有肝组织样本进行分级处理, 按照纤维化程度又将BA分两组:轻度(Ⅰ～Ⅱ级)、重度(Ⅲ～Ⅳ级);应用免疫组织化学检测FN1、PI3K、p-Akt和肝星状细胞活化标志物α-SMA在肝组织中的表达情况。分析以上蛋白与肝纤维化分级的相关性, 利用qRT-PCR检测肝组织FN1 mRNA的表达水平并进行统计学分析。结果生物信息分析结果显示FN1在肝脏中表达量较高, 是调控小鼠肝纤维化的核心基因之一。FN1...     

钙黏蛋白-11在胆道闭锁患儿肝组织中的表达及意义

目的分析钙黏蛋白-11(cadherin-11,CDH11)在胆道闭锁(biliary atresia,BA)患儿肝组织内的表达及意义。方法选取2014年11月至2016年12月就诊的BA和胆总管囊肿(CC)患儿作为研究对象。分析患儿肝脏CDH11与肝纤维化标志基因和血清肝功能指标的相关性。结果 BA组50例,女25例、男25例,中位年龄59.5(46.8～71.8)天;CC组8例,女5例、男3例,中位年龄70.0(49.0～125.3)天。BA组患儿肝脏中CDH11 mRNA表达水平显著高于CC组,差异有统计学意义(P<0.01)。BA肝内CDH11 mRNA表达水平与转化生长因子β1(TGFB1)、转化生长因子β2(TGFB2)、角蛋白19(KRT19)、肌动蛋白α2(ACTA2)、Ⅰ型胶原α1链(COL1A1)和Ⅳ型胶原α1链(COL4A1) mRNA表达水平呈显著正相关(r=0.36～0.73,P均<0.01)。与轻度肝纤维化BA患儿相比,CDH11表达水平在重度肝纤维化BA患儿肝内显著升高(P<0.01)。BA肝内CDH11 mRNA表达水平与血清γ-谷氨酰...     

IL-17在胆道闭锁患儿肝组织中的表达及意义

目的：研究胆道闭锁（Biliary Atresia BA）患者肝组织中白介素-17（IL-17）的表达水平及其与肝纤维化程度的关系。探讨其在BA发病和肝纤维变中的意义和可能的免疫作用机制。方法选用40例BA患者肝组织标本和10例非肝脏疾病死亡婴儿尸检肝组织标本,采用免疫组织化学法对肝组织进行IL-17染色,观察IL-17在两组肝组织中的表达。结果 BA组肝组织中IL-17表达水平平均秩次为30．28,对照组肝组织中IL-17表达水平平均秩次为6．4,经秩和检验,Uc＝4．773,P＜0.01,差异有显著统计学意义;BA组肝组织中IL-17表达水平与肝纤维化程度呈正相关（r＝0．8714,P＜0.01）。结论 IL-17在胆道闭锁发病过程及肝纤维化的发生发展中发挥了一定的作用。     

胆道闭锁肝脏组织MMP-2、TGF-β1的表达及意义

目的 研究胆道闭锁患儿肝脏组织中MMP-2、TGF-β1的表达,探讨其与胆道闭锁患儿肝纤维化的关系.方法 利用免疫组化法(SP法)检测33例胆道闭锁患儿肝脏组织中MMP-2、TGF-β1蛋白的表达,通过图像分析技术进行定量研究.结果 胆道闭锁患儿肝组织中MMP-2、TGF-β1蛋白均有不同程度的表达,以肝细胞胞浆、胞膜表达最为明显.MMP-2、TGF-β1蛋白在肝组织中的阳性表达随肝纤维化程度的加重而增强,呈正相关(前者r=0.5063,P＜0.05;后者r=0.6179,P＜0.05).MMP-2、TGF-β1在胆道闭锁患儿肝组织中的表达强度明显高于对照组(P＜0.01),MMP-2与TGF-β1的表达有高度相关性(r=0.9200,P＜0.01).结论 MMP-2、TGF-β1与胆道闭锁肝纤维化的发生、发展密切相关;抑制MMP-2、TGF-β1的表达有望阻止胆道闭锁患儿肝纤维化进程.     

胆道闭锁肝内iNOS及其调控因子异常表达与进行性肝损伤的相关性

目的 研究胆道闭锁(BA)患儿肝内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及其上下游调控因子表达情况,并探讨其与BA进行性肝损伤发生的关系.方法 应用免疫组织化学染色法对2002年10月至2007年3月在本院行Kasai手术的38例BA患儿与16例对照儿童肝组织iNOS表达情况进行研究;应用ELASA法对BA患儿和对照组外周血总一氧化氮(NO)代谢产物浓度进行测定;应用TUNEL法对BA患儿和对照组肝内胆管上皮凋亡指数进行测定;应用免疫印记法对BA患儿和对照组肝组织NF-κB表达进行半定量分析.结果 iNOS在BA患儿肝组织异常高表达,强度为0.30±0.08,而在对照组肝组织不表达.BA患儿外周血总NO代谢产物浓度为(90.40±12.46)mol/L,明显高于对照组的(63.67±5.78)μmol/L,且BA组总NO代谢产物浓度与血清ALT水平[(152.76±29.59)U/L]呈强正相关(r=0.97).BA组肝内胆管上皮凋亡指数(54.00±11.67)%远高于正常对照组(20.72±5.63)%,且与肝组织iNOS表达强度呈强正相关(r=0.99).NF-κB出在BA患儿肝组织中的表达(0.74±0.06)明显高于正常对照组(0.22±0.03),且与iNOS表达强度呈强正相关(r=0.97).结论 iNOS异常高表达在BA患儿进行性肝损伤中发挥重要作用,该作用是由iNOS及其上下游调控因子NF-κB、NO共同作用所实现.     

胆道闭锁肝胆病理改变与预后的关系研究

目的 通过研究BA患儿术中肝活检和肝门纤维块的病理表现,探讨肝脏和纤维块病理表现与BA预后的关系.方法 2009年4月至2010年9月,61例BA患儿在我院行Kasai手术治疗,术中取肝活检和肝门纤维块.病理切片观察肝小叶结构、纤维化情况,将所有BA患儿根据肝病理诊断是否为胆汁性肝硬化分为肝硬化组和非肝硬化组.根据镜下观察到纤维块中小胆管增生的程度分为少许小胆管增生组和较多小胆管增生组.术后随访3～17个月.结果 病理诊断为肝硬化者术时年龄较大、术中门脉测压较高、术后肝功能恢复情况较差.肝硬化组术后3个月黄疸消退率明显较非肝硬化组低(X2=4.020,P=0.045),术后1年病死率明显较非肝硬化组高(P=0.046).肝硬化者纤维块内小胆管增生程度较重(x2=4.244,P=0.039);纤维块内小胆管增生越严重,术后3个月黄疸消退率越低(P=0.045).结论 肝病理检查是较早的评估BA患儿预后的可靠方法,肝硬化是影响BA预后的重要因素;纤维块小胆管增生程度与BA患儿的短期预后有相关关系,但其是否与BA的远期预后有关系还需要进一步的研究.

Abstract：

Objective To investigate the correlation between the pathologic changes of liver and fibrous portal tissue and prognosis of biliary atresia (BA). Methods Between April 2009 and September 2010, the Kasai's procedures were carried out on 61 patients with BA. Specimens of the liver tissue and fibrous portal tissue were collected in operation. The pathology of the liver tissue and fibrous portal tissue was studied. Based on the severity of hepatic cirrhosis, the patients were grouped into two groups: cirrhosis group and no cirrhosis group. According to whether or not there was obvious bile ductular proliferation in fibrous portal tissue, the hepatic cirrhosis patients were further grouped into 2 groups. All of patients with BA were followed up for 3 to 17 months. Results The patients of hepatic cirrhosis group were older at operation, and had higher portal pressure and poorer prognosis. The 3 months post-operative jaundice clearance rate of cirrhosis patients was significantly lower than that of no cirrhosis patients (39. 5% vs 83. 3%,X2 = 4. 020,P= 0. 045). The 1-year post-operative mortality of the cirrhosis patients was significantly higher than that of no cirrhosis patients (53. 3% vs 0,P= 0. 046). The patients of the cirrhosis group had more bile ductular proliferation (60% vs 0, X2 = 4. 244, P = 0. 039). The more severe bile ductal proliferation in the cirrhosis patients was, the lower jaundice clearance rate they would have (76. 5% vs 38. 5%,P=0. 045). Conclusions The pathologic findings of liver can be used to predict the prognosis of the BA patients after Kasai's procedure. The patients with severe hepatic cirrhosis and bile ductal proliferation have poor prognosis.     

哮喘大鼠肺组织CD44和α-平滑肌肌动蛋白mRNA的表达

目的探讨不同时段哮喘大鼠肺组织CD44和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA的表达,了解其在哮喘发病中的作用机制。方法以卵蛋白致敏制备大鼠哮喘模型.分别在激发后1、2周取肺组织.RT-PCR检测肺组织CD44与α-SMAmRNA的表达,收集肺泡灌洗液(BALF)行细胞分类计数.肺组织石蜡切片行HE染色。结果哮喘大鼠BALF中炎性细胞明显增多(P<0.05).CD44与α-SMA在正常大鼠肺组织少量表达,在激发哮喘后1周肺组织CD44与α-SMAmRNA表达均显著升高(P均<0.05).2周后升高更明显(P<0.01)。CD44和α-SMA的表达呈正相关.CD44mRNA水平与BALF中淋巴细胞和嗜酸性粒细胞的百分比呈显著正相关。结论肺组织CD44与α-SMA在转录水平的过量表达与哮喘的发生发展密切相关,二者存在相互作用.并在早期开始参与哮喘的发病。CD44与嗜酸性粒细胞、淋巴细胞向肺部炎症组织趋化浸润密切相关。     

EpCAM阳性的不成熟胆道上皮细胞促进胆道闭锁肝纤维化的研究

目的 分析在胆道闭锁患儿肝组织中增生的EpCAM阳性的不成熟胆道上皮细胞与肝纤维化形成的关系,从而探讨不成熟的胆道上皮细胞在胆道闭锁病程进展中的作用.方法 选取2012年1月至2015年6月于我院就治的患儿肝石蜡标本进行连续切片,其中胆道闭锁(biliary atresia,BA) 65例,胆总管囊肿(choledochal cyst,CC) 27例,门静脉海绵样病变(cavernous transformation of portal vein,CTPV) 15例,应用CK19、EpCAM免疫组织化学染色及饱和苦味酸天狼星红染色方法,分析肝组织中增生的胆道上皮细胞的成熟性、EpCAM阳性的不成熟胆道上皮细胞与肝纤维化在位置上的关系,并应用Image-pro对400倍视野下肝组织切片中EpCAM阳性细胞进行计数,观察其增生数量与肝纤维化分级间的关系.结果 在CTPV组可见由CK19阳性的胆道上皮细胞组成的正常成熟的胆管,未见明显增生的胆道上皮细胞.在BA组及有纤维化的CC组可见胆道上皮细胞增生明显,邻近肝纤维化部位的胆道上皮细胞主要为EpCAM阳性的不成熟胆道上皮细胞,与肝纤维化存在位置上的关联.在胆道闭锁肝组织中随着肝纤维化的程度越高,EpCAM阳性的不成熟胆道上皮细胞的数量越多,且不同肝纤维化分期中EpCAM阳性细胞增生的数量存在显著差异(r=0.56,P＜0.001).结论 在小儿胆道闭锁疾病中,EpCAM阳性的不成熟胆道上皮细胞在短时间内迅速增生,可能是胆道闭锁患儿肝纤维化进展迅速的主要原因.     

CCL25/CCR9在胆道闭锁肝纤维化中的表达及临床意义北大核心CSCD

目的探讨CC趋化因子受体9(CC chemokine receptor 9,CCR9)及其趋化因子配体25(CC chemokine ligand 25,CCL25)在胆道闭锁(biliary atresia,BA)患儿肝纤维化中的表达并评价其临床价值。方法回顾性分析2019年10月至2022年8月在天津市儿童医院普外科进行肝脏手术治疗的35例患儿临床资料,将诊断为胆总管囊肿(choledochal cyst,CC)的8例患儿作为对照组,其余27例BA患儿为BA组。所有患儿手术均留取肝组织样本,同时收集患儿血清样本,采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清CCL25水平,并绘制受试者操作特征(receiver operator characteristic,ROC)曲线,结合临床生化指标进一步分析血清CCL25对BA患儿的辅助诊断价值。采用免疫组织化学染色和实时荧光定量聚合酶链反应(real time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测肝组织中CCR9的表达水平,并采用Spearman相关分析法分析其与BA患儿肝组织纤维化分级的相关性;分析CCR9对BA患儿肝脏纤维化程度的评估价值。计数资料组间比较用χ^(2)检验或Fisher精确检验;不符合正态分布的计量资料组间比较采用Mann-Whitney U检验和Wilcoxon检验。结果ELISA结果显示,BA组血清CCL25水平310.03(262.03,338.87)pg/ml明显高于CC组244.46(222.70,260.45)pg/ml,差异有统计学意义(P=0.004)。ROC曲线显示,血清CCL25水平诊断BA患儿的曲线下面积为0.829(95%CI:0.683~0.975),临界值为267.12 pg/ml。血清CCL25水平、GGT、TBA联合诊断BA的曲线下面积为0.958。免疫组织化学和qRT-PCR结果显示,BA患儿肝组织中CCR9蛋白表达量[40.29(29.40,65.12)比15.26(8.04,20.15),P<0.001]、CCR9 mRNA表达量[3.88(1.38,7.95)比0.83(0.07,0.95),P=0.0005]均明显高于CC组。与Ⅰ~Ⅱ级肝纤维化比较,Ⅲ~Ⅳ级肝纤维化的CCR9蛋白表达量[51.08(39.36,73.27)比25.93(19.23,38.00),P=0.0022]、CCR9 mRNA表达量[6.63(2.75,9.45)比1.21(1.04,3.57),P=0.0075]明显提高。BA组患儿的CCR9蛋白表达量、mRNA表达量与肝纤维化分级均呈正相关(rs=0.820、rs=0.804,P<0.001)。结论血清CCL25在辅助诊断BA患儿方面具有潜在的临床价值;CCR9在肝组织中的表达与BA患儿肝纤维化程度密切相关,且随着肝纤维化程度加重而增加。     

HDAC2的表达水平评分与胆道闭锁肝纤维化进展及预后的关系北大核心CSCD

目的探究组蛋白脱乙酰酶(histone deacetylase,HDAC)2在胆道闭锁(biliary atresia,BA)患儿肝组织中表达水平、诊断价值及其与BA肝纤维化进展和预后的关系。方法回顾性分析2019年1月至2021年12月因黄疸在天津市儿童医院普外科行手术治疗的患儿44例,包括BA患儿34例(BA组)和其他胆汁淤积性肝脏疾病10例(DC组)。使用生物信息学分析HDAC中HDAC1~HDAC11在BA中的表达情况。取BA组和DC组患儿肝组织样本,通过免疫组织化学染色和实时荧光定量PCR检测HDAC2在两组患儿肝组织中表达水平,对HDAC2的表达进行评分。使用受试者操作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估HDAC2评分对BA的诊断价值。分析BA患儿HDAC2表达与一般临床资料的关系。所有BA患儿在Kasai术后均进行了随访,记录术后6个月时的黄疸清除率(jaundice clearance rate,JCR)和自体肝生存率(survival with native liver rate,SNL)。采用Cox比例风险回归、Kaplan-Meier法分析HDAC2表达与JCR和SNL的关系。结果生物信息学分析显示,与DC组相比,BA组中HDAC的mRNA表达含量丰富,其中HDAC2差异具有统计学意义(log2FC=0.61,P=0.002)。免疫组织化学染色结果显示,BA组肝组织中HDAC2表达定位于多数肝细胞和胆管上皮细胞的细胞核内,而DC组肝组织内仅少量肝细胞和胆管上皮细胞核有表达。实时荧光定量PCR结果显示,BA组肝组织中HDAC2[(15.58±2.32)比(1.42±0.42),P<0.001]、ACTA2[(2.561±0.328)比(1.150±0.196),P<0.001]和KRT19[(2.324±0.367)比(1.116±0.164),P=0.005]mRNA相对表达量高于DC组。DC组与BA组的HDAC2评分之间差异存在统计学差异[3.0(3.0~5.0)分比8.5(6.0~10.0)分,P<0.001];BA组纤维化分级Ⅰ、Ⅱ级与Ⅲ、Ⅳ级的HDAC2评分之间差异有统计学意义[5.5(5.0~8.0)分比9.0(7.0~10.0)分,P=0.005]。HDAC2评分诊断BA的ROC曲线下面积为0.925(95%CI:0.846~1.000,P<0.001)。HDAC2高表达患儿和低表达患儿的SNL差异有统计学意义(P=0.007)。多变量Cox回归分析显示,Kasai手术日龄较大(HR:3.764,95%CI:1.239~11.428,P=0.019)和HDAC2高表达(HR:4.883,95%CI:1.296~18.392,P=0.019)是BA预后不良独立危险因素。结论HDAC2的表达水平评分具有潜在诊断价值,与BA肝纤维化程度有关;同时其高表达可以提示不良预后,为BA的诊断、预后评估带来新思路。     

JNK2、TIMP-1及Collagen Ⅲ在胆道闭锁肝纤维化中的作用研究

目的研究c-Jun氨基末端激酶2(c-Jun N-terminal kinase,JNK2)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase 1,TIMP-1)及CollagenⅢ在胆道闭锁(BA)肝组织中的表达情况及在肝纤维化进程中的作用。方法选取胆管扩张症肝活检病例10例,为胆扩组;BA肝活检病例15例,为BA组;BA晚期因肝功能衰竭而行肝移植患者自体肝活检10例,为肝移植组。采用HE染色观察并评价肝标本纤维化程度;免疫组化染色检测JNK2、TIMP-1及CollagenⅢ在肝组织中的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测肝组织中JNK2、TIMP-1及CollagenⅢ基因表达情况。结果①HE染色:胆扩组偶可见少许纤维细胞增生;BA组汇管区增宽,纤维组织增生、桥接纤维化现象普遍,可见假小叶形成;肝移植组汇管区明显增宽,纤维组织增生较重,广泛桥接纤维组织形成,假小叶显著。②免疫组化:胆扩组JNK2、TIMP-1及CollagenⅢ表达为弱阳性,BA组及肝移植组JNK2、TIMP-1及CollagenⅢ蛋白均在肝细胞、汇管区胆管上皮细胞及血管内皮细胞胞质中阳性表达。(3)半定量分析:三组JNK2(0.122±0.008、0.182±0.017和0.198±0.033),TIMP-1(0.123±0.009、0.185±0.012和0.201±0.017)和CollagenⅢ(0.126±0.012、0.194±0.008和0.208±0.033)表达比较,差异有显著统计学意义(P0.001);三组中,BA组及肝移植组JNK2、TIMP-1及CollagenⅢ表达明显高于胆扩组(P0.05);肝移植组JNK2、TIMP-1及CollagenⅢ蛋白含量与BA组比较,差异无统计学意义(P值均0.05)。(4)qRT-PCR:三组JNK2、TIMP-1和CollagenⅢmRNA表达水平比较,差异有统计学意义(0.221(0.17)vs 1.395(1.22)vs 1.095(1.21),H=17.686,P=0.003;0.439(0.31)vs 1.404(0.85)vs 1.571(0.66),H=20.648,P=0.000;0.917(0.09)vs 1.802(1.35)vs 1.957(1.30),H=15.555,P=0.007),BA组及肝移植组肝内JNK2、TIMP-1及CollagenⅢmRNA表达含量比胆扩组高(P值均小于0.017)。结论JNK2、TIMP-1及CollagenⅢ在BA患儿随着肝纤维化加重而表达升高,表明其可能参与并促进BA肝纤维化进程。     

胆道闭锁患儿肝组织细胞因子及相关基因表达的研究

目的 研究胆道闭锁(BA)患儿肝脏组织中上皮-间充质转化过程中特异性细胞因子的表达及胚胎期发育相关基因的表达激活.旨在探讨BA肝脏纤维化等系列改变的分子机制.方法 取经手术证实为BA患儿的8例肝活检组织(年龄2～3个月),以无消化道疾病尸检婴儿8例肝脏组织做正常对照(年龄0～2个月),RT-PCR半定量法检测胆管上皮细胞特异性因子CK19,纤维化早期指标Ⅰ型胶原蛋白COL1A1,发育相关基因Notch基因受体HES1,TGF-β及其阳性信号分子Smad3的表达水平变化.结果 BA患儿肝脏组织中CK-19,COL1A1、HES1、TGF-β及Smad3等基因表达水平均明显提高,实验组及对照组差异显著.结论 BA患儿肝脏组织胶原组织增生,同时有胆管上皮细胞增生,胚胎期肝脏组织发育相关基因Notch信号通路系统重新激活,TGF-β及其阳性信号分子Smad3在这一过程中发挥作用.     

The expression of interleukin-33 in the serum and liver tissue of the patients with biliary atresia

目的 研究胆道闭锁(BA)血清及肝脏组织中白介素-33(IL-33)的表达及意义.方法 选取18例BA与12例无黄疸症状且肝功能正常的胆总管囊肿(CC)患儿血清和肝脏标本进行对比研究.应用酶联免疫吸附试验检测血清中IL-33的表达水平.荧光定量RT-PCR技术和免疫印迹技术分别检测肝脏组织中IL-33 mRNA及蛋白表达水平.结果 BA组血清中IL-33的表达(791.0±22.22)pg/ml明显高于CC组的(607.1±20.68) pg/ml(P＜0.0001);并与γ-谷氨酰转移酶呈正相关(r=0.629,P=0.005).BA组肝组织中IL-33 mRNA表达0.0420±0.0061明显高于CC组的0.0220±0.0027(P=0.0181).BA组肝组织中IL-33蛋白表达0.4683±0.0188亦明显高于CC组的0.3433±0.0293(P=0.0137).结论 IL-33在BA组血清及肝组织中表达均明显升高,可能在BA炎症发生及发展过程中发挥重要作用,值得进一步研究.     

胆道闭锁肝脏CX3CR1^(+)T淋巴细胞的比例与肝纤维化及预后的相关性研究北大核心CSCD

目的探讨表达CX3C趋化因子受体1(CX3C chemokine receptor 1,CX3CR1)的T淋巴细胞(即CX3CR1^(+)T淋巴细胞)在不同儿童肝脏疾病中的表达情况,以及胆道闭锁肝组织浸润的表达CX3CR1的T淋巴细胞亚群与胆道闭锁患儿临床指标以及预后之间的关系。方法回顾性分析2019年1月至2020年6月在广州市妇女儿童医疗中心接受手术的24例胆道闭锁患儿临床资料,同时选取同期进行手术的胆总管囊肿20例(接受胆总管囊肿根治手术)、胆汁淤积症4例(术中胆道造影排除BA)、门静脉高压9例(行门静脉高压治疗手术)作为对照组。对24例胆道闭锁患儿肝脏标本进行肝纤维化评分。利用流式细胞技术对所有患儿肝脏中浸润的T淋巴细胞亚群进行分析。比较T淋巴细胞亚群在不同疾病患儿肝脏中的表达差异。采用Spearman检验对BA患儿肝脏中CX3CR1^(+)CD8^(+)T淋巴细胞比例与肝功能指标、BA肝纤维化评分分别进行相关性分析。对BA患儿随访2年,比较预后良好及预后不良患儿肝脏表达CX3CR1的T淋巴细胞比例。结果胆道闭锁组肝脏CD69-CX3CR1^(+)CD8^(+)T淋巴细胞比例为(7.91±8.81)%,低于胆总管囊肿患儿(21.53±13.85)%以及门静脉高压患儿(13.82±7.75)%,差异具有统计学意义(P<0.001,P=0.016);胆道闭锁组肝脏CD69-CX3CR1^(+)CD4^(+)T淋巴细胞比例为(3.96±5.39)%,低于胆总管囊肿患儿(8.76±9.16)%以及门静脉高压患儿(7.68±5.98)%,差异具有统计学意义(P=0.020,P=0.003)。胆道闭锁肝脏CX3CR1^(+)CD8^(+)T淋巴细胞比例与患儿γ-谷氨酰转肽酶水平及直接胆红素水平呈负相关,差异具有统计学意义(P=0.002和P=0.048)。胆道闭锁肝纤维化评分与肝脏中CX3CR1^(+)CD8^(+)T淋巴细胞比例及CX3CR1^(+)Ki67^(+)CD8^(+)T淋巴细胞比例呈负相关(P=0.025,P=0.030)。预后良好患儿肝脏中CX3CR1^(+)T淋巴细胞的比例较预后不良患儿高(P<0.05)。结论CX3CR1^(+)CD4^(+)T淋巴细胞和CX3CR1^(+)CD8^(+)T淋巴细胞可以反映肝脏的免疫状态,参与肝纤维化,可能是预测胆道闭锁患儿预后的重要指标。     

MMP-7、APRI与胆道闭锁肝纤维化的相关性分析北大核心CSCD

目的探讨胆道闭锁(biliary atresia,BA)患儿的术前实验室检查结果与肝纤维化程度的相关性,拟建立更好的评估肝纤维化的无创预测模型。方法回顾性分析2021年4月至2023年4月在浙江大学医学院附属儿童医院新生儿外科就诊的100例BA患儿的临床资料。采用Mann-Whitney U检验或Kruskal-Wallis H检验比较不同Ohkuma's肝纤维化分级和不同胆管增生分级患儿间各术前实验室指标的差异。根据多元logistic回归分析方法建立整合模型,各实验室指标同时绘制受试者操作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线,比较其对肝纤维化程度的预测效能。结果BA患儿Kasai手术年龄、血清基质金属蛋白酶-7(matrix metalloproteinase-7,MMP-7)、丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、直接胆红素(direct bilirubin,DBil)、间接胆红素(indirect bilirubin,IBil)、前白蛋白(prealbumin,PAB)、天冬氨酸转氨酶/血小板比值指数(aspartate aminotransferase to platelet ratio index,APRI)在不同肝纤维化分级及不同胆管增生分级患儿间差异有统计学意义(均P<0.05)。肝纤维化分级越高,胆管增生分级普遍越高(P<0.001)。整合模型的ROC曲线下面积为0.876(95%CI:0.806,0.945),敏感性为68.3%,特异性为93.2%,准确性为83.0%,阳性预测值为87.5%,阴性预测值为80.9%,高于各实验室指标的单独预测效能。结论Kasai手术年龄、MMP-7、APRI与BA患儿肝纤维化分级、胆管增生分级相关。多实验室指标的创新整合模型对于无创预测BA肝纤维化程度具有良好的诊断效能和准确度。