甲基苯丙胺通过miR-129-5p/FAM104B分子轴介导大鼠胚胎成纤维细胞损伤

目的探究甲基苯丙胺(METH)是否通过调控miR-129-5p/FAM104B分子轴从而影响大鼠胚胎成纤维细胞(REF)损伤。方法 MTT实验检测不同浓度甲基苯丙胺对REF细胞活力的影响;流式细胞术检测REF凋亡情况, Western blot检测增殖和凋亡相关蛋白的表达;qRT-PCR检测miR-129-5p与FAM104B的表达表达量;双荧光素酶实验验证miR-129-5p与FAM104B的靶向结合关系。结果甲基苯丙胺可抑制REF细胞增殖,促进细胞凋亡,还可促进miR-129-5p的表达,抑制FAM104B的表达。双荧光素酶实验证实miR-129-5p可靶向调控FAM104B的表达。miR-129-5p过表达明显抑制了细胞增殖,促进细胞凋亡。沉默FMA104B可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。抑制miR-129-5p表达或FMA104B过表达可明显降低METH对REF细胞增殖及凋亡的作用。结论甲基苯丙胺通过调控miR-129-5p/FAM104B分子轴而抑制REF增殖及促进细胞凋亡。     

miR-186-5p靶向CXCL13基因通过Wnt/β-catenin信号调节胃癌HGC-27细胞增殖、凋亡、细胞周期、迁移和侵袭

目的 探讨miR-186-5p对胃癌HGC-27细胞增殖、凋亡、细胞周期、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法 在胃癌HGC-27细胞中通过脂质体转染miR-186-5p模拟物（mimics）,采用实时荧光定量PCR检测转染效果, MTT实验分析HGC-27细胞增殖水平,流式细胞术分析细胞周期变化和细胞凋亡情况,Transwell实验分析HGC-27细胞迁移和侵袭能力,生物信息学、双荧光素酶报告基因实验以及Western blotting分析miR-186-5p和CXCL13的靶向关系,Western blotting分析Wnt/β-catenin信号通路活化情况。结果 体外转染miR-186-5p mimics可上调HGC-27细胞中miR-186-5p的表达。上调miR-186-5p表达能够抑制HGC-27细胞体外增殖、细胞周期进程、迁移和侵袭能力,并促进细胞凋亡。miR-186-5p可靶向抑制CXCL13的表达,上调miR-186-5p表达能够抑制β-catenin和c-Myc的表达。结论 miR-186-5p可靶向抑制CXCL13的表达,阻断Wnt/β-catenin信号通路,并抑制胃癌HGC-27细胞增殖、细胞周期、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。     

miR-96-5p通过下调肌动蛋白结合蛋白1促进卵巢癌干细胞顺铂耐药性

目的 探索微小核糖核酸(miRNA)miR-96-5p通过调控肌动蛋白结合蛋白1(profilin 1,PFN1)对卵巢癌干细胞(SiHa细胞)顺铂耐药的分子机制。方法 采用RT-qPCR检测miR-96-5p表达水平；将SiHa细胞置于不同浓度顺铂的培养基中，构建顺铂耐药细胞SiHa/DDP;采用Western blot检测蛋白的表达水平；双荧光素酶报告实验验证miR-96-5p与PFN1的靶向关系；MTT、Transwell和流式细胞术检测细胞增殖、侵袭和凋亡；成球实验检测细胞的成球能力。结果 miR-96-5p在SiHa细胞中高表达，且在SiHa/DDP细胞中的表达最高；敲降miR-96-5p可抑制SiHa/DDP细胞增殖、侵袭和干细胞成球能力并促进细胞凋亡；PFN1是miR-96-5p的潜在靶基因，过表达miR-96-5p通过下调PFN1促进SiHa/DDP细胞增殖、侵袭和干细胞成球，抑制细胞凋亡。结论 miR-96-5p通过靶向调控PFN1,促进SiHa/DDP细胞增殖、侵袭及其干细胞成球并抑制凋亡，从而增强SiHa/DDP细胞对顺铂的耐药性。     

微小 RNA-7-5p靶向调节锌指蛋白核转录因子 4基因抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖和诱导凋亡的体外研究

目的 探讨微小RNA(miR)-7-5p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡及锌指蛋白核转录因子4(KLF4)基因表达调控的影响.方法 研究起止时间为2018年3—10月.实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-7-5p在人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF及口腔鳞状细胞癌细胞SCC25、Cal127和Tca8113中的表达量.将miR-7-5p模拟物(miR-7-5p mimics)及阴性对照序列(mimics Control)分别转染至SCC25细胞,分为三组:Control组(未转染的SCC25细胞)、NC组(转染mimics Con-trol的SCC25细胞)、miR-7-5p组(转染miR-7-5p mimics的SCC25细胞).以qRT-PCR检测miR-7-5p在SCC25细胞中的转染效果;MTT法检测miR-7-5p对SCC25细胞增殖的影响;流式细胞术检测miR-7-5p对SCC25细胞凋亡的影响;通过双荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blotting)检测miR-7-5p对KLF4的靶向关系.结果 miR-7-5p在3种口腔鳞状细胞癌细胞SCC25、Cal127和Tca8113中的表达量[(0.21±0.02)、(0.43±0.04)、(0.48±0.05)]明显低于人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF(1.00±0.09)(P<0.05);转染miR-7-5p mimics能够上调SCC25细胞中miR-7-5p的表达(P<0.05);miR-7-5p过表达能够明显抑制SCC25细胞增殖能力[Control组、NC组72 h吸光度(1.43±0.13)、(1.46±0.15)比miR-7-5p组(0.81±0.09)](P<0.05),并诱导细胞凋亡[Control组、NC组凋亡率(9.48±2.65)％、(10.21±3.02)％比miR-7-5p组(24.41±8.15)％](P<0.05);双荧光素酶报告基因实验结果表明miR-7-5p过表达可抑制KLF4-Wt报告基因载体细胞相对荧光活性;qRT-PCR和Western blotting进一步证实了miR-7-5p能够靶向调节KLF4 mRNA和蛋白表达.结论 miR-7-5p直接靶向调控KLF4基因的表达来抑制口腔鳞状细胞癌SCC25细胞增殖,诱导细胞凋亡.     

过表达微小 RNA-877-5p通过靶向叉头框转录因子 M1调控胃癌细胞活力和凋亡

目的探讨微小 RNA-877-5p(miR-877-5p)对胃癌细胞活力、凋亡的影响及其分子机制。方法本研究时间为 2020年 1—7月。胃癌和正常胃黏膜上皮细胞株购自美国典型培养物保藏中心。实时定量基因扩增荧光检测( qPCR)检测胃癌细胞株 HGC-27、SUN-1、AGS和正常胃黏膜上皮细胞株 GES-1中 miR-877-5p和叉头框转录因子 M1(FOXM1)信使核糖核酸( mRNA)表达。建立 miR-877-5p过表达或抑制 FOXM1表达细胞株,观察其在 HGC-27细胞的活力、凋亡中的作用。 MTT法检测细胞的活力,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法( Western blotting)检测 FOXM1、细胞周期蛋白 D1(cyclinD1)、细胞周期依赖性激酶抑制因子 p21、p27、B细胞淋巴瘤 /白血病 -2(Bcl-2)、 Bcl-2相关 X蛋白( Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶 3(cleaved-caspase 3)蛋白表达。 TargetScan预测结合双荧光素酶报告实验分析 miR-877-5p和 FOXM1的靶向关系。共转染 miR-877-5p模拟物和 FOXM1过表达载体( pcDNA-FOXM1),研究 FOXM1过表达对 miR-877-5p过表达诱导的 HGC-27细胞增殖和凋亡的影响。结果与正常胃黏膜上皮细胞 GES-1比较,胃癌细胞 HGC-27、SUN-1、AGS中的 miR-877-5p表达下调( 1.00±0.08比 0.34±0.03,0.51±0.05,0.44±0.04,P<0.05)FOXM1 mRNA和蛋白表达上调( 1.00±0.09比 2.41±0.23,2.58±0.24,2.26±0.23,P< 0.05)。 miR-877-5p过表达显著降低 HGC-27细,胞 48 h、72 h的细胞活力( P<0.05),明显提高细胞凋亡率、 p21、p27、Bax、cleaved-caspase3蛋白的水平( P<0.05)显著减少 cyclinD1、Bcl-2蛋白表达量( P<0.05)。抑制 FOXM1表达显著降低 48 h、72 h的细胞活力( P<0.05)提高细胞凋亡率、 p,21、Bax蛋白水平( P<0.05),减少 cyclinD1、Bcl-2蛋白表达量( P<0.05)。 miR-877-5p靶向调控 FOXM1的表达,。FOXM1过表达后, miR-877-5p过表达对 HGC-27细胞增殖、 cyclinD1、Bcl-2蛋白表达的抑制作用被逆转,其对细胞凋亡、 p21、Bax蛋白表达的促进作用也被逆转。结论过表达 miR-877-5p通过靶向调控 FOXM1表达抑制胃癌细胞的活     

长链非编码前列腺癌相关转录因子 6靶向微小 RNA-139-3p对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)前列腺癌相关转录因子6(PCAT6)对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响和分子机制.方法 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测20例骨肉瘤组织和与其对应的癌旁组织中PCAT6和微小RNA-139-3p(miR-139-3p)的表达水平.双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR验证PCAT6对miR-139-3p的靶向调控关系.将PCAT6小干扰RNA(si-PCAT6)、miR-139-3p模拟物(miR-139-3p mimics)分别转染骨肉瘤细胞SAOS2,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测SAOS2细胞增殖活力,流式细胞术检测SAOS2细胞凋亡,蛋白质印迹法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、细胞周期素D1(Cyclin D1)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和P21、的表达水平.将si-PCAT6和miR-139-3p抑制物(anti-miR-139-3p)共转染至SAOS2细胞,采用上述方法检测细胞增殖、迁移侵袭能力以及凋亡变化.结果 与瘤旁组织相比,骨肉瘤组织中PCAT6的表达水平[(2.76±0.27)比(1.01±0.09)]显著升高,miR-139-3p的表达水平[(0.51±0.05)比(1.00±0.08)]显著降低(P<0.05).miR-139-3p是PCAT6的靶基因,PCAT6靶向负性调控miR-139-3p表达.抑制PCAT6表达或过表达miR-139-3p均可下调SAOS2细胞CyclinD1和Bcl-2蛋白表达,上调p21和Bax蛋白表达,降低细胞活力,促进细胞凋亡(P<0.05).抑制miR-139-3p表达可逆转si-PCAT6对骨肉瘤SAOS2细胞增殖抑制和凋亡的影响(P<0.05).结论 lncRNA PCAT6在骨肉瘤组织中表达上调,抑制miR-139-3p通过靶向miR-139-3p抑制骨肉瘤细胞增殖,诱导骨肉瘤细胞凋亡.     

微小 RNA-216b-5p对骨肉瘤 MG63细胞功能的影响及其与高迁移率族蛋白 B1的靶向关系

目的 探讨微小RNA-216b-5p(miR-216b-5p)对骨肉瘤MG63细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其与高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的靶向关系.方法 将体外培养的MG63细胞分为mimics-NC组、miR-216b-5p mimics组、inhibitor-NC组和miR-216b-5p inhibitor组,采用实时荧光定量PCR检测miR-216b-5p的表达,MTT法、Transwell小室和流式细胞仪分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡能力.采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-216b-5p和HMGB1的靶向关系,蛋白质印迹法(Western blot-ting)检测HMGB1蛋白的表达.结果 与mimics-NC组相比,miR-216b-5p mimics组细胞中miR-216b-5p的表达水平[(5.36±0.54)比(1.00±0.11)]和细胞凋亡率[(20.36±3.15)％比(8.58±1.22)％]明显升高,而细胞增殖活力、侵袭能力和细胞中HMGB1蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05);miR-216b-5p inhibitor组细胞中miR-216b-5p的表达水平[(0.24±0.03)比(0.96±0.08)]和细胞凋亡率[(2.05±0.38)比(9.27±1.16)]较inhibitor-NC组明显降低,而细胞增殖活力、侵袭能力和HMGB1蛋白的表达水平较inhibitor-NC组均明显升高(P<0.05).双荧光素酶报告基因实验证实HMGB1是miR-216b-5p的靶基因.结论 miR-216b-5p可能通过靶向调控HMGB1表达,抑制骨肉瘤MG63细胞增殖、侵袭并诱导细胞凋亡.     

miR-1915-3p在胃癌细胞中的表达水平及其对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 检测miR-1915-3p在胃癌细胞中的表达水平,探讨其对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测胃癌细胞MGC-803、SGC-7901、MKN-45和永生化胃上皮细胞GES-1中miR-1915-3p的相对表达水平;转染实验将miR-1915-3p质粒和对照质粒（miR-NC）转染至MGC-803和SGC-7901中,分别设置MGC-803细胞miR-1915-3p组和miR-NC组及SGC-7901细胞miR-1915-3p组和miR-NC组;细胞增殖实验和凋亡实验分别检测miR-1915-3p组和miR-NC组细胞的光密度（OD）值和凋亡率;蛋白免疫印迹（Western blot）实验检测miR-1915-3p组和miR-NC组细胞的Bcl-2蛋白表达情况。结果 MGC-803、SGC-7901、MKN-45细胞中miR-1915-3p的相对表达水平分别为（0.46±0.06）、（0.42±0.05）、（0.33±0.04）,均低于GES-1细胞中miR-1915-3p的相对表达水平（P<0.05）。MGC-803细胞中,miR-1915-3p组与miR-NC组相比,OD值降低、细胞凋亡率增加、Bcl-2蛋白表达减弱（P均<0.05）;SGC-7901细胞中,miR-1915-3p组与miR-NC组相比,OD值降低、细胞凋亡率增加、Bcl-2蛋白表达减弱（P均<0.05）。结论 miR-1915-3p在胃癌细胞系中表达降低,上调miR-1915-3p的表达可抑制胃癌细胞增殖,减弱Bcl-2蛋白表达以促进细胞凋亡。     

山楂多糖提取物上调 miR-146a-5p抑制 Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌细胞增殖和凋亡

目的 探讨山楂多糖提取物对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及机制.方法 用浓度分别为200、400、800μg/mL的山楂多糖提取物处理AGS细胞,作为不同浓度山楂多糖提取物组;正常培养的细胞作为对照(NC)组;用800μg/mL的甘露醇处理作等渗对照,记为800μg/mL甘露醇组.将miR-NC、miR-146a-5p转染至AGS细胞中记为miR-NC组、miR-146a-5p组;将anti-miR-NC、anti-miR-146a-5p转染至AGS细胞中再用浓度为800μg/mL的山楂多糖提取物处理,记为anti-miR-NC+山楂多糖提取物组、anti-miR-146a-5p+山楂多糖提取物组.四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖率;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-146a-5p表达水平.结果 与对照组(100.10±10.02)％相比,200、400、800μg/mL山楂多糖提取物组胃癌细胞AGS的增殖率(85.12±8.51)％、(68.22±6.82)％和(42.11±4.21)％降低(F=31.314,P<0.05).不同浓度山楂多糖提取物处理的胃癌细胞AGS中细胞增殖率降低,细胞凋亡率升高,miR-146a-5p表达水平升高(P<0.05).高表达miR-146a-5p,细胞增殖率降低,细胞凋亡率升高(P<0.05).低表达miR-146a-5p部分逆转了山楂多糖提取物对胃癌细胞AGS增殖和凋亡的影响.山楂多糖提取物处理的胃癌细胞AGS中β-catenin表达水平降低,低表达miR-146a-5p逆转了山楂多糖提取物对β-catenin表达的抑制作用.结论 山楂多糖提取物可抑制胃癌细胞AGS增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与miR-146a-5p和Wnt/β-catenin信号通路有关.     

miR-105-5p靶向SIRT1调控脂肪酸代谢影响胃癌细胞生物学行为的研究

目的 探讨miR-105-5p对胃癌细胞增殖、侵袭、迁移及脂肪酸代谢的影响,阐明miR-105-5p与沉默信息调节因子1(SIRT1)基因的靶向关系。方法 选取人胃黏膜上皮细胞GES-1、人胃癌HepG2细胞,将不同质粒转染到HepG2细胞,分为miR-105-5p组(转染miR-105-5p mimic)、si-miR-105-5p组(转染miR-105-5p inhibitor)、miR-NC组(转染mimic NC)、NC组(转染inhibitor NC)、Scramble组(转染Scramble)、miR-105-5p+Scramble组(转染miR-105-5p mimic、Scramble)及miR-105-5p+sh-SIRT1组(转染miR-105-5p mimic、sh-SIRT1)。MTT检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力,ELISA检测细胞磷脂、三酰甘油含量,实时荧光定量PCR检测细胞中miR-105-5p、SIRT1 mRNA表达水平;Western blot检测细胞SIRT1、FASN、ACC1及FABP5表达水平。生物信息预测...     

MiR-497-5p对紫杉醇耐药乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响北大核心CSCD

目的探讨miR-497-5p对乳腺癌紫杉醇耐药细胞的影响,并探讨其作用机制。方法取乳腺癌紫杉醇耐药细胞系MCF-7/紫杉醇。将MCF-7/紫杉醇细胞,分别转染miR-497-5p模拟物(miR-497-5p mimics组)、miR-497-5p模拟物阴性对照(miR-NC组)、miR-497-5p抑制剂(miR-497-5p inhibitor组)及miR-497-5p抑制剂阴性对照(NC组)。用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-497-5p表达,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,用流式细胞术检测细胞凋亡情况,用蛋白质印迹(Western blot)法检测程序性死亡配体1(PD-L1)蛋白的表达。结果miR-497-5p在MCF-7/紫杉醇细胞中表达水平0.44±0.02,显著低于MCF-7细胞的0.73±0.02,差异有统计学意义(P<0.05)。转染48 h后miR-NC组、miR-497-5p mimics组、NC组及miR-497-5p inhibitors组细胞增殖抑制率分别为(19.67±2.08)%,(46.33±5.86)%,(17.33±1.53)%,(9.33±3.51)%;细胞凋亡率分别为(4.18±0.07)%,(16.37±1.10)%,(5.56±0.41)%和(2.44±0.13)%,以上指标,miR-NC组与miR-497-5p mimics组相比,NC组与miR-497-5p inhibitors组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。miR-497-5p mimics组中PD-L1蛋白表达显著较miR-NC组低;miR-497-5p in-hibitor组中PD-L1蛋白表达显著较NC组高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-497-5p通过调控PD-L1表达抑制乳腺癌紫杉醇耐药细胞增殖并促进细胞凋亡。     

miR-338-5p通过靶向TSHZ3促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨miR-338-5p通过靶向TSHZ3调控膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-338-5p在33例膀胱癌组织和癌旁组织中的表达;在膀胱癌T24和UM-UC-3细胞中分别转染mimics-NC、miR-338-5p mimics、inhibitor-NC和miR-338-5p inhibitor,qRT-PCR检测转染效率;采用CCK-8实验检测过表达或者敲低miR-338-5p对膀胱癌细胞增殖能力的影响;Transwell实验检测miR-338-5p对膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的影响;TargetScan、miRDB和Targetminer数据库预测miR-338-5p潜在的靶基因,选定靶基因TSHZ3;双萤光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-338-5p和TSHZ3的靶向关系;在膀胱癌细胞中共转染miR-338-5p mimics和TSHZ3过表达质粒,通过CCK-8和Transwell实验检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力;Western blot检测过表达miR-338-5p或者TSHZ3对Wnt/β-c...     

五味子乙素通过上调miR-486-5 p的表达对甲状腺癌细胞生物学行为的影响

目的 研究五味子乙素对miR-486-5p表达及人甲状腺癌B-CPAP细胞增殖和侵袭的影响.方法 实时定量PCR检测人甲状腺癌B-CPAP细胞中miR-486-5p的表达量,Western-blot法检测人甲状腺癌B-CPAP细胞中Caspase-3、Bcl-2和Bax的表达.脂质体转染方法构建过表达miR-486-5p的人甲状腺癌B-CPAP细胞,MTT法检测人甲状腺癌B-CPAP细胞的增殖率,流式细胞仪检测人甲状腺癌B-CPAP细胞的凋亡率.结果 与空白对照组比较,随着五味子乙素浓度的增加人甲状腺癌B-CPAP细胞增殖率和Bcl-2表达呈不断降低趋势(P<0.05),miR-486-5p、Caspase-3和Bax表达呈不断增加趋势(P<0.05).转染miR-486-5p模拟物组的细胞增殖率在转染3 h与4 h后低于转染miRNA模拟物组,细胞凋亡率显著高于转染miRNA模拟物组(P<0.05,P<0.01).结论 五味子乙素可能通过上调miR-486-5p表达,诱导人甲状腺癌B-CPAP细胞发生凋亡,miR-486-5p可作为对人甲状腺癌靶向治疗的靶点.     

长链非编码 RNA膀胱癌相关转录物 1对微小 RNA-503-5p的靶向关系及对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究长链非编码RNA(lncRNA)膀胱癌相关转录物1(BLACAT1)对微小RNA(miR)-503-5p的靶向关系及结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结肠癌细胞株SW620,LOVO,HT29和人正常结肠黏膜上皮细胞株NCM460中BLACAT1和miR-503-5p的表达.在HT29细胞中转染si-BLACAT1、pcDNA-BLACAT1或miR-503-5p,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞核相关抗原Ki-67(Ki-67)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、活化的多聚ADP-核糖聚合酶(Cleaved PARP)和活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved caspase-3)的表达,starbase预测和双荧光素酶报告分析BLACAT1与miR-503-5p之间的靶向关系.si-BLACAT1和anti-miR-503-5p共转染,观察干扰miR-503-5p对沉默BLACAT1诱导的结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响.结果 与NCM460细胞比较,SW620、LOVO和HT29中BLACAT1表达量明显增加[(4.93±0.58)、(5.66±0.53)、(6.17±0.66)比(1.03±0.22)],miR-503-5p表达量减少[(0.72±0.11)、(0.67±0.09)、(0.51±0.08)比(1.04±0.14)](P<0.05).沉默BLACAT1或转染miR-503-5p明显减少HT29细胞的细胞存活率、Ki-67、CyclinD1蛋白表达量,提高细胞凋亡率、Cleaved PARP和Cleaved caspase-3蛋白水平(P<0.05),过表达BLACAT1则反之.BLACAT1靶向miR-503-5p调控其表达.干扰miR-503-5p部分逆转沉默BLACAT1抑制结直肠癌细胞增殖、Ki-67、CyclinD1蛋白表达和诱导结直肠癌细胞凋亡、Cleaved PARP、Cleaved caspase-3蛋白表达的作用.结论 lncRNA BLA-CAT1在表达上调,沉默BLACAT1可通过靶向调控miR-503-5p的表达,来抑制结直肠癌细胞增殖,并诱导细胞凋亡.     

微小RNA-455-3p 下调TRIM27 对鼻咽癌细胞增殖、凋亡的影响

目的研究微小RNA-455-3p(miR-455-3p)对鼻咽癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法运用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测人鼻咽癌细胞5-8F、CNE-1和鼻咽上皮细胞NP69中miR-455-3p的表达;将miR-NC、miR-455-3p mimics、pcDNA3.1、pcDNA3.1- TRIM27、si-NC、si- TRIM27 组、miR-455-3p mimics 和pcDNA3.1、miR-455-3p mimics 和pcDNA3.1-TRIM27通过脂质体试剂转染到5-8F;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)、流式细胞术、蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞的增殖、凋亡和TRIM27蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中miR-455-3p与TRIM27的靶向关系。结果与鼻咽上皮细胞NP69(1.37±0.06)相比,人鼻咽癌细胞5-8F(0.42±0.02)、CNE-1(0.96±0.05)中miR-455-3p的表达显著降低(F =314.35,P =0.001)。过表达miR-455-3p 可明显抑制5-8F、CNE-1 细胞的增殖,促进其凋亡;miR-455-3p 可抑制野生型TRIM27细胞的荧光活性,且与TRIM27的表达呈负相关;抑制TRIM27可抑制抑制5-8F细胞的增殖,促进凋亡,过表达TRIM27能够逆转miR-455-3p对鼻咽癌细胞5-8F增殖凋亡的作用。结论miR-455-3p能够调控鼻咽癌细胞增殖、凋亡的作用机制与其靶向TRIM27相关,将可为鼻咽癌的治疗提供新靶点。     

miR-509-5 p靶向ACLY调控人黑色素瘤细胞的增殖和凋亡

目的 探讨miR-509-5p靶向调控ACLY表达对人黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响.方法 qRT-PCR检测人表皮黑色素细胞HEMn-LP和3种人黑色素瘤细胞(SK-MEL-2、UACC903和A375)中miR-509-5p和ACLY mRNA的表达水平.以A375细胞为研究对象,构建过表达miR-509-5p的A3...     

微小 RNA-338-3p靶向调控高迁移率族蛋白 B1增强子宫内膜癌对紫杉醇敏感性的研究

目的 探讨miR-338-3p靶向调控高迁移率族蛋白B1(HMGB1)影响子宫内膜癌对紫杉醇(Paclitaxel,PTX)敏感性的分子机制.方法 实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白印迹法(Western blottingting)检测miR-338-3p和HMGB1在子宫内膜癌细胞Ishikawa和HEC-1B中的表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-338-3p和HMGB1之间的靶向关系;将Ishikawa和HEC-1B细胞分为如下5组:miR-338-3p组(转染miR-338-3p mimics组)、miR-NC组(转染miRNA阴性对照组)、si-HMGB1组(转染干扰RNA)、si-NC组(转染siRNA阴性对照)、miR-338-3p+HMGB1组(共转染miR-338-3pmimics和pcDNA3.0 HMGB1组).将各组用转染试剂转染至细胞,用不同浓度的PTX处理上述转染组细胞,CCK-8法检测Ishikawa和HEC-1B细胞增殖,Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡,Western blotting检测HMGBI蛋白表达.结果 与人正常子宫内膜上皮细胞ESC相比,miR-338-3p在子宫内膜癌细胞Ishikawa和HEC-1B中表达下调[(1.00±0.10)比(0.51±0.04)、(0.46±0.04)],而HMGB1则相反;miR-338-3p靶向并负性调节HMGB1表达;过表达miR-338-3p抑制子宫内膜癌细胞Ishikawa和HEC-1B增殖,促进凋亡,增加其对PTX敏感,与敲低HMGB1结果一致;HMGB1可部分逆转miR-338-3p对子宫内膜癌细胞增殖,凋亡以及对PTX敏感性的影响.结论 miR-338-3p通过负性调控HMGB1抑制子宫内膜癌细胞Ishikawa和HEC-1B增殖,促进凋亡和增强其对PTX敏感性.     

miR-199a-5p调控DDR1抑制人脑胶质瘤细胞增殖和迁移

目的初步探究miR-199a-5p对人脑胶质瘤细胞增殖和迁移的影响。方法选取U251细胞为实验对象,构建miR-199a-5p过表达U251细胞株。实验分组:对照组(无转染的U251细胞,Control)、阴性对照组(转染空载体质粒U251细胞,NC)以及实验组(转染miR-199a-5p成熟模拟物,mimics)。实时荧光定量PCR检测各组细胞miR-199a-5p表达;CCK-8检测转染miR-199a-5p后细胞增殖;细胞划痕实验与Transwell迁移实验检测各组U251迁移情况;Western blot检测DDR1表达;构建DDR1过表达U251细胞株,检测DDR1过表达对转染miR-199a-5p的U251细胞增殖和迁移的影响。结果mimics组细胞miR-199a-5p水平高于control组(P<0.01),细胞活力降低(P<0.01),增殖能力减弱(P<0.01)。转染miR-199a-5p组细胞DDR1表达水平降低(P<0.01)。与mimins组相比,转染pcDNA3.1-DDR1组能够上调DDR1(P<0.01),增加细胞活力,促进细胞增殖(P<0.05或P<0.01)。结论miR-199a-5p能够下调DDR1表达,抑制人脑胶质瘤细胞增殖和迁移。     

miR-145-5p通过靶向ABCE1表达影响人肺腺癌A549细胞的增殖和迁移

目的探讨microRNA (miR)-145-5p在肺腺癌组织中的表达情况及其对人肺腺癌A549细胞增殖和迁移的影响及机制。方法检测人肺腺癌组织和A549细胞中miR-145-5p的基因表达。生物信息数据库预测、双荧光素酶报告基因实验验证miR-145-5p和ABCE1的靶控关系;转染miR-145-5p的模拟物、抑制物和对照物入A549细胞,PCR法测定转染后miR-145-5p和ABCE1 mRNA的表达。MTT和划痕愈合实验检测转染前后A549细胞的增殖和迁移能力。结果在肺腺癌组织和A549细胞系中miR-145-5p表达明显下降(P<0.05)。生物信息数据库和双荧光素酶报告基因实验证实,ABCE1是miR-145-5p的靶基因。与未转染和转染miR-145-5p对照物的A549细胞相比,转染模拟物48 h后可显著增加miR-145-5p的表达,抑制ABCE1 mRNA表达,同时,细胞增殖和迁移能力受到抑制(P<0.05);而转染抑制后可显著降低miR-145-5p的表达,增加ABCE1 mRNA表达,同时,细胞增殖和迁移能力明显增强(P<0.05)。结论在癌组织中表达明显降低的miR-145-5p,能够通过负性调节ABCE1的表达,抑制人肺腺癌A549细胞增殖和迁移,为肺癌治疗提供新的靶点。     

苦参醇A对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞增殖凋亡的影响研究

摘要：目的:探讨苦参醇A（KA）对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法:体外培养人视网膜血管内皮细胞,使用高糖诱导细胞,分别加入不同剂量的KA处理细胞;采用CCK-8检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;采用qRT-PCR检测LncRNA DLX6-AS1、miR-145-5p的表达量;双荧光素酶报告实验与RIP实验验证DLX6-AS1、miR-145-5p的靶向关系;分别将si-DLX6-AS1、pc DNA-DLX6-AS1转染至高糖诱导的细胞中,采用上述方法检测细胞增殖及凋亡能力。结果:高糖诱导细胞可降低细胞活力、增高凋亡率（P<0.05）,DLX6-AS1的表达水平显著升高（P<0.05）,miR-145-5p的表达水平显著降低（P<0.05）,而KA可明显逆转高糖对细胞增殖、凋亡及DLX6-AS1、miR-145-5p表达的作用（P<0.05）,且呈剂量依赖性;双荧光素酶报告实验与RIP实验证实DLX6-AS1能够靶向结合miR-145-5p;转染si-DLX6-AS1后细胞活力升高（P<0.05）,凋亡率降低（P<0.05）,而转染pc DNA-DLX6-AS1能够明显减弱KA对高糖诱导视网膜血管内皮细胞增殖、凋亡的作用。结论:苦参醇A可能通过调控DLX6-AS1/miR-145-5p分子轴从而促进高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞增殖及抑制细胞凋亡。