用条件培养液代替重组因子培养小鼠高增殖潜能集落形成细胞

利用富含ＩＬ－３的ＷＥＨＩ－３细胞条件培养液（ＷＥＨＩ３－ＣＭ）和富含Ｍ－ＣＳＦ的Ｌ９２９细胞条件培养液（Ｌ９２９－ＣＭ）代替重组因子在体外用单层琼脂法培养小鼠ＨＰＰ－ＣＦＣ获得成功。在合用ＷＥＨＩ３－ＣＭ和Ｌ９２９－ＣＭ的基础上，联合ｒｈＩＬ－１，ｒｈＩＬ－６和ｒｍＧＭ－ＣＳＦ，ＨＰＰ－ＣＦＣ的产率有所提高。用５－ＦＵ处理小鼠２天后，骨髓细胞中ＨＰＰ－ＣＦＣ得以浓集。产生的ＨＰＰ－ＣＦＣ集落直径大于０．５ｍｍ，中央致密，细胞数大于５００００。     

用条件培养液代替重组因子培养小鼠高增殖潜能集落形成细胞

利用富含ＩＬ－３的ＷＥＨＩ－３细胞条件培养液（ＷＥＨＩ３－ＣＭ）和富含Ｍ－ＣＳＦ的Ｌ９２９细胞条件培养液（Ｌ９２９－ＣＭ）代替重组因子在体外用单层琼脂法培养小鼠ＨＰＰ－ＣＦＣ获得成功。在合用ＷＥＨＩ３－ＣＭ和Ｌ９２９－ＣＭ的基础上，联合ｒｈＩＬ－１，ｒｈＩＬ－６和ｒｍＧＭ－ＣＳＦ，ＨＰＰ－ＣＦＣ的产率有所提高。用５－ＦＵ处理小鼠２天后，骨髓细胞中ＨＰＰ－ＣＦＣ得以浓集。产生的ＨＰＰ－ＣＦＣ集落直径     

小鼠骨髓内皮细胞无血清条件培养液代替刺激因子培养BF-UE和CFU-Meg

造血微环境是一个复杂的造血调节系统 ,造血细胞的发生、发育、成熟、凋亡都受其直接或间接调节[1 ] 。骨髓内皮细胞是骨髓微环境的一个重要组成部分 ,对造血有重要调节作用[2 ] 。李卫民等[3] 发现骨髓内皮细胞表达多种造血刺激因子和造血抑制因子ｍＲＮＡ ,ｍｗ >10ｋＤ组分的ｍＢＭＥＣ ＣＭ含刺激因子为主 ,能刺激造血 ,浓度达 6 % (体积比体积 ,Ｖ Ｖ)时刺激作用最强 ;ｍｗ <10ｋＤ组分的ｍＢＭＥＣ ＣＭ中含抑制因子为主 ,主要抑制造血。程腊梅等[4 ] 发现单用ｍｗ >10ｋＤ组分的ｍＢＭＥＣ ＣＭ代替集落刺激因子可刺激ＣＦＵ ＧＭ生成 ,ｍｗ >10ｋＤ组分的ｍＢＭＥＣ Ｃ     

RhIL—2对人骨髓CFU—GM,CFU—E和BFU—E的影响

采用甲基纤维素体外半固体培养法证明，５０－１０００Ｕ／ｍｌ ｒｈＩＬ－２单用对人骨髓造血祖细胞的ＣＦＵ－ＧＭ〉ＣＦＵ－Ｅ及ＢＦＵ－Ｅ无直接刺激增生作用；当与ＧＭ－ＣＳＦ联用，１００－４００Ｕ＝ｍｌｒｈＩＬ－２其ＣＦＵ－ＧＭ集落形成率明显高于单用ＧＭ－ＣＳＦ的对照组；当与ＥＰＯ联用时，其ＣＦＵ－Ｅ及ＢＦＵ＝Ｅ集落形成率 于单用ＥＰＯ对照组，而１０００Ｕ／ｍｌｒｈＩＬ－２期 ３咱集落形成数目呈下降趋势     

抗CD3McAb和rhGM—CSF对再障患者CFU—GM生长的体外影响的研究

用ＣＦＵ－ＧＭ单固体琼脂培养技术研究了抗ＣＤ３单克隆抗体（ＭｃＡｂ）和重组人集落刺激因子对再生障碍性贫血（ＡＡ）患者骨髓ＣＦＵ－ＧＭ体外生长进行研究。结果表明：１０μｇ／ｍｌ的抗ＣＤ３ＭｃＡｂ和０．１μｇ／ｍｌ的ｒｈＧＭ－ＣＳＦ均可增加ＡＡ患者ＣＦＵ－ＧＭ的集落数,抗ＣＤ３ＭｃＡｂ作用较ｒｈＧＭ＝ＣＳＦ显著,且不同患者对抗ＣＤ３ＭｃＡｂ和ｒｈＧＭ－ＣＳＦ的敏感性不同,对ＡＡ患者,临床治疗时,应先行     

白血病相关抑制物对CFU－GM增殖的抑制作用

用半固体双层琼脂培养法，将白血病细胞植入底层，正常ＣＦＵ－ＧＭ植入上层，作白血病细胞与正常ＣＦＵ－ＧＭ的共同培养。结果发现，底层琼脂中加入０．５×１０５／ｍｌ的白血病细胞后，上层琼脂中的ＣＦＵ－ＧＭ从对照组的１９３．５下降至１２３．１／１×１０５个骨髓有核细胞（ＢＭＮＣ），加入底层的白血病细胞增加时，ＣＦＵ－ＧＭ生成进行性受抑制，当植入的白血病细胞数达１５×１０５／ｍｌ时，几乎无ＣＦＵ－ＧＭ生成。此抑制作用亦见于白血病细胞的培养上清液中。量－效关系测定发现，正常ＣＦＵ－ＧＭ培养体系中加入１０％的白血病细胞培养上清液时，ＣＦＵ－ＧＭ生成率从对照纪的１１２．２下降到８８．６／１×１０５ＢＭＮＣ，以后抑制效应不再增加。以上结果揭示，白血病细胞对ＣＦＵ－ＧＭ的抑制是经某种体液因子实现的。     

细胞因子及4℃保存对脐血造血干／祖细胞的影响

应用体外半固体培养方法,研究了粒巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、白细胞介素３（ＩＬ－３）、白细胞介素６（ＩＬ－６）和促红细胞生成素（Ｅｐｏ）的不同组合及４℃保存对脐血造血干／祖细胞ＣＦＵ－ＧＭ和ＨＰＰ－ＣＦＣ产率的影响。结果表明：在琼脂半固体培养体系中,在不同组合的细胞因子作用下,脐血ＣＦＵ－ＧＭ产率有是明显差异;以ＧＭ－ＣＳＦ组最低、ＧＭ－ＣＳＦ＋ＩＬ－３＋ＩＬ－６＋Ｅｐｏ组最高。脐血置４     

骨髓内皮细胞无血清条件培养液对CFU—E和BFU—E生成的影响

利用本室建立的小鼠骨髓内皮细胞株作传代培养，收集其无血清条件培养液，离心超滤，观察分子量（ＭＷ）〉１０００００组分及分子量〈１０００００组分对红系生成的影响。结果表明：分子量〉１０００００组分对ＣＦＵ－Ｅ和ＢＦＵ－Ｅ有明显刺激作用，且在２％～６％（Ｖ／Ｖ，下同）范围内集落产率随浓度增加而增加，而分子量〈１０００００组分对ＣＦＵ－Ｅ，ＢＦＵ－Ｅ有明显抑制作用，且在１０％～４０％范围内集落产率随浓度增     

造血生长因子对长期培养中骨髓造血细胞增殖和分化的影响

应用骨髓长期培养法研究了ＨＧＦｓ联合应用对ＬＴＢＭＣ中造血干／祖细胞的增殖、分化的影响，结果显示，在ＬＴＢＭＣ中，含有ＨＧＦｓ（ＩＬ－２＋ＩＬ－６＋Ｇ－ＣＳＦ＋ＧＭ－ＣＳＦ＋Ｅｐｏ）的扩增组与对照组相比，ＨＧＦｓ能显著地扩增ＨＳＣｓ，在第一周，ＣＦＵ－ＧＭ，ＣＦＵ－Ｅ和ＢＦＵ－Ｅ总数分别扩增１８．０９－１６．５９倍、１０．２６－８．４８和１４．９９－１２．７８倍，而累积扩增倍数分别达３６．１９－６     

SMU1对正常人体外PBMNC功能效应的影响

目的：研究ＳＭＵ１（自制抗ＣＤ３）对正常人外周血单个核细胞（ＰＢＭＮＣ）的体外功能效应,方法：（地）以ＳＭＵ１６种不同浓度、ＩＬ－２、ＭＣＤ３（丝裂性抗ＣＤ３）孵育ＰＢＭＮＣ,观察细胞密度和形态变化,ＭＴＴ法测定细胞增殖力;（２）分别用ＳＭＵ１０．５ｍｇ／Ｌｆ、５ｍｇ／Ｌ、ＩＬ－２２００ｋＵ／Ｌ培养ＰＢＭＮＣ３ｄ,ＥＬＩＳＡ法测定上清液ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－α及Ｇ－ＣＳＦ水平。结     

用小鼠骨髓内皮细胞条件培养液代替造血刺激因子培养CFU-GM和HPP-CFC

利用大于 10kD组分的小鼠骨髓内皮细胞条件培养液 (mBMEC CM)作刺激物体外琼脂培养CFU GM ,与rmGM CSF合用培养HPP CFC获得成功。就培养CFU GM和HPP CFC而言 ,用细胞因子作刺激物与并用大于 10kD组分的mBMEC CM作刺激物相比较 ,以后者的CFU GM及HPP CFC产率最高     

小鼠骨髓内皮细胞条件培养液支持卵黄囊造血干/祖细胞的体外生长

目的;观察小鼠骨髓内皮细胞条件培养液（mBMEC-CM)对卵黄囊造血干／祖细胞体外生长的支持作用。方法：取妊娠第8．5天的卵黄囊,经消化后获得卵黄囊细胞,取卵黄囊非贴壁细胞加入含10％mBMEC-CM和10％FBS的DMEM中培养24h后,收集细胞做半固体培养。结果：mBMEC-CM在液体培养体系中能扩增卵黄囊造血干／祖细胞使粒－巨噬系集落形成单位（granulocyte-macrophage colony forming unit,CFU-GM)和高增殖潜能集落形成细胞（high proliferative potential-colony forming cell,HPP-CFC)的产率增加,经24h液体培养后的CFU－GM和HPP－CFC的数目分别为培养0h对照组的119．5％和130．8％（P＜0．05）;mBMEC-CM联合flt3配基（flt3 ligand,FL)和血小板生成率（,TPO)后,其扩增CFU－GM和HPP－CFC的能力明显增加,mBMEC-CM联合FL和TPO经24h液体培养后的CFU－GM和HPP－CFC的数目分别为培养0h对照组的132．0％和176．9％（P＜0．01）。结论：mBMEC-CM对卵黄囊造血干／祖细胞的维持和扩增有促进作用,mBMEC-CM联合FL和TPO对卵黄囊造血干/祖细胞的扩增作用明显增强。     

小鼠造血干细胞因子基因克隆及在 C H O 细胞中的表达

目的： 克隆造血干细胞因子（ Ｓ Ｃ Ｆ）并在 Ｃ Ｈ Ｏ 细胞中表达。方法： 采用 Ｐ Ｃ Ｒ 方法从ｐ Ｒ Ｃ／ Ｃ Ｍ Ｖ（含 Ｓ Ｃ Ｆｃ Ｄ Ｎ Ａ）中钓取 Ｓ Ｃ Ｆ ｃ Ｄ Ｎ Ａ 膜外段活性区,克隆入真核表达载体ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ３,转染入 Ｃ Ｈ Ｏ 细胞;用 Ｒ Ｔ－ Ｐ Ｃ Ｒ 方法检测 ｍ Ｒ Ｎ Ａ 水平表达及通过协同刺激骨髓细胞集落形成来检测转染细胞上清的生物活性。结果：转染 Ｓ Ｃ Ｆｃ Ｄ Ｎ Ａ 的 Ｃ Ｈ Ｏ 细胞可表达 Ｓ Ｃ Ｆｍ Ｒ Ｎ Ａ,其细胞培养上清可协同 Ｇ Ｍ － Ｃ Ｓ Ｆ刺激骨髓细胞形成集落数比 Ｇ Ｍ － Ｃ Ｓ Ｆ 单独作用高 ２ 倍,转染外源基因对细胞周期没有明显影响。结论：转染 Ｓ Ｃ Ｆｃ Ｄ Ｎ Ａ 在 Ｃ Ｈ Ｏ 细胞中表达,转染细胞上清协同 Ｇ Ｍ － Ｃ Ｓ Ｆ 刺激骨髓细胞集落的形成,而本身对集落的形成没有影响。     

组胺受体激动剂和拮抗剂对粒单系祖细胞增殖的影响

用体外琼脂培养法研究了2-噻唑乙胺、dimaprit及甲氰咪胍对小鼠CFU—GM产率的影响。结果表明:10~(-8)M～10~(-4)M的2-噻唑乙胺不影响CFU—GM产率,而10~(-8)M的dimaprit即可明显增加CFU—GM产率。此作用随剂量的递增而加强,至10~(-5)M时,增至最大值,此后不再增高。单用甲氰咪胍不影响CFU—GM产率,但伍用dimaprit时,甲氰咪胍阻断dimaprit的上述作用;二者对CFU—GM产率的影响呈现竞争现象。分析了该结果的理论意义和临床意义。     

The murine submandibular gland conditioned medium induce the development of CFU-GM and CFU-meg]

OBJECTIVE: Our purpose is to determine whether murine submandibular gland produce hematopoietic growth factors or not and which hematopoietic growth factor are produced by murine submandibular gland. METHODS: By using the techniques of culture of hematopoietic progenitor cells(CFU-GM, CFU-Meg) ex vivo, flow-cytometry, the effects of murine submandibular gland conditioned medium(SGCM) on the development of CFU-GM and CFU-Meg in mice was studied. RESULTS: SGCM can stimulate the development of CFU-GM and CFU-Meg (without any exogeneous HGF), almost no colony in control (without any exogeneous HGF and SGCM); the promoting activity of male SGCM is higher than female SGCM's in augmenting colony formation of CFU-Meg (P < 0.05), there is no difference of CFU-GM(P > 0.05). The stimulating activity of anemic mice SGCM is higher normal mice SGCM's (P < 0.05). IL-3 can collaborate with female SGCM to stimulate proliferation of CFU-Meg. SGCM can promote bone morrow cell entiring the active proliferative phase(S/G2). CONCLUSION: Submandibular gland can stimulate the development of CFU-GM and CFU-Meg by secreting hematopoietic growth factor-like activities. Our study provide the experimental evidences for clarifying the relationship between submandibular gland and hematopoiesis.     

人参总皂甙诱导人骨髓基质细胞表达GM-CSF的实验研究

目的：研究人参总皂甙(TSPG)对人骨髓基质细胞表达GM—CSF的影响及其与人粒单系血细胞发生的关系。方法：采用造血祖细胞与骨髓基质细胞体外培养、造血生长因子生物学活性检测、免疫细胞化学和核酸分子原位杂交等技术。结果：TSPG能显著刺激粒单系造血祖细胞(CFU—GM)增殖；经TSPG诱导制备的骨髓基质细胞条件培养液富含GM—CSF样活性；TSPG能显著促进骨髓基质细胞的GM—CSF蛋白和mRNA表达。结论：TSPG可能通过直接和/或间接途径促进造血诱导微环境中的骨髓基质细胞合成和分泌GM—CSF，进而促进CFU—GM的增殖分化。     

5种造血生长因子对造血祖细胞集落形成的影响

目的探讨IL-3、IL-6、GM-CSF、G2、PIXY321对骨髓造血祖细胞集落形成的影响.方法 5种造血生长因子分别采用100、250、500、750、10 00 u/ml浓度,进行骨髓造血祖细胞集落培养,从中找出峰值浓度,然后在峰值浓度下进行集落培养,计数不同造血生长因子条件下所形成的集落.结果 IL-3、IL-6、GM-CSF、G2、PIXY321对造血祖细胞集落形成的峰值浓度分别为100、100、250、750、25 0 u/ml.峰值浓度下,对CFU-E、BFU-Em、BFU-Eim、CFU-GM形成的作用强度不同,PIXY321 条件下所形成的集落数最多.结论这五种造血生长因子对骨髓造血祖细胞的集落形成均有促进作用,PIXY321效果显著.     

Effect of Angiotensin Ⅱ on Cord Blood CD34^＋ Cells Expansion in vitro

Summary In order to investigate the influence of angiotensin II on hematopoietic system, CD34⁺ cells in cord blood were purified, and the effects of angiotensin II in combination with various cytokines on their growth and differentiation were studied by cell culturein vitro. It was found that angiotensin II in suspending medium could stimulate both BFU-E and CFU-GM expansion. The number of BFU-E and CFU-GM was increased with the increases of angiotensin II concentrations during a certain range. In addition, the expansion fold of CFU-GM was increased from 2.3±0.8 times to 7.8±2.3 times when angiotensin II was added in the presence of SCF+G-CSF+GM-CSF+IL-3 cytokines mixture. Similarly, the expansion fold of BFU-E was increased from 3.1±1.8 times to 9.2±2.3 times with angiotensin II in the presence of SCF+EPO+TPO+IL-3. In the semi-solid medium, angiotensin II could stimulate CFU-GM expansion but had no effect on the growth of BFU-E. In conclusion, angiotensin II had some etimulating effects on cord blood hematopoietic progenitors expansionin vitro in the presence of other cytokines. PENG Cheng, female, born in 1978, Resident