血管紧张素Ⅱ致心肌细胞肥大作用研究进展

血管紧张素（Ang）Ⅱ是肾索-Ang系统（RASS）中的一种主要的多功能活性肽，同时也是一种重要的心肌肥大刺激因子，具有生长因子样作用，通过与特异的AngⅡ受体结合，可直接导致心肌肥厚，对心肌的结构、功能产生重大的影响。本文就AngⅡ致心肌细胞肥大作用的最新研究进展作一综述。     

血管紧张素Ⅱ诱导乳鼠心肌细胞凋亡及牛磺酸的作用

目的 观察外源性血管紧张家Ⅱ(AngⅡ)对心肌细胞凋亡的诱导作用，并探讨牛磺酸对其可能的作用和影响。方法 利用培养的乳鼠心肌细胞，随机分成不同AngⅡ浓度(10^—9—10^—5M)诱导的细胞凋亡组和不同浓度牛磺酸(10、20、40mmol/L)作用组，观察培养24h后的各组心肌细胞存活率，光镜和电镜观察凋亡细胞形态结构变化．TUNEL法检测凋亡，流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果 10^—9M的AngⅡ可诱导心肌细胞发生凋亡，心肌细胞呈现特征性的凋亡形态结构变化；TUNEL检测观察到凋亡细胞核呈黄褐色改变；流式细胞仪PI染色呈现典型的亚二倍体峰。牛磺酸可以明显的降低血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞凋亡率(P＜0．05)。结论 一定浓度的AngⅡ可以引起体外培养的乳鼠心肌细胞发生调亡，且牛磺酸可对这种凋亡产生保护作用。     

内源性一氧化碳对血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的影响

目的 探讨内源性一氧化碳（CO）对血管紧张素Ⅱ（AT－Ⅱ）诱导心肌细胞肥大的影响。方法 体外培养新生SD大鼠的心肌细胞，用^3H-亮氨酸（^3H-Leu)掺入法观察AT－Ⅱ对其蛋白质合成的影响，用CO合成的关键酶即血红素氧合酶（HO）的诱导剂－氯化血红素诱导心肌细胞生成CO，观察它对AT－Ⅱ作用的影响。结果 与对照组相比，AT－Ⅱ可使培养的新生SD大鼠心肌细胞对^3H-Leu的摄取明显增多（P＜0．05），用氯化血红素干预后，AT－Ⅱ上述作用被明显抑制（P＜0．05）。结论 内源性CO对AT－Ⅱ诱导的SD大鼠心肌细胞肥大有抑制作用。     

血管紧张素Ⅱ诱导的新生小鼠心肌细胞肥大模型

目的 探索新生小鼠心肌细胞的原代培养方法,建立血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的小鼠心肌细胞肥大模型。方法 使用0.03%的胰酶+0.04%的2型胶原酶多次消化分离心肌细胞,差时贴壁法纯化心肌细胞。1μmol/L AngⅡ刺激心肌细胞肥大,α-actinin染色进行心肌细胞纯度鉴定及面积检测,实时定量RT-PCR检测心肌细胞肥大标志物的表达,Western blot法检测蛋白质磷酸化水平。结果 培养得到的小鼠心肌细胞具有较高纯度及存活力;AngⅡ刺激后心肌细胞面积增大、蛋白合成增加,ANP、BNP、β-MHC等心肌细胞肥大标志物的mRNA表达水平较对照组明显升高(P<0.05),而α-MHC表达则下降(P<0.05);此外,AngⅡ刺激组ERK、JNK与p38的磷酸化水平较对照组明显上调(P<0.05)。结论 使用改良的新生小鼠心肌细胞原代培养方法,成功培养了具有较高纯度及存活力的小鼠心肌细胞,并建立了AngⅡ诱导的小鼠心肌细胞肥大模型。     

血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后缝隙连接蛋白Cx43表达的变化

[目的]研究血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后连接蛋白43（Cx43）表达的变化及与细胞周期分布的关系。[方法]分离培养大鼠心肌细胞,用血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大,72h后用RT-PCR和免疫荧光方法观察心肌细胞Cx43基因和蛋白表达,用流式细胞仪测定法观察心肌细胞周期分布变化以及Cx43表达量的关系。[结果]血管紧张素Ⅱ处理后的心肌细胞表现细胞肥大且细胞活力增强,S期、G2-M期细胞百分比增加,细胞内G2-M（二倍体）DNA含量降低,Cx43蛋白表达低于对照组,Cx43mRNA表达水平也较对照组明显下调,Cx43蛋白表达下调与细胞周期分布的改变相关。[结论]血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后Cx43基因表达明显下调,导致Cx43蛋白表达亦出现下调,这一改变可能与心肌肥大过程中的细胞周期变化有关,提示血管紧张素Ⅱ可能通过调控Cx43基因的表达而参与缝隙连接重构过程,而Cx43表达的变化可能与心肌肥大的机制有关。     

PTEN负性调控血管紧张素Ⅱ刺激所致心肌细胞肥大

目的研究PTEN对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)所致心肌细胞肥大的影响.方法构建携带PTEN基因的腺病毒载体,感染原代培养的乳鼠心肌细胞,用AngⅡ作为肥大刺激因素,测定ANF、β-MHC与心肌细胞大小.结果对照组与仅携带GFP的腺病毒感染的心肌细胞在AngⅡ作用下,ANF、β-MHC表达与细胞直径显著增高,而PTEN过度表达则对上述改变具有抑制作用.结论 PTEN能够负性调控AngⅡ所致的心肌细胞肥大.     

血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后缝隙连接蛋白Cx43表达的变化

 [目的]研究血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后连接蛋白43（Cx43）表达的变化及与细胞周期分布的关系。[方法]分离培养大鼠心肌细胞,用血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大,72h后用RT-PCR和免疫荧光方法观察心肌细胞Cx43基因和蛋白表达,用流式细胞仪测定法观察心肌细胞周期分布变化以及Cx43表达量的关系。[结果]血管紧张素Ⅱ处理后的心肌细胞表现细胞肥大且细胞活力增强,S期、G2-M期细胞百分比增加,细胞内G2-M（二倍体）DNA含量降低,Cx43蛋白表达低于对照组,Cx43mRNA表达水平也较对照组明显下调,Cx43蛋白表达下调与细胞周期分布的改变相关。[结论]血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后Cx43基因表达明显下调,导致Cx43蛋白表达亦出现下调,这一改变可能与心肌肥大过程中的细胞周期变化有关,提示血管紧张素Ⅱ可能通过调控Cx43基因的表达而参与缝隙连接重构过程,而Cx43表达的变化可能与心肌肥大的机制有关。     

血管紧张素Ⅱ诱导乳鼠心肌细胞凋亡的研究

目的观察血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ, AngⅡ)/1型受体拮抗剂(AT1R antagonist)对心肌细胞凋亡的影响及其机制.方法体外培养的Wistar乳鼠心肌细胞,培养96 h后随机分为3组,对照组:无血清培养2、6、12、24 h;AngⅡ组:以10-7 mol/LangⅡ刺激2、6、 12、 24 h,用TUNEL方法检测凋亡细胞数,免疫组化观察Bcl-2蛋白染色,荧光法检测caspase-3活性;AngⅡ AT1R拮抗剂伊贝沙坦(Irbesartan)组:以10-7 mol/LangⅡ与10-5 mol/L伊贝沙坦共同孵育,观察其对心肌细胞凋亡的影响.结果随着时间的延长AngⅡ组TUNEL染色凋亡心肌细胞数量显著增高;同时伴有Bcl-2蛋白表达下降,caspase-3活性增高;加入伊贝沙坦后,TUNEL染色凋亡细胞数下降,caspase-3活性下降.结论血管紧张素Ⅱ可以诱导乳鼠心肌细胞凋亡,伊贝沙坦抑制AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡,其作用可能通过1型受体介导,AngⅡ诱导心肌细胞凋亡是以caspase依赖方式,Bcl-2蛋白参与调节.     

血管紧张素Ⅱ对心肌细胞活力的影响

目的：旨在观察血管紧张素Ⅱ（ＡＮＧⅡ）对心肌细胞活力的影响。方法：本研究利用培养的乳鼠心肌细胞，根据活细胞线粒体在能量代谢过程中可作用于ＭＴＴ产生蓝紫色结晶产物ｆｏｒｍａｚａｎ这一原理，应用ＭＴＴ法测定ＡＮＧⅡ对培养心肌细活力的影响。结果：发现ＡＮＧⅡ在１２ｈ之内使ｆｏｒｍａｚａｎ产物的ＯＤ值逐渐上升，１２ｈ达到高峰，此后开始下降，至２４ｈ已低于正常水平，它们的ＯＤ值之间均有显著的统计学差异（Ｐ〈０．０５或０．０１）。结论：该结果提示ＡＮＧⅡ在早期具有提高心肌细胞活力的效应。这一发现对了解ＡＮＧⅡ在心功能不全代偿和心衰发生中的作用地位具有重要意义。     

乌苏里藜芦生物碱对血管紧张素Ⅱ诱导的乳鼠心肌细胞肥大的影响

[目的]在原代培养的大鼠乳鼠心肌细胞上,观察乌苏里藜芦生物碱(Veratrum nigrum L.Var.ussurience Na-kai alkaloids,VnA)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的大鼠乳鼠的心肌细胞肥大的影响。[方法]通过BCA法测定心肌细胞蛋白含量和显微测微器测定心肌细胞直径,免疫荧光法分析心肌细胞内钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)的表达变化。[结果]在一定剂量范围内VnA能抑制心肌细胞蛋白含量的增加(P<0.01)和细胞体积的增加(P<0.01),细胞内CaN的表达减少。[结论]VnA抑制AngⅡ诱导的乳鼠心肌细胞肥大可能与其抑制细胞内CaN表达有关。     

橙皮素对血管紧张素Ⅱ诱导H9C2心肌细胞肥大的影响

目的 探讨橙皮素对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导H9C2心肌细胞肥大的影响.方法 使用不同浓度橙皮素（0.125、0.25、0.5、1μmol/L）和AngⅡ（1μmol/L）共同孵育H9C2心肌细胞12h,心肌细胞骨架骨骼α肌动蛋白（α-actinin）荧光染色评估H9C2细胞面积改变以及real-time PCR方法检测心肌肥厚标志物BNP、β-MHC的mRNA表达变化,以观察不同浓度橙皮素对AngⅡ诱导H9C2心肌细胞肥大的影响,选择0.25 μmol/L橙皮素和AngⅡ（1μmol/L）共同孵育H9C2心肌细胞6、12、24h,观察橙皮素对AngⅡ诱导H9C2心肌细胞肥大抑制作用的时间相关性.结果 橙皮素干预可以缓解AngⅡ诱导H9C2心肌细胞的细胞面积增大;橙皮素抑制了AngⅡ诱导的H9C2心肌细胞BNP、β-MHC的mRNA表达水平升高.结论 橙皮素能够抑制AngⅡ诱导H9C2心肌细胞肥大,其有可能成为治疗心肌重构新的潜在药物.     

丹参酮Ⅱ A 磺酸钠对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心肌纤维化的影响

目的 观察丹参酮Ⅱ A 磺酸钠（STS）对血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）诱导的大鼠心肌纤维化的影响; 并初步探讨STS 抗心肌纤维化的作用与转录因子NF-E2 相关因子2（Nrf2）所调控的抗氧化应激反应的关系。 方法 40 只SD 大鼠随机分为5 组（对照组,模型组,低、中、高剂量STS 组）,采用皮下植入微量渗透泵缓释 Ang Ⅱ复制大鼠心肌纤维化模型,各STS 组给予不同剂量STS 处理。3 周后,采用苏木精伊红和马松染色法 观察心肌纤维化程度;采用qRT-PCR 和Western blot 检测心肌组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原,Nrf2 和它的胞质接头 蛋白Keap1,以及Nrf2 所调控的抗氧化酶和Ⅱ相解毒酶mRNA 水平及其蛋白水平;采用比色法检测心肌组 织中丙二醛、谷胱甘肽水平及超氧化物歧化酶活性。结果 STS 呈剂量依赖性地减轻Ang Ⅱ诱导的心肌纤维化, 促使Nrf2 在细胞核内的聚集,提高抗氧化酶及Ⅱ相解毒酶的表达,增强抗氧化应激反应,降低心肌组织脂质过 氧化水平。结论 STS 能够有效减轻Ang Ⅱ诱导的大鼠心肌纤维化,其抗纤维化作用与调控Nrf2 信号通路相关。     

血管紧张素Ⅱ诱导人内皮细胞凋亡

为探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)能否诱导人内皮细胞凋亡,将健康胎儿脐静脉内皮细胞培养至第3代,用不同浓度AngⅡ培养不同时间,用TUNEL和ELISA检测细胞凋亡,并检验Caspase-3酶活性变化.用RT-PCR检测AngⅡ受体AT1和AT2的mRNA表达.发现AngⅡ可以诱导出典型的凋亡,凋亡细胞阳性率极显著高于对照组,凋亡强度与AngⅡ呈现剂量依赖关系.Caspase-3酶活性在AngⅡ作用后有极显著的增加.内皮细胞同时表达AT1和AT2的mR-NA.结果表明AngⅡ经AT1或(和)AT2可以诱导人内皮细胞凋亡,并且是Caspase-3依赖性的.这一结果有助于阐明AngⅡ的致病机制.     

血管紧张素Ⅱ促心肌细胞蛋白质合成中信息传递途径的研究

体外研究表明：血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）可引起心肌细胞肥大，但其信息传递途径尚不清楚。本文通过＾３Ｈ－Ｌｅｕ掺入率的测定与ＲＮＡ狭线杂交技术，初步探讨了ＡｎｇⅡ受体、Ｃａ＾２＋及蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）在ＡｕｇⅡ刺激乳鼠心肌细胞蛋白质合成中的作用，并观察了ＡｎｇⅡ对原癌基因ｃ－ｆｏｓ表达的影响。结果发现，培养液中加入钙通道阻断剂－Ｖｅｒａｐａｍｉｌ、细胞外钙螯合剂－ＥＧＴＡ、肌浆网钙释放抑制剂－Ｄａｎｔ     

血管紧张素Ⅱ诱导乳鼠心肌细胞凋亡

目的:观察血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AⅡ)对心肌细胞凋亡的诱导作用及其作用受体.方法:体外培养的Wistar乳鼠心肌细胞,以AⅡ10-11～10-5 mol*L-1孵育24 h,采用流式细胞术及TUNEL方法检测凋亡细胞;然后加入AⅡⅠ型受体阻断剂氯沙坦与AⅡ共同孵育,观察其对AⅡ诱导的心肌细胞凋亡的影响.结果: AⅡ 10-11 mol*L-1组凋亡细胞数量与对照组差异无显著性[(14.63±3.18)% vs (10.55±2.67)%, P>0.05]; AⅡ10-9 mol*L-1组凋亡心肌细胞数量显著高于对照组[(22.18±3.59)% vs (10.55±2.67)%, P<0.01]; AⅡ浓度为10-9 mol*L-1、10-7 mol*L-1和10-5 mol*L-1三组间,凋亡细胞数量差异无显著性[(22.18±3.59)%, (19.07±3.27)%, (25.06±5.64)%,P>0.05].氯沙坦抑制AⅡ诱导的心肌细胞凋亡[(12.87±4.31)% vs(19.07±3.27)%,P<0.05].TUNEL染色支持以上结果.结论:血管紧张素Ⅱ可以诱导乳鼠心肌细胞凋亡,其作用可能通过AⅡⅠ型受体介导.     

STZ糖尿病大鼠心肌细胞凋亡及葡萄糖、血管紧张素Ⅱ、瘦素对心肌细胞凋亡影响的观察

目的　观察链脲佐菌素(STZ)糖尿病大鼠心肌细胞凋亡情况及葡萄糖、血管紧张素Ⅱ、瘦素对正常SD大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法　主动脉插管逆行灌流分离培养STZ糖尿病大鼠和正常SD大鼠心肌细胞,通过Annexin V FITC +PI双染法,采用流式细胞术,检测细胞凋亡情况,并运用细胞免疫荧光染色法检测心肌细胞膜瘦素受体的表达。结果　(1)STZ糖尿病大鼠心肌细胞凋亡较对照组明显增高(P <0 .0 1) ;(2 )在体外培养条件下,血管紧张素Ⅱ、瘦素使心肌细胞凋亡明显增加,且与浓度相关,差异均有显著性(P <0 .0 1) ,在葡萄糖5 .6、2 5mmol/L的培养环境中,心肌细胞凋亡变化不明显(P >0 .0 5 ) ;(3)细胞免疫荧光染色检测瘦素受体表达,在荧光显微镜下可见到心肌细胞膜呈现绿色荧光。结论　STZ糖尿病大鼠的心肌细胞凋亡增高;在体外培养条件下,血管紧张素Ⅱ、瘦素可促进SD大鼠心肌细胞凋亡,且与浓度相关,增加培养环境中的葡萄糖浓度,对SD大鼠心肌细胞的凋亡无明显影响,而瘦素可能通过与心肌细胞膜上瘦素受体结合而发挥作用。     

自噬在血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大中的作用

【目的】探讨自噬在血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导心肌细胞肥大中的作用.【方法】原代培养的乳鼠心肌细胞,采用Ang Ⅱ干预建立心肌肥大的模型;在光学显微镜下观察心肌细胞的形态,采用Real time PCR技术检测心肌细胞肥大标志物心房利钠多肽(ANP)的表达,Western blot法检测LC3蛋白的表达.【结果】 Ang Ⅱ可抑制自噬相关基因LC3蛋白的表达,自噬阻断剂3-甲基腺嘌呤(3MA)会促进AngⅡ诱导的心肌细胞肥大.【结论】AngⅡ可能通过抑制自噬来诱导心肌细胞肥大.     

MicroRNA-185对血管紧张素Ⅱ介导的心肌细胞肥大和凋亡的影响

目的探讨MicroRNA-185(miR-185)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)介导的心肌细胞肥大及凋亡的影响。方法将心肌细胞系H9c2细胞随机分为对照组、AngⅡ处理组、阴性对照组和miR-185过表达组。对照组细胞采用常规培养; AngⅡ处理组细胞常规培养,并给予AngⅡ处理;阴性对照组细胞使用含miR-185阴性对照(NC)的无血清培养基处理24 h后给予AngⅡ处理; miR-185过表达组细胞使用含miR-185模拟物(miR-185 mimic)的无血清培养基培处理24 h后给予AngⅡ处理。采用实时定量聚合酶链反应检测各组细胞中miR-185、心房钠尿肽(ANP)、脑钠肽(BNP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)和细胞分裂周期蛋白42(CDC42) mRNA表达,应用细胞计数试剂盒-8检测各组细胞活性,细胞凋亡检测试剂盒测定各组细胞凋亡小体富计因子水平,Western blot法测定各组细胞中活化型多聚腺苷二磷酸核糖聚合梅(cleaved PARP)、活化型caspase 3和CDC42蛋白表达。结果与对照组比较,AngⅡ处理组和阴性对照组细胞中miR-185相对表达量、细胞活性显著降低(P <0. 05),ANP、BNP、β-MHC和CDC42 mRNA相对表达量、细胞凋亡小体富计因子及活化型PARP、活化型caspase 3和CDC42蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05)。阴性对照组与AngⅡ处理组细胞中miR-185和ANP、BNP、β-MHC、CDC42 mRNA相对表达量、细胞活性、凋亡小体富计因子及活化型PARP、活化型caspase 3、CDC42蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P> 0. 05)。与AngⅡ组和阴性对照组比较,miR-185过表达组细胞中miR-185相对表达量、细胞活性显著升高(P <0. 05),ANP、BNP、β-MHC和CDC42 mRNA相对表达量、细胞凋亡小体富计因子及活化型PARP、活化型caspase 3、CDC42蛋白相对表达量显著降低(P <0. 05)。结论 miR-185可能通过下调心肌细胞中CDC42水平来减轻AngⅡ介导的心肌细胞损伤,抑制AngⅡ介导的心肌细胞肥大和凋亡,改善心肌细胞活性,从而发挥心肌保护作用。     

血管紧张素Ⅱ介导的心肌细胞肥大反应中磷酸化MAPK的作用

【目的】本研究主要是从丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK)激活及失活角度研究该信号途径在血管紧张素Ⅱ (an giotensinⅡ ,AngⅡ )介导的心肌细胞肥大反应中作用。【方法】实验分别以 :①心肌细胞蛋白合成速率作为心肌肥大反应指标 ;②磷酸化MAPK蛋白 (p44MAPK、p42MAPK)表达反映MAPK活性状态。【结果】①AngⅡ (0 .1μmol/L)处理心肌细胞 48h ,可使3H 亮氨酸掺入明显增加 ,该作用可被CV11974明显抑制 (抑制 85 % ) ,而PD0 980 5 9可部分抑制该反应 (抑制 32 5 % ) ;②AngⅡ (0 .1μmol/L)处理心肌细胞 5min ,磷酸化MAPK蛋白表达即开始增加 ,30min左右达到高峰 ,2h基本恢复正常 ,血管紧张素Ⅱ的Ⅰ型受体 (AT1)拮抗剂CV11974(0 .1mmol/L)或MAPK激酶 (MEK)特异性抑制剂PD0 980 5 9(5 0 μmol/L)可明显抑制AngⅡ介导的磷酸化MAPK蛋白表达 (30min时分别下降 89%及 81% )。【结论】AngⅡ主要通过AT1受体激活MAPK及介导心肌肥大反应 ,抑制MAPK的激活可减轻AngⅡ介导的心肌肥大反应。MAPK通路激活是AngⅡ介导的心肌肥大反应重要机制。