茶多酚对人膀胱癌BIU-87细胞间隙连接蛋白43表达和细胞间隙连接通讯功能的影响(英文)

Objective:The aim of our study was to investigate the effects of(-)-epigallocatechin-3-gallate(EGCG,the major phytochemistry component in green tea)on the expression of connexin43(Cx43)gene and detect the intercellular communication of the human bladder cancer cell lines BIU-87,and explore its possible mechanisms of prevention and cure for the bladder tumor.Methods:The methyl thiazolyl tetrazolium and Annexin-V/PI double-labeled flow cytometry methods were used to observe the growth inhibitory rate(IR)and a...     

胃癌中连接蛋白32和43的表达及细胞间隙连接通讯功能的研究

目的探讨细胞间隙连接蛋白(Cx)表达及细胞间隙连接通讯(GJIC)功能状况与胃癌发生、发展的关系。方法采用免疫组化和间接免疫荧光法分别检测胃癌组织和不同分化程度的胃癌细胞系中Cx32和Cx43的表达;应用Western blot法检测Cx43在胃癌组织、癌旁组织及不同分化胃癌细胞系中的表达;应用划痕染料示踪技术检测不同细胞系中细胞GJIC功能。结果在正常胃组织中,Cx32和Cx43的阳性表达率均为100.0%,在胃癌组织中Cx32和Cx43的阳性表达率分别为49.5%(55/111)和39.6%(44/111)。Cx32的表达与组织类型、分化程度、远处转移及临床分期有关(P<0.05),而与侵袭程度、年龄无关(P>0.05);Cx43的表达与组织类型、分化程度、远处转移、侵袭程度及临床分期有关(P<0.05),而与年龄无关。Cx32和Cx43在转化的人胃黏膜细胞系GES-1中的阳性表达率均为100.0%;在胃高分化腺癌细胞系N87中的阳性表达率分别为49.0%和55.0%;在胃低分化腺癌细胞系BGG-823中均无表达。GES-1细胞具有强GJIC功能,N87和BGC-823细胞均无GJIC功能。Cx43在胃癌组织中的表达量明显低于癌旁正常组织,在GES-1和N87细胞中的表达水平依次递减,在BGC-823细胞中几乎无表达。结论Cx32和Cx43表达下降与胃癌的发生、发展有关。     

过表达间隙连接蛋白43表达对宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨过表达间隙连接蛋白43(Cx43)对宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响。方法选取2015年1月至2017年12月间深圳市龙岗区第三人民医院收治的31例宫颈癌患者,手术切除的经病理诊断明确为宫颈癌的组织及配对癌旁组织,采用RT-qPCR法检测宫颈癌组织及癌旁组织中Cx43的表达水平。设计过表达Cx43的慢病毒载体及阴性对照,采用RT-qPCR法检测宫颈癌细胞中Cx43的表达水平,CCK-8实验检测细胞在不同时间点的增殖能力,划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell实验检测细胞的侵袭能力,Caspase-3检测细胞的凋亡。结果 RT-qPCR显示,与癌旁组织相比,Cx43在宫颈癌中表达降低,差异有统计学意义(P <0. 01)。宫颈癌细胞过表达组的Cx43表达均增加,差异均有统计学意义(均P <0. 01)。Cx43表达上调后,宫颈癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力明显下降,细胞凋亡增加,差异均有统计学意义(均P <0. 01)。结论相较于癌旁组织,Cx43在宫颈癌组织中低表达。Cx43在宫颈癌中起到抑癌作用,可作为宫颈癌的治疗靶点。     

间隙连接蛋白43与恶性肿瘤

间隙连接所介导的间隙连接通讯对细胞增殖和分化调控起重要作用,构成间隙连接的是一组具有高度同源性的间隙连接蛋白家族,在转化或肿瘤细胞中间隙连接通讯功能的丧失常伴随间隙连接蛋白家族某一成员表达的改变.间隙连接蛋白43(Cx43)是一种主要的细胞间隙连接蛋白,其表达的异常与多种疾病的发生有关.本文就Cx43与肿瘤发生、发展的关系以及Cx43在肿瘤治疗中的应用进行综述.     

间隙连接蛋白 43在舌鳞状细胞癌中的表达及意义

目的：探讨间隙连接蛋白43（connexin43,Cx43) 在舌癌中的表达及意义。方法：对6例正常舌上皮、24例不同分化程度舌癌的石蜡包埋切片用定量免疫组化检测Cx43蛋白的表达,同时应用流式细胞仪和免疫细胞化学对舌癌细胞株（Tca8113)Cx-43蛋白的表达进行检测。结果：正常 舌上皮中Cx43蛋白定位于棘细胞层的胞膜上,Cx-43阳性表达的 面积和灰度值在正常舌上皮和高分化舌癌之间无显著性差异（P＞0．05）,但Cx43阳性表达的面积随着舌癌细胞分化程度的下降显著降低（P＜0．01）,而且在舌癌组织中Cx－43异常表达于细胞浆。流式细胞仪 和免疫细胞化学检测可见舌癌细胞中Cx43弱表达,细胞阳性率仅为4．8％,而正常舌上皮则为92．3％。结论：该结果提示Cx43表达的改变与舌癌的进展和分化相关。     

Cx43对乳腺癌细胞侵袭和迁移及细胞间隙通讯的影响

目的:探讨Cx43对乳腺癌侵袭、迁移以及细胞间隙通讯功能的影响。方法:用脂质体转染法将Cx43质粒、Cx43 siRNA及阴性对照转染入人乳腺癌细胞株MDA-MB-231。细胞黏附实验、Transwell试验检测细胞黏附、侵袭和迁移能力。分子生物学方法检测MMP-2、MMP-9、BRMS-1的表达。荧光染料传输实验检测不同Cx43表达的细胞间隙通讯的功能。结果:细胞黏附实验结果表明相较于野生型细胞,Cx43 siRNA组黏附能力（0.43±0.07）降低（t=20.801,P=0.002）,Cx43质粒组黏附能力（1.63±0.26）增高（t=5.917,P=0.027）。Transwell实验表明相较野生组,Cx43质粒组侵出小室的细胞数增加（侵袭:1.25±0.04,t=16.339,P=0.004;迁移:1.33±0.02,t=22.770,P=0.002）,而Cx43 siRNA组侵出小室的细胞数减少（迁移:0.84±0.04,t=11.139,P=0.008;侵袭:0.79±0.04,t=5.743,P=0.029）。分子生物学检测发现Cx43质粒组MMP-2、MMP-9表达增高,BRMS-1表达降低,而Cx43 siRNA组MMP-2、MMP-9表达降低,BRMS-1表达增高。染料传输实验证实相较野生组传输能力,Cx43质粒组传输作用增强;Cx43 siRNA组细胞间的传输作用减弱。结论:Cx43对乳腺癌细胞侵袭及迁移能力存在正调控。这一调控能力可能通过GJIC实现。     

维甲酸对HeLa细胞间隙连接蛋白基因cx43表达的调节作用

目的：探讨分化诱导剂维甲对肿瘤抑制基因－细胞间隙连接蛋白基因cx４３在人子宫颈癌细胞系ＨeＬa中表达的调节作用。方法：应用核酸原位杂交、流式细胞仪、Ｗesten blot及Ｌucifer Ｙellow划痕标记荧光传输技术,研究维甲酸作用对ＨeＬa细胞cx４３mＲＮＡ及其蛋白表达,以及对ＨeＬa细胞生长和通迅功能找调节作用。结果：ＨeＬa细胞经维甲酸处理后,原位杂交显示,ＨeＬa细胞cx４３ mＲＮＡ水平上调;流式细胞仪分析,Ｃx４３蛋白     

肺腺癌中间隙连接蛋白Cx43的表达

目的:观察间隙连接蛋白Cx43(connexin 43,Cx43)在人肺癌组织中的表达,并探讨其与肺癌的发生、发展和预后的关系。方法:应用免疫组织化学方法检测146例肺腺癌组织中Cx43的表达,并分析其与癌浸润程度、分化、分期等病理特征及预后之间的相关性。结果:在高/中分化和低/未分化的肺腺癌组织中阳性表达率分别为48.7%和30.0%(P<0.05);Cx43在无淋巴结转移和有淋巴结转移的肺腺癌组织中阳性表达率分别为56.3%和34.5%(P<0.05);Cx43在I、II期和III、IV期肺腺癌组织中的阳性表达率分别为51.6%和34.0%(P<0.05)。结论:Cx43的表达与人肺腺癌的组织分化、淋巴结转移、TNM分期、预后相关,可能参与人肺腺癌发生发展的过程,并可能是肺腺癌预后相关的指标之一。     

As2O3对人膀胱癌细胞株BIU-87作用的体外研究

目的　观察三氧化二砷 (As2 O3 )对人膀胱癌细胞株BIU 87的作用 ,并探讨其作用机制。方法　采用四氮唑蓝(MTT )法检测As2 O3 不同浓度、不同作用时间对BIU 87细胞株的生长抑制率 ;流式细胞术 (FCM )检测不同浓度As2 O3 作用 72h后细胞中凋亡相关蛋白Fas、bcl 2的表达及细胞周期变化。结果　As2 O3 可有效抑制BIU 87细胞株的生长 ,具有浓度、时间依赖性特点。Fas、bcl 2的表达与As2 O3 浓度增高分别呈正、负相关 (P <0 .0 5 ) ,且随As2 O3 浓度增高Fas、bcl 2的表达呈负相关 (P <0 .0 5 )。随As2 O3 浓度增高细胞周期被阻滞在G0 /G1期。结论　As2 O3 可有效抑制人膀胱癌BIU 87细胞株的生长增殖 ,阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡可能起了重要作用     

氧化应激对大肠癌细胞迁移、血管内皮生长因子表达及细胞间通信的影响

目的探讨氧化应激对大肠癌细胞迁移能力、血管内皮细胞生长因子表达及细胞间通信的影响。方法使用H2O2模拟大肠腔内氧化应激环境,通过不同浓度H₂O₂刺激人结肠癌细胞HCT-8,使癌细胞处于氧化应激状态,通过Transwell小室观察大肠癌细胞迁移能力;利用免疫细胞化学观察VEGF表达;利用划痕染料传输试验LY/DT法测定细胞间通信连接,最后利用Western blot进一步检测细胞间通信连接蛋白（Connexin 43）的表达。结果当H₂O₂浓度≤10-5mol/L时,不同程度地促进细胞的迁移,上调结肠癌细胞HCT-8 VEGF的表达,抑制细胞间通信;当H2O2浓度为10-5mol/L时, 明显促进细胞的迁移（t=2.247,P<0.05）,上调结肠癌细胞HCT-8 VEGF的表达（Z=3.938,P=0.000）,抑制细胞间通信(Z=3.860,P=0.000)。 结论大肠癌细胞在过氧化物刺激的情况下,促进细胞迁移,诱导血管内皮生长,抑制细胞间通信,在大肠肿瘤的进展中可能具有促进作用。     

三氧化二砷对人膀胱癌细胞BIU-87作用的体外研究

目的观察三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对人膀胱癌细胞株BIU-87的作用,并探讨其作用机制.方法采用四氮唑蓝(MTT)法检测As2O3不同浓度、不同时间对BIU-87细胞的生长抑制率,同时流式细胞仪检测不同浓度As2O3作用72 h后细胞中与凋亡有关蛋白Fas、Bcl-2的表达.结果As2O3可有效抑制BIU-87细胞的生长,具有浓度、时间依赖性特点.Fas、Bcl-2的表达分别与浓度增加呈正、负相关,P<0.05,且二者随浓度增高呈负相关,P<0.05.结论As2O3可有效抑制膀胱癌细胞生长,其作用机制与凋亡有关.     

胃癌组织中间隙连接超微结构改变及间隙连接蛋白-43的表达及其意义

目的 观察胃癌组织中间隙连接结构的改变,并检测Cx43蛋白及mRNA在组织中的表达,为胃癌的发病机制研究提供新的思路,同时也为药物治疗提供潜在的作用靶点。方法 通过透射电子显微镜技术观察正常胃与胃癌组织中间隙连接的变化;利用Western blot和 RT-PCR技术检测Cx43在正常胃与胃癌组织中的表达水平。结果 胃癌组织超微结构中细胞间隙连接破坏,分化越差破坏越严重,在正常胃组织中Cx43蛋白及mRNA的表达高于胃癌组织中的表达（P<0.05）,在胃癌组织中高-中分化者Cx43蛋白及mRNA表达高于低分化者（P<0.05）,胃癌组织中TNM分期Ⅰ/ⅡCx43蛋白及mRNA表达高于Ⅲ/Ⅳ期的表达（P<0.05）,胃癌组织中浸润深度未侵及浆膜层者Cx43蛋白及mRNA的表达高于侵及浆膜层者（P<0.05）,胃癌组织中无淋巴结转移者Cx43蛋白及mRNA的表达高于有淋巴结转移者(P<0.05）,Cx43蛋白及mRNA在不同年龄和性别组中的表达差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 间隙连接超微结构的改变同Cx43蛋白及mRNA的异常表达与胃癌的发生、发展有关,这为胃癌的发病及靶向治疗提供了新的方向。     

细胞间隙连接基因connexin32、connexin43及其蛋白在肝癌细胞系中的表达

为了探讨细胞间隙连接ｃｏｎｎｅｘｉｎ（ｃｘ）基因及其蛋白产物在肝癌细胞系的表达及意义,应用核酸分子原位杂交和流式细胞仪分析技术,研究肝癌细胞系ＨＨＣＣ、ＳＭＭＣ７７２１和正常肝细胞系ＱＺＧ中,间隙连接基因ｃｘ３２、ｃｘ４３ｍＲＮＡ及其蛋白产物的表达规律。原位杂交显示,ｃｘ３２、ｃｘ４３ｍＲＮＡ在ＨＨＣＣ、ＳＭＭＣ７７２１和ＱＺＧ中均呈强阳性。流式细胞仪分析,Ｃｘ３２蛋白在ＨＨＣＣ、ＳＭＭＣ７７２１和ＱＺＧ中阳性细胞计数率分别为１．９％、１．７％和９９．０％,Ｃｘ４３蛋白阳性细胞计数率分别为７．３％、２．３％和９９．１％。Ｃｘ３２、Ｃｘ４３蛋白在ＨＨＣＣ、ＳＭＭＣ７７２１中阳性细胞计数率与ＱＺＧ相比,有非常显著性差异（Ｐ＜０．０１）。ｃｘ３２、ｃｘ４３基因在转录后水平的调控异常所导致的蛋白表达降低与ＨＣＣ的发生密切相关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯抗肿瘤分子机制

茶多酚及其主要成分表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)具有明显的抗肿瘤作用,既可通过抑制核转录因子-κB(NF-κB)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、表皮生长因子受体、胰岛素样生长因子、环氧合酶(COX)-2等相关信号通路防止肿瘤发生,也可通过抑制血管内皮生长因子、基质金属蛋白酶(MMP)、尿激酶纤溶酶原激活物等途径阻止肿瘤转移,有望成为一种天然的抗肿瘤药物。     

Sulforaphane Inhibits the Proliferation of the BIU87 Bladder Cancer Cell Line via IGFBP-3 Elevation

Aim: To investigate effects of sulforaphane on the BIU87 cell line and underlying mechanisms involvingIGFBP-3. Methods: Both BIU87 and IGFBP-3-silenced BIU87 cells were treated with sulforaphane. Cellproliferation was detected by MTT assay. Cell cycle and apoptosis were determined via flow cytometry.Quantitative polymerase chain reaction and Western blotting were applied to analyze the expression of IGFBP-3and NF-κB at both mRNA and protein levels. Results: Sulforaphane (80 μM) treatment could inhibit cellproliferation, inducing apoptosis and cell cycle arrest at G2/M phase. All these effects could be antagonized byIGFBP-3 silencing. Furthermore, sulforaphane (80 μM) could down-regulate NF-κB expression while elevatingthat of IGFBP-3. Conclusions: Sulforaphane could suppress the proliferation of BIU87 cells via enhancingIGFBP-3 expression, which negatively regulating the NF-κB signaling pathway.     

锰卟啉光动力学疗法对人膀胱癌BIU-87细胞Bcl-2表达的影响

[目的]研究锰卟啉的光动力学疗法(PDT)对人膀胱癌BIU-87细胞Bcl-2表达的影响,探讨其诱导BIU-87细胞凋亡的机制.[方法]合成水溶性金属卟啉化合物5,10,15,20.四(N-甲基-4-吡啶基)锰卟啉四碘盐(锰卟啉)后,分别采用膜联蛋白(Annexin-V),碘化丙锭(PI)双标记流式细胞术、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western-blotting检测锰卟啉在不同时间(0、10、20、30min)的PDT对人膀胱癌BIU-87细胞的凋亡率和Bcl-2 mRNA及其蛋白质表达水平的影响.[结果]1μmol/L锰卟啉的PDT作用20min和30min后均能诱导BIU-87细胞凋亡,凋亡率分别为9.08%±1.55%、19.15%±2.39%;在诱导细胞凋亡过程中,锰卟啉的PDT能显著抑制BIU-87细胞中Bcl-2 mRNA和相应蛋白质的表达,且锰卟啉的PDT作用对细胞凋亡和Bcl-2表达的影响有显著的光照剂量依赖性.[结论]适宜光照剂量锰卟啉的PDT可以通过抑制凋亡抑制基因Bcl-2的表达来诱导BIU-87细胞发生凋亡,为金属卟啉PDT的临床应用提供了实验依据.     

沙利度胺对前列腺癌PC-3细胞的增殖及细胞缝隙连接通讯的影响

  目的  观察沙利度胺对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的作用及对PC-3细胞中Cx43表达水平的影响。   方法  将处于对数生长期的前列腺癌PC-3细胞分别给予递增浓度的沙利度胺(0、12.5、25、50、100μg/mL)处理24 h和48 h。采用CCK-8法检测不同浓度沙利度胺对PC-3细胞的增殖抑制影响, Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡情况, RT-PCR法检测Cx43mRNA的表达及Westernblot检测Cx43蛋白的表达。   结果   沙利度胺浓度在25~100μg/mL能明显抑制PC-3细胞体外增殖, 随着时间、浓度增加, 抑制率相应升高。不同浓度组沙利度胺处理PC-3细胞24~48 h后, Cx43 mRNA和蛋白有不同程度的升高(P < 0.05)。   结论  沙利度胺可通过抑制人前列腺癌PC-3细胞增殖、诱导其凋亡, 产生抗肿瘤作用。沙利度胺可上调前列腺癌PC-3细胞Cx43mRNA及蛋白的表达水平, 并可能促进前列腺癌PC-3细胞的细胞缝隙连接通讯功能的恢复, 从而抑制肿瘤生长。