慢性阻塞性肺疾病患者肺组织和血清HMGB1的表达及与TNF-α和IL-1β的相关性

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肺组织和血清高迁移率族蛋白1(HMGB1)的表达及与肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1β的相关性。方法采用RT-PCR及免疫组化染色法分别检测24例COPD伴肺癌患者(观察组)和24例无COPD肺癌患者(对照组)的肺组织中HMGB1的mRNA和蛋白表达,并采用ELISA法检测同期入院的COPD急性加重患者156例、稳定期患者80例和健康对照80例血清HMGB1、TNF-α和IL-1β水平,对结果进行比较并进行相关性分析。结果观察组24例标本中22例阳性,阳性率87.5%;对照组24例标本中10例染色阳性,阳性率41.6%(χ2=11.02,P<0.01)。对照组HMGB1蛋白的平均光密度值显著低于观察组(t=7.91,P<0.05)。对照组HMGB1的mRNA转录水平显著低于观察组(t=14.68,P<0.01)。COPD急性期和COPD稳定期患者血清HMGB1、TNF-α、IL-1β水平相比对照组明显较高,且COPD急性期患者相比稳定期患者明显较高。重度COPD、肺部多发肺大泡患者血清HMGB1、TNF-α、IL-1β水平相比轻中度、肺部无肺大泡患者明显较高。无呼吸衰竭患者的HMGB1明显低于有呼吸衰竭患者,差异显著(t=2.122,P<0.05),而呼吸是否衰竭在TNF-α、IL-1β水平上无差异。COPD急性加重期患者血清HMGB1与TNF-α、IL-1β水平存在显著相关(r=0.602、0.738,均P<0.01)。结论 COPD病程中,HMGB1于肺组织和血清中高度表达,并同TNF-α和IL-1β等多种炎性介质相互作用。     

慢性阻塞性肺疾病患者Clara细胞形态和功能的改变

目的探讨Clara细胞在慢性阻塞性肺疾病(COPD)发病中的作用.方法收集COPD患者肺手术标本13例,并收集年龄、吸烟指数(吸烟支数/天×年)相近的非COPD患者13例肺标本,免疫组化法观察小气道中Clara细胞所占比例及分布,RNA酶保护实验测定肺组织中CC16mRNA表达水平,Westem法测定CC16蛋白水平.结果COPD组呼吸性细支气管中Clara细胞数目低于非COPD组(P＜0.05),肺组织中CC16mRNA的表达低于非COPD组(P＜0.05),CC16蛋白水平在两组中差异无显著性.结论Clara细胞的数目与功能的变化可能是COPD形成的机制之一.     

神经生长因子在慢性阻塞性肺疾病大鼠血、肺组织、支气管灌洗液中的表达

目的建立单纯香烟刺激诱导的慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型,并观察神经生长因子(NGF)在香烟刺激COPD大鼠、戒烟1个月COPD大鼠中血、肺组织、支气管灌洗液中的表达变化。方法24只雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、COPD组、戒烟1个月COPD组,采用6个月单纯香烟刺激建立COPD大鼠模型。通过观察肺组织病理变化、检测大鼠肺功能、对支气管肺泡灌洗液行分类计数评估COPD动物模型。并测定3组血、肺组织、支气管肺泡灌洗液中NGF蛋白、NGF mRNA表达。结果COPD组、戒烟1个月COPD组大鼠肺组织病理均显示肺气肿形成明显,相比正常对照组,肺顺应性和每分钟通气量均明显下降,气道阻力明显升高(均P<0.05)。COPD组、戒烟1个月COPD组支气管肺泡灌洗液的巨噬细胞总数显著多于正常对照组(P<0.05),但这两组之间差异无统计学意义(P>0.05)。3组血中NGF表达差异无统计学意义(P>0.05),COPD组、戒烟个1月COPD组肺组织、支气管肺泡灌洗液中NGF蛋白、NGF mRNA表达较正常对照组明显升高(均P<0.05),但这两组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论通过6个月单纯香烟刺激成功建立COPD大鼠模型,并且戒烟1个月后,停止造模干预,COPD病变仍持续存在。NGF持续性参与COPD的发生发展,即使戒烟,NGF仍参与肺局部炎症反应。     

血红素氧合酶在慢性阻塞性肺疾病患者中的表达

目的 观察血红素氧合酶（HO）在慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者中的表达及其变化。方法 设COPD组、COPD合并肺癌组、单纯肺癌组及正常健康组。4组均进行血气分析和肺功能测定。应用紫外分光光度计间接测定动脉血一氧化碳血红蛋白（COHb)含量和肺脏HO－1的活性。用逆转录－聚合酶链反应检测肺脏和肺动脉组织HO mRNA表达水平。用免疫组化法测定肺脏组织HO蛋白的表达。结果 COPD组和COPD合并肺癌组患者动脉血氧分压低于60mm Hg(1mm Hg=0.133kPa),提示这两组患者均为Ⅰ型呼吸衰竭患者。与正常健康组比较,这两组患者的肺一氧化碳弥散量、肺一氧化碳弥散量／肺泡通气量及1秒钟用力呼气容积占预计值的百分比均显著降低,残气容积／肺总量显著升高,提示这两组患者均患有中度COPD（Ⅱ级）。这两组患者的COHb明显高于单纯肺癌组和正常健康组（P＜0.01),单纯肺癌组和正常健康组比较差异无显著性。COPD合并肺癌组患者胆红素生成量、肺脏及肺动脉组织HO－1mRNA吸光度值明显高于单纯肺癌组和正常健康组。HO－1免疫组化染色显示,COPD合并肺癌组非癌变肺组织肺泡壁细胞、肺内小血管和支气管壁细胞胞质HO－1的表达显著增强。结论 COPD患者HO－1表达增多。     

COPD模型大鼠肺组织TGF-β1 mRNA的表达及意义

目的探讨转化生长因子良（TGF-β1）在长期吸烟所致慢性阻塞性肺疾病（COPD）病理变化中的作用。方法将大鼠随机分为对照组和模型组，分别分为1-6月组，每组6只。建立大鼠吸烟COPD模型。光镜下观察吸烟对大鼠肺组织结构的影响，RT-PCR方法检测TGF-β1mRNA在肺组织中的表达。结果随吸烟时间延长，肺泡腔不规则扩大，肺泡间隔破裂，有的肺泡融合成肺大泡，以吸烟6月组最为明显，肺组织结构表明COPD模型建立成功。RT-PCR结果表明，TGF-β1mRNA在正常肺组织中呈微弱表达，随吸烟时间的延长，TGF-β1mRNA表达增多，5月组表达最多。结论长期吸烟可引起气道壁炎细胞浸润及肺组织形态学变化，导致COPD发生。TGF-β1，表达随吸烟月份增加逐渐增多，肺组织结构破坏与TGF-β1表达有相关性，表明TGF-β1在COPD的发生和发展过程中起重要作用。     

细胞色素C氧化酶在慢性阻塞性肺疾病中的表达及其与肺血管内皮细胞凋亡的关系

目的 观察COPD患者肺组织中细胞色素C氧化酶(COX)和血管内皮细胞凋亡的变化,探讨COPD的发病机制.方法 2007年9月至2008年5月在中南大学湘雅二医院行肺切除术的周围型肺癌患者20例,参照COPD的诊断标准和患者的吸烟状况分为对照组(7例)、吸烟非COPD组(7例)和吸烟并COPD组(6例),取远离病变的肺组织.采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测肺血管内皮细胞凋亡,采用分光光度法、半定量逆转录PCR法和Western blot法分别检测肺组织中COX活性、COXⅡ亚基(COXⅡ)mRNA和蛋白表达,免疫组织化学法检测肺血管内皮细胞COXⅡ蛋白的分布和表达.多组间比较采用单因素方差分析,用LSD-t检验进行两两比较.结果 吸烟并COPD组肺血管内皮细胞凋亡指数为(13.8±1.9)%,明显高于吸烟非COPD组[(9.6±0.8)%]和对照组[(5.9±1.0)%];吸烟并COPD组肺组织中COX活性为(4.4±0.7)×105U/kg,COXⅡmRNA相对表达量为0.76±0.17,肺血管内皮细胞中COXⅡ蛋白相对表达量为14.5±1.6,明显低于吸烟非COPD组[(6.0±0.6)×105 U/kg、0.81±0.15和18.6±2.1]和对照组[(7.6±0.4)× 105U/kg、0.86±0.20和23.8±3.4],差异均有统计学意义(t值为-13.66～13.27,均P＜0.05);COX活性与FEV1占预计值%和FEV1/FVC呈显著正相关(r值分别为0.84和0.91,均P＜0.01),与吸烟指数呈显著负相关(r=-0.78,P＜0.01);肺血管内皮细胞凋亡与COXⅡ蛋白表达呈显著负相关(r=-0.75,P＜0.01).结论 COPD患者的肺血管内皮细胞凋亡增加,COX表达和活性下降,且均与吸烟有相关性.COX可能参与介导COPD肺血管内皮细胞凋亡过程.     

姜黄素对COPD大鼠IL-1β和IL-17的影响

目的 探讨姜黄素干预对COPD大鼠IL-1β和IL-17水平的影响.方法 将雄性SD大鼠38只随机分为正常对照组、COPD模型组、姜黄素干预组和溶剂对照组,采用香烟烟熏加气管内注射脂多糖方法建立COPD大鼠模型,并按照分组情况对大鼠进行干预.干预结束后计数BALF中的炎症细胞总数、中性粒细胞和巨噬细胞数量,HE染色观察大鼠气道炎症及肺气肿程度,酶联免疫吸附测定检测血清和BALF中IL-1β、IL-17含量,实时荧光定量聚合酶链式反应检测肺组织中IL-1β、IL-17mRNA表达水平.结果 与正常对照组比较,COPD模型组BALF中炎症细胞总数、中性粒细胞和巨噬细胞数量均显著升高(P＜0.05);姜黄素干预组大鼠BALF中炎症细胞总数、中性粒细胞和巨噬细胞数量较COPD模型组降低(P＜0.05).组织病理学显示COPD模型组大鼠小气道周围大量炎症细胞聚集、肺泡腔扩张,姜黄素干预可减轻小气道周围炎症细胞聚集及肺泡腔扩张.与正常对照组相比,COPD模型组大鼠血清和BALF中IL-1β、IL-17含量升高,肺组织中IL-1β、IL-17mRNA表达水平上调,差异有统计学意义(P＜0.05).姜黄素干预后COPD大鼠血清和BALF中IL-1β、IL-17含量下降,肺组织中IL-1β、IL-17mRNA表达水平降低,与COPD模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 姜黄素对COPD具有保护作用,其机制可能与抑制IL-1β、IL-17炎症因子释放有关.     

前列环素在慢性阻塞性肺疾病患者肺组织中的表达

目的 研究前列环素在慢性阻塞性肺疾病患者肺组织中的表达变化.方法 分别采集湘雅二医院2008年6-10月因肺癌、肺大疱入院行肺叶切除术的患者22例的肺组织标本,分为COPD组(12例)和对照组(10例).采用缺口末端标记法定量测定肺血管内皮细胞凋亡,免疫组织化学法检测前列环素合酶(PGI_2-S)蛋白表达,酶联免疫吸附试验测定6-酮前列腺素F_(1α)含量变化.两组间比较采用t检验.结果 COPD组肺中型血管和微小型血管内皮细胞凋亡指数[(12.9±2.0)%和(11.4±1.4)%]明显高于对照组[(6.1±1.2)%和(5.9±0.4)%],PGI_2-S蛋白表达率[(55.2±9.8)%和(42.3±5.1)%]明显低于对照组[(95.4±2.1)%和(82.3±7.4)%],气道上皮细胞中PGI_2-S蛋白表达率[(31.8±5.2)%]明显低于对照组[(95.5±2.2)%],6-酮前列腺素F_(1α)含量[(2.6±0.4)μg/L]明显低于对照组[(16.2±2.8)μg/L],差异均有统计学意义(t值为9.6～173.6,均P<0.01).结论 COPD患者肺血管内皮细胞存在异常凋亡现象,PGI_2-S蛋白表达下降,肺组织中前列环素生成明显减少,这些变化可能是COPD患者肺血管内皮细胞功能异常的组织学标志,并参与COPD的发生与发展.     

神经生长因子及其酪氨酸激酶A受体在慢性阻塞性肺疾病大鼠肺泡巨噬细胞中的表达

目的 观察神经生长因子(NGF)及其酪氨酸激酶A(TrkA)受体在COPD大鼠肺泡巨噬细胞的表达变化.方法 40只雄性SD大鼠,随机分为对照组和COPD组,每组20只.采用6个月单纯烟熏法建立COPD大鼠模型,并检测肺功能,HE染色观察肺组织病理变化.从支气管肺泡灌洗液中分离纯化出肺泡巨噬细胞,用酶联免疫吸附法测定肺泡巨噬细胞培养液的上清液中NGF蛋白表达,激光共聚焦法鉴定肺泡巨噬细胞以及半定量检测肺泡巨噬细胞的TrkA蛋白表达.实时荧光定量PCR法检测肺泡巨噬细胞的NGF mRNA及TrkA mRNA表达.两组间比较采用单因素方差分析,组间比较采用t检验.结果 COPD组大鼠肺顺应性为(0.15 ±0.03) ml/cm H2O(1 cm H2O =0.098kPa),每分通气量为(0.045±0.004)L,均显著低于对照组的(0.42±0.05) ml/cm H2O和(0.102±0.010)L,差异均有统计学意义(t值分别为9.46和12.99,均P＜0.01)；气道阻力为(0.038±0.004)cm H20·L-1·S-1,显著高于对照组的(0.016±0.002)cm H2O·L-1·s-1,差异有统计学意义(t=11.55,P＜0.01).肺组织病理显示,COPD组大鼠肺泡壁变薄,肺泡间隔破裂,肺泡腔不规则扩大,部分融合形成肺大疱,肺气肿形成.COPD组NGF蛋白表达量为(3.79±1.52) ng/L,显著高于对照组的(0.94±0.27) ng/L,差异有统计学意义(t=4.13,P ＜0.05).COPD组TrkA蛋白平均荧光强度值(19.5±1.5)显著高于对照组(11.2±1.9),差异有统计学意义(t=7.95,P＜0.05).COPD组NGF和TrkA的mRNA表达量(24.8±6.0和9.0±3.3)显著高于对照组(1.0±0.2和1.0±0.4),差异均有统计学意义(t值分别为8.48和5.16,均P＜0.05).结论 COPD组肺泡巨噬细胞高表达NGF及其TrkA受体,提示NGF及其TrkA受体可能介导肺泡巨噬细胞参与COPD的发病过程.     

非小细胞肺癌组织中β-连环蛋白、Cyclin D1的表达及意义

目的观察非小细胞肺癌组织中的β-连环蛋白和Cychn D1的表达变化及意义。方法采用免疫组织化学SP法检测42例非小细胞肺癌及10例肺良性病变组织中的β-连环蛋白和Cyclin D1蛋白。结果在10例肺良性病变组织中β-连环蛋白表达正常,Cyclin D1均呈阴性表达;而在42例非小细胞肺癌组织中β-连环蛋白异常表达率为71．4％,Cyclin D1阳性表达率为76．2％。β-连环蛋白异常表达率与非小细胞肺癌的淋巴结转移情况和生存期有关（P均〈0．05）。Cyclin D1表达阳性率与非小细胞肺癌的分化程度和增殖活性密切相关（P均〈0．05）;β-连环蛋白异常表达与Cyclin D1阳性表达在非小细胞肺癌中呈显著的正相关性（r=0．324,P〈0．05）。结论非小细胞肺癌中β-连环蛋白表达异常、Cyclin D1蛋白表达上调。β-连环蛋白的异常表达可能是非小细胞肺癌转移的分子机制之一。     

辛伐他汀通过调控NOTCH信号通路来抑制慢阻肺免疫失衡和炎症反应

目的探究辛伐他汀对慢阻肺炎症反应的影响及所涉及的相关机制。方法将小鼠随机分为健康对照组、COPD组、辛伐他汀治疗组(EXP组)。采用熏烟法制备COPD模型。从建模第61d起,EXP组每隔一天以1mg/kg的剂量腹腔内注射辛伐他汀,直到第90d。健康组和COPD组腹腔注射生理盐水。建模完成后,检查峰值吸气流量(PIF)和峰值呼气流量(PEF)评估小鼠肺功能。处死后,采用HE染色法进行肺组织病理形态学观察,流式细胞术进行CD~+_4T细胞亚群检测,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Notch1/2/3/4,Hes1/5和Hey1 mRNA表达,蛋白免疫印迹分析(WB)进行检测Notch1/2/3/4,Hes1/5和Hey1蛋白表达,ELISA方法进行检测血清INF-γ, IL-4, IL-17,和IL-10浓度。结果 COPD组PIF和PEF显著低于健康对照组,EXP组PIF和PEF显著高于COPD组。COPD组小鼠肺组织发生病理损伤,EXP组病理损伤有改善。与健康组相比,COPD组Th1和Th17相对于总T细胞的比例均显著增加,而Th2和Treg相对于总T细胞的比例均降低,且Th1/Th2和Th17/Treg比值显著增加。EXP组使这些改变恢复平衡。COPD组小鼠T细胞Notch1/2/3/4受体、Hes1/5和Hey1的mRNA和蛋白水平均高于健康对照组,而与COPD组相比,EXP组Notch1/2/3/4受体、Hes1/5和Hey1的mRNA和蛋白水平均显著降低。与健康组相比,COPD组血清INF-γ和IL-17的分泌显著增加,血清IL-4和IL-10的分泌显著降低。与COPD组相比,EXP组血清INF-γ和IL-17的分泌显著降低,血清IL-4和IL-10的分泌显著增加。上述变化在EXP组和健康组中差异无统计学意义。结论辛伐他汀改善COPD小鼠的肺部功能,且改善COPD小鼠肺组织病理损伤。且辛伐他汀通过调控Notch信号通路来调节COPD免疫紊乱和炎症反应。     

Siah、PHDs和HIFs-α在慢性阻塞性肺疾病患者中的表达变化

目的 研究慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肺动脉高压形成过程中Siah表达变化的规律及与PHDs和HIFs-α的相关关系.方法 HE染色检测COPD患者和对照组患者肺小动脉形态学改变,应用原位杂交检测肺小动脉壁内Siah、PHDs及HIFs-α mRNA的表达水平,应用免疫组织化学检测肺小动脉壁内Siah、PHDs及HIFs-α蛋白质表达水平.结果 COPD患者肺小血管HIFs-α mRNA和蛋白质表达均增高,蛋白质增高更明显,COPD患者PHD1 mRNA与对照组比较差异无统计学意义,PHD2、PHD3 mRNA表达明显增高,PHD1蛋白质表达水平降低,PHD2蛋白质水平升高,PHD3较对照组比较差异无统计学意义.COPD组Siah1和Siah2蛋白质与mRNA的表达均有升高,与对照组比较差异有统计学意义.直线相关分析表明,Siah1、Siah2蛋白质与HIFs-α蛋白质呈正相关.结论 COPD患者中Siah1与Siah2可能通过泛素-蛋白酶体途径在转录后水平对PHDs的蛋白稳定性进行调节,间接对HIFs起正调控作用.     

核因子κB和缺氧诱导因子1在慢性阻塞性肺疾病患者外周血单个核细胞中的表达

目的 探讨核因子κB (NF-κB)和缺氧诱导因子1(HIF-1)在老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达,明确NF-κB和HIF-1在COPD发病机制中的作用.方法 通过Western blotting法、实时荧光定量PCR法分别测定稳定期COPD患者(中度以上,30例)、对照组(30例)PBMC的NF-κB、HIF-1蛋白水平和NF-κB、HIF-1 mRNA水平.结果 COPD组PBMC细胞中NF-κB mRNA、HIF-1 mRNA水平均显著高于对照组(0.013±0.010比0.005±0.003,P＜0.01;0.030±0.025比0.008±0.006,P＜0.01).COPD组PBMC细胞核中NF-κB、HIF-1蛋白表达均高于对照组,差异有统计学意义(1.08±0.12比0.87±0.09,P＜0.01;1.12±0.09比0.97±0.17,P=0.002).NF-κB蛋白在各COPD组差异有统计学意义(P＜0.01),与FEV1％ pred呈显著负相关(r=-0.657,P ＜0.01).NF-κB mRNA、HIF-1 mRNA、HIF-1蛋白在各COPD组差异均无统计学意义,与FEV1％pred均无相关性(P值均＞0.05).NF-κB mRNA与HIF-1 mRNA呈正相关(r=0.673,P＜0.01),NF-κB、HIF-1蛋白表达呈正相关(r=0.56,P=0.001).结论 COPD患者PBMC中NF-κB、HIF-1mRNA水平及蛋白水平表达均增加,且HIF-1在各严重程度的COPD中稳定表达,NF-κB蛋白表达与疾病严重程度相关.表明中度以上COPD患者在慢性持续性缺氧的情况下既启动了全身的炎症反应同时也启动了适应性保护机制.     

50例舒利迭治疗慢性阻塞性肺疾病的临床分析

目的探讨舒利迭对COPDⅢ-Ⅳ级患者肺功能的疗效。方法将100例COPDⅢ-Ⅳ级患者随机分为试验组50例和对照组50例，两组患者在基础治疗相同的基础上，试验组吸入舒利迭，对照组吸人辅舒酮（丙酸氟替卡松）加万托林，疗程均为3个月。疗程结束后进行肺功能检查、疗效分析。结果两组患者在治疗前后肺通气功能指标FEV1／FVC均有改善，其中试验组COPD患者的肺通气功能较对照组改善更加显著；试验组的疗效（有效率94％）优于对照组（有效率74％）。比较均有统计学差异，P〈O．05。结论舒利迭可以改善稳定期COPD患者的肺功能，可作为稳定期COPD长期治疗的常规药物。     

辛伐他汀对COPD大鼠肺组织细胞凋亡的影响及其机制探讨

目的观察辛伐他汀对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织细胞凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法将30只大鼠随机分为三组,正常组不予处理,对照组及治疗组建立大鼠COPD模型,香烟暴露2周后治疗组同时给予辛伐他汀治疗6周;8周后处死大鼠,TUNEL法测算肺组织细胞凋亡指数(AI),RT-PCR法检测肺组织中的Caspase-3、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因。结果正常组肺泡上皮细胞AI为6.21%±1.28%、气道上皮细胞AI为3.55%±0.87%,对照组分别为31.41%±2.67%、17.86%±2.7%,治疗组分别为20.98%±3.00%、10.20%±1.52%。对照组、治疗组AI与正常组比较,P均<0.05;治疗组与对照组AI比较,P<0.05。与正常组比较,对照组、治疗组肺组织中Caspase-3、iNOS mRNA表达量增加、eNOS mRNA表达量降低(P均<0.05);且对照组变化更显著(P均<0.05)。各组大鼠肺组织中Caspase-3 mRNA与iNOS mRNA的表达呈正相关(r分别为0.94、0.89、0.91,P均<0.05),与eNOS mRNA表达呈负相关(r分别为-0.88、-0.65、-0.92,P均<0.05)。结论辛伐他汀对COPD大鼠肺组织细胞凋亡有抑制作用;该作用与其增加COPD大鼠肺组织中eNOS mRNA表达,减少iNOS mRNA、Caspase-3 mRNA表达有关。     

慢性阻塞性肺疾病大鼠磷脂酰肌醇-3激酶、蛋白激酶B及γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶表达研究

目的通过观察COPD大鼠中磷脂酰肌醇-3激酶（phosphoinositide-3 kinases,P13K）、蛋白激酶B（protein kinaseB,PKB）与γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（gamma glutamylcysteine synthetase,γ-GCS）的表达,研究P13K、PKB通路和rGCS的关系及其在COPD中可能的参与机制。方法30只健康雄性Wistar大鼠随机分COPD组和对照组。采用每日熏香烟和两次气管内注入脂多糖法制作COPD大鼠模型。检测大鼠肺组织中7-GCS活性,原位杂交检测肺组织中rGCSmRNA的表达,免疫组织化学分析肺组织中P13K、PKB与γ-GCS蛋白水平。结果COPD组大鼠肺组织中γ-GCS差异（P〈0．01）。P13K、PKB与γ-GCS免疫组织化学在COPD组可见肺泡、支气管活性明显高于对照组,组间差异有统计学意义（P〈0．01）。原位杂交示COPD组大鼠支气管,肺泡上皮细胞与小动脉平滑肌细胞7-GCSmRNA广泛表达,与对照组有显著性壁细胞及小血管平滑肌细胞胞浆中皆有蛋白阳性信号表达;图象定量分析示大鼠COPD组P13K、PKB与γ-GCS蛋白表达显著高于对照组（P〈0．01）。直线相关分析得出P13K、p—PKB蛋白表达与γ-GCS活性、mRNA及蛋白表达呈正相关。结论COPD大鼠肺组织7-GCS蛋白和mRNA表达增高,P13K、p-PKB蛋白也有相应高表达,提示P13K、PKB和γ-GCS可能在COPD的发病机制中发挥作用,且可能参与了γ-GCS的信号转导通路。     

慢性阻塞性肺疾病患者肺小血管低氧诱导因子-α的表达

目的通过观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肺小动脉内低氧诱导因子(HIF)-α的表达,探讨其在肺血管重塑中的可能作用。方法选因肺肿瘤行肺叶切除者,诊断符合COPD者入选COPD组(12例),不符合者入选对照组(10例)。取2组患者的肺组织,原位杂交和免疫组化检测HIF-1α、HIF-2α、HIF-3α的mRNA及蛋白表达水平。光学显微镜观察并计算肺小动脉管壁厚度与外径的比值(WT%)及肺小动脉管壁面积与血管总面积的比值(WA%)。结果(1)COPD组WT%、WA%均较对照组高(P值均小于0·01)。(2)HIF-1αmRNA和蛋白表达在COPD组增强,吸光度(A)值分别为0·172±0·011、0·089±0·013,与对照组(0·103±0·010、0·042±0·010)比较差异有统计学意义(P值均小于0·01)。HIF-2αmRNA及蛋白表达在COPD组呈弱阳性,A值分别为0·038±0·010、0·077±0·010,与对照组(0·133±0·017、0·169±0·010)比较差异有统计学意义(P值均小于0·01)。HIF-3α仅mRNA表达在COPD组呈弱阳性,A值为0·077±0·010,与对照组(0·088±0·010)比较差异有统计学意义(P<0·05)。(3)相关分析HIF-1αmRNA及蛋白表达与WT%和WA%分别呈正相关,而HIF-2αmRNA及蛋白表达与WT%和WA%分别呈负相关,HIF-3αmRNA及蛋白表达与WT%和WA%均无相关性。结论COPD患者HIF-α基因表达有差异,此差异可能参与了COPD的肺血管重塑。     

慢性阻塞性肺疾病大鼠主要脏器γ-GCS活性及其mRNA表达变化

目的:研究慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠血浆、肺、心、肝、和肾组织中氧化/抗氧化水平,及γ谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)活性及其表达在各器官组织中的差异和变化。方法:健康雄性Wistar大鼠14只,随机分COPD模型组和对照组,每组7只。采用每日熏香烟和两次气管内滴入脂多糖(LPS)法制作COPD大鼠模型。检测大鼠血浆、肺、心、肝和肾组织中还原型谷胱甘肽(GSH)、活性氧(ROS)、总抗氧化力(T-AOC)和γ-GCS活性。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肺、心、肝和肾组织中γ-GCS mRNA的表达。结果:COPD组大鼠心、肝中GSH、ROS、T-AOC和γ-GCS活性均显著增高(P均<0.05),但未显示出明显氧化/抗氧化失衡。肺中GSH和ROS提高,而T-AOC下降明显(P均<0.05),表明提高的GSH不足以抵御氧化作用,明显存在氧化/抗氧化失衡。血清中ROS增高,GSH和T-AOC下降明显,显示系统性氧化/抗氧化失衡。COPD大鼠肺组织γ-GCS mRNA表达较对照组显著增高(P<0.05),而心、肝、肾组织中γ-GCS mRNA表达与对照组无明显差异(P>0.05)。结论:COPD大鼠肺内存在氧化/抗氧化失衡,肺组织是γ-GCS表达的主要部位,在抗氧化损伤中可能发挥重要作用。     

吸烟患或未患慢性阻塞性肺疾病患者肺组织中巨噬细胞移动抑制因子表达

 目的 通过检测吸烟患或未患慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者肺组织中巨噬细胞移动抑制因子（MIF）表达水平,为进一步了解COPD易患机制提供基础研究资料。方法 肺组织来源于因肺癌行肺叶切除术的41例患者,分吸烟患COPD组（16例）、吸烟未患COPD组（13例）、无吸烟对照组（12例）3组。所有受试者均于术前1周做肺功能检查［第1秒用力呼气容积（FEV₁）,用力肺活量（FVC）］,采用实时定量PCR和免疫组化检测肺组织中MIF mRNA和蛋白表达水平,并行相关分析。结果 (1）实时定量PCR检测肺组织内MIF mRNA表达水平,吸烟患COPD组（4.87±1.79）高于吸烟未患COPD组（2.16±0.72）,而吸烟未患COPD组又高于无吸烟对照组（1.09±0.48;P<0.01）。（2）免疫组化显示,肺组织内MIF蛋白表达吸光度值吸烟患COPD组（0.277±0.025）高于吸烟未患COPD组（0.199±0.034）,而吸烟未患COPD组高于无吸烟对照组（0.130±0.021;P<0.01）。（3）相关性分析：肺组织内MIF mRNA表达与FEV₁占预计值百分比、FEV₁／FVC呈负相关(r分别为-0.578、-0.607,P值均<0.01)。结论 吸烟患COPD者肺组织中MIF表达明显增加,且与气流受限程度呈正相关,提示MIF可能在吸烟致COPD发病机制中起重要作用。     

细胞色素C氧化酶-2/前列腺素E2信号通路对老年慢性阻塞性肺疾病患者肺血管内皮细胞凋亡的作用

目的探讨细胞色素C氧化酶(Cox)-2/前列腺素E2(PG)E2信号通路对老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肺血管内皮细胞凋亡的作用。方法该行肺叶切除术的老年患者20例,根据吸烟情况和COPD诊断标准分为非吸烟非COPD组(对照组)6例,吸烟非COPD组(非COPD组)7例,吸烟且COPD组(COPD组)7例,取癌旁正常肺组织为研究标本。TUNEL法检测肺血管内皮细胞凋亡情况;免疫组化染色观察细胞中Cox-2、PGE2蛋白分布情况;RT-PCR检测Cox-2、PGE-2 mRNA表达;Western印迹检测Cox-2、PGE2蛋白的表达。结果肺血管内皮细胞凋亡指数由高到低依次为COPD组、非COPD组、对照组;Cox-2、PGE2蛋白呈棕色或棕黄色表达于肺血管内皮细胞质并在对照组中表达丰富。非COPD组、COPD组肺组织中Cox-2、PGE2 mRNA表达量明显低于对照组,COPD组明显低于非COPD组(P<0.05)。非COPD组、COPD组肺组织中Cox-2、PGE2 mRNA蛋白表达量明显低于对照组,COPD组明显低于非COPD组(P<0.05)。结论 COPD患者Cox-2、PGE2表达下调,肺血管内皮细胞凋亡增加且与吸烟相关;Cox-2/PGE-2信号通路参与介导COPD患者肺血管内皮细胞凋亡,呈负向调节。