从噬菌体肽库中筛选抗原模拟表位的研究进展

大部分功能重要的抗体都可以识别抗原的构象表位，而噬菌体肽库技术最大的应用前景就是可以得到模拟抗原表位结构和化学持征的小肽分子，通过这些模拟表位不仅可以寻找、发现血清中的持异抗体，用于研究疾病的病因与发病机制以及特异性地诊断疾病；而且还可以替代抗原诱导抗体产生，达列治疗疾病的目的；同时也为新药的开发提供了新思路。     

利用噬菌体随机9肽库筛选寻常型天疱疮抗原模拟表位

目的 利用噬菌体随机9肽库筛选寻常型天疱疮抗原桥粒芯糖蛋白3（desmoglein, Dsg3）模拟表位,加深对寻常型天疱疮发病机制的认识。方法 通过大肠杆菌表达Dsg3的胞外结构域1和2（extracellular domain, EC1-2） 和谷胱甘肽转移酶（GST）的融合蛋白,从寻常型天疱疮患者血清中纯化与EC1-2特异结合的多克隆抗体,对噬菌体随机线九肽库和环九肽库进行亲和筛选,阳性噬菌体展示肽经ELISA和竞争性ELISA验证。结果 经过两轮亲和筛选,与自身抗体结合的噬菌体明显富集,免疫筛查、验证后得到3个阳性噬菌体展示肽,ELISA检测显示它们与患者血清反应,而不与正常人血清反应,竞争性ELISA检测显示它们可以抑制寻常型天疱疮患者血清与重组蛋白EC1-2的结合。结论 利用噬菌体随机9肽库筛选到3个与寻常性天疱疮密切相关的模拟表位。     

天然抗角蛋白自身抗体识别的角蛋白模拟表位的研究

目的 探索利用天然抗角蛋白自身抗体(AK auto Ab)淘筛噬菌体递呈的随机肽库,获得在体内具有功能活性的角蛋白模拟表位方法。方法 用角蛋白亲和层析柱从正常人混合血清中分离并纯化AK auto Ab,然后进行生物素标记;用生物素化的AK auto Ab对噬菌体递呈的随机15肽库进行3轮淘洗并进行ELISA检测;挑取23个阳性克隆进行DNA测序,分析所获数据并进行竞争实验。结果 DNA测序分析表明,AK auto Ab特异识别3个抗原表位区:SLSPMPTTNRR、PPLIPIPLRTM和TTPRPPMRIMLPRIT,其中SLSPMPTTNRR可能含有优势表位;携有这些短肽的噬菌体可与AK auto Ab特异结合,角蛋白可阻断这种特异的结合反应。结论 利用噬菌体随机肽库技术成功地获得了AK auto Ab所识别的角蛋白模拟表位。     

大疱性类天疱疮患者血清抗BP180自身抗体识别抗原表位的研究

目的分析大疱性类天疱疮(BP)患者血清抗BP180IgG和IgE自身抗体所识别的抗原表位。方法利用柱亲和层析的方法从10例BP患者血清中提取抗BP180-NC16A自身抗体,用免疫印迹技术对所获IgG和IgE自身抗体分别进行抗原表位鉴定。结果所有10例患者的自身抗体均识别aa507-aa532区域内(NC16A-2和NC16A-2.5)至少一个抗原表位,而且来自同一患者的IgG和IgE自身抗体在该区域所识别的表位完全一致。BP自身抗体与NC16A-1、NC16A-3和NC16A-4区域的结合率较低,与NC16A-5片段不结合。结论BP致病性自身抗体所识别的主要抗原表位可能位于BP180分子NC16A片段的aa507-aa532区域内。     

系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞趋化因子受体2和3 mRNA的表达

目的探讨趋化因子受体(CCR)2及CCR3在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单一核细胞(PBMC)中的表达及与疾病的相关性.方法对93例SLE患者和30名健康对照者,应用半定量逆转录(RT)-PCR方法检测其CCR2、CCR3 mRNA表达水平,并应用SLE疾病活动性指数评分标准(SLEDAI)对SLE患者进行评分.结果①9例SLE患者活动期、非活动期及对照组PBMC CCR2与CCR3 mRNA表达水平分别为2.989±1.595与2.847±2.400、0.388±0.213与0.585±0.219、0.263±0.157与0.602±0.124,活动期与非活动期、对照组相比差异均有显著性(P值分别为0.013,0.004;0.000,0.007);非活动期与对照组相比差异无显著性(P＞0.01).②SLE患者PBMC中CCR2、CCR3 mRNA表达水平与SLEDAI分别作直线相关性分析,CCR2 mRNA、CCR3mRNA水平与SLEDAI均呈正相关.③具有肌炎临床表现的SLE患者其PBMC CCR2、CCR3表达水平较无肌炎表现时降低.血小板减少的SLE患者比不具有相应症状者CCR2 mRNA表达降低.结论SLE患者PBMC CCR2、CCR3表达均增加,且与疾病活动性呈正相关,而CCR2、CCR3为表达于Th2细胞的趋化因子受体,提示SLE患者Th2细胞占优势.CCR2可能参与SLE患者肌炎及血小板减少的发生,CCR3参与肌炎发生.     

女性系统性红斑狼疮患者神经肽Y、神经降压素的检测及其意义

目的：探讨女性系统性红斑狼疮（SLE）患者血浆中神经肽Y和神经降压素水平的变化及其意义。方法：采用放射免疫分析法对30例女性SLE患者及20例正常对照血浆中神经肽Y、神经降压素水平进行检测。结果：女性SLE患者血浆中神经肽Y水平升高，神经降压素水平降低，二者与对照组相比，差异有显著性（P〈0．01）；与病情非活动期相比，病情活动期SLE患者神经肽Y水平显著升高、神经降压素水平显著降低，差异有显著性（P〈0．01），治疗3个月后，二种物质的水平趋于正常，与对照组相比，差异无显著性（P〉0．05）。结论：女性SLE患者血浆中神经肽Y和神经降压素水平的变化可能与SLE的发病有关．     

女性系统性红斑狼疮患者血清瘦素水平的检测及意义

目的：探讨女性系统性红斑狼疮患者血清瘦素水平的变化。方法：采用放射免疫分析法对54例女性系统性红斑狼疮患者及30例正常对照组血清瘦素水平进行了检测。结果：女性系统性红斑狼疮患者血清瘦素水平明显高于正常对照组，差异有显著性；月经周期正常者、月经周期紊乱者、闭经者血清瘦素水平明显高于正常对照组，差异有显著性；有肾脏损害及无肾脏损害患者血清瘦素水平亦升高，与正常对照组相比，差异有显著性。结论：女性系统性红斑狼疮患者血清瘦素水平的变化可能与系统性红斑狼疮的发病有关。     

HLA-DM基因多态性与SLE疾病活动性及肾损害相关性分析

SLE是一种自身免疫性疾病.HLA-DM基因属于抗原加工提呈相关基因,定位于HLAⅡ类基因区域,分DMA和DMB两个位点,均由其第三外显子决定其多态性,其多态性位点较经典的HLAⅡ类基因相对较少.本研究旨在探讨HLA-DM基因多态性与SLE患者自身抗体、活动性及肾损害等的相关性.     

FcγRⅡA基因多态性分布与系统性红斑狼疮易感性的研究

目的：探讨云南汉族FcγRⅡA基因多态性与SLE易感性的关系。方法：提取86例SLE患者和40例健康对照者的静脉血DNA，分别用PCR BSTUI酶切检测FcγRⅡA基因型，比较各基因型检出率的差别；并比较不同基因型患者在疾病活动期的临床表型。结果：患者组FcγRⅡA—R／R的检出率高于健康对照组；R／R组皮疹阳性率及血清IgG增高的阳性率明显高于H／H组。结论：FcγRⅡA—R／R基因型可能是SLE的遗传易感因素。     

SLE患者T细胞TCR/CD3复合物介导的[Ca++]i反应与患者临床特征相关性的研究

为研究SLE患者原发的T细胞功能异常与TCR/CD3复合物介导生物化学信号转导异常相关,及与其临床特征的相关性。用尼龙柱分离肝素化的静脉血得到T细胞悬液,用CD3单抗与羊抗鼠二抗IgG相交联刺激T细胞,粘附细胞仪连续观察10min,观察T细胞犤Ca++犦i的变化,并分析其与患者的临床特征相关性。发现正常人和SLET细胞的[Ca++]i反应的基准值相似(P=0.105),SLE患者T细胞高峰值和平台值均明显高于正常对照(P<0.001,P<0.001),且与患者临床特征无关。     

曲古抑菌素A对SLE患者外周血IL-10和IL-12分泌的影响

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血全血培养细胞中IL-10和IL-12分泌水平的影响。方法:选取21例SLE患者和10名正常人,采集空腹静脉血标本分为空白组、HDAC抑制剂(曲古抑菌素A,TSA)组、植物血球凝集素/脂多糖(PHA/LPS)刺激组和PHA/LPS TSA组作体外全血细胞培养,分离培养液上清并应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测IL-10和IL-12分泌水平。结果:SLE患者的外周血全血培养细胞IL-12分泌水平明显低于正常人(P<0.01),但IL-10却明显高于正常人(P<0.01);TSA对SLE患者IL-10的分泌有显著抑制作用(P<0.01),而对IL-12则有明显上调作用(P<0.01),但对正常人IL-10和IL-12分泌水平无明显影响;而且SLE患者IL-10和IL-12的分泌水平分别与SLE疾病活动指数(SLEDAI)呈不同程度的正相关和负相关。结论:IL-10分泌水平上调和IL-12下降在SLE的发病中可能起重要作用,TSA对体外培养的外周血多途径激活后的IL-10分泌具有抑制作用,对IL-12具有上调作用,HDAC抑制剂可能是治疗SLE的一种新方法。     

SLE脑损害危险因素的临床初步分析

为初步探讨发生SLE脑损害（NPLE）的危险因素，对17例NPLE患者及29例无脑损害的SLE（非NPLE）患者进行临床表现及实验室检查结果方面的统计学比较，并分析NPLE与各临床特点之间的相关性。结果显示，NPLE病组发热、血小板减少、抗Sm抗体阳性、脑脊液（CSF）抗核抗体（ANA）阳性、CSF蛋白增加及氯化物减少的发生率显著高于非NPLE组（P＜0．05），而盘状红斑发生率则显著低于非NPLE组（P＜0．05）；发热、血小板减少、抗Sm抗体阳性、CSF ANA阳性、CSF蛋白增加及氯化物减少可能是发生NPLE的危险因素，盘状红斑及抗Ro抗体阳性可能是NPLE的保护性因素。     

系统性红斑狼疮患者皮损及血清黏附分子及一氧化氮水平的研究

目的：探讨血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、E-选择素水平及一氧化氮（N0）在皮损表达和血清水平与系统性红斑狼疮（SEE）活动性的关系。方法：①应用ELISA试剂盒测定血清细胞黏附分子。血清NO的检测使用NO硝酸还原酶试剂盒;②采用SABC免疫组化技术检测细胞黏附分子和NO的表达。结果：①血清中可溶性VCAM-1（sVCAM—Ⅰ）、可溶性ICAM-1（sICAM—Ⅰ）、NO水平病例组均较对照组明显升高（P均〈0．01）;病例组活动期较非活动期升高（P〈0．01）。②SLE活动期皮损处血管内皮细胞VCAM-1、ICAM-1、E-选择素和NO的表达与对照组比较．均明显上调（P〈0．05）。③SLE患者sICAM-1水平与SLE疾病活动指数（SLEDAI）有相关性（r=0．590,P=0．026）,NO水平与抗ds—DNA抗体呈正相关（r=0．777,P=0．001）。④血管内皮细胞内各黏附分子、NO表达的强度依次为VCAM-1〉ICAM—1〉NO〉E-选择素。结论：VCAM-1、ICAM-1、E-选择素和NO可能在SLE的发生、发展中起重要的组织损伤作用。     

The influence of treatment on quality of life in systemic lupus erythematosus patients

Objective Systemic lupus erythematosus is an autoimmune disease with uncertain prognosis as to the course. The patients need pharmacotherapy all their life. The main aim of this study was to determinate the impact of therapeutic schedules on patients’ quality of life. Methods The study was performed on 83 patients who were divided into five groups according to methods of treatment used. Quality of life was measured using MOS SF‐36. Results Obtained results revealed that therapeutic schedules have the highest influence on patients’ social functioning. The more medicaments the patients use, the lower their quality of life. Conclusions The type of medicaments and therapeutic schemes adopted affect the patients’ quality of life. Nevertheless, quality of life and the patients’ attitude to it are very subjective and are also influenced by the clinical state of the patients as well as many other factors such as socioeconomic and demographic.