瑞香素杀疟原虫裂殖体的作用

[目的 ]研究中药瑞香素在体外和体内的杀裂殖体作用。 [方法 ]在恶性疟原虫FCCl株常规体外培养中测试瑞香素杀裂殖体活性 ,并按“四天抑制性试验”在感染伯氏疟原虫ANKA株的小鼠中测定不同剂量瑞香素的体内抗疟活性。 [结果 ]体外试验中瑞香素在 1～ 10 μmol L剂量范围内有明显杀灭裂殖体作用 ,而体内试验中按D4减虫率与感染鼠在 30d内的平均生存天数评价 ,5 0或 10 0mg kg .d- 1 × 4d瑞香素灌胃以及 10 ,5 0或 10 0mg kg.d- 1 × 4d瑞香素腹腔注射给药在伯氏鼠疟原虫ANKA株感染鼠中的抗疟作用与 10mg kg .d- 1 × 4d氯喹 (CQ)灌胃的疗效相似。 [结论 ]瑞香素在体外和体内均有一定的杀裂殖体作用。     

瑞香素对体外培养恶性疟原虫超氧化物歧化酶活性及DNA合成的影响

目的研究瑞香素(DPNT)对体外培养恶性疟原虫超氧化物歧化酶(SOD)活性及DNA合成的影响。方法在恶性疟原虫FCC1株体外培养体系中,以SOD试剂盒检测瑞香素、瑞香素铁盐及去铁胺(DFO)对疟原虫SOD活性的影响。疟原虫培养同步化,利用荧光素Hoechest33258测定在瑞香素和去铁胺作用下疟原虫不同发育阶段(环状体和滋养体)的DNA合成水平。结果与未加药对照组比较,经瑞香素作用后疟原虫总SOD下降约60％(P<0.01),而相应的经去铁胺作用后,疟原虫的总SOD仅下降约22％(P>0.05)。瑞香素铁螯合能力被遮蔽后,几乎失去对疟原虫SOD的影响。同步培养的滋养体阶段疟原虫,在瑞香素作用下DNA合成率明显低于对照组。结论在体外瑞香素可显著降低疟原虫SOD活性,并影响滋养体阶段疟原虫的DNA合成。     

实时荧光定量PCR测定瑞香素类抗疟化合物对恶性疟原虫核糖核酸还原酶基因表达的影响

目的测定瑞香素类抗疟化合物对恶性疟原虫核糖核酸还原酶（RNR）基因表达的影响。方法体外同步培养的恶性疟原虫经瑞香素及其衍生物DA78与DA79作用后,抽提总RNA,并合成相应的特异性引物,运用实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time PCR）测定瑞香素类抗疟化合物对恶性疟原虫RNR基因表达的影响。结果恶性疟原虫体外经瑞香素及其衍生物作用后的RNR基因扩增标准曲线在10^5～10^9拷贝（copies）/ml范围内呈良好的线性关系,R^2为0.997 52;瑞香素及其衍生物DA78与DA79对恶性疟原虫RNR作用后,其原始拷贝数分别为81 173.23、124 830.83和74 801.35,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.01）,而瑞香素的铁螯合能力被饱和后,对该基因的表达未产生显著抑制（P〉0.01）。结论瑞香素类抗疟化合物体外抑制恶性疟原虫RNR的基因表达,RNR可能作为瑞香素类抗疟化合物抗疟作用的候选靶分子之一。     

去铁胺对恶性疟原虫基因表达的影响

作为铁螯合剂,已证明去铁胺在体内外均有抗疟活性,它特异作用于后期滋养体和裂殖子早期阶段,但其抗疟机制及特异性作用位点仍未明确。作者研究了去铁胺对恶性疟原虫转录水平的影响,所选择进行研究的     

瑞香素类抗疟化合物的筛选及其靶分子研究

目的 通过体外试验和鼠疟动物模型筛选瑞香素结构衍生物的抗疟作用,确定瑞香素类抗疟化合物对恶性疟原虫抗疟作用的靶分子.主要研究内容及方法 (1)在瑞香素基本结构的基础上设计并合成瑞香素的结构衍生物;(2)通过光学显微镜镜检和微量荧光法两种体外筛选系统筛检瑞香素类衍生物对恶性疟原虫的体外抗疟作用;(3)对体外筛检抗疟活性高的化合物,采用WHO推荐的四天抑制试验测定其对鼠伯氏疟原虫(ANKA株)的抗疟作用;(4)以电子自旋共振法测定瑞香素类抗疟化合物对恶性疟原虫核糖核酸还原酶(ribonucleotide reductase,RNR)活性的影响;(5)采用紫外分光光度法测定瑞香素类抗疟化合物对恶性疟原虫细胞色素C氧化酶(cytochrome c oxidase,COX)活性的影响;(6)对体外同步培养的恶性疟原虫经瑞香素、DA78与DA79作用后,抽提总RNA,并合成相应的特异性引物,运用实时荧光PCR法测定瑞香素类抗疟化合物对恶性疟原虫的重要生物功能酶,如RNR、超氧化物歧化酶(superoxidase dismutase,SOD)及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,L,DH)等基因表达的影响.结果 (1)在瑞香素结构的基础上,通过对7、8位羟基或相邻位点的修饰,共合成32种瑞香素结构衍生物.(2)通过体外筛选系统筛选出DA78与DA79两种新型的瑞香素类抗疟化合物,两者的IC50分别为7.6μmol/L、1.4μmoL/L,其体外抗疟活性与瑞香素的差别无统计学意义(P＞0.05);体内试验按D4减虫率评价,瑞香素、DA78与DA79灌胃给药在鼠伯氏疟原虫ANKA株感染小鼠中,DA79在1、10、50、75 ms/(kg·d)×4 d组与对照组1%西黄蓍胶相比较差异有统计学意义(P＜0.01),而DA78在50或75 mg/(kg·d)×4 d的抗疟作用与对照组相比较差异有统计学意义(P＜0.05);另外DA79在10或75 mg/(kg·d)×4 d的抗疟效果要优于同剂量的瑞香素(P＞0.05).(3)体外同步培养的恶性疟原虫经100μmol/L瑞香素2、4、8和12 h作用后,COX活性依次下降了0、6%、、73%和80%,在瑞香素浓度为100 nmoi/L、lμmoL/L、100 μmol/L与l mmol/L作用6 h后,COX活性依次下降了3%、31%、53%和84%(n=3),其活性随着瑞香素浓度的增高基本成线性降低,而当瑞香素的铁鳌合能力饱和后对COX活性的影响几乎消失;100 μmol/L DA78与DA79作用2、4、8和12 h后,COX的活性依次下降了0、2%、11%、9%与7%、13%、17%、32%,在DA78、DA79浓度为100 nmol/L、1 μmol/L、100 μmol/L与1 mmol/L作用6 h后,COX活性依次下降了0、0、4%、13%与1%、4%、15%、29%,其活性随着DA78或DA79浓度的增高基本成线性降低,其中DA79对COX的抑制作用高于DA78,但两者均低于瑞香素对COX的作用(n=3,P＜0.01).(4)体外同步培养的恶性疟原虫经瑞香素、DA78与DA79作用后.以电子自旋共振法测定不同时间恶性疟原虫酪氨酸的量以反映RNR的活性,经100 μmol/L瑞香素作用1、2、3和4 h后,相对于对照组的值RNR的活性依次为其值的93%、49%、31%和25%,在瑞香素浓度为100 nmol/L、1 μmol/L、100 Vanol/L与1 mmoL/L作用6 h后,相对于对照组的值RNR的活性依次为其值的97%、69%、42%和7%;RNR的活性随着瑞香素浓度的增高而降低,但并非呈线性相关.当瑞香索铁鳌合能力饱和后,恶性疟原虫RNR活性几乎未受影响(n=3,P＞0.05).经100μmot/L DA78与DA79作用1、2、3和4 h后,相对于对照组的值恶性疟原虫RNR的活性依次为其值的98%、96%、87%、71%与93%、44%、41%、23%,DA79对RNR活性的抑制作用高于同剂量相同作用时间DA78的作用(n=3,P＞0.01),DA79与瑞香素在体外对恶性疟原虫RNR抑制作用的差别无统计学意义(n=3,P＞0.05);在DA78与DA79浓度为100 nmol/L、1μmol/L、100μmol/L与1 mmol/L.,作用6 h后,相对于对照组的值RNR的活性依次为其值的100%、92%、64%、61%与97%、48%、25%、4%,DA79对RNR活性的抑制作用高于同剂量DA78的作用(n=3,P＜0.01),并且高于同剂量瑞香素对RNR活性的抑制作用(n=3,P＜0.05).(5)恶性疟原虫体外经瑞香素、DA78与DA79作用后,LDH、SOD与RNR 3种基因扩增的标准曲线,在105～109 copies/ml范围内标准曲线呈良好的线性关系,其基因扩增产物的标准曲线的r2依次为0.9907、0.9983、0.9975.根据标准曲线计算各组样品3种基因的原始拷贝数来比较各组3种基因表达量的差异,不同处理组对恶性疟原虫LDH基因的表达无显著性抑制作用(n=3,P＞0.05),而且各组间差异无统计学意义(n=3,P＞0.05);瑞香素、DA78与DA79对恶性疟原虫RNR基因的表达均有抑制作用;只有瑞香素对恶性疟原虫SOD基因表达产生抑制作用,其他各组无显著性抑制作用;但瑞香素的铁螯合能力饱和后,对上述3种基因的表达均未产生显著性抑制作用(n=3,P＞0.05).结论以DA78与DA79为代表的瑞香素类衍生物作为一类新型的抗疟化合物,在体外和体内试验中均显示出一定的抗疟活性;RNR很可能作为瑞香素类抗疟化合物抗疟作用的靶分子.本研究首次发现两种瑞香素结构衍生物DA78与DA79具有与瑞香素同一水平的抗疟活性,为寻求更有效的抗疟化合物提供了方向,并利用分子生物学方法对瑞香素抗疟化合物抗疟作用的靶分子进行了筛选与研究,初步确定了RNR作为瑞香素类抗疟化合物抗疟作用的靶标,为今后瑞香素类抗疟药物的进一步开发提供了理论依据.     

瑞香素结构衍生物体内外抗疟活性的研究

目的 通过体外试验和鼠疟(Plamodium berghei)动物模型观察瑞香素结构衍生物的抗疟作用.方法 通过光学显微镜镜检和微量荧光法两种体外筛选系统筛检瑞香素类衍生物对恶性疟原虫(Plamodium falciparum)的体外抗疟作用;对体外筛检抗疟活性高的化合物,采用WHO推荐的"四天抑制试验"测定其对鼠伯氏疟原虫(ANKA株)的抗疟作用.结果 通过体外筛选系统筛选出DA78与DA79两种新型的瑞香素类抗疟化合物,两者的IC50分别为7.6 μmol/L和1.4 μmol/L,其体外抗疟活性与瑞香素在同一统计学水平(P＞0.05);体内试验伯氏鼠疟原虫ANKA株感染鼠,DA78 1、10、50、75 mg/kg·d×4 d剂量组D4减虫率与空白对照组比较差异有显著性(P＜0.01),而DA79 50或75 mg/kg·d×4 d剂量组D4减虫率与对照组相比较差异有显著性(P＜0.05),DA78 10或75 mg/kg·d×4 d剂量组D4减虫率高于同剂量的瑞香素组(P＜0.05).结论 以DA78与DA79为代表的瑞香素类衍生物作为一类新型的抗疟化合物,在体外和体内试验中均显示出一定的抗疟活性,为寻求更有效的抗疟化合物提供了方向和理论依据.     

瑞香素体外抗卡氏肺孢子虫作用的初步研究

目的研究瑞香素在体外抗卡氏肺孢子虫(Pneumocystiscarinii,Pc)的作用。方法建立Wistar大鼠卡氏肺孢子虫肺炎模型;分离、纯化虫体,进行体外培养。测定不同浓度的瑞香素体外抗Pc的作用,观察经FeSO4、MgSO4螯合后的瑞香素对虫体的生长影响情况。用透射电镜观察药物处理后的虫体超微结构改变。结果瑞香素抗Pc作用效应在1～20μmol/L浓度范围呈剂量依赖和时间依赖关系。10μmol/L瑞香素与1.0μg/ml喷他脒对Pc生长影响效果相当。若预先将瑞香素与FeSO4按21比例混合后,瑞香素对Pc的生长抑制作用大大减弱。瑞香素处理后的虫体的超微结构有改变。结论瑞香素在体外对Pc生长有抑制作用。     

瑞香素对恶性疟原虫细胞色素C氧化酶及核糖核酸还原酶活性的影响

目的 体外测定瑞香素对恶性疟原虫细胞色素C氧化酶（COX）及核糖核酸还原酶（RNR）活性的影响。方法 Trager &; Jensen法体外培养恶性疟原虫FCC1/HN分离株，超声波破碎恶性疟原虫提取总蛋白，用紫外分光光度计检测瑞香素与瑞香素-Fe复合物在不同作用时间和不同作用浓度对恶性疟原虫COX活性的影响，以电子自旋共振法检测经瑞香素与瑞香素-Fe复合物作用1、2、3和4 h后，恶性疟原虫酪氨酸（Tyr）自由基的量以反映恶性疟原虫RNR的活性。 结果 体外同步培养的恶性疟原虫经瑞香素（100 μmol/L）作用2、4、8和12 h后，COX活性分别被抑制了0、6%、73%和80%；在瑞香素浓度为0.1、1、100和1 000 μmol/L，作用6 h后，COX活性分别被抑制3%、31%、53%和84%；而瑞香素-Fe复合物对COX的影响几乎消失。经瑞香素（100 μmol/L）作用1、2、3和4 h后RNR活性分别被抑制7%、51%、69%和75%；在瑞香素浓度为0.1、1、100和1 000 μmol/L，作用6 h后，RNR活性分别被抑制3%、31%、58%和93%；而瑞香素-Fe复合物作用6 h后RNR活性分别被抑制8%、6%、11%和9%。 结论 在体外瑞香素可显著降低恶性疟原虫的细胞色素C氧化酶（COX）及核糖核酸还原酶（RNR）活性。     

铁离子螯合剂前体药物——右旋丙亚胺对体外培养的恶性疟原虫和约氏疟原虫的作用

疟原虫与其它生物一样,其生长发育依赖铁离子;因此铁离子螯合剂去铁草酰胺B具有抗疟作用,但该药半衰期短,渗透性低且成本高而得不到广泛应用。为证实另一种经细胞内水解后才结合铁的铁离于螯合剂前体药物右旋丙亚胺(dexrazoxane)是否有抗疟活性,作者观察右旋丙亚胺对体外培养的恶性疟原虫红内期和鼠约氏疟原虫红外期的影响。     

甲氟喹治疗人疟

甲氟喹盐酸盐-mefloquine(WR 142,490)是一个4-喹啉甲醇类的新衍生物,它的化学名称为α-(-2哌啶)-2,8-双三氟甲基-4-喹啉甲醇。30年前已发现一些4-喹啉甲醇类化合物在鸟疟模型表现出抗疟作用。其中,SN10,275对人间日疟具有长效杀血裂殖体作用,但由于光毒毒性而不能广泛使用。WR30,090对氯喹敏感株或抗性株恶性疟原虫均有高效,光毒毒性最小,但杀血裂殖体作用的时间相当短。甲氟喹经临床前研究表明比WR30,090     

Daphnetin: a novel antimalarial agent with in vitro and in vivo activity.

Daphnetin is a dihydroxycoumarin that is being used in China for the treatment of coagulation disorders. It is also a chelator and an antioxidant. In vitro, daphnetin causes a 50% inhibition (IC50) of 3H-hypoxanthine incorporation by Plasmodium falciparum at concentrations between 25 and 40 microM. Several related compounds, such as scopoletin, 2, 3-dihydroxybenzoic acid and 3, 4-dihydroxybenzoic acid show no inhibitory activity. The antimalarial activity of daphnetin is inhibited by the addition of iron. Daphnetin does not appear to be an oxidant drug, since it does not spontaneously generate superoxide in vitro. However, it does alkylate bovine serum albumin when incubated in the presence of iron. In vivo, daphnetin significantly prolongs survival of P. yoelli-infected mice.     

瑞香素抗红外期疟原虫作用的研究

目的　研究瑞香素 (DPNT)抗红外期疟原虫的作用。方法　于ICR小鼠腹腔注射约氏疟原虫子孢子后 0 5h灌胃给药 ,连续 4d。不同剂量的DPNT及DPNT伍用伯氨喹 (PQ)的抗疟作用 ,分别以d7ICR小鼠阴性率及d1 1 或d1 2 ICR小鼠每千个红细胞被原虫感染数作评价 ,并观察DPNT对ICR小鼠血红蛋白浓度的影响。结果　DPNT的剂量范围为每天 10～ 10 0mg/kg ,连服 4d ,d7原虫阴性小鼠数及d1 1 红细胞被感染程度与对照组相比其差异均无显著性 ;DPNT每天 5 0mg/kg和每天PQ5mg/kg配伍组的d7小鼠阴性率与PQ每天 10mg/kg组相当。ICR小鼠DPNT每天 5 0mg/kg组与对照组血红蛋白浓度在d8天有差异。结论　DPNT单独用药 ,无明显抗红外期疟原虫作用 ,但DPNT每天 5 0mg/kg与PQ每天 5mg/kg伍用的抗疟效果与PQ每天 10mg/kg相当。DPNT在短期内可致小鼠贫血。     

In vitro activity of chloroquine and quinine in combination with desferrioxamine against Plasmodium falciparum

The activity of chloroquine and quinine, alone and in combination with desferrioxamine (7 μmol/liter), was evaluated in vitro against susceptible and resistant clones of Plasmodium falciparum by a semimicroassay system. The addition of desferrioxamine had no effect on the activity of chloroquine against both clones. Desferrioxamine had no effect on the activity of quinine against the susceptible clone but had slightly enhanced quinine action against the resistant clone. Further development of desferrioxamine as an antimalarial drug may be of limited interest. © 1993 Wiley-Liss, Inc.     

蒿甲醚与瑞香素伍用对感染伯氏疟原虫小鼠的治疗作用

目的　研究蒿甲醚与瑞香素伍用(A+D)对感染伯氏疟原虫ANKA株小鼠的疗效及其联合作用方式。　方法　按“四天抑制法”d0 感染,d0 ～d3 给药,每天1次,d4涂薄血膜检查,并计算d4减虫率及各药丰数有效置(ED50),用等效应图解法分析A+D的合并作用。　结果　蒿甲醚0.4mg/(kg·d)× 4d的d4减虫率与对照组相比差异无显著性 ;[A0 .4mg/(kg·d) +D7.7mg/(kg·d) ]× 4d的抗疟效果提高 ,与对照组相比差异有显著性(P<0.05)。A+D各组的ED50均低于单用药组;不同配伍比例的R值皆大于0.4,小于2.7(0.4     

The effect of N-alkyl modification on the antimalarial activity of 3-hydroxypyridin-4-one oral iron chelators

The antimalaria effect of iron chelators is attributed to their interaction with a labile iron pool within parasitised erythrocytes, and it was postulated that increased affinity to iron as well as increased lipophilicity may improve antimalarial activity. In the present study we have examined the antimalarial effect of 3-hydroxypyridin-4-ones, a family of bidentate orally effective iron chelators whose lipophilicity may be modified by altering the length of the R2 substituent on the ring nitrogen. A significant dose-related suppression of Plasmodium falciparum cultures was observed with all drugs tested in vitro at concentrations of 5 mumol/L or higher. In contrast, there was a clear segregation of the in vivo effect on P berghei in rats (300 mg/kg/d subcutaneous) into two categories: compounds CP20, 38, and 40 failed to suppress malaria, whereas CP51, 94, and 96 had a strong antimalarial effect, similar or better than deferoxamine. There was a close linear correlation between the suppression of peak parasite counts and the reduction in hepatic nonheme iron induced by the various drugs tested (r = .9837). The most lipophilic compounds were also the most effective in suppressing malaria and in depleting hepatic iron stores. These data indicate that 3-hydroxypyrydin-4-ones are able to suppress malaria in vivo and in vitro. Because lipid solubility is an important determinant of antimalarial action, our study provides useful information regarding the selection of orally effective iron-chelating compounds that may be suitable for clinical application as antimalarial agents.