Effect of SeO<Subscript>2</Subscript> on telomerase activity in human lung carcinoma cell line GLC-82

Objective: To observe the effect of inhibition of telomerase activity by selenium dioxide (SeO2) on lung carcinoma cell line GLC-82. Methods: TRAP-PCR-ELISA was used to study the changes of telomerase activity in human pulmonary adenocarcinoma cell line GLC-82 treated by SeO2 at the different concentrations (3, 10, 30 μmol/L) and for different times (24, 48, and 72 h). Results: SeO2 inhibited the telomerase activity of GLC-82 at the different concentrations after treatment of 24, 48 and 72 h. Conclusion: SeO2 inhibits from telomerase activity of human lung carcinoma line GLC-82. The effect of inhibition is dose-dependant and time-dependant.     

Induction of apoptosis by SeO<Subscript>2</Subscript> in human lung carcinoma cell line GLC-82

Objective:To investigate the effect of selenium dioxide(SeO2) on human pulmonary adenocarcinoma GLC-82 cell lines to reveal its probable mechanism and the relationship between apoptosis and SeO2. Methods: Methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) method, flow cytometry (FCM), DNA agarose gel electrophoresis, light and electron microscope were used to study cell apoptosis in human pulmonary adenocarcinoma cell line GLC-82 treated by SeO2 at different concentrations (3, 10, 30μmol/L) and for different times (24, 48, and 72 h). Results: SeO2 significantly inhibited the proliferation and induced the cell apoptosis of GLC-82 at the different concentrations after treatment of 48h and 72 h. Conclusion: Selenium dioxide could inhibit the growth of lung cancer GLC-82 cells through inducing apoptosis. The effect of inhibition is dose-dependant and time-dependant.     

二氧化硒对肺癌细胞增殖、凋亡及端粒酶活性的影响

背景与目的:近年研究表明硒可诱导肿瘤细胞凋亡,并且其与端粒酶活性以及肿瘤的发生密切相关。本研究旨在通过观察二氧化硒(seleniumdioxide,SeO2)对肺腺癌细胞株GLC-82的体外作用,探讨SeO2对肺癌细胞的作用机制,以及细胞凋亡与端粒酶活性之间的关系。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度SeO2作用不同时间对肺癌GLC-82细胞生长的抑制作用;用TRAP-PCR-ELISA法检测SeO2作用前后GLC-82细胞端粒酶活性变化;采用流式细胞术(FCM)观察SeO2作用后GLC-82细胞的凋亡率;通过琼脂糖凝胶电泳法观察DNA梯状带;通过光镜和透射电镜观察GLC-82细胞的形态变化。结果:在3、10、30μmol/LSeO2作用下,GLC-82细胞的生长和端粒酶活性明显受抑制,24h时细胞生长抑制率分别为0.7%、12.8%、31.8%,72h时分别达15.1%、51.2%、61.1%;24h时端粒酶活性分别为1.173±0.029、1.127±0.067、1.050±0.098(P<0.05),48h时为1.150±0.026、1.047±0.060、0.950±0.036(P<0.05),未处理组24h和48h时端粒酶活性分别为1.227±0.032、1.167±0.023;流式细胞仪检测二倍体峰前出现凋亡峰,30μmol/LSeO2与GLC-82细胞共育24h、48h、72h后细胞凋亡率分别为0.7%、3.8%、12.1%;琼脂糖凝胶电泳显示细胞凋亡典型梯状条带;SeO2作用后,GLC-82细胞呈典型     

二氧化硒对GLC-82肺癌细胞株C-FOS蛋白表达的影响

目的:本研究通过观察不同浓度的二氧化硒(SeO2)对GLC-82肺癌细胞株C-FOS蛋白表达的影响,初步探讨SeO2致肺癌细胞损伤的机制。方法:把GLC-82细胞分别接种于3个6孔板中,同时在每个孔中放置4片盖玻片后;于37℃、5% C02下培养爬片24h,分别加SeO2,使每个板5个孔SeO2的浓度分别为3,10,30礛,而每板保留1个孔作为空白对照。分别在1h、6h、12h和24h捞片。100%丙酮固定后,进行SP法的C-FOS蛋白免疫组化染色。在光镜10×40倍视野下,应用CMIAS-H图像分析仪对阳性细胞的图像学参数进行分析,最后结果经Spss8.0统计软件统计分析。 结果:Se02在早期(1h)即可引起 C-FOS蛋白表达增强,随后逐渐增强,在6～12h时GLC-82细胞C-FOS均呈明显的高表达(P<0.05和P相似文献   

EMP INDUCES APOPTOSIS IN HUMAN LUNG CARCINOMA CELL LINE GLC-82

The possibility of health risks resulting from exposure to electric and magnetic fields provides a strong motivation to determine how such fields interact with cells. The short, intense electromagnetic pulse (EMP) produced by high-altitude nuclear explosions may radiate over many hundreds of miles. Basically, EMP consists of a pulse of radio-frequency waves with a nearly instantaneous rise in the electric and magnetic fields and a subsequent decline in the fields. EMP radiation may be repre…     

高能电磁脉冲诱导肺癌细胞株GLC-82凋亡的研究

背景与目的:电磁脉冲(electromagneticpulse,EMP)辐射已用于饮食行业的灭菌,且较2450MHz连续微波辐射消毒更加有效。本研究探讨高能电磁脉冲对肺癌细胞GLC-82凋亡的影响,以发现治疗肿瘤的新手段。方法:以场强为6×104V/m的EMP2min内辐照5次,然后采用细胞计数、MTT、流式细胞术及SP免疫组化法检测bcl-2和p53蛋白的表达,并对表达强度用CMIAS-Ⅱ图像分析仪在放大400倍条件下进行分析,通过上述方法观察EMP对肺癌细胞GLC-82的损伤作用,所有数据经SPSS8.0软件进行分析。结果:EMP可明显抑制肺癌细胞GLC-82的增殖与活力。照射后细胞的MTT光吸收值(A570)与对照组相比,在辐照后0h,1h和6h明显降低。流式细胞术证明,GLC-82细胞在辐照后6h发生明显的凋亡,凋亡率达13.38%。免疫组化的图像分析表明,照射后GLC-82细胞有不同程度的bcl-2蛋白表达的下调及p53蛋白表达的上调。结论:EMP可诱导肺癌细胞GLC-82的凋亡。bcl-2及p53蛋白参与了GLC-82细胞的凋亡过程。     

CD40配体对转CD40 cDNA的人肺癌细胞功能调节的研究

目的 研究CD40配体(CD40L,CD154)对CD40阴性肺癌细胞系转染CD40 cDNA后(即CD40高表达细胞系)的调节作用,评价CD40作为治疗靶抗原的潜能。方法 通过流式细胞术筛选CD40阴性细胞系,即GLC-82细胞。以3D5细胞为模板,以pCDNA3为载体,通过基因克隆技术制备CD40 cDNA并转染到GLC-82细胞中,建立CD40高表达细胞系,即GLC-82／CD40。在细胞培养液中加入0．1μg／ml CD40L,通过流式细胞术和MTT试验检测CD40L对细胞表型、细胞生长、细胞周期及凋亡的影响。结果 Western蛋白印迹检测、限制性酶切电泳、DNA测序和流式细胞仪测定均证明了CD40 cDNA转染成功,转染后细胞的CD40表达率高达95．9％。CD40L与CD40作用后,使GLC-82／CD40细胞系上MHC-1、ICAM-1和Fas分子的表达增强,EGFR表达减弱。细胞生长受到抑制,第5天受抑最明显,受抑率为30％,但无周期特异性变化。CD40L停用48h后,各种指标的变化有所恢复。CD40L对原有高表达CD40的Calu-3肺癌细胞上述指标的影响较GLC-82／CD40更明显,而对不表达CD40的GLC82细胞无明显影响。所有肺癌细胞系均未出现细胞凋亡。结论 CD40L对转染CD40 cDNA后CD40高表达肺癌细胞系具有免疫导向治疗的潜能。     

悬浮培养GLC-82肺肿瘤细胞积聚体与蛋白激酶FAK、AKT、ERK和SRC活化的关系

背景与目的:蛋白激酶FAK部分介导肿瘤细胞在悬浮培养下细胞积聚体的形成,从而阻止细胞发生凋亡和促进细胞增殖,但是参与细胞积聚体形成的FAK下游通路尚不清楚。本研究旨在研究蛋白激酶FAK及其可能的下游分子ERK、AKT和SRC活化在悬浮状态肺癌GLC-82细胞积聚中的作用。方法:用polyHEMA悬浮培养观察肺正常细胞HBE和肿瘤细胞GLC-82积聚体形态;细胞凋亡用DNA琼脂糖凝胶电泳检测梯状DNA分析;细胞转化能力用软琼脂糖集落形成实验分析;磷酸化蛋白激酶水平用免疫印迹实验检测;RNA干扰实验降低FAK蛋白水平的表达。结果:GLC-82肺腺癌细胞在polyHEMA悬浮状态下能够存活和形成积聚体,肺正常细胞HBE在polyHEMA悬浮状态下发生凋亡和不形成积聚体。磷酸化FAK、ERK、AKT和SRC的水平和GLC-82积聚体有关。沉默FAK蛋白的表达,能够部分地阻断肿瘤细胞积聚体的形成,降低磷酸化ERK和AKT水平,以及降低软琼脂集落形成能力。FAKRNA干扰前后的GLC-82细胞软琼脂集落形成率分别为(12.2±1.1)%和(3.6±0.7)%(P=0.001)。结论:GLC-82肺癌细胞积聚体的形成部分由FAK信号通路介导,ERK和AKT是FAK的下游通路蛋白。     

Ad-p53与Ad-p16联合对人肺腺癌GLC-82细胞作用的体外实验研究 *

探讨腺病毒介导的p53与p16基因的联合对人肺腺病GLC-82疗效提高的可能性。方法：将分别携有p53基因、p16基因重组腺病毒(Ad-p53与Ad-p16)联合使用,通过细胞生长和存活实验、克隆形成实验、流式细胞分析、TUNEL检测、RT-PCR分析、免疫组织化学实验,观察其对人肺腺癌GLC-82细胞的作用。结果：在总感染强度相同的前提下,Ad-p53与Ad-p16联合导入GLC-82细胞,对细胞生长存活及克隆形成能力的抑制、以及所造成的凋亡效果比施用单种基因的效果强,表明p53基因与p16基因在体外疗效上互为协同。结论： Ad-p53与Ad-p16联合,可以提高对人肺腺癌GLC-82细胞的疗效。     

介导反义cyclin D1的重组腺病毒的构建及其对人肺腺癌细胞的作用 *

目的:构建介导反义cyclin D1的重组腺病毒,研究其对人肺腺癌细胞内的细胞周期、增殖和凋亡的影响.方法:将cy-clin D1基因反向克隆于穿梭质粒载体pAdCMV中,通过脂质体与pJM17共转染293细胞,经同源重组产生编码反义cyclin D1的重组腺病毒.体外观察和检测重组腺病毒感染人肺腺癌细胞系GLC-82和SPC-A-1以及人胚肺二倍体细胞2BS后,细胞周期的改变、凋亡的发生和相关基因表达的变化.结果:构建并扩增、纯化得到编码反义cyclin D1的重组腺病毒Ad-AS cyclin D1,滴度达1×10~(10)pfu/ml.肿瘤细胞感染Ad-AS cyclin D1后,RT-PCR分析显示cyclin D1基因表达下调;同时出现了明显的G1期阻滞和凋亡,凋亡相关基因bcl-2和bax基因的表达分别出现下调和上调;人胚肺二倍体细胞感染Ad-ASmyc后无上述变化.肿瘤细胞体外克隆形成能力Ad-AS cyclin D1抑制.结论:反义cyclin D1的重组腺病毒感染肿瘤细胞可使cyclin D1基因表达下调,继而诱导肿瘤细胞G1期阻滞和凋亡,使肿瘤细胞致瘤能力和肿瘤生长被抑制,但不影响正常细胞.     

PCNA表达与肺癌细胞株凋亡的关系

 目的　探讨肺癌细胞株增殖细胞核抗原 (PCNA)的表达与肺癌细胞株凋亡的关系。方法　用三氧化二砷 (As2 O3 )诱导肺癌细胞株GLC 82凋亡。运用细胞培养、MTT、流式细胞技术 (FCM )检测及逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)检测PCNA表达在细胞凋亡过程中的变化及相互关系。结果　三氧化二砷可明显抑制GLC 82细胞增殖 ,使细胞周期阻滞于G2 /M并随后凋亡 ,PCNA表达受到抑制。结论三氧化二砷诱导GLC 82凋亡过程中 ,PCNA表达受到明显抑制。对于耐药性肿瘤 ,PCNA活性的抑制可能代表一种新的化疗策略。     

阿诺宁的抗瘤作用研究

背景与目的：我们先前的研究证明,阿诺宁（anuoning)、bullatacin和squamocin在体外有强抗肿瘤作用,squamocin可诱导HL-60细胞凋亡。本研究目的的进一步研究阿诺宁的细胞毒作用和体内抗瘤作用。方法：体外试验用噻唑蓝还原法（MTT法）检测阿诺宁对体外培养的人结肠癌细胞（HT-29）、人鼻咽癌细胞（SUNE1和CNE2）、人肝癌细胞（bel-7402)、人乳腺癌细胞（MCF-7）和人肺腺癌细胞（GLC-82）的生长抑制作用。建立小鼠移植瘤模型,观察阿诺宁腹腔注射对小鼠肝癌（HepS)和肉瘤S-180的体内抗瘤作用。结果：体外实验表明,阿诺宁对CNE2、bel-7402、HT-29和SUNE1细胞的半数抑制浓度（IC50）依次为0.044μg/ml、0.068μg/ml、0.446μg/ml和1.617μg/ml;对MCF-7和GLC-82细胞的IC50分别为1.857μg/ml和3.481μg/ml。体风试验表明,阿诺宁15、30和60μg/kg,腹腔注射作用10天后,对小鼠肝癌的平均抑瘤率依次为36.9%、51.8%和57.9%,与对照组相比有统计学意义;对小鼠肉瘤S-180的平均抑瘤率依次为43.0%、52.1%和61.0%,与对照组相比有统计学意义。结论：阿诺宁对多种人肿瘤细胞有很强的抑制生长作用,并对小鼠移植瘤具有抗瘤作用。     

Ad—p53与Ad—p16联合对人肺腺癌GLC—82细胞作用的研究

目的：探讨腺病毒介导的ｐ５３与ｐ１６基因联合对人肺腺癌ＧＬＣ－８２疗效提高的可能性。方法：将分别携有ｐ５３基因、ｐ１６基因重组腺病毒（Ａｄ－ｐ５３与 Ａｄ－ｐ１６）联合使用,通过细胞生长和存活实验、克隆形成实验、流式细胞分析、ＴＵＮＥＬ检测、ＲＴ－ＰＣＲ分析、免疫组织化学实验,观察其对人肺腺癌ＧＬＣ－８２细胞的作用。结果：在总感染强度相同的前提下,Ａｄ－ｐ５３与Ａｄ－ｐ１６联合导入ＧＬＣ－８２细胞,对细胞生长存活及克隆形成能力的抑制、以及所造成的凋亡效果比施用单种基因的效果强,表明ｐ５３基因与ｐ１６基因在体外疗效上互为协同。结论：Ａｄ－ｐ５３与Ａｄ－ｐ１６联合,可以提高对人肺腺癌ＧＬＣ－８２细胞的疗效。     

肺癌耐药发生和细胞周期改变的流式细胞术分析

目的　探讨肺癌耐药发生过程中多药耐药相关蛋白 (multidrugresistance associatedprotein ,MRP)、P 糖蛋白表达和细胞周期改变的关系。方法　采用低浓度阿霉素 (ADM)诱导人肺腺癌GLC 82细胞系 ,通过流式细胞术双参数标记检测MRP、P 糖蛋白表达和细胞周期的变化。结果　低浓度可明显降低GLC 82肺癌细胞系细胞周期中G1期比例 ,增加S期比例 ;P 糖蛋白表达极弱 ,MRP表达率明显增加 ,呈时间依赖性 ,其表达与细胞周期中S期比例变化呈正相关 (r =0 .87,P =0 .0 0 0 1)。结论　MRP表达可能是肺癌细胞耐药发生的重要参与机制 ,其表达与细胞周期中S期的变化相关。     

肺癌膜蛋白识别分子诱导肺癌细胞凋亡的机制

目的:探讨肺癌患者血清中癌抗原识别分子及其抗肿瘤机制。方法:免疫亲合层析法分离纯化肺癌患者外周血中肺癌膜蛋白识别分子,SDS-PAGE电泳法分析其相对分子质量。MTT法测定细胞增殖情况;Annexin V/PI双标法检测细胞凋亡率,并通过流式细胞仪检测p53、Bcl-2蛋白表达水平。结果:肺癌患者外周血中存在肺癌膜蛋白识别分子,相对分子质量分别约为70×103、66×103和15.2×103。不同浓度膜蛋白识别分子(10、20和40mg/L)具有抑制肺癌细胞株(GLC-82)生长和促进细胞凋亡作用。肺癌细胞株与肺癌膜蛋白识别分子共培养6h后,Bcl-2蛋白表达水平明显降低,P=0.008;而p53水平明显增加,P=0.000。结论:肺癌患者外周血中存在肺癌膜蛋白识别分子,并具有抑制肺癌细胞增殖和促进凋亡作用,其机制与p53和Bcl-2表达改变有关。     

转染野生型p53基因对人肺腺癌细胞作用的研究

目的研究外源性野生型p53基因对人肺腺癌细胞系GLC-82的生物学作用.方法将含有野生型p53基因的pDOR-neo逆转录病毒载体,通过Lipofectin转染GLC-82细胞,采用流式细胞分析、电镜下观察、3H-TdR掺入试验、软琼脂培养集落形成率测试及裸小鼠成瘤性实验,观察野生型p53基因对GLC-82细胞的生物学效应.结果电镜下观察可见,转染野生型p53基因可使GLC-82细胞出现一些病理现象,如细胞质中有明显的空泡及线粒体肿胀;流式细胞仪分析结果显示,野生型p53基因可阻止GLC-82细胞周期停止于G1-S区域;3H-TdR掺入试验结果提示野生型p53基因能够抑制GLC-82细胞的DNA合成,软琼脂培养集落形成率减少及裸小鼠成瘤减慢.结论转染野生型p53基因可抑制GLC-82细胞恶性增殖.     

紫草素衍生物SYUNZ-7的抗肿瘤作用及其机制的初步研究

背景与目的:实验证明天然紫草素类化合物及其衍生物具有不同程度的细胞毒作用和抗肿瘤作用。本实验研究紫草素萘茜类衍生物[2或3,11-双苯硫基-6-异己萘茜]代号为SYUNZ-7的体内外抗肿瘤作用,并探讨其作用机制。方法:应用MTT法检测SYUNZ-7对多种肿瘤细胞的体外抗增殖作用,并计算IC50值;用小鼠移植肿瘤模型和人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型进行SYUNZ-7的体内抗瘤实验;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期的变化;免疫组化法检测SYUNZ-7对血管生成的影响。结果:SYUNZ-7对人肺癌细胞GLC-82、人鼻咽癌细胞CNE2、人口底癌细胞KB、人胃癌细胞MGC-803和人肝癌细胞HepG2的IC50值分别为(2.18±0.04)μg/ml、(4.17±0.09)μg/ml、(5.41±0.10)μg/ml、(6.41±0.14)μg/ml和(9.99±0.21)μg/ml。SYUNZ-7对GLC-82细胞的体外抗增殖作用最强。小鼠艾氏腹水癌EAC(实体型)抗瘤实验结果显示,在1mg/kg、2mg/kg、4mg/kg和8mg/kg的剂量下SYUNZ-7的抑瘤率分别为(40.5±0.1)%、(50.9±2.3)%、(61.3±1.8)%和(65.6±7.4)%(P<0.01)。1mg/kg、2mg/kg和4mg/kg的SYUNZ-7对CNE2细胞裸小鼠移植瘤的抑瘤率分别为24.7%、38.3%和41.2%(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,SYUNZ-7能浓度依赖性和时间依赖性诱导CNE2细胞的凋亡;随着作用时间的延长或处理浓度的增加,SYUNZ-7可以阻滞CNE2细胞由S期向G2/M期转化。免疫组化结果显示:SYUNZ-7能够呈浓度依赖性抑制CNE2细胞裸小鼠移植瘤的血管生成。结论:紫草素萘茜类衍生物SYUNZ-7具有较强的体内外抗瘤作用,其抗瘤机制与诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期和抑制血管生成有关。     

Fused Polypeptide with DEF Induces Apoptosis of Lung Adenocarcinoma Cells

To analyze the effects of a new unknown peptide DEF on the growth of tumor cells, a fused polypeptideTAT-DV1-DEF was designed and synthesized. The lung adenocarcinoma cell line GLC-82 treated with TATDV1-DEF was analyzed with a cell counting kit 8, and the location of polypeptides in cells was observed underlaser confocal microscopy. The efficiency of polypeptide transfection and changes in nuclear morphology wereanalyzed by flow cytometry and fluorescence microscopy, respectively. Finally, the mechanism of tumor cellgrowth inhibition was evaluated by Western blotting. We found that TAT-DV1-DEF could significantly inhibitthe growth of the lung adenocarcinoma cell line GLC-82, but not the normal human embryonic kidney cellline HEK-293. Polypeptides were found to be mostly localized in the cytoplasm and some mitochondria. Theefficiency of polypeptide transfection in the two cell types was approximately 99%. Apoptotic nuclei were observedunder fluorescence microscopy upon treatment with polypeptides and DAPI staining. Western blot analysesindicated that the polypeptide inhibition of tumor cell growth was apoptosis dependent. In the present study,we demonstrated that fused polypeptides could induce apoptosis of the lung adenocarcinoma cell line GLC-82,indicating that the new unknown peptide DEF has antitumor effects.     

蟾蜍灵诱导人肺腺癌细胞凋亡作用及其机制

目的 研究中药蟾酥有效成分蟾蜍灵(bufalin)对人肺腺癌细胞的作用及其机制。方法 MTT法检测蟾蜍灵对细胞的增殖抑制作用;瑞氏 吉姆萨染色法观察细胞形态学的变化;流式细胞术分析细胞凋亡和线粒体跨膜电位;Western blot法检测Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达。结果 (1) 蟾蜍灵明显抑制A549细胞增殖,48h及72h的IC50分别为(56.14±6.72)nmol/L、(15.57±4.28)nmol/L。(2) 蟾蜍灵能诱导肺癌细胞凋亡,形态学表现为出现凋亡小体及流式细胞仪检测到的亚二倍体凋亡峰。(3) 蟾蜍灵可以明显降低细胞线粒体跨膜电位(ΔΨm)。(4) 蟾蜍灵诱导细胞凋亡过程中,下调Bcl-2蛋白表达(P<0.01),同时活化Caspase-3。结论 线粒体途径是蟾蜍灵诱导肺腺癌A549细胞凋亡的主要通路之一。     

肺腺癌GLC-82细胞HSP70表达与放化疗敏感性

[目的] 研究人肺腺癌GLC-82细胞中不同HSP70表达水平对该细胞放、化疗敏感性的影响。[方法] 检测GLC-82细胞热处理前后HSP70表达水平的变化，以不同时间点确定为HSP70正常表达组、增强表达组、恢复表达组，分别以化疗、放疗、化疗结合放疗等方法处理，用MTT法测各组细胞存活率，比较HSP70不同表达水平对放化疗敏感性的影响。[结果] GLC-82细胞热休克处理前后HSP70表达水平明显不同，热休克处理后12h细胞HSP70表达最高．48h后达到预热前水平；各组细胞经不同剂量放射线作用后采用单靶多击模型拟和细胞生存曲线，显示HSP70正常表达组和HSP70恢复表达组生存曲线基本重合，增强表达组生存曲线右上移位，肩K增宽；不同化疗药物对HSP70增强表达组的抑制率较其它两组低．差异有统计学意义，虽然放化疗联合能显著提高对同一HSP70表达水平的GLC．82细胞的杀伤效果，但是HSP70增强表达组细胞对放化疗的联合杀伤敏感性较其它组低，差异有统计学意义。[结论] HSP70增强表达可以降低GLC-82细胞对放疗、化疗及放化疗联合作用的敏感性。