蛇床子素对APP/PS1小鼠学习记忆的影响

目的观察蛇床子素(OST)对APP/PS1小鼠学习记忆功能的影响。方法采用雄性APP/PS1双转基因小鼠及野生型(WT)小鼠,随机分为3组:WT对照组、APP/PS1对照组和APP/PS1+OST。给药组小鼠自9月龄开始每天给予OST10 mg·kg~(-1),对照组小鼠则给予等体积的双蒸水,连续给药12周。每月观察小鼠筑巢行为的改变;实验结束前采用Morris水迷宫观察小鼠行为学的改变。之后,麻醉并处死小鼠,收集脑组织,采用Nissl染色观察海马神经元的形态及数量;Western蛋白印迹法检测海马组织Aβ1-40/Aβ1-42含量,APP、α分泌酶(ADAM10)及β分泌酶(BACE1)的蛋白表达水平。结果 APP/PS1小鼠筑巢行为评分随着时间推移而逐渐变差,不能筑成完整的巢穴;给予OST治疗后,小鼠的筑巢行为评分接近WT小鼠,基本筑成完整巢穴。由此说明,12月龄的APP/PS1小鼠日常生活能力和社会行为有所损伤,而OST对此可部分恢复。水迷宫结果显示,与WT小鼠相比,APP/PS1小鼠出现明显的空间学习记忆能力的下降,表现为平均逃避潜伏期明显延长且目标象限停留时间百分比和穿越平台次数明显减少;给予OST后改善了APP/PS1小鼠的空间学习记忆能力。组织形态及分子生物学结果显示,APP/PS1小鼠海马DG区及CA3区神经元的细胞形态受损并伴有完整神经元数量的减少,并且海马组织Aβ1-40/Aβ1-42含量增加,APP及BACE1蛋白呈现高表达,ADAM10的蛋白表达下降;给予OST后,减少了APP/PS1小鼠海马组织Aβ的含量,降低了APP及BACE1蛋白水平,增加了ADAM10的蛋白表达。结论 OST可改善APP/PS1小鼠日常生活能力、社会行为及空间学习记忆等能力,并减少海马组织Aβ的含量,可能与调节海马APP的酶切途径有关。     

戊二酰亚胺类抗生素S-632A对D-半乳糖老化小鼠海马神经元Aβ及其相关蛋白表达的影响

目的:观察戊二酰亚胺类抗生素S-632A对D-半乳糖老化小鼠模型(DGAM)海马神经元β-淀粉样肽(β-amyloid,Aβ)及其相关蛋白表达的影响.方法:采用免疫组织化学染色和免疫印记方法,检测DGAM海马神经元Aβ、β-分泌酶(Beta-site APP cleaving enzyme,BACE)、内质网Aβ结合蛋白(Endoplasmicreticulum amyloid β peptide binding protein,ERAB)和早老蛋白1(Presenilin-1,PS-1)的表达水平,并观察应用戊二酰亚胺类抗生素S-632A对DGAM海马神经元的保护作用.结果:对照组小鼠海马神经元Aβ及其相关蛋白BACE,ERAB和PS-1表达量少,而DGAM小鼠海马神经元Aβ及其相关蛋白表达水平明显增加,与对照组比较差异具有高度显著性(P<0.01),S-632A组上述各种蛋白的表达结果与对照组接近.结论:DGAM小鼠海马神经元存在着Aβ及其相关蛋白BACE,ERAB和PS-1表达的上调,S-632A可明显改善模型动物中上述蛋白的异常表达,对小鼠神经元具有营养和保护作用.     

NMDA对老年性痴呆大鼠βAPP及BACE1表达的影响

目的 探讨N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体抑制剂(盐酸美金刚)对老年性痴呆(AD)大鼠β-淀粉样前体蛋白(APP)及β分泌酶(BACE1)表达的影响。方法 30只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,治疗组(盐酸美金刚组);除假手术组外,其余两组大鼠海马注射10 μg β淀粉样蛋白(Aβ)1-40构建AD大鼠模型,治疗组大鼠腹腔注射10 mg/(kg.d)盐酸美金刚,其余两组给予等量生理盐水,连续给药14 d,处死大鼠取血及海马组织。ELSIA法检测血清及海马组织中Aβ含量,western blot及RT-PCR法检测海马组织中APP和BACE1蛋白及mRNA表达量。结果 与假手术组比较,模型组中Aβ含量显著提高,APP及BACE1蛋白及mRNA含量显著提高;与模型组比较,治疗组中Aβ含量显著降低,APP及BACE1蛋白及mRNA含量显著下降。结论 盐酸美金刚能通过阻断APP裂解,从而抑制AD大鼠海马组织中Aβ沉积。     

氟西汀对阿尔茨海默病模型小鼠的神经元保护作用

目的:研究氟西汀对老年APP/PS1双重转基因阿尔茨海默病模型小鼠学习记忆能力的影响及对神经元的保护作用.方法:实验分为动物实验和细胞实验.动物实验中取APP/PS1双重转基因小鼠随机分为氟西汀组(n=8)和生理盐水组(n=8),另取C57同窝生同月龄正常小鼠10只为对照组.氟西汀组小鼠给予氟西汀(10 mg/kg)腹腔注射,生理盐水组及对照组注射等量生理盐水1次/d,持续8周.Morris水迷宫实验进行行为学检测.Tunel染色检测海马区神经元凋亡.细胞实验中将人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)培养48 h后分为正常组、Aβ组、氟西汀组和氟西汀+Aβ组,后3组分别在含10μmol/L β-淀粉样蛋白、100 nmol/L氟西汀和100 nmol/L氟西汀+10μmol/L β-淀粉样蛋白的DMEM中继续培养48 h.行原位细胞凋亡染色检测各组细胞凋亡.结果:水迷宫定位航行实验中,氟西汀组小鼠较生理盐水组相比平均潜伏期明显缩短(P＜0.01);空间探索实验中跨越平台次数增加(P＜0.01);海马区凋亡神经元数量减少(P＜0.01).细胞实验中,氟西汀组和氟西汀+Aβ组与Aβ组相比,凋亡细胞数量明显减少(P＜0.01).结论:氟西汀对神经元细胞有保护作用,能减少神经元的凋亡,长期服用氟西汀能显著改善APP/PS1阿尔茨海默病模型小鼠学习记忆力能力.     

β-淀粉样蛋白前体蛋白裂解酶1相关干预策略在阿尔采末病治疗的研究进展

阿尔采末病(AD)是一种进行性的神经退行性疾病,其发病原因是脑内β淀粉样蛋白(Aβ)的聚集和沉积。Aβ是由淀粉样蛋白前体经β-分泌酶和γ-分泌酶剪切代谢生成,而β-淀粉样蛋白前体蛋白裂解酶1(BACE1)是该过程的限速酶,抑制BACE1的活性可减少Aβ的产生,因此BACE1成为人们关注治疗AD的热门靶点。本文对近年来BACE1靶点在阿尔采末病治疗中的研究和进展进行综述。     

α7 nAChR通过提高抗氧化能力提升AD模型动物学习记忆能力及抗神经毒性作用

目的α7尼古丁型乙酰胆碱能受体(α7 nAChR)对学习与记忆功能密切相关,但其作用机制尚不十分清楚。为此,本研究选用APP/PS1双转基因动物模型,应用α7 nAChR激动剂/抑制剂研究nAChR是否能对抗Aβ引起的神经毒性作用,改善学习与记忆功能。方法选择α7 nAChR激动剂PNU-282987、α7 nAChR抑制剂甲基牛扁碱(MLA)分别处理6月龄、10月龄APP/PS1双转基因小鼠,水迷宫测定小鼠空间学习及记忆能力;HE染色观察APP/PS1双转基因小鼠脑组织病理学改变;免疫组织化学染色检测小鼠大脑内老年斑分布及表达;生物化学方法测定小鼠大脑及血清中丙二醛(MDA)含量、SOD及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;Western蛋白印迹法检测小鼠海马APP代谢途径中α分泌型淀粉样前体蛋白(αAPP)、β分泌型淀粉样前体蛋白(βAPP)、β淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)、BACE2及解聚素金属蛋白酶结构域蛋白10(ADAM10),抗氧化应激通路核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)、突触素(SYN)和突触相关蛋白(SNAP-25)等蛋白的表达水平。结果在6月龄、10月龄小鼠中,与对照组相比,PNU处理组小鼠的平台逗留时间明显升高,穿越平台次数明显增多,逃避潜伏期也有相应缩短;而MLA处理组小鼠平台逗留时间,穿越平台次数明显减少,逃避潜伏期则相应延长。6月龄APP/PS1转基因小鼠中,PNU处理组小鼠脑组织MDA含量较阳性对照组降低,SOD及GSH-Px活性较阳性对照组明显升高;MAL处理组小鼠脑组织MDA含量较阳性对照组升高,而SOD及GSH-Px活性较阳性对照组明显降低。10月龄APP/PS1转基因小鼠中,氧化应激指标略有加重,血清中氧化应激水平变化与脑组织中相似。Western蛋白印迹法结果显示,在6月龄小鼠中,PNU能够上调Nrf2/HO-1,ADAM10,BACE2,αAPP,SYN和SNAP-25蛋白表达水平,MLA可降低BACE1,αAPP,SYN和SNAP-25蛋白表达水平;在10月龄小鼠中,PNU能够上调Nrf2/HO-1,ADAM10,αAPP,SYN和SNAP-25蛋白表达水平,MLA可降低ADAM10,αAPP,SYN,SNAP-25蛋白表达水平。结论α7 nAChR可通过提高抗氧化能力来提升AD动物学习记忆能力及抗神经毒性作用:(1)激活α7 nAChR能改善APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力,而抑制α7 nAChR可加重该动物模型学习记忆障碍;(2)激活α7 nAChR能够活化Nrf/HO-1抗氧化应激通路和降低氧化应激水平;(3)α7 nAChR可调节APP代谢相关酶,促进αAPP生成,抑制Aβ生成及增强SYN、SNAP-25蛋白表达,改善突触可塑性。     

蛇床子素上调miRNA-107减少APP_(595/596)转基因神经元Aβ的生成

目的考察蛇床子素(osthole,Ost)对转染APP_(595/596)基因的小鼠神经元的保护作用,并探讨其作用机制。方法原代培养小鼠神经元,转染APP_(595/596)基因构建AD细胞模型;采用CCK-8法检测神经元存活率;试剂盒法检测乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)释放量,评价神经元的损伤程度;TUNEL染色法检测神经元凋亡;免疫荧光化学法检测β-淀粉样蛋白(beta-amyloid peptide,Aβ)和β-分泌酶1(β-site APP cleaving enzyme 1,BACE1)的蛋白表达;RT-PCR检测miRNA-107的表达。结果与模型组比较,Ost干预组神经元的存活率明显升高,LDH释放量明显降低,凋亡率明显降低,Aβ和BACE1的蛋白表达均明显降低,而miRNA-107的表达明显升高。结论 Ost对转染APP_(595/596)基因的小鼠神经元具有良好的保护作用,其机制可能与上调miRNA-107表达,抑制BACE1表达,进而减少Aβ生成有关。     

D-半乳糖和三氯化铝诱导小鼠产生类阿尔茨海默病变

目的　探讨D 半乳糖和三氯化铝 (AlCl3 )联合使用制备阿尔茨海默病动物模型的可能性。方法昆明种小鼠 ,腹腔注射D 半乳糖 (60mg·kg-1 ·d-1 )和灌胃AlCl3 (5mg·kg-1 ·d-1 )每天 1次 ,连续 90d。给药结束后 ,通过Morris水迷宫、生化指标测定、RT PCR及常规HE染色和Aβ1 -4 0 免疫组化染色 ,观察D 半乳糖和AlCl3 对小鼠学习记忆、胆碱能系统及脑内β淀粉样前体蛋白 (APP)、早老素 1 (PS1 )、β位点APP内切酶 (BACE)基因表达的影响 ,并观察海马、皮质的形态学改变。结果　D 半乳糖和AlCl3共同作用导致小鼠学习记忆力减退 ;脑内ACh含量下降 ,AChE活性升高 ;APP ,PS1和BACE基因表达增强 ;海马和皮质老年斑形成。结论　D 半乳糖和AlCl3 联合使用可使小鼠产生类阿尔茨海默病变 ,该方法可用于制备阿尔茨海默病动物模型。     

姜黄素对阿尔采末病中APP淀粉样酶切途径的调控作用

目的研究姜黄素作用于阿尔采末病中APP淀粉样酶切途径的环节,探讨其抑制Aβ产生的作用机制。方法体外培养SHSY5Y细胞,以LipofectaminTM2000脂质体介导瞬时共转染pBACE1-mychis和pAPPswe两种质粒,姜黄素(0、1.25、5.0、20μmol.L-1)处理转染后的SHSY5Y细胞24h,以及5μmol.L-1姜黄素按时间梯度(0、12、24、48h)分别处理转染后的SHSY5Y细胞,通过RT-PCR检测APP和BACE1mRNA水平,Western blot检测BACE1和C99蛋白表达情况,ELISA检测Aβ40/42水平。结果经姜黄素处理后APP和BACE1mRNA表达水平都有明显减弱,呈浓度-时间依赖性(P<0.05);BACE1和C99蛋白表达也有不同程度的下调,呈浓度-时间依赖性(P<0.05);Aβ40/42表达水平明显降低,呈浓度-时间依赖性(P<0.05)。结论姜黄素能够抑制阿尔采末病相关基因APP mRNA表达;抑制APP的限速酶BACE1mRNA和蛋白表达;并抑制APP分解产物C99蛋白表达,都呈浓度-时间依赖性(P<0.05)。此外,姜黄素可以明显抑制APP的分解产物Aβ40/42的产生。     

半胱氨酰白三烯受体1调节APP/PS1小鼠原代神经元β淀粉样蛋白生成及机制

目的 探究半胱氨酰白三烯受体1(CysLT1R)对体外培养的APPswe/PS1?E9双转基因小鼠(APP/PSI小鼠)皮质原代神经元β淀粉样蛋白(Aβ)生成的影响及机制.方法 ①将携带CysLT1R的慢病毒-绿色荧光蛋白载体(LV-CysLT1R-EGFP)或空载体(LV-EGFP)转染至APP/PS1小鼠皮质原代神...     

二甲双胍对阿尔茨海默病小鼠的神经保护作用机制研究

目的 研究二甲双胍处理对淀粉样蛋白前体蛋白/早老素基因1（APP/PS1）转基因小鼠神经保护作用及机制。方法 将APP/PS1转基因小鼠分成模型组和实验组,将同窝野生型小鼠作为正常组,每组16只。实验组给予二甲双胍350 mg·kg^-1·d^-1,正常组和模型组给予标准饮用水,连续4个月。用水迷宫实验检测3组小鼠逃生时间,以蛋白质印迹法检测沉默信息调节因子2同源蛋白1（SIRT1）、β淀粉蛋白前体蛋白（APP）、APPβ位点剪切酶1（BACE1）、β羧基末端片段（β-CTF）和核转录因子kappa B（NF-κB）,酶联免疫吸附实验检测β-淀粉样蛋白（Aβ40）和β-淀粉样蛋白42（Aβ42）,脑切片荧光染色检测老年斑数量,高尔基染色检测树突棘密度。结果 正常组、模型组和实验组于水迷宫实验第6天的逃生时间分别为（30.08±4.26）,（54.71±6.58）和（34.56±3.27）s;这3组间树突棘密度分别为（1.68±0.17）,（1.05±0.17）和（1.60±0.21）cell·μm^-1。模型组和实验组的BAC...     

人淀粉样蛋白前体695基因及人烟碱乙酰胆碱受体α4β2亚单位基因共表达细胞模型的构建

目的为满足寻找可能影响淀粉样β蛋白(Aβ)在阿尔茨海默病过程中的药物实验的需求,建立共表达人淀粉样蛋白前体(APP)695基因和烟碱乙酰胆碱受体(nAChR)α4β2亚单位基因的细胞模型。方法用脂质体转染方法把APP695基因转染进已稳定转染nAChRα4β2亚单位基因的SH-EP1细胞。用500mg.L-1G418加压筛选,并挑选细胞单克隆。用RT-PCR和Western蛋白印迹法对转染后的细胞单克隆进行鉴定,挑取成功转染并高表达APP695的细胞进行克隆。膜片钳检测所挑细胞克隆的α4β2受体功能。结果挑出成功稳定转染人APP695基因及人nAChRα4β2亚单位基因的共表达细胞克隆株。膜片钳方法检测到此细胞克隆株上nAChRα4β2存在活性。结论成功制备了共表达人APP695基因及人nAChRα4β2亚单位基因的细胞模型,为探讨神经元nAChRα4β2亚型对Aβ加工影响的药物实验提供了条件。     

灵孢多糖对M146L细胞APP mRNA表达的影响研究

目的：探讨灵孢多糖(GLPS)对M146L细胞APP mRNA表达的影响,寻找潜在的能够抑制Aβ分泌的中药单体,以达到治疗阿尔茨海默病(AD)的目的。方法：以可过表达β淀粉样蛋白42(Aβ₄₂)的β淀粉样蛋白前体蛋白(APP)/突变型早老素1(PS1)双转基因的CHO细胞(M146L细胞)为体外AD治疗药物筛选模型。经不同浓度的GLPS(100,200,300μg/mL)处理后,采用MTT比色法检测细胞活性;应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测灵孢多糖对M146L细胞APP mRNA表达的影响;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测M146L细胞中APP,Aβ₄₂,Bax, Bcl-2等蛋白表达情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测M146L细胞外Aβ₄₂的表达情况。结果：低、中剂量GLPS组细胞活性与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);高剂量GLPS组相比于对照组,细胞活性明显下降(P<0.05)。相比于对照组,低、中、高剂量GLPS组APP mRNA,APP,Aβ_42<...     

拟人参皂苷F11抗阿尔茨海默病作用的Aβ相关机制

目的阿尔茨海默病(AD)是一种常见的神经退行性疾病,其主要病理特征为Aβ过度沉积形成的老年斑、Tau蛋白过度磷酸化形成的神经纤维缠结等。拟人参皂苷F11(PF11)是西洋参茎叶中分离提取的一种三萜皂苷化合物。我们前期研究结果显示,PF11具有拮抗东莨菪碱、D-半乳糖和LPS所致实验动物的认知障碍的作用,同时显著降低过度磷酸化Tau并减轻神经炎症,提示PF11可能通过干预AD发病的多种机制来实现改善认知障碍的作用。本文进一步评价PF11对AD模型动物认知功能障碍的改善作用,尤其对Aβ的产生及清除的相关机制。方法 (1) 6月龄和12月龄APP/PS1转基因小鼠灌胃给予PF11(8 mg·kg~(-1)),分别在给药3个月、1个月后进行行为学实验,并检测小鼠海马和皮质脑区中淀粉样蛋白前体蛋白(APP)及Aβ1-40的表达水平。(2)灌胃给予6月龄雄性SAMP8快速衰老小鼠PF11(2,8和32 mg·kg~(-1)),在给药3个月后进行行为学实验,并检测APP、β-分泌酶(BACE1)、晚期内含体Rab7和循环内含体Rab11的表达。(3)构建p EGFP-Rab5及p RFP-Rab7质粒并转染至原代小胶质细胞中,观察Rab转换。考察PF11对小胶质细胞吞噬、降解Aβ寡聚体(o Aβ)作用的影响,研究PF11对小胶质细胞内吞-自噬-溶酶体系统的保护作用。结果 (1) PF11给药可明显改善APP/PS1转基因小鼠的学习记忆能力,并可显著减少小鼠海马和皮质脑区中APP与Aβ1-40的表达水平。(2) PF11(8和32 mg·kg~(-1))可显著改善SAMP8小鼠的认知能力,显著减少小鼠海马和皮质脑区中Aβ的沉积,降低BACE1的表达水平,并可促进APP从细胞质向质膜的转运,提示PF11可能通过影响APP的剪切过程及亚细胞定位来减少Aβ的生成。此外,PF11(8和32 mg·kg~(-1))显著增加小鼠海马和皮质脑区中APP与Rab11的共定位,提示PF11可以促进APP与循环内含体结合从而减少Aβ的生成。(3) o Aβ可通过调节转录因子EB(TFEB)的核易位和延缓Rab的转化而阻碍溶酶体的自噬降解系统。PF11(30～100μmol·L-1)可通过促进自噬小体及内含体的成熟并恢复溶酶体功能,发挥促进小胶质细胞吞噬及降解Aβ的作用。结论 PF11可显著改善APP/PS1转基因小鼠、SAMP8小鼠的学习记忆障碍,同时减少小鼠海马和皮质脑区中Aβ的沉积。其机制与减少Aβ生成、促进其降解等多环节有关。     

治疗阿尔采末病的药物靶点:β-分泌酶

近年来的研究表明,β-淀粉样蛋白(Aβ)是老年斑的主要成分,有明显的神经细胞毒性作用,在阿尔采末病(AD)的发病过程中发挥了重要作用,因此降低脑中Aβ的生成量是治疗AD的策略。Aβ是由β-和γ-分泌酶裂解其前体蛋白(APP)而生成,其中β-分泌酶(BACE)是启动Aβ形成的关键限速酶,因此BACE是开发治疗AD药物的一个具有吸引力的作用靶点。该文就近来对β-分泌酶的研究作一综述。     

拟人参皂苷-F11对SAMP8小鼠认知障碍的改善作用及机制

目的阿尔茨海默病(AD)是一种常见的、以认知障碍为主要症状的中枢神经系统退行性疾病。β-淀粉样蛋白(Aβ)聚集形成的淀粉样斑块(SP)和过度磷酸化的Tau蛋白引发的神经原纤维缠结(NFT)是AD临床上的主要病理特征。拟人参皂苷F11(PF11)是西洋参茎叶中分离提取的一种三萜皂苷化合物,本文通过自发快速老化(SAMP8)模型小鼠,从Aβ沉积和Tau过度磷酸化等方面,结合神经行为学、免疫组织化学和蛋白质免疫印迹等手段,进一步评价PF11对AD模型动物认知障碍的改善作用及潜在机制。方法灌胃给予6月龄雄性SAMP 8快速衰老小鼠PF11(2,8和32 mg·kg~(-1)),在给药3个月后进行行为学实验,并检测APP和β-分泌酶(BACE1)、晚期内含体Rab7和循环内含体Rab11的表达。结果灌胃给予PF11(8和32 mg·kg~(-1))3个月可以显著改善SAMP8小鼠的识别记忆和空间学习记忆障碍,显著增加SAMP8小鼠海马和皮质中突触后致密蛋白95的水平;显著降低SAMP8小鼠海马和皮质中胞浆淀粉样蛋白前体蛋白(APP)和β-分泌酶(BACE1)的水平,减少海马和皮质中APP与晚期内含体(LE)的共定位,从而降低脑内Aβ的沉积;PF11可以显著提高SAMP8小鼠海马和皮质中异常降低的亮氨酸羧甲基转移酶(LCMT-1)水平,增加甲基化蛋白磷酸酶2A(PP2A)的水平,从而减少过度磷酸化的Tau。结论 PF11能够明显改善SAMP8小鼠的认知障碍,其机制与抑制海马和皮质脑区中APP淀粉样剪切途径进而减少Aβ沉积,以及增加PP2A活力进而减少Tau蛋白的过度磷酸化相关。     

基于转基因细胞模型研究通络醒脑泡腾片对Aβ代谢的影响

目的采用转基因细胞模型,考察通络醒脑泡腾片对Aβ生成和降解关键靶点的影响,探索其抗阿尔茨海默病的作用机制。方法体外培养SH-SY5Y-APP和SH-SY5Y-C99细胞,不同浓度的含药血清的培养液(含通络醒脑泡腾片血清0%~40%)干预48 h,采用MTT法确定无毒浓度,LDH法检测细胞活性,ELISA法检测Aβ_(1-40)和Aβ_(1-42)分泌量;采用RT-PCR和Western blot检测APP基因和蛋白表达,Western blot法检测APP剪切片段sAPPα和sAPPβ蛋白表达;qRT-PCR、Western blot及荧光检测试剂盒分别测定BACE1基因、蛋白水平和酶活性;Western blot检测Aβ降解酶IDE和NEP蛋白表达;体外培养SH-SY5Y,通络醒脑泡腾片不同浓度的含药血清培养液孵育48 h,MTT法检测Aβ_(25-35)诱导后细胞存活率。结果通络醒脑泡腾片含药血清对SHSY5Y-APP和SH-SY5Y-C99细胞均无明显毒性作用(P>0.05);通络醒脑泡腾片含药血清可明显抑制SH-SY5Y-APP细胞Aβ的分泌(P<0.05),对SH-SY5Y-C99细胞Aβ分泌量无影响;对SH-SY5Y-APP细胞APP基因及蛋白水平、sAPPα及Aβ降解酶NEP和IDE蛋白表达均无明显影响(P>0.05),但对sAPPβ蛋白有明显抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖关系,对BACE1基因、蛋白水平、活性均有明显抑制作用(P<0.01)。此外,研究发现通络醒脑泡腾片含药血清对Aβ_(25-35)诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有保护作用(P<0.01)。结论通络醒脑泡腾片对β-分泌酶具有明显的抑制作用,并能对抗Aβ神经细胞毒性作用,提示抑制β-分泌酶和拮抗Aβ神经细胞毒性是通络醒脑泡腾片发挥抗阿尔茨海默病的主要作用机制。     

阿里红多糖对阿尔茨海默症小鼠认知功能的作用机制研究

目的 考察阿里红多糖（FOPS）改善淀粉样前体/早老素（APP/PS1）阿尔茨海默症小鼠的认知功能及潜在机制。方法 C57BL/6J雄性小鼠作正常组;根据体重将APP/PS1双转基因雄性小鼠随机分为4组：模型组、对照组、FOPS-a实验组和FOPS-b实验组,每组8只。模型组正常饲养,对照组给予0.65 mg·kg^-1盐酸多哌奈齐,FOPS-a实验组给予60 mg·kg^-1 FOPS-a, FOPS-b实验组给予60 mg·kg^-1 FOPS-b,灌胃给药;qd,连续给药3个月。用Morris水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力,实时荧光定量-聚合酶链反应法测定海马区糖原合成酶激酶-3（GSK3α）、淀粉样前体蛋白（APP）、β淀粉样蛋白（Aβ）基因转录情况,蛋白质印迹法检测GSK3Α、APP、Aβ_1-42、早老素（PS-1）蛋白的表达。结果 模型组、正常组、对照组、FOPS-a组、FOPS-b剂量组第4天逃避潜伏期分别为（48.29±10.49）,（27.36±17.25）(28.91±20.31),（...     

C反应蛋白对β淀粉样蛋白生成的调节参与Alzheimer’s病发病的研究

β淀粉样蛋白(amyloid-β,Aβ)是阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)发病的重要因素。我们前期发现C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)能诱导大鼠产生与Aβ相似的认知障碍,提示CRP可能是AD的重要致病因子。本实验目的是利用PC12细胞初步探讨CRP的细胞毒性与Aβ相关因子淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP),β-分泌酶(β-site of APP cleaving enzyme,BACE-1)、早老素1(presenilins-1,PS-1)和早老素2(presenilins-2,PS-2)的表达调控关系。继而以APP/PS1转基因小鼠作为研究对象,分析脑内CRP和Aβ1-42的相关性;同时脑室给予APP/PS1转基因小鼠CRP以及bis(PC)-H后,观察CRP及其抑制剂是否能影响转基因小鼠的学习记忆,并分析脑内Aβ斑块的形成以明确CRP参与AD早期发病过程的机制。结果显示,CRP诱导PC细胞的相对活力下降,LDH释放增加,表明CRP对PC12细胞产生毒性损伤作用;bis(PC)-H则通过拮抗CRP活性逆转CRP对PC12细胞产生的毒性作用。CRP处理细胞后可诱导Aβ生成相关因子和Aβ1-42的表达显著上调,而bis(PC)-H则可以逆转CRP这一效应,提示了CRP可以调节Aβ的生成。我们在动物实验中发现APP/PS1转基因小鼠脑内CRP与Aβ1-42的水平存在正相关,推测CRP可能通过调节Aβ1-42的生成参与AD早期的发病。我们通过脑室给药的方式给予疾病早期的APP/PS1转基因小鼠CRP及其抑制剂,发现CRP可以影响其学习记忆和Aβ斑块形成。拮抗CRP可以逆转APP/PS1转基因小鼠在物体识别、Morris水迷宫和跳台实验中轻度学习记忆损伤的趋势,并减少Aβ斑块的形成;给予CRP则可以加重APP/PS1转基因小鼠的学习记忆的损伤,并增加Aβ斑块的形成,一正一反地证明了CRP参与AD转基因小鼠的发病。本实验发现了CRP是一个可以作为早期干预AD发病的新靶点,也阐明了CRP参与AD发病的新机制。