原发性肝细胞癌p33ING1b表达水平及其临床诊断意义

目的 探讨肝癌p33ING1b mRNA表达水平及与临床病理特征的关系,揭示p33ING1b基因在肝癌发生发展中的作用及临床诊断意义.方法 用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测55例原发性肝癌患者癌组织及其癌旁组织p33ING1b mRNA水平.结果 63.6% (35/55)癌组织及70.9%(39/55)癌旁组织p33ING1b mRNA呈阳性表达,癌组织p33ING1b mRNA表达量为0.410±0.175,明显低于癌旁组织0.529±0.203,两者比较差异有统计学意义(P＜0.05).p33ING1b mRNA水平与肝癌的病理分级、淋巴结转移、包膜浸润与否有关,而与年龄、性别、肿瘤大小、癌栓形成、合并肝硬化与否无关.结论 p33ING1b表达下调在肝癌发生、发展中起重要作用,可以作为肝癌分化、侵袭性及预后的评价指标.     

初步探讨口腔鳞状细胞癌中的p33/ING1表达的意义

目的 观察口腔鳞状细胞癌中的p33/ING1基因表达情况,探讨其临床意义.方法 分别选取口腔黏膜正常组织30例、异常口腔黏膜增生组织30例、口腔鳞状细胞癌黏膜组织30例,观察p33/ING1在人正常口腔黏膜上皮角化细胞（Normal Oral Keratinocyte,NOK）、人口腔黏膜上皮异常增生细胞（ Dysplastic Oral Keratinocyte,DOK）和人口腔鳞状细胞癌细胞（Oral Squamous Cell Carcinoma,OSCC）中的表达情况.结果 ING在NOK细胞中的表达要远远高于在OSCC细胞中的表达,有显著性差异和统计学意义（P＜0.05）.结论 p33/ING1蛋白的表达在OSCC细胞中的表达显著下降,p33/ING1表达在口腔鳞状细胞癌的发展中具有重要意义.     

P33ING1基因结构及表达异常与周围型肺癌CT征象

目的：探讨P33ING1基因结构及表达异常与周围型肺癌CT征象的相关性。方法：利用免疫组织化学、聚合酶链反应-单链构象多态性分析（PCR-SSCP）方法检测52例周围型肺癌患者癌肺组织和癌旁肺组织中P33ING1基因的表达水平及第2外显子突变,并与其CT征象进行相关性研究。结果：52例肺癌患者癌组织中,P33ING1基因蛋白丢失率为53.8%（28/52）,第2外显子缺失/突变率为23.1%（12/52）;P33ING1基因的缺失和蛋白的丢失率在不同临床分期的各组间的差异有统计学意义（P〈0.05）,但在不同病理类型、分化程度的各组间差异无统计学意义（P〉0.05）,有细毛刺、棘突、胸膜凹陷及淋巴结转移等CT征象肺癌患者,P33ING1基因的缺失和蛋白的丢失率明显高于无以上征象者（P〈0.05）;而在不同肿瘤大小、有无分叶、有无空洞、不同增强值方面,各组的P33ING1基因的缺失和蛋白的丢失率差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：P33ING1基因突变及表达异常可能在肺癌的发生、发展中起重要作用,并与肺癌患者CT征象有关,P33ING1基因可作为肺癌临床诊断及预后评估的检测指标。     

K-ras与p33ING1、CyclinE在直肠癌组织中表达及生物学关系的研究

目的探讨K-ras蛋白与p33ING1蛋白、CyclinE在直肠癌组织中表达情况及其与直肠癌生物学行为的关系。方法运用S-P免疫组化技术,检测72例直肠癌组织及正常直肠黏膜组织中K-ras蛋白与p33ING1蛋白、CyclinE的表达。结果 K-ras与p33ING1、CyclinE的蛋白表达阳性率在直肠癌组织中分别为62.5%、29.2%、72.2%,在正常直肠黏膜中分别为2.8%、91.7%、18.1%,差异有统计学意义(P<0.05);K-ras蛋白在直肠癌组织中的表达与年龄、肿瘤大小、临床分型、组织分化无关;与淋巴结转移及Dukes分期有关,不同分组间的K-ras蛋白表达率差异有统计学意义(P均<0.05);K-ras蛋白表达和p33ING1蛋白表达呈负相关(rs=-0.404,P<0.05),K-ras蛋白表达和CyclinE表达呈正相关(rs=0.571,P<0.05)。结论直肠癌组织中K-ras蛋白、CyclinE表达增高,抑癌基因蛋白p33ING1表达降低,提示K-ras与p33ING1、CyclinE参与直肠癌的发生、发展,并在直肠癌形成过程中起着重要作用。并可能为直肠癌的早期诊断和治疗提供新的方法。     

肺癌患者胸腔积液中UHRF1 mRNA的表达和临床意义

目的探讨肺癌患者胸腔积液中脱落细胞的泛素样含PHD和环指域1(UHRF1)mRNA表达水平及临床诊断价值。方法选取2015年10月至2017年2月南京医科大学附属江宁医院收治的胸腔积液患者124例,根据病理学诊断结果分为恶性胸腔积液组(60例)和良性胸腔积液组(64例),采用实时荧光定量聚合酶链反应技术检测两组UHRF1mRNA表达水平,分别与胸腔积液中脱落细胞学检查结果、癌胚抗原(CEA)和DNA异倍体细胞检测结果进行比较,并分析其与临床病理因素的关系。结果恶性胸腔积液组中UHRF1mRNA相对表达量为(4.53±4.33),明显高于良性胸腔积液组(1.61±1.56),差异有统计学意义(t=5.057,P=0.000)。受试者工作特征曲线分析显示,UHRF1mRNA、CEA单独检测及联合检测的曲线下面积分别为0.753、0.879、0.861,灵敏度分别为53.48%、78.18%、74.42%,特异度分别为88.24%、93.44%、86.27%。在不同年龄、性别、肿瘤定位、组织学分型、CEA水平及有无吸烟史患者的胸腔积液中,UHRF1mRNA相对表达量差异无统计学意义(P0.05);脱落细胞阳性和异倍体细胞阳性患者胸腔积液中UHRF1mRNA相对表达量高于阴性患者,差异有统计学意义(P0.05)。结论UHRF1mRNA对恶性胸腔积液具有较高的临床诊断价值。     

宫颈癌患者血清hsa-miR-200a-3p的表达及其意义

目的探讨宫颈癌患者血清hsa-miR-200a-3p的表达水平及其对宫颈癌的辅助诊断价值。方法收集55例宫颈癌患者、32例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者、39例子宫肌瘤患者及47例健康对照者血清样本,分别测定hsa-miR-200a-3p的表达水平及糖链抗原125(CA125)和人鳞状细胞癌相关抗原(SCCAg)水平。分析血清hsa-miR-200a-3p的表达水平与临床病理特征、CA125和SCCAg之间的关系。用受试者工作特征曲线(ROC曲线)评价3项指标单独及联合检测对宫颈癌的辅助诊断价值。结果宫颈癌患者血清hsa-miR-200a-3p的相对表达量均高于子宫肌瘤患者和健康对照者,差异有统计学意义(P0.001)。CIN患者血清hsa-miR-200a-3p的相对表达量均高于子宫肌瘤患者和健康对照者,差异有统计学意义(P0.05)。子宫肌瘤患者和健康对照者血清hsa-miR-200a-3p的相对表达量差异无统计学意义(P0.05)。宫颈癌患者血清hsa-miR-200a-3p的表达水平在年龄大小、是否绝经、肿瘤最大直径、FIGO分期间差异均无统计学意义(P0.05),宫颈癌患者血清hsa-miR-200a-3p相对表达量与CA125(r2=0.012,P=0.421)、SCCAg(r2=0.004,P=0.647)无相关性。ROC曲线分析血清has-miR-200a-3p检测对宫颈癌患者的辅助诊断价值,宫颈癌区分于子宫肌瘤时,ROC曲线下面积(AUC)为0.753;宫颈癌患者区分于健康对照者时,AUC为0.771。结论宫颈癌患者血清hsamiR-200a-3p相对表达量高于子宫肌瘤组和健康对照组,有可能成为宫颈癌辅助诊断的重要生物学指标。血清hsa-miR-200a-3p的表达水平或可用于CIN的辅助诊断。     

p53促凋亡刺激蛋白2在非小细胞肺癌中表达的临床意义

目的 探讨p53促凋亡刺激蛋白2(ASPP2)在非小细胞肺癌(NSCLC)诊断和治疗中的临床意义.方法 建立检洲ASPP2 mRNA表达的实时荧光定量(RT-PCR)方法,并应用该方法检测非小细胞肺癌患者肿瘤组织和外周血单个核细胞ASPP2 mRNA表达,并监测化疗前后ASPP2 mRNA表达的变化.结果 建立的RT-PCR方法获得较好的扩增曲线和标准曲线,并且熔解曲线峰型单一,具有良好的稳定性与重复性;NSCLC患者肺癌组织和外周血中ASPP2 mRNA表达分别为(2.34±0.75)×103,(7.00±1.17)×103.肺癌组外周血中ASPP2 mRNA明显低于对照组(1.20±0.18)×104(P<0.05),术后化疗一个月后ASPP2 mRNA的表达明显高于化疗前(P<0.05).结论 ASPP2 mRNA的表达水平变化可以反映NSCLC疾病的状况,可在基因水平检测肿瘤的发生.ASPP2 mRNA的表达与化疗药物的敏感性相关,有望成为抗肿瘤治疗的新的分子靶点.     

非小细胞肺癌细胞p53凋亡刺激蛋白家族的表达及调节

目的:探讨p53遗传背景不同的非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株中p53凋亡刺激蛋白(ASPP)家族的表达和调节。方法:应用荧光定量RT-PCR方法检测细胞株中ASPP的mRNA表达以及应用Westernblot检测ASPP蛋白含量,MTT法检测不同细胞对抗肿瘤药物的敏感性。结果:顺铂处理后NCI-H157细胞株的IC50值是3.7μg/mL,A549的IC50是10.48μg/mL。NCI-H157细胞株中ASPP1、ASPP2mRNA平均表达量分别是A549的2.66倍(P=0.002)和6.98倍(P=0.03)。NCI-H157细胞株ASPP1、ASPP2蛋白表达量分别是A549的1.33倍和1.24倍。结论:ASPP家族在突变型NSCLC细胞株中的表达比在野生型细胞株中高,ASPP家族表达和肺癌细胞对抗肿瘤药物的敏感性有关,有望成为抗肿瘤治疗的新的分子靶点。     

microRNA在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床应用研究

摘要:目的：探讨microRNA（miRNA）在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及其临床意义。 方法：用实时荧光定量PCR技术检测40例NSCLC患者癌组织与癌旁组织中miR-21、miR-20a、miR-31、miR-222、miR-223、miR-145、miR-126的表达变化。 结果：NSCLC患者癌组织中miR-21、miR-20a、miR-31、miR-222较癌旁组织呈高表达（P<0.05）,而miR-223、miR-145、miR-126呈低表达（P<0.05）。随着病情进展,miR-21、miR-222表达升高,miR-126表达下降。 结论：miR-21、miR-20a、miR-31、miR-222、miR-145、miR-126、miR-223在NSCLC癌组织中表达存在差异,且miR-21、miR-222和miR-126与NSCLC病情的恶化发展相关,有助于预后判断。     

逆转录实时荧光定量PCR检测p73 mRNA在结肠癌的表达

目的:建立一种实时定量PCR方法检测p73mRNA的表达水平,探讨其与结肠癌发生、发展的可能关系。方法:采用SYBRGreenⅠ逆转录实时荧光定量PCR检测39例结肠癌组织和其癌旁组织中p73mRNA的表达。结果:p73基因在结肠癌肿瘤组织的表达水平高于其在癌旁组织的表达(P<0.01);表达水平与肿瘤的恶性程度、分化及淋巴结转移显著相关(P<0.05)。结论:p73的高表达可能与结肠癌的发生、发展及预后有联系。     

P33／ING1在正常和异常增生口腔黏膜角化细胞及Tca8113细胞中的表达研究

目的研究抑癌基因P33／ING1在人正常口腔黏膜角化细胞（hNOK）、人异常增生口腔黏膜角化细胞（hDOK）和舌鳞癌细胞系Tea8113细胞中的表达及意义。方法对hNOK、hDOK和Tea8113细胞进行体外培养,间接免疫荧光染色结合激光共聚焦显微镜检测细胞中P33／ING1的表达与亚细胞定位。结果在hNOK和hDOK中P33／ING1呈高强度表达,主要分布于胞核和胞膜,偶见于胞浆;而Tea8113细胞中P33／ING1微弱表达,主要分布于胞桨。P33／ING1染色阳性率与组织病变恶性度显负相关（P〈0．05）。结论P33／ING1在口腔鳞癌发生发展过程中的表达呈进行性下降或缺失,ING1基因突变或缺失可能在口腔鳞癌的发生发展过程中起重要作用。     

实时荧光定量RT—PCR检测肺癌中PUMA mRNA的表达

目的 建立检测肺癌PUMA mRNA的实时荧光定量RT-PCR方法,初步探讨PUMA mRNA表达水平与肺癌发生发展的关系.方法 以GAPDH作为内参照基因,应用实时荧光定量RT-PCR,检测PUMA mRNA在肺癌组织中的表达水平.结果 建立了应用实时荧光定量RT-PCR检测肺癌PUMA mRNA的方法.熔解曲线分析和琼脂糖凝胶电泳结果证实了PCR反应的特异性;相对定量结果显示,40例肺癌患者的肿瘤组织、对应的癌旁组织、远癌组织和10例肺良性病变组织中均有PUMA tuRNA的表达,表达水平在肺癌与肺良性病变之间、肺癌各病理类型之间差异均无统计学意义(P>0.05).结论 应用SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR可以特异、准确、快速地分析不同肺组织中PUMA mRNA的表达差异.非小细胞肺癌的发生发展与PUMA mRNA的表达无明显相关性.     

血浆ESCCAL_1在食管鳞状细胞癌中的表达及意义

目的探讨食管鳞状细胞癌(ESCC)相关的长链非编码RNA ESCCAL_1在ESCC患者血浆中的表达及临床意义。方法抽提ESCC患者及体检健康者血浆RNA,以GAPDH为内参照,实时灾光定量PCR(q RT-PCR)检测ESCC患者及体检健康者血浆中ESCCAL_1的表达水平,并分析其与ESCC患者临床病理参数的关系。结果ESCC患者ESCCAL_1的△Ct均值(4.04±1.74)低于体检健康者(5.38±1.46),差异有统计学意义(t=-3.684,P0.01);ESCC患者ESCCAL_1上调率[66.7%(42/62)]高于体检健康者[25%(12/48),χ~2=19.777,P0.01];但ESCCAL_1在ESCC患者不同临床病理参数中的表达水平差异均无统计学意义(P均0.05)。结论ESCCAL_1在ESCC患者及体检健康者血浆中差异表达,提示其可能参与了ESCC的发生过程。     

子宫肌瘤和肌壁组织B7-H3 mRNA表达水平及意义

目的探讨子宫肌瘤患者肌瘤组织和正常子宫肌壁B7-H3 mRNA的表达水平及其在子宫肌瘤患者发病中的作用。方法利用逆转录多聚酶链反应法和实时荧光定量PCR法检测44例子宫肌瘤患者的肌瘤组织和正常子宫肌壁的B7-H3 mRNA表达水平。结果子宫肌瘤的肌瘤组织表达的B7-H3 mRNA高于正常子宫肌壁。结论子宫肌瘤组织高表达B7-H3 mRNA,B7-H3 mRNA高表达可能与子宫肌瘤发生发展有关。     

肺癌与癌旁组织中miR-20a的定量检测及其意义

目的：探讨人肺癌与癌旁组织miR-20a定量检测的临床意义。 方法：real-time PCR检测31例肺癌及其对应癌旁组织中miR-20a的表达量, 分析其与肺癌组织学类型、临床分期、分化程度等临床病理特征的关系。 结果：肺癌组织miR-20a表达量(2^{-△△Ct)为3.630（1.042～7.727）,与对应癌旁组织相比,有显著性差异(P<0.05)。miR-20a与肺癌临床分期、分化程度、病理类型、肿块大小和淋巴结转移均无相关性(P>0.05) 。 结论:miR-20a在肺癌组织高表达,可能与肺癌的发生有关。}     

乳腺癌组织中p33^ING1b和p53及C-erbB-2表达对预后评估的意义

目的：探讨p33^ING1b,p53，原癌基因C-erbB-2在乳腺癌的发生发展中的生物学特征及其对预后评估的意义。方法：应用EVISION免疫组化法，检测了80例乳腺癌标本中C-erbB-2,p33^ING1b，p53的表达，及13例癌旁正常组织p33^ING1b的表达。结果：乳腺癌组及对照组中p33^ING1b均阳性表达，乳腺癌组织中表达[65％(52／80)]有明显下降，两组之间差异有显著性意义(X^2=25．138，P&;lt;0．01)，p33^ING1b，p53，C-erbB-2在乳腺癌组织中表达阳性率分别为65％，60％，61％。其中p33^ING1b的表达与雌激素受体和孕激素受体水平呈正相关(r=0．371，r=0．537，P&;lt;0．05)p33^ING1b，p53与肿瘤大小、腋窝淋巴结有无转移呈负相关(r=-2．09，r=-0．537，P&;lt;0．05)。C-erbB-2与组织学分级，淋巴结有无转移呈正相关(r=0．371，P&;lt;0．05)，与雌、孕激素受体水平呈负相关(r=-0．387，r=-0．440，P&;lt;0．05)。结论：p33^ING1b基因的表达可能需要p53基因的协同，两者共同作用于细胞的生长、凋亡和转化，保证机体发挥正常的功能，抑制肿瘤的发生。INGI是抑癌基因，其蛋白p33^ING1b在乳腺癌中低表达，对乳腺癌的发生发展可能起重要作用，p33^ING1b，p53，C-erbB-2可作为判断乳腺癌恶性程度及预后的重要指标。     

人BRIT1基因在宫颈癌组织中的表达及其临床意义分析

目的检测宫颈癌组织和配对的宫颈非癌组织中的BRIT1表达情况,比较两者之间的表达差异。方法分别应用实时荧光PCR(RT-PCR)、免疫组化技术检测宫颈癌组织及其配对的宫颈非癌组织中BRIT1 mRNA和蛋白的表达水平,分析BRIT1蛋白表达水平与患者年龄、肿瘤大小、肿瘤类型、肿瘤的病理分级和临床分期之间的关系。结果 RT-PCR结果揭示宫颈癌组织中BRIT1mRNA的表达水平低于配对的宫颈非癌组织,差异有统计学意义(P0.05);免疫组化技术结果揭示63例标本中的44例(69.8%)宫颈癌组织BRIT1蛋白表达水平低于配对的宫颈非癌组织,差异有统计学意义(P0.05);在高级的病理分级和临床分期中,BRIT1蛋白的表达减少更为明显。结论 BRIT1在宫颈癌癌组织和非癌组织中的表达差异提示BRIT1可能在宫颈癌的发生、发展中具有一定的作用。     

实时荧光定量PCR法检测RNA干扰后的GES-1细胞中MYCT-1基因的表达

目的 建立MYCT-1基因的实时荧光定量PCR(Real-time fluorescence quantitative PCR,RFQ-PCR)检测方法,检测RNA干扰(RNA interference,RNAi)后GES-1细胞中MYCT-1 mRNA 的表达水平,探讨不同剂量siRNA对MYCT-1基因的沉默效果....     

实时荧光定量PCR检测人肺癌p16基因启动子异常甲基化阳性参比物的研究

我国肺癌发病率较高，且5年生存率仅有6％～16％，早期发现和治疗可使5年存活率提高到60％-90％。研究证明，p16基因启动子区域的胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸岛（CpG岛）异常甲基化在肿瘤发生组织增生和化生阶段已出现，故对肺癌的早期诊断具有很大价值。因此，本研究用实时荧光定量PCR方法检测p16基因甲基化，以寻找敏感、特异的肺癌诊断标志，这对肺癌早期诊断和预后观察以及高危人群筛查都有重要意义。     

血清microRNA-224-3p在结直肠癌中的表达及临床研究

目的探讨microRNA-224-3p(miR-224-3p)在结直肠癌患者血清中的表达及临床意义。方法采用荧光定量PCR(SYBR Green法)检测miR-224-3p在50例结直肠癌患者和44例健康者(健康对照组)血清中的表达量。结果血清miR-224-3p在健康对照组中的相对表达量中位数(四分位数)为1.04(0.80～1.40),在结直肠癌组中相对表达量为2.01(0.92～3.05),差异有统计学意义(P0.05)。对结直肠癌患者的病理参数进行进一步分析发现,血清miR-224-3p在癌胚抗原(CEA)10ng/mL的分组中相对表达量中位数(四分位数)为1.47(0.84～2.56),在CEA10ng/mL的分组中相对表达量为2.96(2.22～3.39),差异有统计学意义(P0.05),miR-224-3p和CEA联合检测,可以提高诊断的准确性。血清miR-224-3p在不同预后情况以及CEA表达水平中差异有统计学意义(P0.05),提示血清miR-224-3p可用于结直肠癌患者的预后判断。结论在结直肠癌患者的血清中,miR-224-3p的表达量高于健康者,与CEA联合检测,有望用于结直肠癌的辅助诊断,也可用于结直肠癌的预后判断。