基因治疗中的病毒性载体研究进展

从1990年美国施行第一例基因治疗计划到目前为止,全世界共有几百例临床计划在实施中。当初人们对基因治疗普遍寄予厚望,但结果却往往不尽如人意。人们意识到在基因组、基因的表达调控及疾病发生的机理没有彻底阐明之前,基因治疗还很难取得突破性进展。但基因治疗的出现,毕竟给我们治疗一些用传统疗法难以治愈的疾病带来了新的希望。如果能实现有效的基因转移,基因治疗在对付遗传性疾病、减缓肿瘤发展、战胜病毒性感染和终止神经系统退行性病变等方面都会有广阔的应用前景。这就要求在载体改造、载体的靶向性、外源基因的表达调控等诸多方面…     

心肌基因治疗与基因转入方式

基因治疗是应用基因工程和细胞生物学技术 ,将正常基因转移到体内 ,以期通过导入外源目的基因的表达 ,补充缺失或失去正常功能的蛋白质或细胞因子 ,或者抑制体内某些基因过盛表达而达到治疗疾病的一类方法。基因治疗最初是治疗有基因缺陷的疾病 ,现已扩展为治疗后天获得性疾病和一些主要致病因子导致的疾病。除了可导入机体原有的具正常功能的基因外 ,还可将人类没有的 ,或正常情况下不表达的基因转移到机体内 ,赋予机体抗病的能力。涉及心血管外科的基因治疗包括心肌的血管再生[1] ,心衰的治疗[2 ] ,预防冠状动静脉移植物的疾病[5,6 ] ,减…     

应用新型假包膜糖蛋白提高慢病毒感染人T细胞效率的研究

目的 利用基因工程方法构建一种新型假包膜糖蛋白表达载体来提高慢病毒感染人T细胞的效率。方法 采用分子克隆技术构建CD5-scFv-VSV-G质粒;慢病毒包装载体共转染293T细胞,包装慢病毒并感染Jurkat细胞,流式细胞术检测转导率并计算其滴度;慢病毒包装载体共转染293T细胞,包装慢病毒感染健康人T细胞获得嵌合抗原受体T细胞。结果 与野生型WT VSV-G慢病毒比较,CD5-scFv-VSV-G慢病毒能够提高感染率1.5倍(10%的CD5-scFv-VSV-G慢病毒对Jurkat细胞的感染率为63.1%),而在293T细胞中,不同比例CD5-scFv-VSV-G慢病毒的感染率都低于野生型WT VSV-G慢病毒。当感染复数(MOI)=5时,与野生型WT VSV-G慢病毒比较,CD5-scFv-VSV-G慢病毒能够提高感染率1.6倍(33%的CD5-scFv-VSV-G慢病毒对CD3⁺T细胞的感染率为44.1%);当MOI=10时,与野生型WT VSV-G慢病毒比较,CD5-scFv-VSV-G慢病毒也能够提高感染率1.5倍(33%的CD5-scFv-VSV-G慢...     

腺病毒载体及其在肿瘤基因治疗中的应用

近等来，DNA病毒作为有潜在应用价值的基因转移载体倍受关注。其中，腺病毒(Adenovirus，Ad)是研究较彻底、使用最广泛的一种。Ad的优点包括：(1)腺病毒基因组较大(36kb)，插入大片段外源基因的潜力大，理论上．除最末端序列(复制必需)和接近左端的序列(包装必需)外，基因组的绝大部分(约35kb)均能被外源基因取代。目前构建的载体其外源DNA的插入容量可8．3kb；(2)宿主范围广、感染率高，对非增殖细胞也有感染性；(3)理化性质较稳定．通过柱层析或超离心可获得高谪度的病毒载体；     

插入增子后人β—珠蛋白基因在MEL细胞中的表达

将人β－珠蛋白基因（２．４ｋｂ），分别反向克隆入逆转录病毒载体Ｎ２β和Ｎ２Ａ，并在Ｎ２Ａ３′ＬＴＲ插入４１２ｂｐ的增强子ＨＳＩＩ（简称Ｎ２ＡβＥ０．４）。将此两种逆转录病毒重组质粒分别转入φ－２和ＰＡ３１６细胞，经Ｇ４１８筛选后，用ＰＡ３１７细胞产生的病毒粒子感染小鼠红白血病细胞ＭＥＬ。结果显示，人β－珠蛋白基因可在ＭＥＬ内得到表达，来自人ＨＳＩＩ（４１２ｂｐ）的增强子可以增强人β－珠蛋白基因ｍＲ     

腺病毒载体在肿瘤基因治疗中的应用

腺病毒载体目前广泛地应用于肿瘤的基因治疗。随着对腺病毒分子结构、功能以及感染机制的进一步深入了解,人们在降低其免疫原性,增强基因导入特异性,增强感染和表达效率等方面进行了许多探索,开发具有肿瘤靶向性的溶瘤腺病毒载体是其发展方向与研究热点。本文对腺病毒载体的生物学、构建策略及其在肿瘤基因治疗中的应用进行综述。     

CAR-T技术的作用机制及其在恶性淋巴瘤中的应用

近年来,肿瘤的免疫治疗越来越受到人们的重视.在肿瘤的免疫治疗手段中,以嵌合抗原受体(CAR)修饰的 T细胞疗法为代表的肿瘤靶向免疫治疗的疗效最为肯定.嵌合抗原受体 T细胞(CAR-T)疗法是近年来发展非常迅速的一种新兴的细胞免疫治疗技术,和以往的免疫治疗手段不同,CAR-T疗法显示出更灵敏的肿瘤特异性、更加高效的杀伤肿瘤效应及攻击持久性,在恶性肿瘤,特别是淋巴造血系统恶性肿瘤的治疗上具有应用潜力和发展前景.本文旨在对CAR-T技术的作用机制及其在恶性淋巴瘤中的临床应用做一介绍.     

CAR-T抗肿瘤研究的现状及展望

嵌合抗原受体修饰的T细胞(CAR-T)是一种安全有效的肿瘤治疗策略。在多种血液肿瘤的临床试验中,CAR-T细胞疗法取得重大突破,在实体瘤的临床试验中也崭露头角。但在获得显著疗效的同时,CAR-T也存在脱靶效应、细胞因子风暴、插入突变、对实体肿瘤疗效有限等问题。现就CAR-T技术的最新进展及该领域有待解决的问题进行综述,为CAR-T疗法的进一步研究和临床应用提供参考。     

α-病毒载体在基因治疗中的作用

基因治疗是近10年来随着现代医学与分子生物学相结合而出现的，基因治疗的研究已迅速扩大到肿瘤、艾滋病、心血管病和神经系统疾病等。而且，基因载体(包括质粒、病毒和脂质体等)的研究也进展迅速，各种新型载体不断出现。近10年来，α-病毒的多个成员已经被作为表达载体，并被引入基因治疗领域，其中最常用的是森林病毒(Semliki forest virus，SFV)、     

重组腺病毒载体在肿瘤基因治疗中的应用

腺病毒载体转导目的基因具有效率高、滴度高、在体内不与宿主细胞染色体整合等优点,使腺病毒载体在肿瘤的基因治疗研究与实践方面得以广泛运用。本文就三代腺病毒载体的构建与改进,腺病毒载体介导的肿瘤基因治疗策略及其应用进展进行了简要地综述,并讨论了在肿瘤基因治疗中仍需解决的安全问题和面临的挑战。     

慢病毒载体及其在血液病研究中的应用进展

慢病毒载体是近年来发展极其迅速的基因载体,对分裂及非分裂细胞均具有感染力强大、能容纳大片段外源目的基因、基因持续表达、宿主免疫反应小等优点。近年来对慢病毒载体的研究日渐深入,慢病毒载体在血液系统相关疾病的研究中也得到广泛的应用。现对慢病毒载体及其在血液系统疾病研究中的应用予以综述。     

病毒介导的基因转染在组织工程中的应用

目的 构建重组病毒载体，将较多细胞因子通过病毒载体转入种子细胞，提高细胞增殖及分泌基质能力，维持表型，延缓老化。方法 应用基因工程技术，构建缺陷型逆转录病毒重组载体和缺陷性腺病毒重组载体。分别通过PT67包装细胞筛选克隆及293细胞扩增，获得假病毒上清液，经浓缩纯化后转染靶细胞结果成功构建胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、Fas配体(Fas-Ligand)、绿色荧光蛋白(GFP)等逆转录病毒载体以及TGFβ1、人骨形成蛋白因子-7(hBMP7)、端粒酶、Smad3、Smad7等腺病毒载体，其中GFP-逆转录病毒重组载体在软骨细胞表达至2月。结论 通过有效的含目的基因重组载体转染种子细胞，延缓体外培养细胞的老化及促进细胞的增殖与基质分泌，获得组织工程所需要的大量种子细胞，为组织工程构建奠定了基础。     

病毒介导的基因转染在组织工程中的应用

目的构建重组病毒载体,将较多细胞因子通过病毒载体转入种子细胞,提高细胞增殖及分泌基质能力,维持表型,延缓老化.方法应用基因工程技术,构建缺陷型逆转录病毒重组载体和缺陷性腺病毒重组载体.分别通过PT67包装细胞筛选克隆及293细胞扩增,获得假病毒上清液,经浓缩纯化后转染靶细胞.结果成功构建胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、Fas 配体(Fas-Ligand)、绿色荧光蛋白(GFP)等逆转录病毒载体以及TGFβ1、人骨形成蛋白因子-7(hBMP7)、端粒酶、Smad3、Smad7等腺病毒载体,其中GFP-逆转录病毒重组载体在软骨细胞表达至2月.结论通过有效的含目的基因重组载体转染种子细胞,延缓体外培养细胞的老化及促进细胞的增殖与基质分泌,获得组织工程所需要的大量种子细胞,为组织工程构建奠定了基础.     

异基因嵌合抗原受体T细胞技术的研究进展

自体嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞疗法的应用大大改善了血液系统恶性肿瘤患者的预后。目前国内获批上市的都是自体的CAR-T产品,异基因CAR-T细胞疗法与自体CAR-T细胞疗法相比,拥有更多潜在的优势和前景,但异基因CAR-T细胞疗法也有不足之处：(1)可能会产生危及生命的移植物抗宿主病(GVHD);(2)迅速被宿主免疫系统所清除。本文针对以上问题,从如何选择不同来源的T细胞进行制备,并利用多种基因编辑技术来减少GVHD和增加其抗肿瘤活性方面进行综述。     

基因转移的骨骼肌细胞及其在基因治疗中的应用

基因转移的骨骼肌细胞及其在基因治疗中的应用田竟生郑少鹏近年来发现，若将外源基因包括报告基因及目的基因克隆到哺乳动物表达性质粒载体或病毒载体上，再将质粒ＤＮＡ以裸露方式或用脂质体包裹，直接注射或先体外后体内（ｅｘｖｉｖｏ）法，即经骨骼肌的前体细胞——成...     

嵌合抗原受体-T细胞免疫治疗在血液系统恶性肿瘤中的应用进展

嵌合抗原受体（CAR）将单链抗体可变区与T细胞的活化基序相融合,使其修饰的T细胞具有非主要组织相容性复合物（MHC）限制性识别肿瘤抗原及杀伤靶细胞的双重功能。CAR细胞内区的结构从表达单一信号分子的第1代,发展为添加1个及2个以上共刺激分子的第2代和第3代以及增加了编码CAR和/或其启动子、自杀基因等的第4代,使T细胞在体内的存活时间和杀伤能力明显增强且能够调控。本文就CAR-T细胞免疫治疗的原理、在血液系统恶性肿瘤中的应用以及主要不良反应和应对措施进行分析,发现应用CAR-T细胞免疫治疗多种血液系统恶性肿瘤取得了较好临床疗效,其中以靶向CD19的CAR-T细胞免疫治疗疗效尤为突出,患者的生存期延长、生活质量改善并且不良反应较少。CAR-T细胞免疫治疗的主要不良反应是脱靶效应和细胞因子释放综合征,需要引起临床足够重视。     

基因介导的精准免疫疗法在急性髓系白血病治疗中的进展

急性髓系白血病（acute myeloid leukemia, AML）是一种骨髓内造血干细胞的克隆异常,进而导致大量异常分化的髓系细胞在骨髓内聚集而产生的疾病。传统的治疗手段难以治愈AML,嵌合抗原受体T细胞（chimeric antigen receptor T-cell, CAR-T）免疫疗法的成功应用预示着血液肿瘤的治疗进入精准免疫疗法新阶段。然而CAR-T免疫疗法在临床应用中存在诸多问题,例如治疗周期长、价格高昂、产生脱靶效应、发生细胞因子释放综合征等,因此,需要扩展嵌合抗原受体的应用或提出改进措施来提升治疗效果。本文综述了CAR免疫细胞基因工程化改造新策略、原位编辑产生CAR-T的研究进展与应用,同时对体内递送基因药物的新方法进行了简要介绍,旨在为扩展和改进精准免疫疗法在AML中的应用提供新思路和理论依据。

     

腺病毒载体纯化及在肿瘤基因治疗中的应用

腺病毒是一种线性无包膜的双链DNA病毒,用于载体构建的主要是人类2型和5型腺病毒.现在通过对腺病毒的改造,已经成功构建出第一代、第二代、第三代和条件复制型腺病毒载体.随着腺病毒载体在蛋白质表达中的广泛使用,对高产量、高纯度腺病毒载体的需求量逐渐增大,因此近年来在传统纯化腺病毒载体的基础上发展出各种纯化新方法.同时,由于腺病毒载体自身的一些优点,使其在疫苗和肿瘤基因治疗中也得到了较为广泛的应用.