宫颈脱落细胞HPVE6/E7 mRNA检测在宫颈癌早期筛查与 HPV分型诊断中的应用

目的 研究宫颈脱落细胞E6/E7 mRNA检测在宫颈癌早期筛查与HPV分型诊断中的应用价值。方法 选取2018年3月至2020年3月安康市妇幼保健院收治的268例宫颈癌疑似病变患者作为研究对象,取宫颈脱落细胞作为实验标本,检测E6/E7mRNA阳性率及拷贝数,并行HPV分型检查。以病理诊断为金标准,其中140例纳入宫颈癌组,128例为非宫颈癌组。并对268例患者进行HPV分型,高危型HPV组212例,低危型HPV组15例,低危混合型HPV组41例,记录宫颈癌发生率。采用多因素回归分析宫颈癌与高危型HPV的影响因素,利用受试者工作曲线（ROC）分析各影响因素单项和联合对检测宫颈癌与HPV分型的准确性。结果 宫颈癌组患者E6/E7 mRNA阳性率和拷贝数均高于非宫颈癌组,高危型HPV组患者E6/E7 mRNA阳性率和拷贝数均高于低危型及低危混合型HPV组,差异均有统计学意义（P<0.05）。多因素分析结果显示受教育程度初中及以下（95% CI： 0.187~0.836）、孕次≥3次（95%CI： 1.079~1.625）、初次性生活时间<18岁（95% CI： 1.075~1.611）、鳞状细胞癌抗原（SCC）（95% CI： 1.058~1.782）及HPVE6/E7mRNA阳性（95%CI： 1.251~2.049）是宫颈癌的高危因素（P<0.05）。年龄（35~65岁）（95%CI： 1.134~1.436）、孕次≥3次（95% CI： 1.346~2.472）、性伴侣≥3个（95% CI： 1.526~2.386）、阴道分泌物异常（95%CI： 1.021~1.778）及HPVE6/E7 mRNA阳性（95% CI： 1.216~1.920）是高危型HPV的危险因素（P<0.05）。ROC分析显示孕次、初次性生活时间、SCC及HPVE6/E7 mRNA多项联合检测宫颈癌的AUC为0.826,高于单项检测（P<0.05）。年龄、孕次、性伴侣、阴道分泌物及HPVE6/E7 mRNA联合检测高危型HPV的AUC为0.880,高于单项检测（P<0.05）。结论 HPVE6/E7 mRNA阳性是宫颈癌和高危型HPV共同的独立影响因素,基于HPVE6/E7 mRNA的多项联合检测较单项检测能显著提高检测宫颈癌与HPV分型的准确性。     

人乳头瘤病毒E6/E7mRNA检测在宫颈病变中的诊断价值研究

目的 探索HPV E6/E7mRNA检测在宫颈病变中的诊断价值。方法 收集2016年12月~2017年10月在笔者医院妇科行细胞学和HPV DNA基因分型联合筛查发现疑似宫颈病变并转阴道镜活检的女性病例262例,活检同期均行HPV E6/E7mRNA检测,以宫颈组织病理活检为标准对照。对比3种方法检测宫颈病变HSIL的敏感度、特异性、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比、阴性似然比及受试者工作特征曲线下面积（AUC）,及3种方法在不同病理级别中的检出情况,并分析HPV E6/E7mRNA病毒载量与病变关系。结果 HPV E6/E7mRNA检测宫颈病变≥HSIL的敏感度与HPV DNA基因分型和细胞学相似,特异性、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比均高于细胞学和HPV DNA基因分型;HPV E6/E7mRNA的受试者工作特征曲线下面积（AUC=0.80, P<0.01）高于细胞学（AUC=0.65, P<0.01）和HPV DNA分型（AUC=0.54,P>0.05）的曲线下面积;HPV mRNA和细胞学在不同病理级别中的检出率比较,差异有统计学意义（P<0.01）,HPV DNA基因分型在不同病理级别中的检出率比较差异无统计学意义（P>0.05）;HPV E6/E7 mRNA表达水平与组织病理分级之间的相关关系有统计学意义（P<0.01）,且HPV E6/E7mRNA表达水平与宫颈病理分级间呈正相关（r=0.467）。结论 HPV E6/E7mRNA检测对宫颈病变诊断准确性优于细胞学和HPV DNA分型,在宫颈病变及癌变的筛查中具有一定的临床价值,临床医生应给予关注。     

宫颈组织人乳头状瘤病毒E6/E7 mRNA ATG-12 Tie-1 表达情况及与鳞状上皮内病变病理分级的相关性

目的 分析宫颈组织人乳头状瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA、自噬相关蛋白12(ATG12)、酪氨酸激酶受体1(Tie-1)表达情况,及与子宫颈鳞状上皮内病变(SIL)病理分级的相关性。方法 将2017年1月至2020年12月在南阳市中心医院保存宫颈活检组织或手术切除宫颈组织的228例患者按2014年WHO女性下生殖道肿瘤分类标准分组,分别纳入慢性宫颈炎组(n=34)、低级别鳞状上皮内病变(LSIL)组(n=20)、高级别鳞状上皮内病变(HSIL)组(n=55)、宫颈鳞癌(CSCC)组(n=119)。通过分支DNA杂交实验(bDNA)法检测宫颈组织HPVE6/E7 mRNA表达情况,利用免疫组化法检测宫颈组织ATG12、Tie-1表达情况,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析HPV E6/E7mRNA、ATG-12、Tie-1表达情况对HSIL+(HSIL、CSCC)的筛查价值。结果 HSIL组、CSCC组HPV E6/E7 mRNA阳性率高于慢性宫颈炎组,ATG-12阳性率及Tie-1阳性率低于慢性宫颈炎组,差异均有统计学意义(P<0.05);LSIL组与慢性宫颈炎组,差异无统计学意义(P<0.05);HSIL组、CSCC组HPV E6/E7 mRNA阳性率高于LSIL组,ATG-12阳性率及Tie-1阳性率低于LSIL组(P<0.05),CSCC组HPV E6/E7 mRNA阳性率高于HSIL组,ATG-12阳性率及Tie-1阳性率低于HSIL组(P<0.05);ROC曲线显示,单一HPV E6/E7 mRNA、ATG-12、Tie-1筛查HSIL+时,Tie-1阴性的曲线下面积(AUC)最大,筛查灵敏度为78.16%,特异度为83.33%,3者联合筛查HSIL+的AUC值上升至0.856,灵敏度、特异度分别为89.66%、81.48%,高于HPV-E6/E7 mRNA阳性、ATG-12阴性、Tie-1阴性筛查的AUC值(P<0.05)。结论 不同SIL病理分级的宫颈组织HPVE6/E7mRNA、ATG12、Tie-1阳性表达率存在差异,较单纯HPVE6/E7mRNA筛查HSIL+,联合ATG12或Tie-1检测可提升筛查特异度。     

宫颈组织HPV E6/E7 mRNA Atg-12 Tie-1表达情况与鳞状上皮内病变病理分级的相关性

目的 探讨宫颈组织人类乳头瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA、自噬相关蛋白-12(Atg-12)、酪氨酸激酶受体-1(Tie-1)表达情况与鳞状上皮内病变(SIL)病理分级的相关性。方法 选取2020年5月至2021年10月新乡市中心医院病理科诊断为SIL的患者227例,根据宫颈病变分级分为低级别鳞状上皮内病变(LSIL)组124例和高级别鳞状上皮内病变(HSIL)组103例,另选取子宫肌瘤手术患者80例为对照组。所有患者均采用支链DNA信号扩增法检测HPV E6/E7 mRNA,采用免疫组化法及免疫印迹法检测Atg-12、Tie-1蛋白。分析E6/E7 mRNA、Atg-12、Tie-1与病理分级的相关性,绘制受试者特征(ROC)曲线分析各指标对HSIL与LSIL的鉴别诊断价值。结果 HSIL组的HPV E6/E7 mRNA、Tie-1蛋白阳性检出率高于LSIL组和对照组(P<0.05),HSIL组的Atg-12蛋白阳性检出率低于LSIL组和对照组(P<0.05),HSIL组的HPV E6/E7 mRNA拷贝数、Tie-1蛋白表达量高于LSIL组和对照组(P<0.05),HSIL组的Atg-12蛋白表达量低于LSIL组和对照组(P<0.05)。HPV E6/E7 mRNA、Tie-1蛋白表达量与SIL病理分级呈正相关(r=0.514,0.488),Atg-12蛋白表达量与SIL病理分级呈负相关(r=-0.433)。HPV E6/E7 mRNA、Atg-12、Tie-1鉴别诊断HSIL与LSIL的灵敏度为88.57%、74.29%、82.86%,特异度为57.14%、66.67%、64.29%。3项指标联合诊断的灵敏度为77.14%,特异度为85.71%(AUC=0.854)。结论 HSIL患者HPV E6/E7 mRNA、Tie-1表达较高,Atg-12表达较低。HPV E6/E7 mRNA、Atg-12、Tie-1表达与SIL病理分级有一定相关性,联合诊断可为HSIL与LSIL的鉴别诊断提供参考。     

高危型人乳头瘤病毒E6/E7mRNA检测在宫颈人乳头瘤病毒阳性人群中的分流价值

目的 探讨高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)E6/E7mRNA检测在宫颈人乳头瘤病毒DNA阳性人群分流管理中的临床应用价值。方法 2014年1月~2015年7月因宫颈疾病在温州医科大学第三临床学院妇科门诊就诊的宫颈HPV-DNA阳性患者共970例,随机选取336例,均行HPVE6/E7mRNA及宫颈细胞学(TCT)检测,并追踪其病理学结果 。分析HPVE6/E7mRNA拷贝数与病理分级及宫颈细胞学结果 的关系,预测其对CINⅡ+的诊断价值。结果 鳞癌(squamouscell cancer,SCC)组拷贝数最高,无上皮内病变或恶性病变(negative for intraepithelial ledion or malignancy,NILM)组拷贝数最低,宫颈癌组HPVE6/E7mRNA阳性率及拷贝数最高,宫颈炎性改变组阳性率及拷贝数最低。不同细胞学诊断级别间HPVE6/E7mRNA水平比较,细胞学异常组(包括atypical squamous cells of undetermined significance,ASCUS,low-grade squamous intraepithelial lesion LISL,high-grade squamous intraepithelial lesions HISL,SCC)的表达水平高于NILM组,差异有统计学意义(F=28.99,P<0.01),不同宫颈组织病变程度级别间HPVE6/E7mRNA水平比较,CINⅡ+(histological dysplasia or cancer)的表达水平高于CINⅡ-,差异有统计学意义(F=40.154,P<0.01)。Spearman等级相关提示宫颈细胞学诊断级别及宫颈病理级别同HPVE6/E7mRNA拷贝数呈正相关,相关系数分别为(r=0.408,P<0.01;r=0.699,P<0.01)。结论 随着宫颈病变程度的加重,HPVE6/E7mRNA拷贝数逐渐增加,对宫颈HPV-DNA阳性患者的分流有一定的意义,对宫颈癌有一定的筛查价值。     

高危HPVE6/E7mRNA对宫颈病变诊断价值的研究

目的 探讨高危HPV E6/E7 mRNA对宫颈病变的临床诊断价值。 方法 根据病理诊断结果的不同分为两组,其中慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ级患者共48例为对照组,高级别宫颈病变(包括CINⅡ级、CINⅢ级及宫颈浸润癌)共42例患者为观察组,分别对上述宫颈细胞标本进行HPV DNA分型检测和高危HPV E6/E7 mRNA检测。 结果 慢性宫颈炎、CINⅠ组中高危HPV DNA的检出率(29.1%)明显高于高危HPV E6/E7 mRNA(8.3%),高级别宫颈病变组中高危HPV E6/E7 mRNA的检出率(85.7%)明显高于高危HPV DNA(64.3%),差异有统计学意义(P<0.05);高危HPV E6/E7 mRNA检测的敏感度、特异性、阳性预测值、阴性预测值(85.7%、91.7%、90.0%、88.0%)均高于HPV DNA分型检测(64.3%、70.8%、65.9%、69.3%),差异有统计学意义(P<0.05)。 结论 高危HPV E6/E7 mRNA检测在临床诊断过程中大大降低过度检查和治疗的机会,避免了高频率和重复感染给患者带来的经济负担和精神压力。     

高危型HPV E6/E7 mRNA检测在ASC-US分流中的诊断价值

目的 探讨高危型人乳头瘤病毒（high-risk human papilloma virus,HR-HPV）E6/E7 mRNA检测在无明确诊断意义的不典型鳞状细胞（atypical squamous cell of undetermined significance,ASC-US）分流中的诊断价值。方法 对320例ASC-US患者进行HR-HPV E6/E7 mRNA和HR-HPVDNA检测,同时行阴道镜检查和宫颈活检,结合病理学诊断资料进行统计学分析。结果 HR-HPV E6/E7 mRNA在宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia,CIN）和宫颈癌中的阳性率与HR-HPV DNA比较,差异有统计学意义（P<0.05）;CINⅡ+级和CINⅢ+级的HR-HPV E6/E7 mRNA阳性率分别高于CINⅡ-级和CINⅢ-级,差异均有统计学意义（P均<0.05）。HR-HPV E6/E7 mRNA与HR-HPV DNA检测CINⅡ+级和CINⅢ+级的敏感度、阳性预测值、阴性预测值比较,差异无统计学意义（P均>0.05）;两者特异性比较,差异有统计学意义（P均<0.05）;利用受试者工作特征（ROC）曲线,HR-HPV E6/E7 mRNA检测诊断CINⅡ+级和CINⅢ+级的效能比HR-HPV DNA更佳,差异均有统计学意义（P均=0.000）。<30岁组的HR-HPV DNA阳性率明显高于≥30岁组,差异有统计学意义（P<0.01）;两个年龄组的HR-HPV E6/E7 mRNA阳性率差异无统计学意义（P>0.05）。结论 HR-HPV E6/E7 mRNA检测可作为ASC-US患者是否需要阴道镜转诊的更确切有效的指标,其特异性和诊断价值更佳。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对HPV11早期基因E6、E7mRNA表达的影响

目的 利用人工构建的含人乳头瘤病毒(HPV)11型基因组的HaCaT细胞(简称为HPV11.HaCaT细胞),研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对该细胞生长的抑制作用,以及受试物对HPV11早期基因E6和E7 mRNA表达的影响。方法 在HaCaT及HPV11.HaCaT细胞培养基中添加不同浓度的EGCG后,应用MTT比色法检测受试物对细胞生长增殖的影响;用相对荧光定量PCR法检测HPV11.HaCaT细胞中HPV11 E6、E7 mRNA表达的改变。结果 EGCG能抑制HaCaT和HPV11.HaCaT细胞的生长,不同浓度EGCG作用下,细胞生存率为52%~95%、64%~90%,呈浓度和时间依赖趋势。EGCG作用于细胞12h和24h后,HPV11.HaCaT细胞中HPV11 E6、E7基因的mRNA表达水平明显下降(P<0.05)。结论 EGCG在体外能抑制含HPV11基因组的HaCaT细胞生长,并能抑制HPV11功能基因E6、E7表达。     

宫颈HPV持续感染患者脱落细胞中miR-148a-3p的表达水平及意义

目的 探讨宫颈人乳头瘤病毒（HPV）持续感染患者宫颈脱落细胞中微小RNA-148a-3p（miR-148a-3p）的表达水平及意义。方法 选取2017年3月至2019年3月上海交通大学附属新华医院崇明分院妇科收治的宫颈HPV阳性患者170例作为研究对象,根据随访6个月的结果将患者分为HPV非持续感染组（n=105,HPV转阴）、HPV持续感染组（n=65,HPV仍呈阳性）。收集两组患者临床资料,采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测宫颈脱落细胞中miR-148a-3p表达水平;采用HPV核酸扩增分型检测试剂盒对21种常见的HPV基因型进行分型检测,并根据HPV基因型检测结果将HPV持续感染组分为低危型组（n=26）、高危型组（n=39）。采用多因素logistic回归分析影响宫颈HPV持续感染的危险因素;并绘制接受者操作特征曲线（ROC）,分析宫颈脱落细胞中miR-148a-3p表达水平对宫颈HPV持续感染的诊断价值。结果 HPV持续感染组年龄≥ 45岁、初次性生活年龄<20岁、人流次数≥ 1次及有生殖道炎症比例均高于HPV持续感染组,差异有统计学意义（P<0.05）。HPV持续感染组患者脱落细胞中miR-148a-3p表达水平低于HPV非持续感染组患者,差异有统计学意义（P<0.05）。高危型宫颈HPV持续感染患者脱落细胞中miR-148a-3p表达水平低于低危型宫颈HPV持续感染患者,差异有统计学意义（P<0.05）。多因素logistic回归分析显示,年龄、人流次数及脱落细胞中miR-148a-3p表达水平均是影响宫颈HPV持续感染的独立危险因素（P<0.05）。ROC曲线分析显示,脱落细胞中miR-148a-3p表达水平诊断宫颈HPV持续感染的曲线下面积为0.923,最佳截断值为0.75时,诊断敏感度为81.30%,特异度达96.30%。结论 脱落细胞中miR-148a-3p表达水平降低与宫颈HPV持续感染发生有关,可能作为早期诊断宫颈HPV持续感染的有效指标之一。     

E6/E7 mRNA检测在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌患者中的临床价值

【摘要】目的 探讨人类乳头瘤病毒（HPV）E6/E7 mRNA检测在宫颈上皮内瘤变（CIN）及宫颈癌患者中的临床价值。方法 收集2015年6月~2017年6月于我院诊断的224例高危型人乳头瘤病毒（HR HPV）感染者,按病理检查结果分为CINⅠ级组（75例）、CIN Ⅱ级组（24例）、CIN Ⅲ级组（21例）、宫颈癌组（14例）,选取同期病理诊断结果显示正常或炎症者90例为正常组,采用b DNA技术检测宫颈脱落细胞HPVE6/E7mRNA表达的阳性率及表达量。比较不同液基薄层细胞检测（TCT）级别HPVE6/E7mRNA表达的阳性率及表达量。结果 各组HPVE6/E7mRNA阳性率逐渐降低,差异具有统计学意义（P＜0.05）;各组HPVE6/E7mRNA表达量逐渐降低,其中宫颈癌组显著高于其他组,差异具有统计学意义（P＜0.05）,CINⅠ、Ⅱ级比较,CINⅠ级、正常组比较差异无统计学意义（P＞0.05）;宫颈癌组、高级别（HSIL）、低级别（LSIL）、非典型（ASC）鳞状上皮内瘤变、无上皮内病变（NSIL）HPVE6/E7mRNA阳性率逐渐降低,HPVE6/E7mRNA表达量逐渐降低;宫颈癌组HPVE6/E7mRNA阳性率显著高于其他TCT级别,宫颈癌组HPVE6/E7mRNA表达量显著高于其他TCT级别,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论 HPV E6/E7mRNA检测有助于宫颈癌以及高级别CIN的筛查,可作为癌前病变与宫颈癌筛查的分子标志物。     

HPV E6/E7 mRNA与YAP在宫颈癌中的表达与相关性研究

目的:研究宫颈病变中HPV E6/E7 mRNA与Yes相关蛋白（YAP）的表达情况及临床意义,探讨两者之间的相关性。方法: 应用支链DNA（b-DNA）技术检测36例正常宫颈组织（正常组）、45例宫颈上皮内瘤变(CIN) Ⅱ-Ⅲ级（CIN组）、43例宫颈癌（宫颈癌组）的宫颈脱落细胞标本中HPV E6/E7 mRNA的表达情况,免疫组化方法（IHC）检测上述各组患者宫颈组织石蜡包埋标本中YAP的表达情况。结果:HPV E6/E7 mRNA及YAP阳性表达率在正常组分别为16.67%、11.11%,在CIN组分别为82.22%、84.44%,在宫颈癌组分别为88.37%、90.70%,3组HPV E6/E7 mRNA及YAP阳性表达率均逐渐升高,且差异均具有统计学意义（P<0.05）。YAP在宫颈癌有淋巴结转移组中的表达明显高于无淋巴结转移组（P<0.05）,而与宫颈癌的临床分期、组织学分级及组织学类型无关（P>0.05)。HPV E6/E7 mRNA与YAP的表达呈正相关（r=0.383,P<0.05）。结论:HPV E6/E7 mRNA与YAP的检出率随病理级别的升高呈增强趋势,且两者具有相关性。因此,HPV E6/E7 mRNA与YAP的联合检查,可以提高宫颈病变的诊断率并能够预测癌前病变的进展。     

宫颈癌中活化的蛋白激酶C受体1、低氧诱导因子1α与血管内皮生长因子的表达及病理学意义

目的 检测活化的蛋白激酶C受体1（RACK1）、低氧诱导因子1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）在宫颈癌组织中的表达并探讨其病理学意义。方法 选取2014年6月至2018年6月于本院行手术切除并经病理确诊的85例宫颈癌组织样本及其对应的癌旁组织,通过免疫组织化学染色ABC法分别检测RACK1、HIF-1α、VEGF蛋白在宫颈癌组织及其癌旁组织中的表达。结合患者的临床病理资料,分析宫颈癌组织中RACK1、HIF-1α和VEGF蛋白表达与患者年龄及肿瘤直径、浸润深度、病理分级、淋巴结转移之间的关系,并分析三者表达之间的相关性。结果 RACK1、HIF-1α、VEGF蛋白在宫颈癌组织中的表达均高于癌旁组织（P均<0.05）,阳性表达率分别为81.2%（69/85）、63.5%（54/85）、89.4%（76/85）。RACK1表达与肿瘤浸润深度、病理分级和淋巴结是否转移有关（P均<0.05）,HIF-1α和VEGF表达均与肿瘤直径、浸润深度、病理分级及淋巴结是否转移有关（P均<0.05）。RACK1、HIF-1α、VEGF蛋白的表达两两之间呈正相关（RACK1 vs HIF-1α：r=0.523,P=0.043 9;RACK1 vs VEGF：r=0.428,P=0.033 7;HIF-1α vs VEGF：r=0.689,P=0.024 5）。结论 RACK1、HIF-1、VEGF蛋白在宫颈癌组织中高表达且三者之间的表达呈正相关,提示其可能在肿瘤的发生、发展过程中起协同作用,可作为判断肿瘤侵袭、转移及预后的重要指标。     

宫颈脱落细胞microRNA-508-3p、ROCK1的表达及其对宫颈癌的诊断价值研究

目的 探究宫颈脱落细胞microRNA-508-3p（miR-508-3p）、ROCK1的表达及其对宫颈癌的诊断价值。方法 选取2016年2月—2019年9月诸暨市人民医院收集的宫颈脱落细胞标本172例,其中正常组70例、宫颈上皮内瘤变组54例、宫颈癌组48例。通过qRT-PCR、免疫组织化学、Western blotting检测各组细胞miR-508-3p、ROCK1的表达,荧光素酶报告实验验证宫颈病变脱落细胞miR-508-3p与ROCK1的相关性,观察宫颈癌脱落细胞miR-508-3p、ROCK1表达与宫颈癌患者临床资料的关系,通过受试者工作特征（ROC）曲线评估宫颈病变脱落细胞miR-508-3p、ROCK1表达对宫颈病变的诊断价值。结果 与正常组比较,宫颈癌组和宫颈上皮内瘤变组miR-508-3p降低（P <0.05）,ROCK1 mRNA、ROCK1 mRNA阳性率、ROCK1蛋白相对表达量升高（P <0.05）;与宫颈上皮内瘤变组比较,宫颈癌组miR-508-3p降低,ROCK1 mRNA、ROCK1 mRNA阳性率、ROCK1蛋白相对表达量升高（P <0.05）。宫颈癌组、宫颈上皮内瘤变组miR-508-3p与ROCK1 mRNA呈负相关（r =-0.6678和-0.5234,均P =0.000）,ROCK1是miR-508-3p的直接靶基因。miR-508-3p、ROCK1水平与宫颈癌患者FIGO分期、淋巴结转移有关（P <0.05）,与年龄、绝经情况、肿瘤直径及病理类型无关（P >0.05）。在诊断宫颈癌和宫颈上皮内瘤变时,miR-508-3p的ROC曲线下面积（AUC）分别为0.946（95% CI：0.899,0.993）和0.851（95% CI：0.782,0.921）,敏感性为87.1%（95% CI：0.776,1.654）和84.3%（95% CI：0.746,1.589）,特异性为100.0%（95% CI：1.000,2.000）和79.6%（95% CI：0.702,1.497）;ROCK1的AUC分别为0.949（95% CI：0.892,1.000）和0.905（95% CI：0.852,0.958）,敏感性为89.6%（95% CI：0.810,1.706）和77.8（95% CI：0.667,1.445）,特异性为100.0%（95% CI：1.000,2.000）和88.6%（95% CI：0.812,1.698）。随访1年后,48例宫颈癌患者中生存42例,死亡6例。生存组miR-508-3p高于死亡组（P <0.05）,ROCK1 mRNA相对表达量低于死亡组（P <0.05）。结论 宫颈脱落细胞miR-508-3p、ROCK1在宫颈癌患者中表达异常,其中miR-508-3p下调,ROCK1上调,两者呈靶向负调控关系,并与宫颈癌患者FIGO分期及淋巴结转移密切相关,具有一定的宫颈癌诊断价值,可作为早期宫颈癌筛查的潜在生物学指标。     

FGF21对非酒精性脂肪肝大鼠肝细胞TLR4/p38MAPK通路的影响

目的 探讨成纤维细胞生长因子21（FGF21）对谷氨酸钠（MSG）诱导非酒精性脂肪肝大鼠肝细胞炎症及TLR4/p38MAPK信号通路的影响。方法 新生SD大鼠随机分成正常对照组、MSG组和FGF21组（n=10）。MSG组和FGF21组大鼠于生后第2、4、6、8、10天皮下注射MSG 4g/（kg·d）喂养至13周,FGF21组大鼠腹腔注射FGF21 1mg/（kg·d）32天。HE染色分析肝脏病理学改变;观察肝重、肝功能;qRT-PCR和Western blot法检测肝组织IL-6、TNF-α、TLR4、p38MAPK表达情况。结果 与正常对照组比较,MSG组大鼠肝细胞发生脂肪变性伴炎性细胞浸润,肝重、ALT、AST、ALP水平升高（P<0.01）,肝细胞IL-6、TNF-α、TLR4、p38MAPK mRNA表达增加（P<0.01）,TLR4、p38MAPK、p-p38MAPK蛋白表达升高（P<0.01）;与MSG组比较,FGF21组大鼠肝细胞脂泡和炎性细胞减少,肝重、ALT、AST、ALP降低（P<0.05,P<0.01,P<0.01,P<0.05）,IL-6、TNF-α、TLR4、p38MAPK mRNA表达下降（P<0.01）,TLR4、p38MAPK、p-p38MAPK蛋白水平降低（P<0.01）。结论 FGF21可能通过调节TLR4/p38MAPK信号转导通路,抑制NAFLD炎性反应。     

lncRNA SNHG6通过microRNA-26b-5p对三阴性乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的作用机制研究

目的 探究lncRNA SNHG6通过microRNA-26b-5p（miR-26b-5p）对三阴性乳腺癌（TNBC）细胞增殖、迁移、侵袭的作用机制。方法 体外培养人TNBC细胞系MDA-MB-231细胞,培养后分组转染。设置对照组（空载质粒转染）,SNHG6敲减组（si-SNHG6慢病毒载体转染）、miR-26b-5p抑制组（空载质粒+miR-26b-5p-inhibitor转染）及共转染组（si-SNHG6慢病毒载体+miR-26b-5p-inhibitor转染）。实时荧光定量聚合酶链反应检测SNHG6及miR-26b-5p的表达,分别进行CCK-8实验、划痕实验及Transwell实验检测MDA-MB-231细胞增殖、迁移及侵袭能力,采用双荧光素酶报告实验检测SNHG6与miR-26b-5p的靶向作用。结果 与对照组比较,SNHG6敲减组SNHG6 mRNA表达下调（P <0.05）,miR-26b-5p mRNA表达上调（P <0.05）;与对照组比较,miR-26b-5p抑制组SNHG6 mRNA表达上调（P <0.05）,miR-26b-5p mRNA表达下调（P <0.05）;与SNHG6敲减组比较,miR-26b-5p抑制组和共转染组SNHG6 mRNA表达上调（P <0.05）,miR-26b-5p mRNA表达下调（P <0.05）;与miR-26b-5p抑制组比较,共转染组SNHG6 mRNA表达下调（P <0.05）,miR-26b-5p mRNA表达上调（P <0.05）。对照组、SNHG6敲减组、miR-26b-5p抑制组、共转染组24 h、48 h、72 h的OD值比较,采用重复测量设计的方差分析,结果 ①不同时间点OD值有差异（F =52.481,P =0.000）。②4组OD值有差异（F =50.336,P =0.000）,与对照组比较,SNHG6敲减组及共转染组24 h、48 h及72 h的OD值降低（P <0.05）,miR-26b-5p抑制组24 h、48 h及72 h的OD值升高（P <0.05）;与SNHG6敲减组比较,miR-26b-5p抑制组和共转染组24 h、48 h及72 h的OD值升高（P <0.05）;与miR-26b-5p抑制组比较,共转染组OD值降低（P <0.05）。③4组OD值变化趋势有差异（F =20.109,P =0.000）。与对照组比较,SNHG6敲减组和共转染组划痕愈合率降低,侵袭细胞数减少（P <0.05）,miR-26b-5p抑制组划痕愈合率升高,侵袭细胞数增加（P <0.05）;与SNHG6敲减组比较,miR-26b-5p抑制组和共转染组划痕愈合率升高,侵袭细胞数增加（P <0.05）;与miR-26b-5p抑制组比较,共转染组划痕愈合率降低,侵袭细胞数减少（P <0.05）。且SNHG6与miR-26b-5p基因序列上存在结合位点。结论 敲减SNHG6通过靶向上调MDA-MB-231细胞中miR-26b-5p的表达,抑制TNBC增殖、迁移及侵袭。     

替米沙坦抑制SOCS-3/SREBP-1c通路改善非酒精性脂肪性肝炎模型大鼠的胰岛素抵抗

目的 探讨替米沙坦对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织SOCS-3通路的抑制作用及对胰岛素抵抗的干预作用。方法 70只雄性SD大鼠随机分为A （20只，正常对照）、B （30只，模型对照）和C组（20只，实验干预）。A组大鼠喂以普通饲料，B和C组喂以高脂饲料；12周末随机处理B组10只，行正葡萄糖高胰岛素钳夹试验，证实IR-NASH造模成功（100%）后，B、C两组继续高脂喂养，并予C组大鼠替米沙坦每日5 mg/kg灌胃，16周末全部大鼠测血清IL-6、TG、TC、ALT、AST、空腹血糖（FBG）和血清胰岛素（FBI），并计算胰岛素抵抗指数；行正葡萄糖高胰岛素钳夹试验，肝组织HE肝脏病理学检查，半定量RT-PCR法检测肝组织SOCS-3和SREBP-1c mRNA表达水平。结果 高脂饮食12周大鼠进展为NASH。16周末，B组大鼠肝湿重显著高于A组，C则明显低于B组；B组出现血脂异常和IR，血清IL-6、肝脏SOCS-3 mRNA和SREBP-1c mRNA表达水平明显上调（与A组比较P<0.01），三者分别与稳态葡萄糖输注率（VGIR60-120）显著负相关（r=0.9248，P<0.0001；r=0.9011，P<0.0001；r=0.9739，P<0.0001）。替米沙坦干预后，肝功能和血脂异常明显改善，NASH病理明显好转，SOCS-3 mRNA和SREBP-1c mRNA较B组显著下调（P<0.01），同时VGIR60-120明显增高（r=0.9532，P<0.0001；r=0.9687，P<0.0001），表明IR明显改善；而此时IL-6仍高水平，与VGIR60-120、SOCS-3、SREBP-1c失去相关关系（r=0.0071，P=0.7238；r=0.0019，P=0.8560；r=0.0002，P=0.9586），而SOCS-3 mRNA和SREBP-1c mRNA仍显著相关（r=0.9439，P<0.0001）。结论 替米沙坦干预NASH大鼠可显著减改善肝功能和IR，其机制并非抑制炎症因子IL-6，而是下调肝脏SOCS-3、SREBP-1c的表达，从而改善糖脂代谢和NASH。     

高压氧治疗一氧化碳中毒迟发脑病的疗效分析及其机制研究

目的 研究高压氧对一氧化碳中毒迟发脑病（DEACMP）患者Toll样受体4（TLR4）/核转录因子-κB（NF-κB）信号通路及预后的影响。方法 选取2018年10月—2019年10月在南昌大学第一附属医院神经内科就诊的90位DEACMP患者。根据抽中奇偶数的结果将患者分成两组，偶数患者作为实验组，奇数患者作为对照组，每组45例。对照组采取常规治疗，实验组在对照组基础上使用高压氧治疗，比较两组临床疗效，治疗前后TLR4 mRNA、NF-κB p65水平及洛文斯顿作业治疗用认知评定量表（LOTCA）、日常生活能力量表（ADL）、Wahlund改良脑白质疏松分级量表（ARWMC）评分，治疗后3个月、6个月、12个月改良Rankin（mRS）评分。结果 观察组总有效率高于对照组（P <0.05）。实验组治疗前后TLR4 mRNA、NF-κB p65相对表达量的差值大于对照组（P <0.05）。实验组治疗前后LOTCA、ADL的差值大于对照组（P <0.05），ARWMC的差值小于对照组（P <0.05）。实验组与对照组治疗后3个月、6个月和12个月mRS评分比较，采用重复测量设计的方差分析，结果 ①不同时间点mRS评分有差异（F =122.783，P =0.000）；②实验组与对照组mRS评分有差异（F =43.885，P =0.000）；③两组mRS评分变化趋势有差异（F =66.939，P =0.000）。结论 高压氧治疗DEACMP患者临床疗效较好，可通过调控TLR4/NF-κB信号通路来改善患者预后，有较高的临床价值。     

调控SOX2对HPV-16阳性宫颈癌细胞增殖转移的影响

目的 探讨SOX2基因对HPV-16阳性宫颈癌细胞株增殖转移的影响。方法 培养Caski-EGFP细胞后,采用空白腺病毒、SOX2基因沉默的腺病毒载体、SOX2基因过表达的腺病毒载体转染Caski-EGFP细胞并将细胞依次分为C、S、E组。Western blot法及实时荧光定量PCR （RT-PCR）检测SOX2及mRNA水平,检测细胞是否构建成功;CCK-8细胞增殖实验检测各组癌细胞的光密度值,绘制细胞活力曲线,分析SOX2基因对宫颈癌细胞株增殖活力的影响;Transwell侵袭试验分析各组癌细胞侵袭抑制率的改变,探讨SOX2基因对宫颈癌细胞株侵袭转移能力的影响。结果 RT-PCR、Western blot法检测,结果显示mRNA、SOX2蛋白表达量分别为E组 > C组 > S组,差异有统计学意义（P<0.05）,提示构建的细胞构建成功可进行下一步实验。CCK-8细胞增殖实验结果显示,不同时间下,C组、S组、E组吸光度值、细胞活力均呈上升趋势,3组都在72h达到高峰,差异有统计学意义（P<0.01）;比较各时间点下3组癌细胞的吸光度值及细胞活力差异,癌细胞培养后第0、24、48及第72h,E组相较于对照组C组而言,癌细胞的吸光度值及细胞活力均显著升高,差异有统计学意义（P<0.01,F_C-E组间=3.764,P_C-E组间=0.001）,S组相较于对照组C组而言,癌细胞的吸光度值及细胞活力均有所降低,差异有统计学意义（P<0.01）。E组相较于对照组S组而言,癌细胞的吸光度值及细胞活力均显著降低,差异有统计学意义（P<0.01,F_组间=4.286,P_组间=0.000）;不同时间点与分组之间存在交互作用（F_交互=3.784,P_交互=0.001）;Transwell小室实验结果显示,以C组实验对照组的细胞侵袭能力设定为100%,则E组的相对侵袭抑制率为146%;S组细胞的相对侵袭抑制率为75%。对比可知,E组的细胞侵袭能力高于实验对照组C组,差异有统计学意义（P<0.01）;S组低于实验对照组C组,差异有统计学意义（P<0.05）;E组细胞侵袭能力明显高于S组,差异有统计学意义（P<0.01）。结论 本研究进一步探讨了SOX2基因对高危型HPV感染（HPV-16）的宫颈癌细胞株增殖能力及侵袭转移能力方面的促进作用,抑制SOX2的表达有望成为一种早期诊断治疗宫颈癌的新途径。     

KATP通道Kir6.2亚基E23K多态性对阿霉素损伤大鼠心肌细胞结构及自噬的影响

目的 构建携带KATP通道Kir6.2亚基E23K多态性的大鼠模型,给予阿霉素损伤,探讨KATP通道Kir6.2亚基E23K多态性对于阿霉素损伤的心肌,心肌结构、功能及细胞自噬的影响。方法 利用定点突变的方法获得含有Kir6.2 KK基因型的大鼠并进行基因鉴定。将大鼠随机分为4组,即A组（WT+Saline组,SD大鼠+生理盐水）、B组（E23K+Saline组,Kir6.2 KK大鼠+生理盐水）、C组（WT+DOX组,SD大鼠+阿霉素）、D组（E23K+DOX组,Kir6.2 KK大鼠+阿霉素）。采用腹腔注射阿霉素的方法构建阿霉素损伤大鼠模型,对照组腹腔注射等体积的生理盐水。应用心脏彩超进行阿霉素损伤心肌病模型的鉴定及心脏结构和功能的评价（每组8只）。分别通过HE染色及天狼星红染色心肌组织切片,测量心肌细胞面积及心肌纤维化比例,并通过PCR方法检测纤维化相关标志物CTGF、TGF-β mRNA的表达。通过Western blot法技术测定心肌细胞自噬水平。结果 超声结果显示,阿霉素损伤的大鼠相比于盐水组存在明显的心肌重构及功能损伤（P<0.01）,且E23K组变化较WT组更明显（P<0.01）。病理及纤维化相关标志物mRNA表达显示,阿霉素损伤的大鼠心肌纤维化程度明显加重（P<0.01）,且E23K组纤维化程度较WT组更严重（P<0.01）;自噬相关蛋白表达量检测显示,阿霉素损伤的大鼠,自噬相关蛋白表达量显著增加（P<0.01）,且E23K组明显高于WT组（P<0.01）。结论 在阿霉素损伤模型中,Kir6.2亚基E23K多态性对大鼠心脏结构、功能、纤维化程度及自噬表达均有显著影响。     

miR-149-5p靶向FGF5调节人口腔鳞状细胞癌细胞凋亡和上皮-间质转换及微管形成

目的：　探究miR-149-5p对人口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）细胞凋亡、上皮-间质转换（epithelial-mesenchymal transition,EMT）及微管形成的影响及作用机制。方法：　miR-149-5p mimic（mimic）和pcDNA-FGF5（FGF5）单转或共转CAL-27细胞系,RT-PCR、Western blot检测FGF5表达;双荧光素酶报告实验验证miR-149-5p和FGF5靶向关系;流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测Bax/Bcl-2蛋白表达;观察EMT细胞形态转化,Western blot检测CAL-27细胞上皮标记物E-钙黏蛋白（E-cadherin,E-cad）及间质标记物N-钙黏蛋白（N-cadherin,N-cad）表达;成管实验检测CAL-27细胞微管样形成能力,Western blot检测血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达。结果：　miR-149-5p mimic能明显抑制CAL-27细胞中FGF5的表达（P=0.000）;miR-149-5p mimic能明显减弱FGF5野生质粒的荧光素酶活性（P=0.000）;miR-149-5p mimic可明显上调CAL-27细胞凋亡率及Bax/Bcl-2比值（P=0.000）,并逆转FGF5过表达导致的细胞凋亡率（P=0.014）及Bax/Bcl-2比值上调（P=0.000）。miR-149-5p mimic抑制EMT细胞形态由圆形到纺锤形转变,并逆向转换FGF5过表达导致的间质样细胞形态。miR-149-5p mimic可上调CAL-27细胞中E-cad的表达（P=0.000）、下调N-cad的表达（P=0.000）,逆转FGF5过表达引起的E-cad表达下调（P=0.020）和N-cad表达上调（P=0.000）。miR-149-5p过表达能明显抑制CAL-27细胞微管结节形成（P=0.002）,降低VEGF蛋白表达水平（P=0.000）,逆转过表达FGF5引起的VEGF表达上调（P=0.000）。结论：　miR-149-5p能抑制OSCC细胞的EMT和微管形成能力并促进细胞凋亡,作用机制与靶向抑制FGF5表达有关。