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1.
创伤性脑损伤的分子生物学研究机制已深入到基因水平 ,但在分子水平上对脊髓损伤 (SCI)的探讨尚少。笔者旨在检测pSVPoMcat微基因修饰雪旺细胞(SC)移植对SCI后早期局部脊髓组织神经细胞中c -fos基因及bcl- 2基因表达的影响 ,并初步探讨其意义。一、材料与方法健康SD大鼠 80只 ,体重 2 5 0~30 0g ,雌雄不拘 (由华西医科大学动物中心提供 )。随机分为 4组 ,pSVPoMcat微基因 (在华西医科大学基础医学院重组DNA研究室构建 )修饰的SC组为A组 ,SC组为B组 ,损伤组为C组 ,正常对照组为D组。用质量…  相似文献   

2.
应用8 Br c A M P 和60 Co 照射体外诱导 Hela 细胞凋亡。探讨bx L 2 ,w p53 ,m p53 ,c m yci Nos 的基因表达和i Nos , Fas 蛋白表达之间的关系,为探讨无毒性8 Br c A M P 对宫颈癌治疗的新途径提供依据。采用 T U N E L 法和 Feulgen 法进行细胞凋亡实验;采用本实验室创新的完整细胞原位 R N A 斑点印迹技术检测 Fas 和i Nos蛋白,应用高速薄层色谱扫描仪对斑点印迹信号进行定量测定。结果8 Br c A M P 和60 Co 照射均可上调 Hela wp53 ,i Nos 的基因表达;下调m p53 ,bcl 2 ,c myc 的基因表达。可增强i Nos 蛋白质的酶活性,降低 Fas 蛋白质的免疫反应性。显示出8 Br c A M P 可能代替放疗作为一种治疗宫颈癌的新途径。  相似文献   

3.
人β-干扰素在杆状病毒载体与Sf细胞体系中的表达   总被引:1,自引:0,他引:1  
采用苜蓿尺蠖核多角休病毒(Autographacalifornicanuclearpolyhedrosisvirus,AcNPV)DNA中多角体蛋白基因启动子及其前后序列作为转移载体,将人β-干扰素(HuIFN-β基因插入转移载体pUAc-5,构建成pAc-IFN-β载体。该质粒DNA与野生型AcNPVDNA经lipofectin共转染秋粘虫(Spodopterafrugiperda)传代细胞(Sf9细胞),利用重组病毒不产生多角体蛋白的特征,进行病毒空斑筛选。用核酸杂交方法鉴定出携带HuIFN-β基因的主组病毒。用重组病毒感染Sf9细胞,可表达rHuIFN-β。在1.0×10 ̄6细胞/ml感染上清中测定rHuIFN-β最高活性为3.0×10 ̄6IU/ml,抗天然HuIFN-β抗体能完全中和rHuIFN-β的抗病毒活性。  相似文献   

4.
Caspase-3基因在凋亡HL-60细胞及肿瘤细胞中的表达   总被引:6,自引:0,他引:6       下载免费PDF全文
目的 明确caspase3 基因在凋亡前后HL60 细胞及不同肿瘤细胞系中的表达特性。方法 用Northern 杂交技术检测γ射线诱发的凋亡前后HL60 细胞和6 种肿瘤细胞中caspase3 的mRNA。结果 caspase3 基因在白血病细胞株HL60 、CEM 和K562 细胞及视母细胞瘤细胞SHSY5Y 中表达高于宫颈癌细胞HeLa 及乳腺癌细胞MCF7 ;在凋亡HL60 细胞表达高于未照射对照HL60 细胞。结论 caspase3 表达水平与细胞寿命、对辐射敏感性及细胞凋亡的发生有关。  相似文献   

5.
本文采用反向血凝试验对本公司2174例学龄前儿童进行了乙型肝炎表面抗原携带情况调查,阳性人数249例,阳性率为11.45%,结果显示携带率高于全国人群平均携带率,(8.3%,属高度感染区。经过对已接对乙肝疫苗与未接种乙肝疫苗儿童间表面抗原携带率的对比性分析,提示需加强幼托机构的卫生管理,对婴幼儿进行乙肝疫苗的免疫接种,以做到有效地避免和控制乙肝病毒的传播。THEINVESTIGATIONOFHEPATITISBVIRUSANTIGENCARRIEDBYPRESCHOOLERSINNANCHANGAIRCRAFTMANUFACTURINGCOMPANYChenWeiqi1994.5(2):119(Nanchabg334Hospital)AbstratHepatitisBvirusantigenwasinvestigatedbyreversehemagglutinationtestin2174casesofpreschoolertoourcompany.Amongthem249(11.45%)werepositive.ThepositiveratesinpreschoolerswithhepatitisBvir  相似文献   

6.
利用分子生物学技术,构建表达丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的人源单链可变区抗体(ScFv)的原核表达载体,并在大肠杆菌JM109中表达可溶性的HCV-core-ScFv。以重组的HCV核心蛋白为包被抗原,利用噬菌体抗体库的表面展示技术,筛选到含有HCV-core-ScFv基因的噬菌体克隆。从噬菌体抗体阳性克隆中提取质粒,经NcoⅠ/Not Ⅰ酶切鉴定,该ScFv基因由750bp组成。将其亚克隆到pCANTAB5E表达载体中,转化大肠杆菌JM109,提取质粒进行DNA序列测定,符合ScFv的重链可变区和轻链可变区基因结构特点。IPTG诱导转化的大肠杆菌JM109,在其培养上清中获得了可溶性HCV-core-ScFv的表达。酶联免疫吸附法(ELISA)证实表达的HCV-core-ScFv进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PA  相似文献   

7.
目的:c-myc是一种转录因子,它与其特异性结合序列结合后,可增强下游基因的表达。方法:将4个重复拷贝的c-myc顺式反应元件(CACGTG)4、CMV增强子/启动子以及带有CMV增强子/启动子的(CACGTG)4分别插入报道基因质粒pBLCAT2,得到3种融合报道质粒:pM4CAT2、pCMVCAT、pM4CMVCAT。结果:CAT测活表明,在c-myc高表达的BT325细胞中,pM4CAT2的CAT活性比pBLCAT2增高10.7倍,而在c-myc低表达的HeLa细胞中,仅增高1.1倍;在BT325细胞中,pM4CAT2的CAT活性为pCMVCAT的1/4,而pM4CMVCAT的CAT活性与pCMVCAT相当。结论:连接了(CACGTG)4的TK启动子的转录活性依赖于c-myc的扩增情况。而在(CACGTG)4TK的前面再增加一个强的增强子可进一步增强该启动子的活性。  相似文献   

8.
增殖细胞核抗原(PCNA)是一种高度保守的细胞蛋白,在DNA复制和修复中起作用。本实验用γ射线照射大鼠胚胎成纤维细胞(CREF)诱导p53,研究照射后PCNA表达的机制。方法:实验用pBACAT(其PCNA-氯霉素转移酶报告基因区域内含有人PCNA启动子序列)和pCMV-DMp53(表达突变型p53蛋白)两种质粒,照前24小时用磷酸钙介导法将报告质粒转染细胞,6小时后实行甘油休克;转染24小时后用137 Csγ射线照射CREF12Gy,剂量率为1.25Gy·min-1。照后在48小时内进行细胞瞬…  相似文献   

9.
人β—干扰素在杆状病毒载体与Sf细胞体系中的表达   总被引:1,自引:0,他引:1  
采用苜蓿尺蠖核多角体病毒DNA中多角体蛋白基因启动子及其前后序列作为转移载体,将人β-干扰素(HuIFN-β)基因插入转移载体pUAc-5,构建成pAc-IFN-β载体。该质粒DNA与野生型AcNPV DNA经lipofectin共转染秋粘虫传代细胞(Sf9细胞),利用重组病毒不产生多角体蛋白的特征,进行病毒空斑筛选。用核酸杂交方法鉴定出携带HuIFN-β基因的重组病毒。用重组病毒感染Sf9细胞,  相似文献   

10.
用免疫组织化学技术检测了52例慢性乙型肝炎(CHB)肝组织内的Fas抗原、HBsAg和HBcAg。结果表明,48例Fas抗原阳性表达(92.3%),主要在肝细胞浆内,其表达程度与肝组织活动性炎症分度密切相关,提示Fas抗原介导的细胞凋亡在肝细胞损伤中起一定作用;肝细胞Fas抗原的表达程度与HBsAg相关而与HBcAg不相关。  相似文献   

11.
目的 研究pSVPoMcat微基因修饰雪旺细胞 (Schwanncell,SC)对大鼠脊髓损伤 (spi nalcordinjury,SCI)后神经生长相关蛋白 - 4 3 (growthassociatedprotein - 4 3 ,GAP - 4 3 )表达的影响。 方法 采用 12 0只大鼠脊髓半横切损伤模型 ,随机分为三组 :pSVPoMcat微基因修饰SC移植组 (A组 )、单纯SC移植组 (B组 )、损伤对照组 (C组 )。应用免疫组织化学方法动态观察SCI后GAP - 4 3的表达 ,同时采用联合行为记分 (CBS)观察大鼠神经功能恢复情况。 结果 SCI损伤后 1周 ,A、B、C三组间GAP - 4 3表达差异无显著性意义 ;SCI后 2 ,4 ,8周 ,三组间表达顺序为A >B >C ,差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ;其间A组在 2周时达到最高峰 ,此后逐渐下降 ,12周时A、B、C三组间差异无显著性意义。A组大鼠神经功能恢复最好。 结论 pSVPoMcat微基因修饰SC移植有促进SCI后GAP - 4 3表达和大鼠神经功能恢复的作用  相似文献   

12.
目的探讨pSVPoMcat微基因修饰雪旺氏细胞(SC)移植对脊髓损伤(SCI)后c-fos,bcl-2基因表达的影响.方法用切割法制备大鼠SCI模型,将实验动物分为pSVPoMcat微基因修饰SC组(A组),SC移植组(B组),损伤组(C组),正常对照组(D组),不致伤.用地高辛(DIG)标记的c-fos、bcl-2探针行原位杂交.结果SCI后A、B、C、D四组脊髓c-fos基因表达顺序为C>B>A=D;bcl-2基因表达顺序为D=A>B>C.结论SCI后C-fos基因表达显著增多,而bcl-2基因表达显著减少,pSVPoMcat微基因修饰SC移植能部分抑制SCI后c-fos基因的表达和促进bcl-2基因的表达.  相似文献   

13.
pSVPoMcat微基因修饰雪旺细胞移植对脊髓损伤的修复作用   总被引:3,自引:0,他引:3  
为观察pSVPoMcat微基因修饰雪旺细胞(SC)移植对脊髓损伤的修复作用,采用切割法制备脊髓半模断损伤模型(T8平面)。实验动物随机植入pSVPoMcat微基因修饰的SC(A组)、SC组(B组)和损伤对照组(C组),每组40只。术后应用联合行为记分(CBS)和皮层体感诱发电位(CSEP)动态观察大鼠功能恢复情况,应用原位杂交和免疫细胞化学方法观察胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。术后3月行MRI观察,并用免疫组化对神经轴突进行神经中丝(NF)染色。结果显示,A组能抑制大学损伤后的GFAP表达;MRI发现,A组大鼠脊髓损伤(SCI)区脊髓信号已基本恢复正常,B组未恢复正常,而C组SCI有软化灶形成。与NF染色发现一致。A、B两组潜伏时波幅呈恢复的趋势,与A组接近正常,与CBS结果一致。提示,pSVPoMcat微基因修饰SC移植能抑制SCI后GFAP的表达,促进神经轴突的生长并对神经功能恢复有明显的促进作用。  相似文献   

14.
目的:探讨pSVPoMcat微基因修饰雪旺氏细胞移植对损伤脊髓前角神经元的保护作用。方法:采用大鼠脊髓半横切损伤模型,将实验动物分为3组:pSVPoMcat微基因修饰雪旺细胞移植组(A组),单纯雪旺氏细胞移植组(B组),损伤对照组(C组)。对脊髓切片行Nissl染色,酸性磷酸酶(ACP)组织化学染色及原位末端标记(TUNEL)法染色,并用联合行为记分(CBS)观察大鼠神经功能恢复情况。结果:A、B、C三组前角神经元存活率呈显著性差异(A>B>C,P<0.01);A组ACP变化幅度明显降低(A<B<C);细胞凋亡率为C>B>A。大鼠神经功能恢复也出现了相同的变化趋势。结论:pSVPoMcat微基因修饰雪旺氏细胞移植对脊髓损伤前角神经元有保护作用并促进大鼠损伤脊髓功能的恢复。  相似文献   

15.
目的:观察人Po-5,flanking介导的21.5ku髓鞘碱性蛋白(myelin basic protiein,MBP)微基因(暂命名为pSVPoMcat)修饰雪旺细胞(SC)在鼠脊髓内存活及其基因表达。方法:120只大鼠分为3组,A组为pSVPoMcat微基因修饰SC移植组;B组为高纯化SC移植组;C组为脊髓损伤(SCI)_对照组,伤后各组分别于2,4,8,12周(每组每次10只),取移植区脊髓切片,进行S-100蛋白,MBP免疫细胞化学染色及地高辛(DIG)标记的hMBPF2 cDNA探针的原位杂交(ISH)测定。结果:伤后2,4,8,12周,A组S-100,MBP染色细胞和ISH细胞差异无统计学意义(P<0.05),其中ISH阳性细胞可见髓鞘形成,B组的S-100染色细胞逐步递减,差异有非常显著性意义(P<0.01),未发现MBP染色细胞以及ISH细胞,C组未发现任何阳性细胞,结论:pSVPoMcat微基因修饰SC在鼠损伤脊髓内能长期存活并表达外源基因,且有助于受伤脊髓的髓鞘形成。  相似文献   

16.
目的 观察高压氧对大鼠脊髓损伤后Fas/Fas1、Caspase-3和凋亡细胞的影响,探讨高压氧治疗脊髓损伤的机制.方法 按照Allen's打击法制备SD大鼠脊髓损伤模型,将20只大鼠损伤后随机分为高压氧组、常氧高压氮组、常压吸氧组和常压空气组,于损伤后6 h开始治疗;1、2、 3、 7、和11 d取材.采用凋亡细胞检测法检测凋亡细胞,免疫组化法检测Fas/Fas1和Caspase-3表达,光镜下观察并计数分析.结果 Fas/Fas1、Caspase-3和凋亡细胞于损伤后1 d即升高,Fas/Fas1和Caspase-3于伤后2 d即达到高峰,细胞凋亡高峰出现在第3天,高压氧组与各组比较,峰值降低且差异有统计学意义(P<0.01).结论 高压氧对大鼠继发性脊髓损伤有保护作用,其作用与下调Fas/Fas1的表达,减少Caspase-3,从而抑制细胞凋亡有关.  相似文献   

17.
目的 探讨银杏叶提取物(extract of Ginkgo biloba,Egb)对脊髓损伤后神经细胞的保护作用及其机制.方法 雌性SD大鼠48只,体重200~230 g,用随机数字表法把大鼠分为等渗盐水组(NS组)24只,银杏叶提取物组(Egb组)24只.在T9椎板水平半切脊髓.术后NS组大鼠每天给予2 ml等渗盐水灌胃,EGb761组大鼠每天给予2 ml(20mg)Egb灌胃.分别于术后1,7,14,21 d取材,行髓鞘染色、焦油紫染色、诱生型一氧化氮合酶(iNOS)免疫组化和TUNEL法标记凋亡细胞.结果 术后各时相点Egb组大鼠脊髓损伤周围邻近区脱髓鞘明显减轻,坏死囊腔明显减小,损伤侧与正常侧脊髓前角神经元数目比率明显高于NS组(P<0.05),神经细胞凋亡指数和iNOS表达阳性细胞率低于Ns组(P<0.01或P<0.05);而且,iNOS阳性细胞率与细胞凋亡指数间呈正相关(r=0.729,P<0.01).结论 Egb能减少脊髓损伤后神经细胞的凋亡,其机制可能与抑制iNOS表达有关.  相似文献   

18.
目的 探讨脊柱适形调强放疗(IMRT)和普通放疗对犬脊髓的生物安全性。方法 选取纯种比格犬12只并随机分为2组,模拟犬胸9~10椎体肿瘤,以IMRT和普通放疗2种方式分别对2组比格犬胸9~10椎体给予50及70Gy剂量的放疗,于放疗3个月后活杀取材,取相同部位、相同位置的胸9~10节段脊髓行HE染色,电镜观察后,免疫组织化学法定量检测脊髓中Fas、HSP70蛋白的表达,TUNEL法定量检测脊髓中凋亡神经元。结果 照射3个月后可观察到脊髓的损伤,IMRT组脊髓神经元以可逆性损伤为主,而普通放疗组以凋亡为主。相同剂量的放疗,IMRT组细胞凋亡指数〔50Gy组为(1.2±0.7)%;70Gy组为(2.5±0.8)%〕均低于普通放疗〔50Gy组为(7.3±1.1)%,70Gy组为(11.3±1.4)%〕,两组比较差异有统计学意义(50Gy组t=0.022,P<0.05;70Gy组t=0.017,P<0.05);凋亡促进蛋白Fas表达量IMRT组(50Gy组为4.6±0.8;70Gy组为7.4±1.1)明显低于普通放疗组(50Gy组为15.1±6.4,70Gy组为19.3±7.6),两组比较差异有统计学意义(50Gy组t=0.231,P<0.05;70Gy组t=0.457,P<0.05);而凋亡抑制蛋白HSP70表达量IMRT组(50Gy组为9.1±0.8,70Gy组为7.3±1.4)明显高于普通放疗组(50Gy组为2.1±0.9,70Gy组为1.7±0.3),两组比较差异有统计学意义(50Gy组t=0.153,P<0.05;70Gy组t=0.223,P<0.05)。脊髓神经元凋亡指数与Fas/HSP70比值呈正相关(r=0.996,t=1.14,P<0.05)。结论 照射3个月后脊髓中存在着明显的放疗迟发反应。通过放疗后脊髓神经元形态学、神经元凋亡指数、凋亡相关蛋白表达等指标的测定结果提示脊柱IMRT的脊髓安全性远优于普通放疗。  相似文献   

19.
目的 观察不同压力的高压氧(HBO)对大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后细胞凋亡的影响,探讨HBO治疗SCI的最佳压力.方法 90只SD大鼠采用Allen's打击法造成SCI后随机分为5组:对照组(A组)、0.15 MPa HBO组(B组)、0.20 MPa HBO组(C组)、0.22 MPa HBO组(D组)和0.25 MPa HBO组(E组).损伤后第3、7、14天分别对5组大鼠进行取材,采用Tunel法检测凋亡细胞,光镜下观察,并对结果进行统计学分析;神经功能评价采用开放场地实验评估大鼠后腿运动功能(BBB评分).结果 与A组比较,HBO各压力组在3个时间点凋亡的细胞数有所减少,神经功能有所改善,且差异有统计学意义(P<0.05).与B组比较,C、D和E组凋亡的细胞数有所减少,BBB评分改善,且差异有统计学意义(P<0.05).与C组比较,E组于第3和第7天的差异有统计学意义(P<0.05);第14天的差异无统计学意义(P>O.05).结论 HBO能抑制SCI后细胞的凋亡,其作用在一定范围内与压力的升高相关.
Abstract:
Objective To study the effects of HBO at different pressures on apoptosis following spinal cord injury in rats and also to investigate ideal pressure value of hyperbaric oxygen(HBO) on spinal cord injury (SCI). Methods The SCI model was established with Allen's weight dropping by using 90 SD rats. Then, the animals were randomly divided into 5 groups following SCI: the control group ( group A); the HBO treatment group at 0. 15 Mpa (group B); the HBO treatment group at 0. 20MPa (group C); the HBO treatment group at 0. 22 Mpa ( group D); the HBO treatment group at 0.25 Mpa ( group E). Segments of injured spinal cord were collected from the animals of the 5 groups for studies on the 3rd, 7th, and 14th days after injury. The apoptosis cells were labeled with Tunel and the neurologic function of the spinal cord was assessed in the open field ( the BBB score ). Results The number of Tunel - positive cells decreased considerably and the BBB score improved significantly in all the animals of the HBO groups when compared with those of group A ( P < 0. 05 ). Same results were found when the group C, group D and group E were compared with group B, with statistical significance( P <0. 05). The number of Tunel-positive cells were decreased considerably and the BBB score improved significantly on 3rd and 7th days in group E, when compared with those of group C( P < 0. 05 ), with statistical significance( P < 0. 05 ). However, no statistical significance could be noted on the 14th day (P <0.05). Conclusions HBO could inhibit apoptosis in rats following spinal cord injury, which might be correlated with the increase of pressure within a certain range.  相似文献   

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