响应面法优化替考拉宁发酵培养基及其扩大培养

目的 通过响应面法,优化替考拉宁发酵培养基,并对发酵工艺参数进行优化,来提高其发酵产量。方法 以游动放线菌TC19-3p-103为试验菌株,采用单因素试验确定发酵培养基考察因素的参考范围;利用最陡爬坡试验确定响应面试验的中心区域;利用Box-Behnken响应面法,确定了发酵培养基中的有机氮源最佳浓度组合;并对起始搅拌转速与通气量这两个发酵工艺参数进行单因素考察;在发酵过程中,采用流加技术控制碳源浓度。结果 经优化的发酵培养基,其摇瓶产量提高了31.6%;50L罐发酵工艺参数优化后,发酵水平达到8558 mg/L。结论 优化后的发酵工艺,显著提高了替考拉宁的产量,为其工业化生产奠定了基础。     

替考拉宁分离条件的响应面法优化

利用大孔吸附树脂分离纯化替考拉宁,并对其分离条件进行优化。以替考拉宁发酵液提取粗品为原料,研究上样浓度、解吸剂、解吸剂pH、解吸剂浓度等因素对替考拉宁含量的影响。在单因素试验基础上对上样浓度、解吸剂pH、解吸剂浓度三个因素进行Box-Behnken试验设计,以替考拉宁含量为响应值,利用响应面分析法对分离条件进行优化。在上样浓度为2500μg/mL、解吸剂pH2.0、解吸剂浓度40%的分离条件下,替考拉宁含量达90.8%。响应面法优化替考拉宁含量比优化前的单因素试验结果有较大提高。     

响应面法优化替考拉宁发酵培养基的研究

目的 通过响应面分析的方法对发酵生产替考拉宁的培养基进行优化,以提高其产量.方法 以一株替考游动放线菌SIIA 04-7-34为试验菌株,采用逐因子实验法确定替考拉宁合成考察因素的参考范围,再采用Plackett-Burman设计法进行培养基的优化.结果 13个实验因子中筛选到3个显著影响因子:葡萄糖、KH2PO4和接种龄.结论 综合评价实验结果表明:优化发酵条件后,替考拉宁发酵产量提高23.3%,实验值与预测值基本相符.     

替考拉宁提炼工艺的研究进展

替考拉宁是继万古霉素后开发的另一种糖肽类抗生素 ,其高效、低毒 ,是当今临床上应用的有效抗耐药菌抗生素之一。但其结构复杂、稳定性差 ,在工业上分离纯化的难度很大。自它问世以来 ,国内外对其提炼方法进行了多方面的探索。本文主要对替考拉宁的提炼方法进行了综述和讨论。     

万古霉素和替考拉宁

万古霉素(图1)是一个极为重要的糖肽类抗生素,其抗菌谱很窄,基本上局限于很小一部分革兰氏阳性菌的种及一些螺旋体.近年多重耐药肠球菌(粪肠球菌)的出现,恢复了人们对万古霉素及其结构类似物替考拉宁(图2)的强烈兴趣,替考拉宁的体外活性更强.万古霉素是推荐用来治疗耐甲氧西林(β_内酰胺)金黄色葡萄球菌感染,包括败血症、心内膜炎、组织和骨感染的药物.对青霉素类过敏的患者可以使用.万古霉素对链球菌也有作用,特别是当与一个氨基糖苷类药物合用时效果更佳(协同作用).口服万古霉素对产毒的艰难梭菌有效,故可用来治疗由抗生素引起的伪膜结肠炎.因此,万古霉素是一个非常有价值的抗生素,不过常常被用作经β_内酰胺类抗生素或其它药物治疗失败后才使用的最后手段.     

替考拉宁的高效液相色谱分析方法

替考拉宁(teicoplanin)是一个新的糖肽类抗生素,主要由5个结构近似的化合物(TA2-1、TA2-2、TA-3、TA2-4、TA2-5)组成的混合物.第 6个活性组份(TA3-1)在发酵液中未发现,但在粗品及精制品中有少量存在,该化合物是TA2的降解(水解)产物,另外替考拉宁还存在有两个亲脂性较大的类似物(RS-1,RS-2)及两个亲脂性较小的类似物(RS-3,RS-4).由于替考拉宁复杂的化学组成,建立准确、简便、快速的HPLC分析方法难度较大,有关的HPLC分析方法报道较多,以下将对HPLC分析方法有关的实验条件及应用进行归纳总结.     

HPLC法测定替考拉宁血药浓度

目的利用单因素实验法建立和优化临床替考拉宁（TEC）HPLC分析方法,为临床合理用药和药动学研究提供检测方法。方法用甲醇沉淀处理血液标本,Waters ODS2（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱为分析柱,利用单因素实验法优化色谱条件。实验设计通过改变柱温、p H、流动相的组成比例,验证每种条件对各成分分离度（R）、理论板数（N）和拖尾因子（T）的影响,并用所建立的方法研究TEC在大鼠肝脏和血清中的分布动力学。结果优化后流动相为0.05 mol·L-1KH2PO4缓冲溶液-乙腈（22∶78）,用磷酸调p H至2.65,波长为200 nm,流速为1.2 m L·min-1,柱温30℃,进样量为100μL。TEC的最低检测质量浓度为0.1 mg·L-1,在0.2²04.8 mg·L-1内线性较好（r=0.995 8）,相对回收率为（98.66±8.38）%^100.75±8.32%,平均日内、日间精密度（RSD）分别为9.83%和9.87%,分离度（R）为1.5。以15 mg·kg-1单剂量静脉给药的大鼠,3 h后测得血清和肝脏中TEC质量浓度分别为（152.5±7.01）mg·L-1和（14.99±3.54）mg·L-1,21 h后得血清和肝脏质量浓度分别为（3.19±1.53）mg·L-1和（13.39±2.39）mg·L-1。结论该方法灵敏、快速、简便和特异性强且稳定可靠,适用于临床TEC血药浓度的监测及药动学的研究。     

糖肽类抗生素替考拉宁的研究进展

替考拉宁是糖肽类抗生素,与万古霉素比较具有更强的脂溶性,半衰期更长,对金葡萄的抗菌活性与万古霉素相似,对肠球菌的抗菌活性强于万古霉素。具有良好的组织、体液分布性,药物不良反应轻。可静脉或肌肉给药,治疗金葡菌和肠球菌引起的各种感染有良好的效果。     

替考拉宁的临床应用

替考拉宁是继万古霉素后研制的治疗G＋球菌的糖肽类抗生素，由于化学结构上增加了脂肪侧链，相对分子量增高，在药物代谢动力学上显示出良好的特性，组织穿透力强，能在细胞内浓集，蛋白结合率超过90%，半衰期明显延长，除静脉给药外也可肌内注射。临床主要用于重症G＋球菌感染。对替考拉宁的应用要谨慎合理，避免耐药菌过早产生。     

响应面分析法优化白术多糖超声提取工艺

目的 采用响应面分析法对白术多糖的提取工艺进行优化。方法 以白术多糖得率为评价指标,以湖南龙山白术为原料,探讨白术颗粒度、提取温度、料液比和提取时间对白术多糖超声提取得率的影响。结果 白术多糖超声提取的最佳工艺为,以水为提取溶剂,白术颗粒的粒度为20目,料液比为1∶15,提取温度为80℃,提取时间为70 min。在此条件下,白术多糖提取得率达12.44%。结论 该研究为武陵山区开发利用白术多糖资源及工业化生产提供了理论依据。     

响应面法优化连翘苷超声提取工艺

在单因素实验基础上,采用Box-Behnken中心组合设计原理优化提取溶剂甲醇的浓度、超声提取时间、超声功率和液料比.以连翘苷得率为响应值进行多元二次响应回归分析,得到连翘苷的最佳提取工艺条件为:甲醇浓度100%,超声提取时间27min,超声功率416 W,液料比12:1.回归模型预测最优条件下连翘苷得率为0.082%,验证值为0.080%,与预测值的相对误差为2.39%.     

响应面分析法优选南方红豆杉中多糖的提取工艺

目的:优选南方红豆杉中多糖的提取工艺。方法:以多糖提取率为评价指标,以pH、提取时间、提取温度、液料比为考察因素,采用单因素试验与响应面分析相结合的方法,优选南方红豆杉中多糖的提取工艺。结果:最佳提取工艺为设定pH为5,提取时间为20 min,提取温度为60℃,液料比为30∶1(V/V);在该工艺条件下,多糖提取率为0.68%。结论:所选工艺合理、可行,可用于南方红豆杉中多糖的提取。     

Box-Behnken响应面法优化毛蕊花糖苷离心萃取工艺

目的 采用离心萃取系统萃取毛蕊花糖苷提取物。方法 通过单因素试验，研究油相中毛蕊花糖苷含量、流量、油水相比、萃取次数、转速、pH对毛蕊花糖苷萃取率的影响。利用响应面Box-Behnken实验设计探究油相中毛蕊花糖苷含量、流量、转速、油水相比对毛蕊花糖苷萃取率的影响并优化最优工艺参数。结果 单因素试验结果表明：萃取最佳条件为油相中毛蕊花糖苷含量为19.20 mg·mL^-1，转速为48 Hz，流量为300 mL·min^-1，油相与水相比=1∶1，乙酸加入量为2%，萃取次数为3次。通过响应面分析发现各因素对毛蕊花糖苷萃取率的影响顺序为油相中毛蕊花糖苷含量>油水相比>流量>转速；在最佳条件下：油相中毛蕊花糖苷含量21.50 mg·mL^-1、转速48 Hz、流量290 mL·min^-1、油水相比1∶1，3次平行试验得到的毛蕊花糖苷萃取率分别达82.49%，79.38%，81.76%，与预测值80.03％的相对误差分别为3.07%，0.81%，2.16%。结论 此方法能够有效对毛蕊花糖苷进行纯化，为毛蕊花糖苷的开发利用提供理论依据。     

响应面法优化广金钱草多糖的酶法提取工艺

目的研究酶法提取广金钱草多糖的最佳工艺条件。方法在单因素实验的基础上,根据Box-Behnken试验设计原理,采用加权评分法以广金钱草提取物中多糖得率和多糖含量为综合评价指标,建立二次多项式回归方程的预测模型．构建以综合评分为响应值的响应曲面和等高线图,考察酶解温度、酶解时间和酶用量3个主要因素对多糖提取效果的影响以及因素间的交互作用。结果回归模型拟合性良好,置信度较高。酶法提取广金钱草多糖的最佳工艺条件为：料液比1：40,pH5．5,酶解温度49．94℃,酶解时间1．53h,酶添加量为2．00％。主要因素对提取效果的影响程度为：酶解时间〉酶解温度〉酶用量。各因素之间存在交互作用,且达到极显著水平。结论酶法处理可提高广金钱草多糖的提取效率。本实验优选的工艺稳定可行,可为相关生产加工企业提供有益的参考。     

响应面法优化葛根蛋白的提取工艺

目的:以单因素实验和响应面法优选葛根总蛋白的提取工艺.方法:采用Tris-HCl溶液提取葛根总蛋白;Folin-酚法测定提取液中的蛋白质含量;凯氏定氮法测定葛根粉中蛋白质含量及提取率.以葛根蛋白提取率为指标,以提取液的pH、提取温度、液料比、Tris-HCl浓度、提取时间为因素,通过单因素实验确定因素水平,利用响应面法,通过三因素(提取液pH、提取温度、液料比)三水平实验设计,对葛根蛋白的提取条件进行优化,最终优化出葛根药材蛋白质的最佳提取条件.结果:葛根蛋白提取的最优条件为:提取时间60 min,Tris-HCl浓度为50 mmol·L-1,pH 8.6,料液温度为48℃,液料比为22:1(mL·g-1),蛋白提取率为35.33%.结论:该优化工艺收率高,具有较好的稳定性和工艺可行性.     

响应面法优化缓解体力疲劳口服液的提取工艺

目的 优化缓解体力疲劳口服液的提取工艺,为保健食品缓解体力疲劳口服液的制备和质量控制提供依据。方法 以黄芪甲苷、总皂苷、粗多糖含量为指标,在单因素试验的基础上,通过响应面法考察料液比、提取时间和提取次数对缓解体力疲劳口服液提取效果的影响,从而优化提取工艺。结果 通过响应面设计试验,综合考察3种有效成分的含量,得到最佳提取工艺为加水量12倍、提取2次,每次1.5 h。在此工艺条件下,提取黄芪甲苷、总皂苷、粗多糖含量分别为0.110 4,5.112 3,16.502 9 mg·mL^-1,与预测值总体吻合。结论 通过响应面设计的提取工艺合理可行,含量测定结果可靠,为缓解体力疲劳口服液的提取制备和质量控制提供实验依据。     

响应面法优化白囊耙齿菌多糖提取条件

采用响应面法优化白囊耙齿菌多糖的提取条件.以提取温度、提取时间、水料比(v/w)为影响因素,在单因素试验的基础上,应用Box-Behnken中心组合方法进行三因素三水平试验,以多糖浸出率为响应值,进行响应面分析.结果自囊耙齿菌多糖提取的最佳工艺条件为:提取温度94.7℃,提取时间3.3h,水料比62:1,白囊耙齿菌多精浸出率预测为16.63%,验证值为16.34%,与预测值的相对误差为1.77%.     

达托霉素发酵培养基的响应面法优化

采用Plackett-Bumaan设计、最陡爬坡试验与响应面设计相结合的方法优化达托霉素发酵培养基组成,利用Design Expert 7.0软件设计试验并分析数据.结果表明,培养基中的糊精、酵母粉、酪蛋白水解物是影响达托霉素产量的主要因素.优化后的培养基组成/g·L~(-1)为:糊精10.6,酵母粉1.6,酪蛋白水解物1.3,硫酸钾8,L-门冬氨酸1.5;pH 6.5.在此条件下,达托霉素产量为37.16 me,/L.进一步优化前体癸酸的添加量,最终达托霉素产量达46.54 mg/L.     

响应面法优化胡柚幼果中柚皮苷与新橙皮苷的提取工艺

目的 优选胡柚幼果中柚皮苷与新橙皮苷的提取工艺。方法 在单因素试验的基础上,对乙醇浓度、料液比、提取时间3个因素进行响应面Box-Behnken中心组合设计优化,得到最佳提取工艺。结果 最佳提取工艺条件为乙醇浓度60%、料液比1：10、提取时间1.8 h、回流提取2次,在此条件下柚皮苷与新橙皮苷的总得率为23.44%。结论 本提取工艺方法简单、合理、稳定,为工业化生产提供了一定的依据。