TSH受体基因突变致先天性甲状腺功能减退症一例及其家系分析

目的 研究先天性甲状腺功能减退症（甲减）患者的TSH受体（TSHR）基因突变与家系遗传规律。方法 用TKM法提取18例先天性甲减患者、35名正常对照者外周血白细胞DNA，PCR-SSCP分析TSHR基因第1、4、6、10号外显子，突变经正反向测序证实。分析先证者家系成员TSHR基因与甲状腺功能情况。结果 发现1例先天性甲减患儿在TSHR基因第10号外显子有2个位点纯合子突变：450位密码子CGC置换为CAC，Arg450→His（R450H）；727位密码子GAC置换为GAG，Asp727→Glu（D727E）。调查家系成员10人，6人为R450H／D727E复合杂合子，以女性携带为主，先证者的父母均为复合杂合子，杂合子中5人血清sTSH轻度升高，为亚临床甲状腺功能减退症（亚临床甲减）。结论 R450H／D727E纯合子突变导致先天性甲减，R450H／D727E杂合子突变可发生亚临床甲减。     

脂蛋白脂肪酶内含子3C→T突变

为筛查中国人群脂蛋白脂肪酶基因的突变情况，并探讨这些突变对脂蛋白代谢可能产生的影响，研究者利用聚合酶链反应一单链构象多态性分析技术，对140例人群(高甘油三酯血症组51例，正常对照组89例)的脂蛋白脂肪酶基因进行了突变筛查，对可疑突变的扩增样品进行DNA序列测定。结果在外显子4扩增片段(包括内含子--外显子交界区)有2例可疑突变被检出，经测序证实均为内含子3受位剪接住点上游6bp的C→T转换突变杂合子。由于该突变仅见于重度高甘油三酯血症患者，结合国内外相关文献，研究者认为我国人群存在脂蛋白脂肪酶基因内含子3受位剪接位点的C→T突变，该突变可能是我国人群高甘油三酯血症的遗传易患因子。     

心脏肌球蛋白结合蛋白C基因1811518116insGCAGG突变导致肥厚型心肌病特点分析

目的观察肥厚型心肌病（HCM）患者中心脏肌球蛋白结合蛋白C基因（MYBPC3）插入突变的特点。方法在100例HCM患者中对MYBPC3的所有外显子及其侧翼内含子序列进行基因扫描,聚合酶链反应（PCR）扩增目的片段,双脱氧末段终止法测序。对突变患者进行家系调查,分析其表型特点。结果在一先证者及其一个家系成员中发现一个位于外显子29的五核苷酸插入突变（18115-18116ins-GCAGG）,序列分析发现1032位缬氨酸后发生了移码突变（p.Vall032fs）,造成先证者60岁发病,超声心动图上表现为室间隔重度不对称性心肌肥厚（35mm）。结论插入突变是MYBPC3基因突变的特点,18115-18116insGCAGG导致的HCM表型发病晚,心肌肥厚程度重。     

MEN1基因第9号内含子突变致多发性内分泌腺瘤病1型一例及其家系研究

研究1个多发性内分泌腺瘤Ⅰ型( MEN1)家系的MEN1基因突变情况,并初步探讨该突变所导致疾病发生的可能机制.提取患者及其家系成员外J周血及相关肿瘤组织基因组DNA,运用PCR扩增MEN1基因外显子及其周边内含子区域,测序,亚克隆测序鉴定其杂合性.进一步免疫组化观察肿瘤组织中menin蛋白的表达.先证者及2个家系成员MEN1基因第9号内含子存在一种杂合缺失突变,IVS9+1_11delGTGAGGGAC AG.并首次证实先证者甲状旁腺肿瘤组织中menin蛋白表达缺失.MEN1基因第9号内含子起始处杂合缺失突变,IVS9+1_11delGTGAGGGACAG,为新发现的中国人MEN1致病基因类型.该突变可能影响MEN1 mRNA的剪接,所合成的menin蛋白易降解及表达缺失,最终导致肿瘤发生.     

激活转录因子6基因Ala145Pro变异与中国人糖脂代谢的关联研究

目的研究激活转录因子6（ATF6）基因Ala145Pro（GCG→CCG）变异与中国人糖脂代谢的相关性。方法对689例上海地区中国人（其中糖调节正常者361名，新诊断2型糖尿病患者250例，早发2型糖尿病家系先证者78例）采用PCR-RFLP检测ATF6基因Ala145Pro变异，并测定所选人群的糖脂代谢相关临床指标。结果（1）等位基因频率分布在早发2型糖尿病家系先证者和糖调节正常人群中差异有统计学意义（P=0．035），糖调节正常人群中C等位基因频率较高；（2）糖调节正常人群中，CC＋CG基因型携带者高密度脂蛋白胆固醇较GG基因型者低（P=0．014）；（3）新诊断2型糖尿病患者中，CC＋CG基因型携带者低密度脂蛋白胆固醇较GG基因型者高（P=0．041）。结论ATF6基因与中国人糖脂代谢相关。     

组织非特异性碱性磷酸酶基因突变与低磷酸酶血症：2个新突变位点

目的：对2例低磷酸酶血症（HPP）患者及家系进行分析和基因突变检测,拓展国人HPP致病基因库,探讨HPP的致病机制。方法对HPP家系先证者和其父母进行生化指标[血常规、肝肾功能、碱性磷酸酶（ALP）、甲状旁腺素（PTH）、钙、磷等]和骨密度检测。同时对所有研究对象进行alkaline phospatase,live/bone/kidney（ALPL）基因全部12个外显子和外显子内含子交界区直接测序。结果来自家系1的先证者为36岁成年男性,身高131.0cm,体重35.0kg。X线提示多发性胸腰椎骨折和骨盆畸形,生化检测示血清ALP27U/L。测序发现ALPL基因6号外显子532位杂合突变（c.532T＞C）,致ALPL成熟多肽中酪氨酸被组氨酸替代。该先证者母亲身高140.5cm,体重39.5kg,血清ALP30U/L,基因测序证明也是该杂合突变携带者。来自家系2的先证者5岁,其外祖父母为近亲结婚。该患儿身高100.0cm,体重18kg。血清ALP55U/L[低于同龄儿童正常范围（＜10岁）75～344U/L],牙齿发育不良并脱落,有左股骨中下端骨折史。测序发现该患儿存在ALPL基因2个错义突变,其中9号外显子c.871G＞A突变。4号外显子269位突变（c.269A＞G）是一个新的错义突变,该突变导致成熟ALPL多肽中天冬氨酸被甘氨酸所替代。该患儿母亲亦是4号外显子c.269A＞G错义突变携带者,但其生化指标正常,无骨骼和牙齿异常。结论ALPL基因6号外显子c.532T＞C突变和4号外显子c.269A＞G突变是以往未曾报道过的新错义突变,为上述2例HPP患者致病基因。     

以肝肿大为主要表现的Ⅰa型糖原累积病家系研究分析

目的对一个以肝肿大为主要表现的Ⅰa型糖原累积病（GSD 1a）家系进行基因突变研究和分析。方法收集GSDⅠa患者家系资料和亲属外周血标本，PCR法扩增葡萄糖-6-磷酸酶（G-6-Pase）基因的5个外显子，并测序比对基因序列的变化。结果结合临床表现、肝组织学检查及家系分析，患者诊断明确。基因结构分析显示，患者p6-Pase基因5号外显子密码727G→T／1071C→A（A331E）复合突变。在其父辈家系中存在5号外显子727G→T杂合子突变，导致剪切点突变；其母辈家系中存在5号外显子1071C→A杂合子突变，导致第331位密码子编码的A转变为E。结论患者的祖父及外祖母为首发突变者。727G→T／1071C→A（A331E）复合突变是该家系发病的分子生物学基础。     

纤维蛋白原α链剪切位点IVS2＋1G〉C突变导致的遗传性低纤维蛋白原血症

目的：探讨遗传性低纤维蛋白原（Fg）血症的分子发病机制。方法：检测凝血指标以明确诊断；用DNA直接测序法对患者Fg基因FGA、FGB和FGG的所有外显子及其侧翼序列进行测序以寻找基因突变，对有突变的序列反向测序证实；通过逆转录结合巢式PCR扩增的方法，检测患者外周血中的Fg异位转录产物；构建含有突变点的突变型FGA小基因（minigene）质粒和野生型FGA小基因质粒，将2种质粒分别转染人胚肾（HEK）293T细胞，抽提RNA．逆转录PCR（RT—PCR）后TA克隆测序。结果：先证者呈FGA基因剪切位点IVS2＋1G〉C杂合突变；对于该突变，逆转录结合巢式PCR的产物经克隆后测序只检测到正常转录本，而没有发现异常转录本：突变型FGA小基因质粒转染HEK293T细胞后．抽提RNA再经RT-PCR、TA克隆、测序，揭示剪接过程中发生了FGA基因2号内含子滞留，导致终止密码的提前出现．从而使异常转录的mRNA在体内很快被降解。结论：异位转录结合体外表达证明先证者FGA基因剪切位点IVS2＋1G〉C突变导致异常转录mRNA在体内很快被降解，是先证者低Fg血症的原因之一。     

心脏型肌球蛋白结合蛋白C基因缺失突变导致肥厚型心肌病特点分析

目的观察肥厚型心肌病（HCM）患者心脏型肌球蛋白结合蛋白C基因（MYBPC3）缺失突变及其表型的特点。方法在100例HCM患者中对MYBPC3的所有外显子及其侧翼内含子序列进行基因扫描,聚合酶链反应（PCR）扩增目的片段,双脱氧末段终止法测序。对突变患者进行家系调查,分析其表型特点。结果在两例先证者中分别发现两个缺失突变14262_14264delAAG和14364delG,均位于外显子25。表型分析发现两例先证者均有劳力性胸闷、胸痛和晕厥史,超声心动图表现为不对称性肥厚（室间隔/左室后壁分别为2.5、3.2）,但SAM征阴性,发病年龄分别为38岁和29岁。结论缺失突变是MYBPC3基因突变的常见形式,14262_14264delAAG或14364delG突变导致的HCM表现为不对称性心肌肥厚,患者容易出现晕厥等症状,应该警惕心源性猝死的发生。     

1例携带HFE基因剪切突变的遗传性血色病患者家系调查

目的探讨1例新型的遗传性血色病(HH)患者家系HFE基因突变形式。方法对确诊的1例HH患者分析其与5位相关亲属的血色病基因,提取血液基因组DNA,采用PCR扩增相关基因HFE、HJV、HAMP、转铁蛋白受体(TfR)2、SLC40A1的外显子、内含子剪切序列,琼脂糖凝胶电泳、纯化后,双向直接测序检测突变位点。结果先证者肝功能异常,血清铁(SI)、总铁结合力(TIBC)、铁蛋白(SF)、转铁蛋白饱和度(TS)均升高,HFE基因外显子EXON2的区间序列2号内含子第4个碱基出现T→C纯合突变(IVs 2+4T→C,C/C纯合,splicing,异常),HJV、HAMP、TfR2、SLC40A1未见异常,患者儿子出现与其相同纯合突变,3位亲属存在杂合突变,1位亲属无异常突变。结论基因检测在血色病诊断中起着重要作用,HFE基因IVs 2+4T→C突变可能是新型的中国HH的致病遗传基因突变类型。     

家族性Graves''病和桥本甲状腺炎患者的家系调查

目的探索家族性Ｇｒａｖｅｓ’病（ＧＤ）和桥本甲状腺炎（ＨＴ）的遗传方式及发病相关性。方法按ＷＨＯ标准，诊断有ＧＤ或ＨＴ家族史的ＧＤ先证者２８１例，ＨＴ先证者８２例，与先证者性别、年龄相当的对照８００名，进行三代家族史和血统成员的调查研究。结果系谱分析显示：ＧＤ先证者家系组ＧＤ和ＨＴ的患病率是对照的９３．３倍和５．７倍（１９．６％对０．２１％和０．８０％对０．１４％），ＨＴ先证者家系组ＧＤ和ＨＴ的患病率（７．９％、１１．９％）是对照的３７．６倍和８５．０倍。ＧＤ先证者家系组与ＨＴ先证者家系组的一、二级亲属患ＧＤ的频率相近（１７．５％对１３．３％、５．７％对５．１％），且都极显著的高于对照组（０．２７％、０．２２％）。２２．４％ＧＤ先证者家系中患者数≥３，先证者同胞中，ＧＤ患病率为４５．９％。在双亲或其中之一为患者的３１个核心家系，ＧＤ符合常染色体显性（ＡＤ）遗传。家族性ＧＤ的遗传度为１２２．３±２．７７％。结论家族性ＧＤ和ＨＴ均为多基因遗传病，但ＧＤ有一个显性主基因存在，部分家系表现ＡＤ遗传。ＧＤ和ＨＴ的遗传基础有较多联系。     

1例胱氨酸尿症家系的临床表型和基因型分析

目的：通过分析1例胱氨酸尿症家系,探讨胱氨酸尿症的临床特征、诊治要点及遗传因素。方法 ：回顾分析1例胱氨酸尿症家系病例资料,先证者为28岁男性。通过尿沉渣镜检、能谱CT测定先证者结石成分,提取先证者及家系成员外周血DNA样本,利用目标序列捕获高通量测序技术筛查突变基因。结果：该家系先证者首诊于15岁。主要临床表现为复发性左侧泌尿道结石合并蛋白尿,其母亲主要表现为蛋白尿,父亲无肾脏受累症状。测序结果示先证者存在溶质载体家族3成员1(solute carrier family 3, member 1,SLC3A1)基因复合杂合突变,其中包括移码突变NM＿000341:exon3:c.703delG（母亲为该杂合突变携带者）及错义突变NM＿000341:exon8:c.1366C>T（父亲为该杂合突变携带者）。两突变均判定为疑似致病性变异。先证者有多次输尿管镜取石术史,尿沉渣镜检中可找到特异性胱氨酸六边形晶体,能谱CT结石成分测定为L-胱氨酸。先证者确诊为胱氨酸尿症后,予碱化尿液、降蛋白尿等治疗,目前病情稳定。结论：尿沉渣镜检中找到六边形晶体是胱氨酸尿症的特异性诊断手段,胱氨酸能谱CT...     

湖北省土家族β地中海贫血IVS—II—654（C→T）和CD41—42（—TTCT）…

报道采用血红蛋白理化性质筛查实验，检出湖北土家族β地中海贫血２个家系，继用ＰＣＲ／ＡＳＯ探针斑点杂交技术，确诊先证１为ＩＶＳ－Ⅱ－６５４（Ｃ→Ｔ）／ＩＶＳ－Ⅱ－６５４（Ｃ→Ｔ）纯合子，其父母分别为ＩＶＳ－Ⅱ－６５４（Ｃ→Ｔ）／Ａ杂合子。先证ｚ为ＣＤ４１－４２（－ＴＴＣＴ）／ＩＶＳ－Ⅱ－６５４（Ｃ→Ｔ）双重杂合子，其父为ＣＤ４１－４２（－ＴＴＣＴ）／Ａ杂合子，其母为ＩＶＳ－Ⅱ－６５４（Ｃ→Ｔ）／Ａ杂     

家族性糖尿病人群中线粒体ND-1基因点突变的分析研究

目的了解线粒体ND-1基因mt3316G→A、mt3394T→C变异在中国家族性糖尿病人群中的发生率及其临床特点。方法应用PCR-RFLP结合直接测序方法对随机抽取的无亲缘关系的770个糖尿病家系的先证者及309例非糖尿病对照者进行线粒体基因mt3316G→A、mt3394T→C变异的筛查。结果在糖尿病先证者组中发现17例（2.21%）mt3316G→A变异,18例（2.34%）mt3394T→C变异;在正常对照组中分别发现5例（1.62%）和6例（1.94%）变异携带者,变异的发生率在两组间差异无统计学意义。在糖尿病先证者组见到2例同时携带上述两种变异者。伴mt3316G→A或mt3394T→C突变的糖尿病组与无该变异的糖尿病组之间的临床特点（年龄、体质指数、胰岛素抵抗指数）比较差异无统计学意义。结论线粒体ND-1基因mt3316G→A,mt3394T→C变异可能不是中国人线粒体糖尿病发病的致病原因,而是中国人线粒体的基因多态。     

Ⅱ型常染色体显性遗传骨硬化症一个家系的临床和遗传学分析

目的检测常染色体显性遗传性骨硬化症一个家系氯离子通道7（chloride channel 7,CLCN7）基因的突变情况。方法收集-骨硬化症家系中2例患者及先证者父母共4人的血液标本,提取基因组DNA,用PCR扩增CLCN7外显子并对所有外显子进行测序分析。结果2例患者及先证者父亲均存在CLCN7第10号外显子856位核苷酸C变成T,导致286位的精氨酸（Arg）被色氨酸（Trp）代替（R286W）,为一已知突变;先证者母亲无此突变。存在CLCN7突变的3人临床表现不同,提示该遗传疾病存在外显不全。结论CLC7R286W突变是导致该家系骨硬化症的致病原因。     

湖北省土家族β地中海贫血ⅣS-Ⅱ-654(C→T)和CD41-42(-TTCT)两个家系

报道采用血红蛋白理化性质筛查实验,检出湖北土家族β地中海贫血2个家系,继用PCR/ASO探针斑点杂交技术,确诊先证1为ⅣS-Ⅱ-654(C→T)/ⅣS-Ⅱ-654(C-T)纯合子,其父母分别为ⅣS-Ⅱ-654(C→T)/A杂合子.先证z为CD41-42(-TTCT)ⅣS-Ⅱ-654(C→T)双重杂合子,其父为CD41-42(-TTCT)/A杂合子,其母为ⅣS-Ⅱ-654(C→T)/A杂合子.     

一个2型糖尿病家系ATP敏感性钾通道基因突变分析

目的了解ATP敏感性钾通道（KATP）基因突变在一个2型糖尿病（T2DM）家系中的发生情况。方法提取家系成员的外周血DNA，用PCR扩增磺酰脲类受体1（SUR-1）基因第16、18、31外显子和KIR 6.2基因，用单链构象多态性分析（SSCP）检测PCR产物，对SSCP电泳结果异常者进行DNA序列分析。结果（1）在17名家系成员中，未检测到SUR-1基因第18号外显子ACC→ACT和第31外显子AGG→AGA突变；（2）SUR-1基因第16号外显子-3C→T的T等位基因频率为65％，比普通T2DM人群高8％；（3）KIR 6.2基因E23K的K等位基因频率38％，比普通T2DM人群低3％。结论SUR-1基因第16号外显子-3C→T多态性可能与饮食、环境等因素共同作用，参与该家系T2DM的发生和发展。     

新突变致复合杂合子家族性高胆固醇血症家系的基因检测

目的对临床诊断为遗传性高胆固醇血症纯合子患者所在家系成员的相关基因进行突变检测和分析,探讨该病的分子诊断方法和发病的可能分子机制。方法以该家系中3代共6人的基因组DNA为模板,用PCR对低密度脂蛋白受体（LDLR）基因的全部18个外显子和启动子以及载脂蛋白B-100（Apo B-100）基因3500-3531区域进行扩增,琼脂糖凝胶电泳鉴定后对PCR产物直接测序。测序结果与Gene Bank中该基因的正常序列对比找出突变,结合该家系成员临床表型证实突变。结果在ApoB-100的3500-3531区域未发现突变,而在先证者LDLR基因的第4外显子发现新的点突变685delA杂合性腺嘌呤缺失和386A〉G杂合错义突变,其父存在685delA杂合性腺嘌呤缺失,其母存在386A〉G杂合错义突变。结论证实家系先证者是存在LDLR突变的复合杂合子,发现的新的LDLR基因突变位点386A〉G和685delA分别来源于父系和母系的遗传,可能是该家系发病的分子基础。     

β肌球蛋白重链基因Asn391Thr突变导致家族性肥厚型心肌病的基因型与临床表型分析

目的研究家族性肥厚型心肌病（HCM）致病基因突变位点,分析基因型与临床表型的联系。方法利用靶向捕获加二代测序,对1个HCM家系的先证者进行26个致病基因的筛查。二代测序发现的突变,利用双脱氧末端终止法测序进行验证,并对家族中其他成员进行该突变位点的筛查,并分析其临床表型特点。结果遗传筛查发现先证者携带β肌球蛋白重链基因（MYH7）．c．1172A〉C（Asn391Thr）突变,该突变位于MYH7基因第12号外显子,导致β肌球蛋白重链的第391位氨基酸残基由天冬酰胺变为苏氨酸。该家系中接受调查的22例对象中8例携带MYH7基因Asn391Thr突变,其中6例患者均携带该突变,突变与疾病呈共分离,且在307名对照者中没有检出。携带者中有3例出现呼吸困难、心悸、胸痛、黑噱等心功能不全表现,所有患者发病年龄均小于40岁,其中Ⅱ9小于8岁（见图1）。家系中有4人早逝（〈50岁）,其中3人确诊为HCM。结论MYH7基因Asn391Thr错义突变为HCM的一个恶性致病突变,携带该突变的患者应进行较积极的治疗和猝死预防。     

中国一进行性肌营养不良家系相关致病基因Dystrophin突变检测结果分析

目的 探讨进行性肌营养不良（DMD）家系相关致病基因Dystrophin基因突变情况.方法 收集一个DMD家系的临床资料,采用聚合酶链反应及直接测序法对此家系成员进行Dystrophin基因突变检测,同时对140例家系外健康对照者的该基因位点进行限制性核酸内切酶分析（PELP）.结果 在DMD家系中先证者（DMD患者1例）发现了一个纯合变异基因,即Dystrophin基因59号外显子上发现一个错义变异（G9017A）,导致代表精氨酸的2937位密码子转变为为谷氨酰胺（R2937Q）.在健康对照者中未发现此位点的变异.结论 在一个中国DMD家系先证者的Dystrophin基因上发现了一个尚未报道的基因突变位点.