链酶亲和素-生物素ELISA检测人心肌肌钙蛋白T

目的 建立人心肌肌钙蛋白T (cTnT)链酶亲和素-生物素（SAB）双抗体夹心酶联免疫分析（ELISA）方法,诊断急性心肌损伤性疾病。方法 以固相化单抗3F7捕捉样品中cTnT,生物素化3H12单抗为检测抗体,加入SA-HRP,显色。根据已知不同浓度标准cTnT显色后D(l)值的标准曲线,检测待测样品cTnT含量。结果 cTnT的最低检测值为0.15 ng/ml,批内变异系数为3.8%,批间变异系数为11.2%,回收率为98%。35例急性心肌损伤患者cTnT含量为(0.68±0.17) ng/ml,明显高于52例正常人对照组(0.20±0.03) ng/ml(P<0.01)。结论 本方法灵敏、特异、稳定,可用于临床急性心肌损伤疾病的诊断。     

ABC 法与 ELISA 法检测巨细胞病毒 IgM 抗体的比较研究

本文应用 ABC 法对89份新生儿脐血、103份围产期妇女及126份未婚育龄妇女进行血清抗巨细胞病毒特异性 IgM 抗体测定,同时与常规 ELISA 法做比较。三组人群的阳性检出率分别为4.49%,32.02%和17.46%。在新生儿和晚期妊娠妇女组中,民汉检出率存在显著性差异(P<0.05),且围产期妇女检出率高于对照组(C组)。两法同为阳性患者 ABC 法检出的抗体滴度为 ELISA 法的2.08倍。12例 ELISA法阴性者 ABC 法阳性,提示该法对抗体水平较低的 CMV 患者更具有诊断价值。实验结果表明:ABC 法在测定巨细胞病毒 IgM 较 ELISA 法敏感,且特异、简单和快速。     

应用ABC-ELISA和SPA-ELISA诊断华枝睾吸虫病的初步比较

本文应用生物素-亲和素过氧化物酶联免疫吸附试验(ABC—ELISA)检测华枝睾吸虫病患者血清IgG抗体,并与常规SPA-ELISA比较。前法与粪检的阳性和阴性符合率分别为100％和87％,后法分为100％和95.7％。用SPA-ELISA检测12份日本血吸虫病兔血清未见交叉反应。由于SPA-ELISA操作简便,试剂价廉,因此更适宜于基层单位推广使用。     

新生血管抑制剂VEGFR2-Fc的检测方法建立与方法学验证

目的建立重组人血管内皮生长因子受体Fc融合蛋白(VEGFR2-Fc)血药浓度的检测方法并进行验证,为该药物的动力学研究提供方法学。方法以羊抗人IgG-Fc作为捕获抗体,以生物素标记羊抗人VEGF R2为检测抗体,建立双抗夹心的BA-ELISA检测方法,并开展方法学试验。结果标准品的线性范围为28～0.4375ng/ml,相关系数达到0.999;质控浓度(20ng/ml、10ng/ml和5ng/ml)的回收率分别为103.159%、116.092%和102.528%,板内和板间精密度分别是8.87%、3.27%、15.41%和12.38%、7.97%、16.74%;灵敏度为0.25ng/ml。结论建立的BA-ELISA检测VEGFR2-Fc方法符合生物技术药物的方法学标准,可以用于体内药代动力学研究的分析方法。     

亲和素-生物素酶复合物酶联免疫吸附技术应用于检测HBsAg的研究

作者应用免疫化学 ABC-ELISA 作人群血清中 HBsAg 的检测,验证了该法在检测 HBsAg 方面具有高敏感性。ABC-ELISA 与 ELISA、R-PHA 及 RICEPA 三种方法相比,HBsAg 的检出率按其敏感程度高低为 ABC-ELISA>ELISA>R-PHA>RICEPA。ABC-ELISA 与经典 ELISA单独相比,其HBsAg 检出率由 ELISA的16.07％提高到 ABC-ELISA 的23.58％,并且可将ELISA漏检的32例 HBsAg 携带者检出。此外,该法在检测 HBsAg中还具有特异性高,操作简便和快速等优点。     

生物素—链霉亲和素系统在检测MHV抗体中的应用

采用生物素—链霉亲和素系统(BSA)试剂建立测定MHV抗体的BSA-ELISA法,并与SPA-ELISA法比较。结果表明,前者本底极低,敏感性比后者提高4倍,阳性检出率提高1倍,且经阻断试验证明其特异性高。因此,该法在检测实验动物的特异性抗体方面,具有很大的应用潜力。     

BA—ELISA检测血清HBcAg的实验研究

用生物素标记抗HBc-IgG和亲和素标记HRP,并选用3mol/L KSCN作裂解剂,建立了检测血清HBcAg的BA-ELISA方法。该法不仅特异、敏感、稳定,而且简化操作程序,缩短检测时间,有利于在临床上推广应用。     

IL-2单克隆抗体夹心BAS-ELISA测定法的建立及应用

白细胞介素一l（IL－2）生物学检测方法多数操作繁琐，稳定性差，有些方法还需将外周血淋巴细胞体外培养进行诱生，但IL－2体外诱生量与体内自然释放量不一致，难以反映机体血清中IL－2实际水平。为此，我们建立了IL－2单克隆抗体的生物素一链霉亲和素测定系统（简称BAS－ELISA），现介绍如下。l材料与方法1．l材料：健康人血清标本来自献血员，患者血清标本取自同济医院。BALB／C小鼠购自湖北省医科院动物中心。重组人IL－2纯品由中科院上海生化所刘新垣教授提供。其余常规试剂和材料略。1．2抗人IL－2MCAb的制备和鉴定：用人…     

链酶亲和素—生物素ELISA检测人心肌肌钙蛋白T

目的 建立人心肌肌钙蛋白Ｔ（ｃＴｎＴ）链酶亲和素－生物素（ＳＡＢ）双抗体夹心酶联免疫分析（ＥＬＩＳＡ）方法。诊断急性心肌损伤性疾病。方法 以固相化单抗３Ｆ７捕捉样品中ｃＴｎＴ,生物素化３１１１２单抗为检测抗体,加入ＳＡ－ＨＲＰ,显色。根据已知不同浓度标准ｃＴｎＴ显色后Ｄ（λ）值的标准曲线,检测待测样品ｃＴｎＴ含量。结果 ｃＴｎＴ的最低检测值为０．１５ｎｇ／ｍｌ,批内变异系数为３．８％,批间变异系数     

猴B病毒抗体ELISA检测方法的建立和应用研究

目的　建立猴B病毒抗体ELISA检测方法。方法　采用方阵滴定法 ,比较不同血清稀释度、3种酶结合物、2种抗原对检测结果的影响 ,与国外同类参比实验室进行检测结果的比较 ,确定ELISA法的最佳实验条件。结果　HSV抗原包被浓度 10 μg ml,抗人IgG HRP为 1∶2 0 0 0时 ;或B病毒抗原包被浓度 10 μg ml,抗人IgG HRP为1∶4 0 0 0时 ,阴性血清和阳性血清的A值差距最大。与国外B病毒检测专业实验室的检测结果符合率分别为98 0 2 %和 97 5 2 %。结论　建立了猴B病毒抗体的ELISA检测方法 ,提高了检测方法的准确性。     

Establishment and application of SPA-co-operated ELISA for detection of anti-HCV-IgM

Summary A staphylococus aureus protein A co-operated ELISA (SPA-ELISA) for the detection of anti-HCV-IgM has been established using HCV antigenic polypeptide, SPA-bearing germs and horseradish peroxidase labelled anti-human IgM. The specificity of SPA-ELISA has been confirmed by some substitution tests, blocking tests and destroying test with 2-mercaptoethanol. The results showed that the rate of anti-HCV-IgG in a group of patients with acute hepatitis and there were significant difference in anti-HCV-IgM was higher than that of anti-HCV-IgM detected rates between patients with acute hepatits and those with chronic hepatitis (32.26%,P<0.01). On the other hand, the positive rates of anti-HCV-IgM were 53.66 % and 63.41 % in transfusion associated hepatitis, 38.10 % and 42.86 % in sporadic hepatitis, 6.11 % and 16.33 % in people who have had active social activities, 40.00 % and 10.00% in a group of blood donors respectively. Furthermore, taking into account the characteristics of HCV polypeptide used, its easiness of manipulation, and elimination of the interference of anti-HCV-IgG in sera, the new SPA-ELISA is believed to be of practical value in clinical and epidemiological studies of hepatitis C.     

B病毒糖蛋白的原核表达及ELISA检测方法的建立

目的表达B病毒糖蛋白,筛选出具有较好检测敏感性和特异性的抗原或抗原组合,用以检测猴血清中的抗体。方法原核表达B病毒糖蛋白C,D和G,经纯化、复性后用蛋白印记验证其抗原性,建立ELISA法,对方法进行评价。结果3个表达抗原反应特异性较好;以BV-ELISA为标准,各抗原的检测敏感性分别是：BVgC-ELISA84.6％,BVgD-ELISA88.5％,BVgC＋gD-ELISA96.2％,检测特异性分别是：BVgC-ELISA93％,BVgD-ELISA85.7％,BVgC＋gD-ELISA64.3％。结论表达的3个BV重组抗原都具备作为替代抗原检测BV抗体的潜力。     

犬瘟热病毒（CDV）ELISA检测方法的建立与应用

目的 建立犬CDV抗体ELISA检测方法.方法培养vero细胞,接种CDV病毒,制备vero正常抗原和CDV特异抗原,滴定酶结合物和抗原最佳工作浓度,并进行精密性、敏感性、稳定性、特异性实验.结果正常、特异抗原和酶结合物最佳工作浓度分别为1∶32 000、10 μg/mL和1∶8 000;正常、特异抗原批内变异系数分别为9.1%和5.8%,批间平均变异系数分别为8.8%和6.6%;检测灵敏度为1∶2 560;与犬细小病毒(CPV)、犬肝炎病毒(ICHV)均无交叉反应.稳定性试验相对偏差小于25%.结论建立的ELISA方法重复性、稳定性好,特异性、敏感性强.可用于犬CDV抗体的检测.     

豚鼠弓形虫抗体ELISA检测方法的建立及应用

目的 建立以弓形虫重组抗原的豚鼠弓形虫抗体ELISA方法,并进行初步应用.方法 根据重组抗原的工作浓度包被酶标板,确定酶标二抗浓度,对方法的特异性、灵敏度、稳定性和重复性等进行测试.结果 确定酶标二抗最佳稀释度为1∶8000;与豚鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCM)、仙台病毒(SV)、肺炎病毒(PVM)及呼肠孤3型(Reo3)阳性血清均无交叉反应;对已知阳性血清的检测上限可达1∶2560;6个月的稳定性试验显示A490值的相对偏差均小于15％;批内变异系数(CV)5.7％ ～ 9.5％,批间变异系数(CV)1.9％～9.0％;对182份样本的检测表明豚鼠弓形虫抗体阳性率为7.14％(13/182),与IFA检测结果的符合率为100％,与商品化试剂盒的阳性符合率为92.3％,阴性符合率为100％.结论 建立的豚鼠弓形虫重组抗原ELISA检测方法可用以弓形虫抗体的常规检测.     

小鼠脑脊髓炎病毒标准血清制备及间接ELISA检测方法的应用

目的制备小鼠脑脊髓炎病毒（TMEV）标准血清,建立ELISA检测方法,实现一种病毒多种检测方法的比对研究。方法用TMEV感染3周龄SPF级BALB／c小鼠,制备免疫用抗原。分别在0、7、14d以腹腔注射的方式免疫SPF级6-8周龄BALB／c小鼠,免疫血清用IFA、IEA法进行鉴定;TMEV感染BHK-21细胞,制备EHSA抗原,确定酶结合物、抗原和标准阳性血清的最佳工作浓度,建立TMEVEHSA检测方法,进行敏感性、特异性、重复性和稳定性实验。结果制备TMEV免疫血清,以IFA、IEA测定血清效价分别为1：640和1：320,与痘苗病毒、小鼠肺炎病毒、小鼠肝炎病毒、仙台病毒和呼肠孤病毒-Ⅲ型均无交叉反应;建立了ELISA检测方法,确立了各种试剂的最佳工作浓度,其中酶结合物最佳工作浓度为1：10000,抗原为2.5μg／mL,阳性参考血清为1：200;EHSA检测灵敏度为1：3200。板内特异抗原、正常抗原平均变异系数为4.67％和5.7％,板间为4.39％和7.61％。稳定性实验相对偏差均小于20％。结论本研究制备的TMEV免疫血清可作为血清学检测方法中的标准质控血清;建立的ELISA方法重复性、稳定性好,敏感性和特异性强,可用于小鼠脑脊髓炎病毒血清抗体检测。     

氧氟沙星ELISA检测方法的建立

目的:建立氧氟沙星(OFL)的ELISA快速检测方法。方法:在制备抗OFL单克隆抗体基础上,采用间接竞争酶联免疫吸附方法(ciELISA)检测OFL的含量。结果:筛选得到特异性分泌抗OFL的单克隆抗体细胞株3G3和3D9,应用3G3所制备腹水建立的ciELISA工作曲线的线性范围为0.5-128 ng/mL(r2=0.985 8),最低检出浓度为0.5 ng/mL,半数抑制浓度IC50为7.0 ng/mL,样品加样回收率为84%~120%,批内变异系数和批间变异系数均小于15%。结论:本文建立的氧氟沙星ELISA检测法可满足OFL残留检测的需要。     

反向间接夹心ELISA法检测柯萨奇B组病毒的方法

建立反向间接夹心ＥＬＩＳＡ法，检测可疑为柯萨奇Ｂ组病毒性心肌炎患者血清中病毒特异性ＩｇＭ抗体，在对临床诊断为病毒性心肌炎的患者中，柯萨奇病毒ＩｇＭ抗体阳性率为２７％，结果说明该法在早期诊断病毒性心肌炎方面具有一定的价值。     

荧光定量PCR和ELISA测定乙肝病毒标志物2005例结果分析

目的　比较FQ PCR和ELISA测定乙肝病毒标志物的相关性。方法　FQ PCR测定HBVDNA ,ELISA测定HBV抗原、抗体。结果　在 2 0 0 5例血清样本中 ,FQ PCR阳性 2 6 4例 ,阳性率 13.1%。其中 12 6例HBeAg阳性者FQ PCR全部阳性 ,阳性率 10 0 %,HBVDNA平均拷贝数 3.1× 10 7;181例HBeAg阴性而HBsAg、HBcAb均阳性。样本FQ PCR132例阳性 ,阳性率 73%,HBVDNA平均拷贝数 2 .6× 10 4 ;8例单项抗HBc、5 90例单项抗HBs、776例乙肝五项指标全部阴性的样本 ,FQ PCR例阳性率分别为 12 .5 %、0 .34 %和 0 .38%。结论　两种方法均具有很好的相关性 ,都是诊断乙肝病毒感染的重要方法。FQ PCR定量测定HBVDNA ,有助于乙型肝炎的早期诊断、疗效观察和预后判断。     

H-1细小病毒抗体ELISA检测方法的建立与应用

目的建立H-1细小病毒抗体的ELISA检测方法,并进行初步应用。方法采用大鼠神经胶质瘤细胞C6培养大鼠H-1细小病毒,制备包被抗原,采用纯化后抗原建立该病毒的ELISA检测方法;将建立的方法与国外同类试剂盒进行比对,考察该方法的特异性和灵敏度。同时,应用该方法对35份大鼠血清进行检测。结果所建立的方法可检测出稀释1280倍的阳性血清;与犬细小病毒、小鼠微小病毒和猪细小病毒阳性血清均无交叉反应;与大鼠细小KRV病毒有交叉反应;对35份大鼠血清进行检测,结果均为阴性,与国外同类试剂盒结果一致。结论所建立的H-1细小病毒ELISA检测方法具有良好的种属特异性和灵敏度,可用于大鼠血清中H-1细小病毒抗体检测。     

定量检测ProMBP双抗体夹心ELISA方法的建立

目的:建立定量检测ProMBP的双抗体夹心ELISA方法.方法:采用Protein A亲和层析法纯化自制的抗ProMBP单克隆抗体(mAb),并行SDS-PAGE和Western blot对纯化抗体特性进行鉴定;利用简易过碘酸钠法对抗ProMBP mAb进行标记辣根过氧化物(HRP)后行抗体配对实验;通过方阵滴定法确定包被抗体和酶标抗体的最适工作浓度;以纯化的妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)/ProMBP抗原为标准品建立标准曲线;以重复性、灵敏性和回收性实验评价ELISA方法,初步对人血清中的ProMBP水平进行检测.结果:最佳配对组合为抗ProMBP mAb 4C6E5B9和HRP标记的抗ProMBP mAb 9G4A6G10,最适工作浓度分别为2.5 μg/ml和1:3 000,该方法的批内、批间变异系数分别为4.6%～6.2%和4.6%～10.5%,灵敏度达2.0 ng/ml,回收率为92%～113%.正常非妊娠血清、9～11周妊娠血清、15～17周妊娠血清ProMBP水平分别为(26.37±2.90)ng/ml、(357.71±33.60)ng/ml和(1088.77±58.13)ng/ml.结论:建立了一种可用于检测ProMBP的双抗体夹心ELISA方法.