子宫内膜异位症子宫内膜及输卵管细胞对鼠胚胎发育的影响

目的探讨子宫内膜异位症(内异症)子宫内膜及输卵管上皮细胞对小鼠胚胎体外发育的影响。方法小鼠2细胞期胚胎202个与卵巢巧克力囊肿患者术中切除的子宫内膜及输卵管上皮细胞共培养(实验组),314个与非卵巢巧克力囊肿患者子宫内膜及输卵管上皮细胞共培养作为对照。结果体外培养72~96h后,与对照组输卵管上皮细胞及子宫内膜共培养时有25.7%和26.2%的2细胞期胚胎发育到扩张期囊胚,与实验组输卵管上皮细胞共培养有25.9%发育到扩张期囊胚,二者无显著差异(P>0.05),而子宫内膜仅为11.1%,二者有显著差异(P<0.05)。结论内异症患者的输卵管上皮细胞对鼠早期胚胎体外发育无影响;子宫内膜对胚胎发育有明显的抑制作用,这可能与内异症的生育率降低有关。     

精液对子宫内膜蜕膜化及胚胎发育的影响

目的探讨精液成分对子宫内膜蜕膜化及胚胎发育的影响。方法(1)子宫内膜细胞蜕膜化后分别加入人精子及精浆共培养,观察蜕膜化的间质细胞生长情况并测定培养液中泌乳素(PRL)含量。(2)内膜培养8 d后,加入小鼠2-细胞期胚胎继续培养,观察胚胎的发育情况及内膜细胞生长情况。(3)建立假孕鼠模型,观察精液在胚胎移植中的作用。结果(1)精浆组子宫内膜间质细胞蜕膜化程度明显优于精子组和对照组,PRL分泌量有显著性差异(P<0.05),而精子组和对照组无明显差异。(2)精浆能促进8细胞以后的胚胎在子宫内膜细胞上的卵裂、囊胚形成、孵化、粘附和扩展性生长(P<0.05)。(3)胚胎移植过程中精子对植入率没有影响。结论(1)精浆能促进子宫内膜间质细胞蜕膜化,促进PRL的分泌。(2)精浆能促进胚胎在子宫内膜细胞共培养体系中的发育。(3)精浆与精液对囊胚着床作用可能相同,而精子在胚胎植入过程中没有作用。     

胞饮突与子宫内膜接受性

胞饮突是重要的子宫内膜接受性形态学方面的标志物,出现在植入窗期子宫内膜上皮细胞表面,与已知的其他子宫内膜接受性标志物出现的时机一致。孕酮刺激胞饮突的出现与成熟,雌二醇导致其萎缩。研究胞饮突的变化为体外受精(IVF)治疗、不明原因不育、反复自然流产的研究提供了新的思路。     

HOXA-10调节的围着床相关分子研究进展

HOXA -10子,介导胚胎种植的多个环节,如子宫内膜容受性的建立、胚胎的定位及粘附、胞饮突形成、蜕膜化、血管通透性等。然而HOXA- 10调节的下游分子知之甚少。差异显示技术,将有助于阐明其在着床中的分子生物学作用机制,并可能为生殖调节提供分子靶点。     

重组人钙调素对小鼠胚胎发育及凋亡的影响

目的探讨外源重组人钙调素(rhCAM)对小鼠早期胚胎体外发育及凋亡的影响。方法小鼠超促排卵,收集2-细胞胚胎置于含不同浓度rhCAM的IVF-30培养液中,观察并记录胚胎形态,TUNEL法检测囊胚细胞数及囊胚细胞凋亡情况。结果20μg/ml rhCAM组的胚胎体外培养48、72 h的囊胚形成率和孵化囊胚率均高于对照组,该组体外培养72 h囊胚细胞凋亡指数显著低于对照组。200μg/ml rhCAM组的胚胎囊胚形成率低于对照组,凋亡指数显著高于对照组。结论一定浓度的rhCAM可促进胚胎体外发育并可抑制胚胎细胞的凋亡。     

子宫内膜体外三维重建的形态学研究

目的 :探索建立子宫内膜体外三维模型的方法。方法 :将分离的子宫内膜基质细胞和上皮细胞依次种植于生物可降解胶原 -聚乳酸羟基乙酸共聚物杂交聚合网上下两面 ,光镜及扫描电镜观察细胞的生长状况。结果 :接种后第 5天子宫内膜细胞能在聚合网上融合生长 ,第 1 4天细胞融合成片 ,呈复层生长 ,形成三维结构。结论 :生物可降解的杂交聚合网作为支架可建立体外子宫内膜三维模型。     

孕酮调节子宫内膜的容受性

胚胎的种植是极其复杂的过程,涉及滋养细胞在子宫腔上皮定位、粘附,胚胎侵入子宫内膜基质伴随基质细胞蜕膜化,雌、孕激素受体的沉默等一系列变化和一系列基因的上调或下调,而孕酮在这一系列变化中发挥关键作用. 一、子宫内膜形态结构和功能 子宫内膜是由腔上皮、腺体上皮和基质细胞组成.子宫腔上皮是由纤毛细胞和具有微绒毛的无纤毛细胞构成,纤毛与无纤毛细胞之比为1∶20至1:30,纤毛细胞散在分布在无纤毛细胞之间,其密度和超微结构在整个黄体期相当恒定,反映了这些细胞不受各种激素的影响,而无纤毛细胞在黄体期则经历一系列变化,在孕酮的作用下失去微绒毛形成胞饮突,可能成为胚胎着床的部位[1].     

人早期胚胎体外培养中自体子宫内膜细胞共培养与序贯培养联合系统的建立

目的:建立早期胚胎与自体子宫内膜细胞共培养与序贯培养联合系统的培养方法。方法:黄体中期获取子宫内膜,细胞培养后程序化冻存。取卵前解冻自体内膜细胞,受精后将双原核胚转移至已更换分裂期胚胎培养液的自体子宫内膜细胞行共培养,取卵后72 h更换囊胚培养液行共培养。结果:人黄体中期子宫内膜有良好的体外培养活力,程序化冷冻与快速复温后细胞存活高,自体胚胎共培养的应用比率为74.04%。种植前各时期早期胚胎联合应用序贯培养液,在自体内膜细胞上生长良好。建立联合培养系统的临床妊娠率68.83%,种植率44.23%。结论:人早期胚胎与自体子宫内膜细胞共培养联合序贯培养系统的建立,为早期胚胎体外培养的模式提供了一种新的思路,力求提高种植前胚胎的质量与发育潜能。     

不同解冻和移植时间的冻融胚胎成功率分析

冻融胚胎移植(FET)是辅助生殖技术(ART)的重要组成部分,影响FET的因素有冷冻胚胎的质量、患者年龄、子宫内膜容受性和子宫内膜与胚胎同步等[1].对于质量差的冷冻胚胎大多数生殖中心的策略是通过囊胚培养筛选胚胎,从而提高妊娠率.由于体内是复杂的神经-内分泌系统,体外的囊胚培养系统不能完全代替体内,可能导致部分有发育潜能的胚胎由于体外"残酷"的环境而停止发育致成胚胎的浪费.我院针对部分质量差的冷冻胚胎尝试性改变解冻和移植时间,以求达到子宫内膜和胚胎更好的同步性.本文就这一部分患者进行了回顾性分析.     

实现选择性单胚胎移植：囊胚技术是关键

规避多胎妊娠风险较好的方法是选择性单胚胎移植,同时冷冻保存剩余胚胎。囊胚的培养和移植在生理学上与子宫内膜同步性最大,因此大部分学者认为囊胚培养和冷冻尤为重要,特别是冷冻后选择囊胚腔扩展起来的囊胚移植。目前评估胚胎主要依靠形态学评估方法。本中心囊胚形成率为53．35％。     

The study on three-dimensional reconstruction of endometrium in vitro

<正> Objectives:To establish a three-dimensional model of endometrium in vitro.Methods:The endometrial cells were cultured on a biodegradable hybrid Collagen-PGLA polymer mesh and observed by scanning electron microscopy and light micro-scopy.Results:It showed that the endometrial cells adhered and spread well on the surfacesof the collagen sponge of the hybrid mesh after being cultured for 5 days.After 2weeks,the cells proliferated to become confluence achieving a three dimensional struc-ture.Conclusion:The three-dimensional model of endometrium could be establishedusing the hybrid polymer mesh as a skeleton in vitro,     

玻璃化冻融小鼠囊胚的超微结构观察

目的观察冻融小鼠囊胚的超微结构改变情况,研究冷冻对囊胚的冷冻损伤。方法采用6组玻璃化溶液对小鼠囊胚进行冷冻保存,复苏后通过透射电镜观察超微结构改变情况。结果各组小鼠囊胚均表现相似的超微结构损伤:线粒体肿胀、粗面内质网脱颗粒、高尔基复合体扩张、含有絮状物或膜性结构的小泡增多、微丝结晶的出现、细胞间紧密连接和桥粒减少。结论冷冻对于小鼠囊胚的冷冻损伤主要是细胞膜性结构和细胞骨架系统的损伤。     

不同取材方式对肾脏培养细胞样品超微结构的影响

目的研究不同取材方式对透射电镜肾脏培养细胞样品超微结构的影响。 方法以大鼠肾小球系膜细胞(RMC)和人肾小管上皮细胞株(HK-2)为实验对象，采取5种不同的取材方式，分别为：刮取-离心-固定组、刮取-固定-离心组、固定-刮取-离心组、消化-离心-固定组、消化-固定-离心组。电镜下比较不同取材方式样品细胞超微结构的形态变化。 结果透射电镜下观察，消化-固定-离心组细胞形态呈圆形或近圆形，超微结构保存良好，易于观察研究；其次为固定-刮取-离心组，细胞呈长梭形，不利于低倍镜下观察，但超微结构保存良好；再次为刮取-固定-离心组，超微结构保存一般；细胞超微结构保存最差的为消化-离心-固定组和刮取-离心-固定组。 结论消化-固定-离心可能为透射电镜肾脏贴壁培养细胞样本的最佳取材方式。     

胚泡表面Le~Y寡糖对小鼠胚泡纤维粘连蛋白、层粘连蛋白表达及分泌的影响

目的　体外观察 L e Y 寡糖对着床前小鼠胚泡细胞外基质 ( ECM)主要成分纤维粘连蛋白 ( FN)、层粘连蛋白 ( LN)的表达和分泌的影响。　方法　采用特异性单克隆抗体 AH6阻断胚泡表面 L e Y寡糖 ,运用半定量逆转录 -聚合酶链反应 ( RT-PCR)及免疫印迹法检测 L e Y寡糖对着床前小鼠胚泡 FN及 LN的表达和分泌的影响。　结果　在体外培养中 ,经 AH6封闭胚泡表面 L e Y 寡糖抗原后仅 1 .5h,胚泡 FN及 L N的分泌有明显升高 ( P<0 .0 1 ) ,并且持续 6 h以上 ,而胚泡 FN及 L N的基因转录表达变化不明显 ( P>0 .0 5)。　结论　胚泡表面的 L e Y寡糖抗原对着床前胚泡的 FN及 L N的分泌具有促进作用     

人子宫内膜体外构建的实验研究

目的探讨体外构建人子宫内膜的新方法。方法将采用筛网分离法获得的原代人子宫内膜基质细胞和腺上皮细胞依次接种到自制的液态胶原材料上共培养,形成子宫内膜组织,并与二维条件下正常培养的子宫内膜基质细胞和腺上皮细胞进行比较。采用组织学和免疫组织化学方法观察所构建的子宫内膜的组织学特征,以及两种细胞在不同培养条件下的生长和分布情况。结果分离获得的子宫内膜基质细胞和腺上皮细胞的纯度分别达到95%和90%。在Ⅰ型液态胶原形成的凝胶内,子宫内膜基质细胞排列紧密,腺上皮细胞呈腺体样结构。结论两种细胞与Ⅰ型液态胶原凝胶复合后构建的子宫内膜具有正常子宫内膜组织的结构。     

表皮生长因子对子宫内膜细胞体外增殖的影响

本研究观察了表皮生长因子（ＥＧＦ）在体外对子宫内膜上皮细胞及基质细胞增殖的影响。采用酶消化加物理方法分离人子宫内膜上皮细胞及基质细胞,分别在体外培养,细胞汇合后消化,一部分用盖片法培养,用特异性抗体鉴定细胞纯度,另一部分做细胞增殖实验。在细胞中加入不同浓度的ＥＧＦ,培养２４、４８、７２小时,用ＭＴＴ法及流式细胞仪测定ＥＧＦ对子宫内膜上皮细胞及基质细胞增殖的作用。结果：ＥＧＦ浓度为５．０及１０．０ｎｇ／ｍｌ时,明显刺激子宫内膜上皮细胞及基质细胞的增殖,ＭＴＴ与流式细胞仪两法一致。ＥＧＦ不刺激细胞凋亡。结论：采用酶消化结合物理方法分离的人子宫内膜基质细胞及上皮细胞,方法简便、快速,细胞纯度高,在体外生长良好,可用于体外研究着床及异位子宫内膜生长的机制。当ＥＧＦ浓度为５．０及１０．０ｎｇ／ｍｌ时,确实刺激子宫内膜细胞的增殖。     

组织工程颌下腺细胞与胶原海绵复合培养的实验研究

目的研究大鼠颌下腺细胞在胶原海绵材料支架上的生长情况。方法取8d龄Wistar大鼠颌下腺细胞，传代培养至第2代细胞，按2×10^4／ml注射法接种于5mm×5mm×2mm胶原海绵表面进行培养。术后1、2、3周行组织学观察、扫描电镜观察胶原海绵上接种颌下腺细胞形态结构特点；取复合培养3周的颌下腺细胞行免疫组织化学细胞角蛋白（cytokratin8．13，CK8．13）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscular actin，α-SMA）染色，透射电镜观察细胞超微结构，鉴定细胞来源。分别取复合培养1d，1、2、3周的培养上清，用Amano法测定淀粉酶含量，检测与胶原海绵复合培养的颌下腺细胞功能。结果细胞接种后第1周细胞分散于材料表面，无细胞突起形成；第2周细胞数量有所增加、细胞突起形成并锚定于胶原海绵表面；第3周时附着的细胞数目增多，可见细胞表层有丝状纤维形成。免疫组织化学染色观察复合培养的颌下腺细胞上皮细胞特异性抗体CK8。13呈强阳性，肌上皮细胞特异性抗体α-SMA染色呈阳性。透射电镜下颌下腺上皮细胞表面可见微绒毛、胞浆皱褶和细胞顶部的酶原颗粒，胞核大卵圆形，胞质内见线粒体和粗面内质网。随着接种后培养时间的延长，与胶原海绵复合培养的颌下腺细胞分泌的淀粉酶含量有不同程度的增加。结论胶原海绵具有良好的细胞相容性，颌下腺细胞与胶原海绵复合培养，细胞可保持增殖分化能力及分泌功能，有望成为颌下腺细胞的载体应用于组织工程支架材料。     

冷冻环玻璃化法与程序冷冻法对人囊胚冷冻复苏效果的比较

目的比较冷冻环玻璃化法与程序冷冻法对人囊胚冷冻复苏的效果。方法将接受体外受精-胚胎移植患者的剩余胚胎进行培养,所获得的囊胚分别进行程序冷冻法或冷冻环玻璃化法冷冻,比较囊胚复苏后的复苏率、妊娠率等指标。结果玻璃化冷冻复苏39个周期,115个囊胚、存活104个(90.4%),移植38个周期、74个囊胚,临床妊娠28个周期(73.7%),其中2例流产,2例足月分娩2个正常新生儿,24例继续妊娠。程序冷冻21个复苏周期,87个囊胚、存活37个(42.5%),移植15个周期、28个囊胚,临床妊娠6例(40%),其中流产1例,2例足月分娩3个新生儿,3例继续妊娠。玻璃化冷冻后的囊胚复苏率显著高于程序冷冻,复苏周期移植取消率显著低于程序冷冻,而临床妊娠率则明显高于程序冷冻,均有统计学差异(P<0.05)。但两种方法的流产率没有显著差异。结论使用冷冻环玻璃化法适于人类囊胚的冷冻保存,其复苏率和妊娠率均显著高于传统的程序冷冻法,复苏周期移植取消率低于程序冷冻法。     

Morphogenesis of MDCK cells in a collagen gel matrix culture under stromal adipocyte-epithelial cell interaction

BACKGROUND: The stromal-epithelial cell interaction is essential for epithelial morphogenesis. Recently, the specific stromal cell type adipocytes, which abundantly exist in perirenal adipose tissue, have been suggested to affect the biological behavior of some epithelial cell types. However, adipocyte-renal epithelial cell interaction remains unclear. We thus examined the effects of adipocytes on the morphogenesis of renal epithelial cells. METHODS: The renal epithelial cell line, Madin-Darby canine kidney (MDCK), cells were cultured in three-dimensional collagen gel matrix with or without mature unilocular adipocytes. Cultures cells were examined by histochemistry, immunohistochemistry, and electron microscopy. RESULTS: Adipocytes extensively promoted the tubule formation of MDCK cells in two different manners. In the first type, after approximately 20% of MDCK cells actively adhered to adipocytes; they organized double-cell structured tubules between the adipocytes and the gel, contacting directly with the entire surface of the adipocytes. In the second type, approximately 70% of MDCK cells apart from adipocytes also formed tubules that had no contact with adipocytes. The component cells of both tubule types at the apical side showed microvilli and peanut agglutinin lectin-positive stain. These cells at the basal side had the basal lamina and type IV collagen-positive stain. CONCLUSIONS: These results indicate that the specific stromal cell type adipocytes cause MDCK cells to organize the well-polarized tubular structures in two different manners according to their direct and indirect interactions, suggesting that adipocytes may be involved in the regulatory mechanism of renal epithelial morphogenesis.