苦豆子总碱治疗大鼠溃疡性结肠炎的实验研究

[目的]研究苦豆子总碱(TASA)治疗溃疡性结肠炎的作用机制。[方法]选取雄性Wistar大鼠96只,随机分为正常对照组、模型组、TASA组和柳氮磺胺吡啶组,每组24只,除正常对照组外,其余3组用2,4二硝基氯苯建立大鼠创伤性溃疡性结肠炎模型,比较4组大鼠结肠黏膜组织病理学、结肠损伤分数、红细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性、结肠黏膜过氧化脂质(LPO)含量及肠黏膜周边组织核因子(NF)-κB和白细胞介素(IL)-1β因子的表达。[结果]TASA组大鼠经治疗后,结肠黏膜光镜下组织学有明显改变,结肠损伤分数、大便乳酸含量降低,SOD活性升高,LPO含量降低,NF-κB和IL-1β因子表达进一步下调,与模型组比较差异有统计学意义(P0.01)。[结论]TASA发挥抗溃疡性结肠炎的机制之一可能与其下调NF-κB和IL-1β的表达,降低结肠黏膜LPO含量,增强红细胞SOD活性,进而增加机体对氧自由基的清除,从而达到促进大便乳酸排泄,减少结肠炎症损伤有关。     

苦豆子总碱对大鼠溃疡性结肠炎细胞因子IL-10表达的影响

目的观察苦豆子总碱对大鼠溃疡性结肠炎(UC)的外周血和结肠组织中IL-10表达的影响。方法将SD大鼠随机分成6组(正常组、模型组、柳氮磺胺吡啶(SASP)、苦豆子总碱高剂量组、中剂量组、低剂量组),采用三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠法,制备结肠炎大鼠模型。第2天开始灌胃,在第3周杀鼠后用酶联免疫吸附法(ELISA)检测IL-10在结肠黏膜组织和外周血清中的表达水平;同时分析结肠黏膜组织IL-10与DAI(疾病活动指数评分)/组织学损伤的相关性。结果(1)结肠部位和外周血清中IL-10的表达较对照组均显著降低,其中以结肠部位降低的幅度最大(P<0.01)。(2)苦豆子总碱高、中、低3个剂量组和SASP组都能显著性上调结肠部位和外周血清的IL-10的表达(P<0.05),且结肠部位的变化与外周血的相比差异明显。(3)结肠部位的DAI与结肠IL-10之间存在的负相关性(Pearsonr=-0.828,P<0.01),结肠部位的组织学损伤与结肠IL-10之间存在负相关性(Pearsonr=-0.819,P<0.01);所有检测为双侧,样本容量n=60。结论苦豆子总碱通过上调IL-10的表达减轻或改善实验性结肠炎大鼠的组织学损伤和症状。     

Foxp3仍然是人调节性T细胞的标志？

CD4＋CD25＋调节性T细胞是维持机体免疫稳态和免疫耐受的一个重要机制。缺乏这群细胞与许多自身免疫性疾病的发生和发展密切相关。目前积累的证据表明，在啮齿类动物中，一个叉头样转录因子Foxp3基因及其编码产物（scurfin）是CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的特异性标志物。Foxp3基因控制着CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的发育,并且直接影响它的功能。虽然早期研究认为Foxp3也在人CD4^＋CD25^＋调节性T细胞上特异性表达，但是越来越多的研究发现Foxp3在人类激活的CD4^＋效应T细胞中也有表达。Foxp3是否也是人的调节性T细胞的特异性分子标志？本文对当前国际免疫调节领域相关方面的工作进展进行总结，以供同行参考。     

胃癌患者外周血及癌组织中调节性T细胞和Foxp3的表达意义

目的探讨调节性T细胞和Foxp3水平在胃癌患者体内的表达及意义。方法选取该院2010年4月至2013年8月40例经胃镜或手术病理证实的胃癌患者,采用流式细胞术检测患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+T细胞的表达水平,免疫组化法检测胃癌及癌旁组织中Foxp3+T细胞的表达水平,对外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞与胃癌Foxp3+T细胞表达水平的相关性进行分析。结果胃癌组CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分比显著高于对照组(t=10.712,P=0.000);胃癌组织中的Foxp3+T细胞表达水平显著高于癌旁组织(t=20.046,P=0.000);胃癌TNM分期越高,患者外周血中的CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分比和癌组织中的Foxp3+T细胞水平越高(P<0.05);存在淋巴结转移的患者,其外周血中的CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分比和癌组织中的Foxp3+T细胞水平均高于未发生淋巴结转移者(P<0.05);胃癌分化程度越低,癌组织中的Foxp3+T细胞水平越高(P<0.05)。胃癌外周血中的CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分比与分化程度、肿瘤部位和肿瘤直径无关(P>0.05);癌组织中的Foxp3+T细胞水平与肿瘤部位和肿瘤直径无关(P>0.05)。胃癌外周血中的CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分比和癌组织中的Foxp3+T细胞水平呈显著正相关(r=0.850,P<0.05)。结论胃癌患者外周血中的CD4+CD25+Foxp3+T细胞水平和癌组织中的Foxp3+T细胞水平均有增高,与胃癌分期、分化程度及是否淋巴结转移密切相关,对胃癌的预测和诊治具有较大的临床指导作用。     

溃疡性结肠炎患者外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA的表达水平

目的:探讨溃疡性结肠炎(UC)患者外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA表达及其与疾病活动性的关系．方法:应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 检测142例UC患者(活动期22例、缓解期20例) 和30例正常对照组外周血单个核细胞Foxp3 mRNA的表达水平．结果:UC患者急性期Foxp3 mRNA水平低于正常人,差异有显著性(1．58±0．31 vs 3．27± 0．40,P<0．05);缓解期Foxp3 mRNA水平与正常人差异无显著性(P=0．104);PBMC中Foxp3 mRNA表达水平与Walmsley评分标准有相关性,且呈负相关．结论:UC患者外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA表达水平显著低于正常人,其参与了 UC的发病过程并与疾病的活动性有关．     

Faecalibacteriumprausnitzii对实验性结肠炎大鼠Foxp3＋Treg细胞的影响

Fxop3＋Treg细胞是-种免疫调节细胞,在免疫调节和维持机体免疫平衡中起重要作用。目的：研究Faecalibacterium口删nitzii（FP）对实验性结肠炎大鼠外周血和脾脏中CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg细胞的影响,从而初步探讨FP治疗溃疡性结肠炎（UC）的作用机制。方法：采用2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）灌肠制备实验性结肠炎大鼠模型．将大鼠随机分为正常对照组、结肠炎组、FP组、FP上清液组、培养基组和双歧杆菌组。观察大鼠结肠大体形态损伤、组织学变化．以流式细胞术测定外周血和脾脏中CD4＋CD25＋Foxp3＋rreg细胞比例,以ELISA法检测血浆IL-10、IL-12和TGF．B含量。结果：与正常对照组相比,结肠炎组结肠大体形态损伤明显,病理学评分显著增高（P〈O．01）;外周血和脾脏中CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg细胞比例显著降低（P〈O．05）;血浆IL．10和TGF．B含量显著降低（P〈0．05）,IL-12含量显著升高（P〈O．01）,IL-IO／IL-12比值显著降低（P〈0．01）。经FP、FP上清液和双歧杆菌治疗后,除血浆IL-10含量无明显差异外．其余指标均显著改善（P〈0．05）。结论：FP及其上清液对TNBS诱导的实验性结肠炎大鼠有显著的治疗作用．其机制可能为提高外周血和脾脏中CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg细胞比例。     

益生菌治疗大鼠实验性结肠炎效果观察及对T细胞亚群的影响

目的评价益生菌对大鼠实验性结肠炎的疗效，以及研究治疗后体内T细胞亚群变化情况。方法选择北京大学人民医院消化内科与北京医院特需医疗科于2004年9月至2005年2月建立实验性结肠炎模型，设立不同剂量益生菌治疗组、阴性对照组和阳性对照治疗组（泼尼松治疗组及柳氮磺胺吡啶治疗组）。组织学积分评定疗效；流式细胞仪检测外周血、脾脏和结肠CD4^＋、CD8^＋T细胞亚群变化情况。结果大剂量益生菌对治疗大鼠实验性结肠炎有效；结肠炎大鼠结肠内CD4^＋、CD8^＋T细胞均增加，益生菌治疗后回落，而CD4^＋／CD8^＋比值及外周循环T细胞亚群无变化。结论大剂量益生菌治疗大鼠实验性结肠炎有效，可能与免疫调节机制有关。     

益生菌治疗大鼠实验性结肠炎效果观察及对T细胞亚群的影响

目的评价益生菌对大鼠实验性结肠炎的疗效,以及研究治疗后体内T细胞亚群变化情况。方法选择北京大学人民医院消化内科与北京医院特需医疗科于2004年9月至2005年2月建立实验性结肠炎模型,设立不同剂量益生菌治疗组、阴性对照组和阳性对照治疗组(泼尼松治疗组及柳氮磺胺吡啶治疗组),组织学积分评定疗效;流式细胞仪检测外周血、脾脏和结肠CD4 、CD8 T细胞亚群变化情况。结果大剂量益生菌对治疗大鼠实验性结肠炎有效;结肠炎大鼠结肠内CD4 、CD8 T细胞均增加,益生菌治疗后回落,而CD4 /CD8 比值及外周循环T细胞亚群无变化。结论大剂量益生菌治疗大鼠实验性结肠炎有效,可能与免疫调节机制有关。     

普拉梭菌对实验性大鼠结肠炎防治的初步研究

目的 观察普拉梭菌(Faecalibacterium prausnitzii Fp)对2,4,6三硝基苯磺酸诱导的大鼠结肠炎的治疗效果,并初步探讨其作用机制.方法 60只Sprague-Dawley大鼠均分为健康对照组、结肠炎模型对照组、Fp预防治疗组、Fp上清液预防治疗组、Fp治疗组和Fp上清液治疗组.评估各组大鼠的疾病活动指数(DAI)、结肠组织学损伤、粪便短链脂肪酸丁酸的含量,检测外周血、脾内叉头状螺旋转录调节因子3(Foxp3)调节性T细胞(Treg)及血清促炎因子IL-17、IL-6的水平.所有数据采用单因素方差分析进行统计学处理.结果 与结肠炎模型对照组比较,Fp预防治疗组、Fp上清液预防治疗组、Fp治疗组和Fp上清液治疗组的DAI评分显著降低,结肠组织学表现明显改善,且Fp预防治疗组优于Fp治疗组,Fp上清液预防治疗组优于Fp上清液治疗组.丁酸浓度在Fp预防治疗组为(3091.08士485.50)×10-6 mol/L,Fp上清液预防治疗组为(1714.64±351.25)× 10-6 mol/L,Fp治疗组为(2064.75±295.04)×10-6 mol/L,Fp上清液治疗组为(1089.13±321.23)×106 mol/L,Fp预防治疗组与其他各组比较差异有统计学意义(F=49.796,P＜0.01).Fp上清液预防治疗组外周血Foxp3+Treg水平最高;Fp预防治疗组、Fp上清液预防治疗组脾细胞Foxp3+Treg水平明显高于其他各组.Fp预防治疗组、Fp上清液预防治疗组、Fp治疗组和Fp上清液治疗组大鼠血清IL-17、IL-6浓度较结肠炎模型对照组均明显降低.结论 Fp对炎症性肠病模型大鼠的肠道炎性反应修复有一定的促进作用.其机制可能与分泌丁酸盐,上调外周血和脾内的Foxp3+Treg水平,抑制促炎因子IL-17、IL-6分泌,重建Treg/Th17平衡来减轻局部肠道的炎性反应.     

HBV感染后外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞与疾病进展的相关性

目的:探讨HBV感染者外周血CD4~ CD25~ Fox- p3~ 调节性T细胞水平与HBV感染后疾病进程的相关性.方法:HBV感染者136名及健康对照40名,应用流式细胞仪胞内染色技术检测外周血CD4~ CD25~ Foxp3~ 调节性T细胞表达,结合HBV感染者临床情况进行分析.结果:HBV感染者外周血CD4~ CD25~ Foxp3~ 调节性T细胞表达率较健康对照组显著增高(7.48%±1.03% vs 3.58%±0.71%,P<0.01);慢性乙肝组与慢性重型乙肝组相比,外周血CD4~ CD25~ Foxp3~ T调节细胞的表达率有明显差异(6.55%±1.26% vs 8.65%±2.58%,P<0.05);HBV病毒载量的对数值与外周血CD4~ CD25~ Foxp3~ T调节细胞的表达率之间存在正相关(r=0.332,P<0.01).结论:HBV感染者外周血CD4~ CD25~ Foxp3~ 调节性T细胞水平与疾病进展明显相关.     

Graves病患者外周血CD4^＋CD25^＋T细胞及Foxp3mRNA表达的变化

目的通过比较Graves病患者和正常人外周血中CD4^＋和CD8^＋T细胞占淋巴细胞、CD4^＋CD25^＋T细胞占CD4^＋T细胞的比例以及相关基因Foxp3mRNA表达的变化,探讨Graves病患者免疫机制中CD4^＋CD25^＋T细胞亚群所起的作用。方法选择40例初次确诊Graves病的患者和40名健康自愿者,通过流式细胞仪检测外周血CD4^＋CD8^＋T细胞占淋巴细胞、CD4^＋CD25^和CD4^＋CD25^high细胞占CD4^＋T细胞的比例以及CD4^＋CD25^＋T细胞的荧光强度。应用Real—Time PCR检测外周血单个核细胞Foxp3mRNA的表达。结果Graves病患者外周血中CD4^＋T细胞比例以及CD4^＋／CD8^＋的比值明显升高,而CD4^＋CD25^和CD4^＋CD25^highT细胞占CD4^＋T细胞的比例以及CD4^＋CD25^＋T细胞的荧光强度与正常人比较差异无统计学意义,Graves病患者外周血单个核细胞Foxp3mRNA的表达也无明显减少。结论Graves病主要通过效应性CD4^＋T细胞的体液免疫反应对甲状腺组织产生影响,CD4^＋CD25^＋T细胞的免疫抑制作用减弱可能仅是Graves病发病机制中的一个次要环节。     

哮喘患者外周血中调节性T细胞GATA3及调节因子PIM2的表达和临床意义

目的：探究哮喘患者外周血中调节性 T 细胞特异性转录 GATA3及其调节因子 PIM2的表达。方法本研究纳入来自上海交通大学医学院附属瑞金医院的哮喘患者32例作为哮喘组,健康志愿者22名作为健康对照组。采用流式细胞术检测外周血中调节性 T 细胞表达 GATA3的水平;采用流式分选技术分选出外周血中调节性 T 细胞后,利用细胞免疫组化技术测定调节性 T 细胞内 PIM2的表达水平。结果哮喘组和健康对照组中 GATA3+ Treg/Treg%分别为(9.40±0.94)%,(5.37±0.33)%,哮喘组较健康对照组升高,差异有统计学意义(P <0.01)。将哮喘组中间歇轻度组和中重度组分别为(9.33±4.17)%和(9.51±6.84)%,较健康对照组均升高(P <0.01,P <0.05),而间歇轻度组与中重度组差异无统计学意义(P >0.05)。哮喘患者外周血中 GATA3+ Treg/Treg%与FEV1%pred 存在负相关(r =-0.85,P <0.05)。在哮喘组(n =12)中,PIM2的表达水平为(2011.00±524.00)IOD,而健康对照组(n =8)中 PIM2的表达水平为(202.00±34.24)IOD,差异具有统计学意义(P <0.01)。结论哮喘患者外周血中调节性 T 细胞表达 GATA3、PIM2增多,推测 PIM2的增多使得 GATA3的表达上调,从而使得哮喘患者中调节性 T 细胞的功能发生改变。     

CD4+CD25+ Foxp3+调节性T细胞对ox-LDL诱导内皮细胞炎性因子表达的影响

目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)炎性因子表达的影响.方法:磁性细胞分离器(MACS)分离CD4+CD25+T细胞及CD4+CD25-T细胞.在ox-LDL作用下,将HUVECs分别与anti-CD3 mAb 激活的CD4+CD25+T细胞、CD4+CD25-T细胞共培养24 h.分别应用流式细胞术、ELISA、real-time PCR测定Tregs对ox-LDL诱导损伤HUVECs炎性因子VCAM-1、MCP-1、IL-6表达的影响.应用凝胶电泳迁移率实验(EMSA)方法观察Tregs对ox-LDL诱导损伤HUVECs NF-κB激活的影响.结果:与对照组比较,Tregs细胞可显著抑制ox-LDL诱导损伤HUVECs炎性因子(VCAM-1、MCP-1、IL-6)及NF-κB的结合活性.结论:Tregs细胞可显著抑制ox-LDL诱导损伤HUVECs炎性因子的表达,其作用机制可能为下调了NF-κB的结合活性.     

脑梗死大鼠外周血中CD4^+CD25^+调节性T细胞表达对神经功能变化的影响

目的观察脑梗死大鼠建模成功后不同时期CD4^+CD25^+调节性T细胞(CD4^+CD25^+Treg)表达对神经功能变化情况及两者之间的相关性。方法选择清洁级雄性大鼠60只,适应性饲养1 w后,选择30只作为假手术组,另外30只建立大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,分别于建模成功后12、24、72 h后处死大鼠,每次处死10只。检测并对比建模成功后不同时期大鼠CD4^+CD25^+Treg表达与神经功能(以Zausinger六分法评估大鼠神经功能),并分析上述两者之间的相关性。结果建模成功12 h后,模型组神经功能得分显著低于假手术组(P<0.05);两组CD4^+CD25^+Treg比较差异无统计学意义(P>0.05);建模成功24、72 h后,模型组CD4^+CD25^+Treg与神经功能得分显著低于假手术组(P<0.001);经双变量Pearson直线相关性检验结果显示,脑梗死大鼠CD4^+CD25^+Treg与神经功能呈正相关(r=0.593,P=0.001)。结论脑梗死大鼠梗死早期CD4^+CD25^+Treg未见明显改变,随着梗死时间延长,大鼠CD4^+CD25^+Treg逐渐降低、神经功能损伤程度加重,二者间存在相关性,考虑早期通过检测脑梗死CD4^+CD25^+Treg,对预测神经功能、指导治疗有积极意义。     

扩张型心肌病患者CD4~+CD25~+Foxp3~+ T细胞的检测及意义

目的:探讨扩张型心肌病(DCM)患者外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞的水平及意义。方法:采用流式细胞术检测DCM患者30例及健康对照组20例外周血CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25+Foxp3+T细胞的比例。结果:DCM患者外周血CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞的比例为(8.53±1.64)%,显著低于健康对照组的(11.4±2.17)%,P0.01;DCM患者CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞比例为(0.99±0.54)%,显著低于健康对照组的(1.55±0.55)%,P0.01;且DCM患者心功能越差,CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞的比例越低。结论:DCM患者调节性T细胞比例的减少,可能打破了自身免疫耐受,发生了针对心肌抗原的自身免疫反应,参与了DCM的发病。     

CD+4 Foxp3+调节性T细胞对断烟大鼠肺部炎症及肺气肿的作用

目的 观察香烟暴露及断烟后大鼠Treg细胞的变化,探讨Treg细胞与断烟后大鼠肺部炎症反应和肺气肿持续存在的关系.方法 将50只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为5组:健康对照组、香烟暴露组和断烟组,其中健康对照组和香烟暴露组又分为12周组(对照1组和实验1组)和24周组(对照2组和实验2组).香烟烟雾暴露法建立大鼠肺气肿模型.HE染色观察大鼠肺气肿的改变,酶联免疫吸附法检测大鼠BALF中白细胞介素(IL-8)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,流式细胞术检测大鼠外周血和肺实质中CD4+Foxp3调节性T细胞(Treg细胞)比例,实时定量PCR法检测大鼠外周血和肺实质中Foxp3的mRNA表达.多组间比较采用单因素方差分析,组内两两比较采用SNK和Games-Howell检验.结果 实验1组和实验2组平均内衬间隔(MLI)为(64.9±5.3)μm和(77.9±11.5)μm,均明显高于对照1组和对照2组的(39.0±3.8)μm和(40.3±2.7)μm,差异均有统计学意义(P＜0.01);断烟组MLI[(71.5 ±5.8)μm]介于实验1组和实验2组之间,但肺气肿程度较实验1组明显加重,差异有统计学意义(P＜0.01).实验1组和实验2组IL-8水平[(68±17)ng/L和(85±16)ng/L]及TNF-α水平[(14.1±1.8)ng/L和(20.1±8.7)ng/L]均明显高于对照1组和对照2组[(44±8)ng/L、(43±9)ng/L及(6.3±2.3)ng/L、(5.8±1.6)ng/L],差异均有统计学意义(P＜0.05).实验1组和实验2组肺实质中CD+4Foxp3+Treg细胞[(6.6±0.8)%和(5.3±0.9)%]明显少于对照1组和对照2组[(9.0±1.0)%和(9.6±0.9)%],差异均有统计学意义(P＜0.01);断烟组肺实质中CD+4Foxp3+Treg细胞[(7.2±0.6)%]与实验1组比较虽无明显减少,但未能恢复至正常水平.实验1组和实验2组肺实质中Foxp3的mRNA表达量(17±7和9±7)明显低于对照1组和对照2组(39±6和42±7),差异均有统计学意义(P＜0.01);断烟组肺实质中Foxp3的mRNA表达量(21±9)与实验1组比较未见明显减少,但未能恢复至正常水平.结论 香烟暴露肺气肿大鼠肺内调节性T细胞下调可能导致大鼠肺内炎症反应放大,并在断烟后持续存在,提示调节性T细胞下调可能是大鼠肺气肿持续进展的原因之一.     

T细胞亚群在TNBS诱发大鼠实验性结肠炎发病及治疗后的变化

目的探讨T细胞亚群在TNBS诱发大鼠实验性结肠炎模型的外周血、脾、结肠中变化特点及经柳氮磺胺吡啶（SASP）和氢化泼尼松（PSL）治疗后这些细胞的变化。方法分为对照组、建模后1周及3周组、SASP及PSL治疗组，用流式细胞仪检测各组外周血、脾和结肠黏膜上皮细胞内CD4^＋，CD8^＋T细胞比例的变化；肠道积分评定组织学变化。结果CD4^＋T细胞：建模第1周外周血、脾明显低于对照组；建模第3周脾CD4^＋T细胞升至对照组水平，SASP治疗组外周血高于模型3周组，PSL治疗组外周血、脾、结肠均明显低于对照组和模型3周组。CD8^＋T细胞：建模第1周外周血、结肠低于对照组，建模第3周外周血中仍低，结肠升至对照组水平；SASP治疗组外周血高于模型3周组。PSL治疗组外周血、脾、结肠均明显低于对照组，脾、结肠低于模型3周组。结论大鼠实验性结肠炎发病过程中，机体免疫功能下调，以局部免疫异常为主，与整体的免疫异常可能关系较小。PSL导致机体免疫功能下调。SASP对全身免疫状态影响较小，其作用更集中于肠道。     

香烟烟雾暴露对支气管哮喘大鼠CD4+ CD25+调节性T细胞及转录因子Foxp3表达的影响

目的 探讨香烟烟雾暴露对支气管哮喘(简称哮喘)大鼠CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)数量及转录因子Foxp3表达的影响.方法 将40只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为生理盐水组、烟雾暴露组、哮喘组和哮喘+烟雾暴露组,每组10只;哮喘组采用卵清白蛋白(OVA)致敏并吸入激发制备哮喘模型,生理盐水组雾化生理盐水,烟雾暴露组采用吸入香烟烟雾,哮喘+烟雾暴露组于每日雾化激发OVA前给予香烟烟雾吸入.流式细胞仪检测外周血CD4+ CD25+Treg细胞占CD4+T细胞的比例,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测外周血和肺组织γ干扰素(INF-γ)以及白细胞介素4(IL-4)含量;Western blot检测肺组织Foxp3蛋白表达水平.结果 (1)哮喘组大鼠CD4+CD25+Treg为(6.4±1.0)%,低于生理盐水组的(9.9±1.0)%,差异有统计学意义(F=92.59,P＜0.01);哮喘+烟雾暴露组为(3.3±0.8)%,低于生理盐水组和哮喘组,差异有统计学意义(F=92.59,P＜0.01).(2)哮喘组大鼠血浆和肺组织中IL-4含量[(22.6±4.3)ng/L、(0.8±0.1)ng/L]高于生理盐水组[(11.4±2.9)ng/L、(0.3±0.1)ng/L],差异有统计学意义(F值分别31.69和49.29,P＜0.01);哮喘+烟雾暴露组血浆和肺组织中IL-4含量[(34.1±6.1)ng/L、(1.4±0.3)ng/L]高于生理盐水组和哮喘组,差异有统计学意义(F值分别为31.69和49.29,P＜0.05);哮喘组血浆中INF-γ含量[(59±20)ng/L]低于生理盐水组[(151±56)ng/L],差异有统计学意义(F=21.83,P＜0.05),哮喘+烟雾暴露组INF-γ含量[(10±3)ng/L]低于生理盐水组和哮喘组,差异有统计学意义(F=21.83,P＜0.05).(3)哮喘组Foxp3蛋白表达为8.18±0.26,低于生理盐水组的10.27±0.33(F=43.33,P＜0.01);哮喘+烟雾暴露组为6.36±0.38,低于生理盐水组和哮喘组(F=43.33,P＜0.05).结论 香烟烟雾暴露可能通过下调CD4+CD25+Treg数量并抑制Foxp3蛋白表达,进一步加重哮喘的Th1/Th2失衡.     

西罗莫司促进TGF-β分泌对小鼠调节性T细胞体外增殖的影响

目的通过观察西罗莫司或环孢霉素A与CD4+CD25+调节性T细胞((regulatory T cell,Treg)体外共培养对CD4+CD25+Treg增殖情况及对Foxp3和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)的表达的影响,探讨西罗莫司促进TGF-β分泌诱导Treg体外分化和增殖的机制。方法无菌条件下取C57BL/6小鼠脾脏,分离单个核细胞,免疫磁珠分选获得CD4+CD25+Treg,设空白对照组、西罗莫司组、环孢霉素A组,共培养96h。上流式细胞仪检测CD4+CD25+Treg。反转录聚合酶链、酶联免疫吸附试验法检测西罗莫司或环孢霉素A处理后的CD4+CD25+Treg的FoxP3+、TGF-βmRNA表达水平和分泌情况;Western blot分析TGF-β信号通路重要的活化分子Smad蛋白的表达情况,观察其对CD4+CD25+FoxP3+Treg增殖的影响;使用TGF-β中和抗体进一步验证TGF-β在西罗莫司促进CD4+CD25+FoxP3+Treg分化增殖过程中的重要作用。结果与对照组相比,西罗莫司处理的CD4+T细胞分泌的TGF-β水平增加近2.5倍,差异有统计学意义(P<0.01);而环孢霉素A处理的CD4+T细胞分泌的TGF-β水平则有所下降,但与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,环孢霉素A组CD4+CD25+Treg占CD4+T细胞比例明显降低,差异有统计学意义(41.25%vs.69.22%,P<0.01);西罗莫司组CD4+CD25+Treg占CD4+T细胞稍有下降,但差异无统计学意义(65.21%%vs.69.22%,P>0.05)。西罗莫司组FoxP3+T细胞的比例明显高于对照组,差异有统计学意义(53.7%vs.40.2%,P<0.05);而环孢霉素A组FoxP3+T细胞比例明显低于对照组,差异有统计学意义(23.6%vs.40.2%,P<0.01)。结论西罗莫司在体外培养促进CD4+CD25+Treg的增殖与生长,而环孢霉素A体外抑制CD4+CD25+Treg的增值与生长。西罗莫司通过诱导TGF-β表达分泌来促进CD4+CD25+FoxP3+Treg的增殖。     

结核性胸膜炎患者外周血CD4CD25调节性T细胞水平及Foxp3mRNA表达的分析

目的观察结核性胸膜炎患者外周血单个核细胞（PBMCs）中CD4 CD25调节性T细胞(CD4 CD25 Treg)水平及Foxp3 mRNA表达的变化,探讨CD4 CD25 Treg在结核性胸膜炎发病中的作用。方法采用流式细胞仪检测58例结核性胸膜炎患者和51例健康志愿者（正常对照组）PBMCs中CD4 CD25 Treg的比例;RT-PCR检测PBMCs中Foxp3 mRNA的表达。结果结核性胸膜炎患者PBMCs中CD4 CD25 Treg的比例明显高于正常对照组(P<0.05);Foxp3 mRNA的表达明显高于正常对照组(P<0.05)。 结论结核性胸膜炎患者外周血中具有免疫抑制活性CD4 CD25 Treg的数量增加,功能增强,可能是结核性胸膜炎发生发展的一个因素。