谷胱甘肽对汞致肾细胞凋亡影响的实验研究

目的 探讨谷胱甘肽（GSH）对汞致肾细胞凋亡的影响，进一步阐明无机汞肾损伤的分子机制。方法 昆明种小鼠24只随机分成3组，即对照组、单纯汞染毒组和GSH干预组。单纯汞染毒组小鼠腹腔注射3．0mg／kg氯化汞（HgCl2）溶液，对照组腹腔注射0．9％的氯化钠溶液，注射量为每10g体重注射0．2ml。GSH干预组于注射3．0mg／kg，HgCl2溶液前2h腹腔注射3mmol／kg谷胱甘肽溶液。24h后将小鼠颈椎错位处死，制备透射电镜标本，观察凋亡细胞形态；免疫组化法检测凋亡相关基因bcl-2和bax蛋白表达。制备单细胞悬液，用流式细胞仪进行凋亡细胞百分数分析。结果 对照组小鼠肾近曲小管细胞形态规则；单纯汞染毒组表现微绒毛排列紊乱，染色质聚集成块，核破碎释放出凋亡小体，凋亡小体被邻近细胞吞噬等典型细胞凋亡形态；GSH干预组显示接近正常的肾小管上皮细胞的形态。凋亡细胞百分数汞染毒组明显高于对照组（P〈0．01），GSH干预组明显低于汞染毒组（P〈0．01）。免疫组化检测GSH干预组bcl-2蛋白的表达明显高于汞染毒组（P〈0．01）；bax蛋白的表达显著低于汞染毒组（P〈0．01）。结论 GSH可以抵抗汞所致的肾细胞凋亡，使凋亡相关基因bcl-2蛋白的表达上调，bax蛋白的表达下调。     

双酚A对雄性小鼠生殖细胞凋亡作用

目的研究双酚A（BPA）对雄性小鼠生殖细胞的凋亡作用.方法选择雄性昆明种小鼠,连续5d双酚A腹腔注射,剂量为0,250,500,1000μmol/kg.分别于首次染毒后的第7和14d每组随机处死7只小鼠.用流式细胞仪测定其睾丸细胞周期,称睾丸重量及计算小鼠脏器系数,测定睾丸组织中一氧化氮（NO）含量和一氧化氮合酶（NOS）的活性.结果不同剂量组睾丸细胞各时相的细胞百分数发生变化,G0/G1和S期细胞百分数明显减少,G2＋M期时相的细胞百分数逐渐增加,Ap峰所占比例增加,染毒组睾丸脏器系数低于对照组,NO含量和NOS的活性均高于对照组,染毒组与对照组比较差异有统计学意义.结论双酚A可使雄性小鼠睾丸细胞的DNA合成受抑制,使睾丸细胞出现G2期阻滞,有丝分裂延迟,使进入M期的细胞百分数减少,表明双酚A对小鼠生殖细胞有凋亡作用.同时,NO、NOS指标的升高也反映了小鼠生殖细胞受损与脂质过氧化有关.     

家蝇幼虫抗菌蛋白诱导黑色素瘤A375细胞凋亡的探讨

目的 观察家蝇幼虫抗菌蛋白对黑色素瘤A375细胞凋亡的诱导，探讨其抗肿瘤作用机制。方法 流式细胞仪测定家蝇幼虫抗菌蛋白对细胞周期和细胞凋亡的影响；HE染色法观察细胞凋亡形态，并测定细胞凋亡指数（AI）。结果 在0．10％组A375的G／M期升高，S期降低。0．50％组G0／G1期、G2／M期和AI／PI（增殖指数）显著增加，S期及PI明显减少。2．50％组S期、PI、AI／PI及细胞凋亡率（Ap）显著增高，G0／G1期大大减少。12．50％组G2／M期、PI、AI／PI及Ap显著增高，G0／G1期和S期明显下降。结论 家蝇幼虫抗菌蛋白对黑色素瘤A375细胞有明显的抑杀作用；家蝇幼虫抗菌物质可能系通过细胞周期阻滞以及诱导细胞凋亡而抑制黑色素瘤A375细胞生长。     

苯与甲醛对小鼠睾丸细胞凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨苯和甲醛联合染毒对小鼠睾丸细胞凋亡的影响及其相关作用的机制。方法按3×3析因设计方法，108只昆明种雄性小鼠随机等分为9个组，每组12只，甲醛和苯染毒剂量分别为0、5、10mg／kg和0、100、400mg／kg，连续灌胃染毒5d，35d后处死，每组6只鼠睾丸做常规病理学切片观察睾丸的形态学变化，并采用免疫组织化学法检测bcl-2、bax的表达。另6只鼠睾丸匀浆离心，取沉渣观察睾丸细胞的凋亡率。结果甲醛和苯各染毒组小鼠睾丸组织结构损伤，染毒浓度越高，病理损害越明显；睾丸细胞bcl-2下调，bax表达上调，并有量-效关系，甲醛和苯染毒各组bcl-2和bax表达的相对灰度值较对照组均有差异（P〈0．01），甲醛和苯的联合效应为协同作用（P〈0．05）；各染毒组睾丸细胞凋亡率高于对照组（P〈0．01），并有量-效关系，二者合用的效应为相加作用（P〉0．05）。结论甲醛和苯可损伤小鼠睾丸的结构，使睾丸细胞凋亡增加、bcl-2表达下调、bax表达上调，bcl-2和bax表达的变化可能是诱导凋亡的机制。     

应用流式细胞术研究甲基对硫磷对大鼠睾丸生精细胞的毒性作用

目的探讨有机磷农药甲基对硫磷对雄性大鼠的睾丸毒性作用。方法20只SD雄性大鼠（220～240g）随机分为对照组和低（1．2mg／kg）、中（6mg／kg）、高（30mg／kg）剂量甲基对硫磷组,灌胃染毒,容量为5ml／kg,每日1次,连续6周。染毒结束次日处死小鼠,用流式细胞仪对大鼠睾丸生精细胞进行分析。结果①高、中剂量甲基对硫磷组细胞凋亡率均显著高于对照组（P〈0．05或P〈0．01）;②与对照组相比,各剂量甲基对硫磷组1C细胞显著减少,2C细胞显著增加（P〈0．05或P〈0．01）;③与对照组相比,高剂量染毒组G0／G1期细胞比例显著降低,G2／M期细胞比例显著增加（P〈0．05或P〈0．01）。结论甲基对硫磷能够阻滞大鼠生精细胞的细胞周期进程,诱导生精细胞凋亡。     

硫酸镍对雌性大鼠性腺机能的影响

目的 观察硫酸镍(NiSO4)腹腔注射染毒对雌性大鼠下丘脑-垂体-性腺轴的毒作用及其机制。方法 对健康性成熟Wistar雌性大鼠腹腔注射NiSO4 5．00，2．50，1．25mg/kg染毒，0．2ml／100g体重，1次／d，连续21d。阴道脱落上皮细胞涂片10d观察动情周期，第22d皮下注射人工合成促性腺激素九肽类似物(GnRH)前放免法测血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、孕酮(P)、雌二醇(E2)，注射GnRH后放免法测血清FSH、LH。第24d腹腔注射孕马血清促性腺激素(PMSO)，48h后腹腔注射人绒毛膜促性腺激素(HCG)后体视显微镜下挤出卵丘团，计数每只动物的超排卵数。同时取阴道、子宫、卵巢、垂体测镍含量。结果 5．00，2．50mg／kg组动物阴道、子宫、卵巢与NS组比较镍含量有显性差异；1．25mg,／kg组动物子宫、卵巢镍含量与NS组比较有显性差异；染毒组的动物出现动情周期延长；注射GnRH前，5．00mg／kg组血清FSH、LH与NS组比较有显性差异，注射GnRH后各染毒组血清FSH、LH与NS组比较均无显性差异；染毒5．00，2．50mg／kg组血清E2、P含量与NS组比较有显性差异；5．00mg／kg组动物超排卵数与NS组比较有显性差异。结论 腹腔注射硫酸镍染毒可引起雌性大鼠卵巢损伤，其机制可能与镍的直接作用和间接作用有关。     

正己烷对实验大鼠肝细胞凋亡的影响

[目的]研究正己烷（n-Hexane）对染毒大鼠肝细胞凋亡的影响。[方法]将40只雄性SD大鼠随机分成5组，即阴性对照组、75、150、300mg／kg染毒组和阳性对照组（环磷酰胺），每组8只。经腹腔注射染毒4周旨，观察大鼠的一般状况和体重变化，用流式细胞仪检测肝细胞凋亡情况。[结果]大鼠体重随染毒时间而增加，阴性对照组增加最快；流武细胞仪检测结果显示，肝细胞凋亡率（AV^＋／PI^-）组间比较差异有统计学意义（P〈0．01），与染毒剂量作相关分析，相关系数为0．913，无明显的相关性（P〉0．05）。[结论]正己烷可引起肝细胞凋亡和坏死比例的增加。     

ω-3多不饱和脂肪酸对人胃癌BGC-823细胞周期及凋亡的影响

目的 利用人胃癌BGC-823细胞体外培养实验，观察不同浓度ω-3多不饱和脂肪酸（EPA、DHA）对肿瘤细胞周期及凋亡的影响。方法 采用MTT法、凋亡形态学检查和流式细胞检测肿瘤细胞周期及凋亡情况。结果 30和45μg／ml的EPA或DHA可显著降低肿瘤细胞存活率（P〈0．001）；Hoechst33258染色和透射电镜可见细胞凋亡现象；流式细胞检测bcl-2基因蛋白表达明显下降（P〈0．05），G0／G1细胞明显增加，G2／M和S期细胞明显减少（P〈0．05）。结论 ω-3多不饱和脂肪酸可诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡和阻滞细胞在G0／G1期，细胞增殖受到抑制。     

应激活化蛋白激酶介导氯化镉致肾上腺皮质细胞凋亡作用探讨

目的 了解氯化镉（CdCl2)对豚鼠肾上腺皮质细胞应激活化蛋白激酶（stress activated protein kinase,SAPK）活性的影响及与凋亡的可能关系。方法 以0．625、1．25和2．50mg/kg CdCl2整体腹腔注射染毒雄性豚鼠,分别于染毒1h和12h处死动物,取肾上腺皮质进行SAPK活性测定（免疫沉淀－蛋白印迹杂交－化学发光法）和电镜观察细胞凋讯。结果 整体染毒1h、SAPK活性随CdCl2染毒剂量的增加呈增加的趋势;染毒12h,各组SAPK活性变化不明显。电观察染毒1h肾上腺皮质细胞未见凋亡征象;但染毒12h可见早期细胞凋亡。结论 SAPK活化在CdCl2诱导肾上腺皮质细胞凋亡过程中可能起重要作用。     

用彗星试验检测苯并(a)芘致小鼠体细胞DNA的损伤

[目的]建立彗星试验检测苯并（a）芘腹腔染毒小鼠体细胞DNA损伤的方法。[方法]雄性昆明种小鼠随机分为空白对照组、溶剂对照组和高、中、低剂量3个染毒组，每组4只。3个染毒组和溶剂对照组分别腹腔注射二甲基亚砜（0．01ml／g体重）和苯并（a）芘（250、125、62．50mg／g体重）。染毒3h后，处死小鼠，取出肝、肾和小肠组织制备单细胞悬液用于彗星试验。IMI彗星分析软件分析彗星尾距（oliver tail moment，TM）评价细胞DNA损伤的程度。[结果]高剂量组小鼠肝、肾和小肠细胞的彗星尾距值均增加，中、高剂量组小肠细胞的彗星尾距值均是溶剂对照组的5．22倍（P〈0．05）；中、高剂量组小鼠肾细胞的尾距值分别是溶剂对照组的8．27和7．16倍（P〈0．05）。高剂量组肝细胞的彗星尾距值是溶剂对照组的3．99倍。低剂量组仅小肠细胞的彗星尾距均值（1．285μm）增加（P〈0．05）。[结论]彗星试验可检测苯并（a）芘腹腔染毒小鼠肝、肾和小肠细胞的DNA损伤。     

维生素E及其联合维生素C对老龄小鼠肝细胞凋亡的影响

目的：观察维生素Ｅ（ＶＥ）及其联合维生素Ｃ（ＶＥ＋ ＶＣ）的抗氧化作用、对肝细胞凋亡与增殖的调节作用以及抗氧化过程与细胞凋亡和增殖的关系。方法：昆明鼠随机分为幼龄组（４ 月龄）、老年组（１７ 月龄）包括老年对照组、ＶＥ组、ＶＥ＋ ＶＣ组;以硫代巴比妥酸法和磷钨酸法分别检测肝及血清过氧化脂质（ＬＰＯ）,流式细胞术测定肝细胞凋亡率并分析肝细胞周期。结果：老龄组肝及血清ＬＰＯ含量均明显高于幼龄组,补以ＶＥ、ＶＥ＋ ＶＣ后ＬＰＯ含量明显降低,尤以ＶＥ＋ ＶＣ效果明显;小鼠肝细胞凋亡率随月龄增加而明显升高,老龄组补以ＶＥ、ＶＥ＋ ＶＣ后肝细胞凋亡率明显降低;与幼龄组相比,老龄组肝细胞发生Ｇ１ 期阻滞,施以抗氧化处理后,Ｇ０／Ｇ１、Ｓ、Ｇ２＋ Ｍ 各期细胞数均发生逆转性变化。结论：ＶＥ具有明显的抗氧化作用,与ＶＣ联用效果更佳,并可显著降低肝细胞凋亡的发生率,提高肝细胞增殖活力。     

母鼠高氟摄入对仔鼠颅骨成骨细胞的影响

目的观察高氟摄入对大鼠所生仔鼠颅骨及成骨细胞超微结构变化,探讨氟中毒与成骨细胞细胞周期和细胞凋亡的关系。方法常规饮食条件下,给雌鼠自由饮用含氟化钠0、50、100、150mgL蒸馏水2个月,随后与正常雄鼠交配,取仔鼠颅盖骨及成骨细胞做光镜和电镜检查;应用流式细胞术检测仔鼠成骨细胞凋亡的百分率和细胞周期。结果氟中毒仔鼠颅骨骨基质增生,胶原纤维堆积,排列紊乱,甚至断裂。成骨细胞异常增生。粗面内质网扩张,部分线粒体嵴断裂或消失,核出现凋亡特征。饮水中氟化钠浓度为150mgL,对成骨细胞OB的细胞周期和细胞凋亡均有影响,使S期细胞数增多,G2M期细胞减少;凋亡细胞百分率明显增多。结论过多的氟化物可以通过胎盘屏障直接作用于仔鼠颅骨成骨细胞,引起成骨细胞结构、细胞周期的改变,并可致细胞凋亡。     

2-甲氧雌二醇诱导人子宫内膜癌细胞株凋亡的实验研究

目的:探讨2-甲氧雌二醇(2-ME)对人子宫内膜癌细胞株KLE细胞凋亡的影响。方法:选用人子宫内膜癌细胞株KLE进行体外培养,实验组加入不同浓度2-ME,对照组不含2-ME。用电子显微镜(电镜)观察细胞形态变化;流式细胞仪(FCM)观察细胞的凋亡率及细胞周期的变化,以及免疫组织化学方法检测P53和Bcl-2的表达强度。结果:2-ME作用后G0/G1期细胞增加,并伴随G0/G1期细胞的增加,出现细胞凋亡峰和凋亡率的升高(P<0.05)。电镜下观察到KLE细胞染色体边集、核固缩、凋亡小体,P53和bc1-2阳性表达率明显下降。结论:2-ME对人子宫内膜癌KLE细胞株有诱导凋亡作用。     

紫杉醇诱导卵巢癌细胞凋亡及细胞周期改变的研究

目的研究紫杉醇能否诱导卵巢癌HO-8910细胞凋亡,以及凋亡诱导与细胞周期改变的关系。方法紫杉醇不同浓度、不同作用时间分别处理HO-8910细胞,在光镜和电镜下观察紫杉醇作用后细胞形态变化,流式细胞仪分析细胞凋亡及细胞周期的改变。结果荧光染色及电镜观察到典型的凋亡细胞形态,流式细胞仪DNA含量分析,癌细胞在紫杉醇作用下,首先表现为G2/M期阻滞。但只有出现G2/M期明显阻滞后,经过一定时间才出现凋亡。结论紫杉醇能够诱导HO-8910细胞凋亡,紫杉醇诱导HO-8910细胞凋亡与细胞分裂期阻滞密切相关,这一作用机制将为临床治疗提供理论依据。     

锌缺乏和锌过量对培养长骨细胞周期和细胞凋亡的影响

目的　探讨锌缺乏和锌过量对培养长骨细胞周期和细胞凋亡的影响 ,为阐明锌对骨骼的生长发育影响的机制提供科学依据。方法　用小鼠胚胎长骨体外培养 ,采用流式细胞仪研究细胞周期各个时相所占比例和凋亡细胞百分比 ,进行电镜分析 ,观察细胞的超微结构。结果　缺锌可使细胞周期停滞在 G0 /G1期 ,培养 2 d,缺锌组 G0 /G1期细胞所占百分比 (82 .3% )高于对照组(76.9% ) ,G2 /M期细胞所占百分比 (3.4% )低于对照组 (8.9% ) ;培养 4d,缺锌组 G0 /G1期细胞所占百分比 (88.6% )明显高于对照组 (78.4% ) ,S期细胞所占百分比 (4.3% )明显低于对照组 (1 1 .0 % ) ;缺锌可使凋亡细胞数目增加。电镜观察 ,缺锌组可见大量的凋亡细胞 ,而高锌组则有大量的坏死细胞。结论　锌缺乏可改变培养长骨的细胞周期 ,诱导细胞凋亡 ,但锌过量对细胞周期和细胞凋亡没有影响。     

亚硒酸钠抑制人胃癌BGC823细胞的作用及其机制探讨

目的观察亚硒酸钠对体外培养的人胃癌BGC823细胞增殖的抑制作用及其作用机制。方法用不同浓度(0、4.0、8.0、10.0μmol/L)的亚硒酸钠处理BGC823细胞24h后,采用四甲基偶氮噻唑蓝比色法(MTT法)检测亚硒酸钠对细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪PI染色检测细胞周期,AnnexinV/PI双染法定量检测BGC823细胞凋亡率,FAS蛋白染色流式细胞仪定量检测各实验组细胞间FAS蛋白表达,荧光显微镜观察DAPI染色细胞形态。结果亚硒酸钠可明显抑制BGC823胃癌细胞的增殖,呈剂量依赖性;亚硒酸钠可阻滞细胞于S期和增加BGC823胃癌细胞凋亡率并随剂量增大作用增强;DAPI染色观察到亚硒酸钠给药组出现细胞核浓缩、边缘化以及凋亡小体等细胞凋亡的形态特征;亚硒酸钠可呈剂量依赖地增强FAS蛋白表达。结论亚硒酸钠可显著抑制人BGC823胃癌细胞的增殖,使细胞阻滞于S期,并可诱导细胞凋亡,其机制可能与上调FAS蛋白有关。     

氟化物对大鼠颅骨成骨细胞的细胞周期和细胞凋亡的影响

目的 :研究氟化物对大鼠颅骨成骨细胞生长、细胞周期和细胞凋亡的影响。方法 :应用酶消化法分离培养大鼠颅骨的成骨细胞 ;AlamarBlue摄入法检测细胞活性 ;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果 :氟化钠 (NaF)浓度为 0～ 2mmol L、2 4h对细胞活性无影响 ;浓度为 2mmol L时 ,S期细胞数增多 ,G0 G1 期和G2 M期细胞无明显改变。NaF浓度为 4mmol L时 ,细胞活性受抑制 ,S期细胞数明显增多 ,G2 M期细胞明显减少。NaF浓度为 2mmol L和 4mmol L时 ,凋亡百分率明显增加。结论 :过量氟化物可影响大鼠颅骨成骨细胞活性及细胞周期的分布 ,使细胞停滞于S期 ,并可诱导细胞凋亡     

硫芥诱导淋巴细胞凋亡与细胞周期的关系

目的 探讨硫芥诱导体外培养大鼠脾脏淋巴细胞凋亡及与细胞周期的关系。方法 体外分离培养大鼠脾脏淋巴细胞。以流式细胞仪、琼脂糖凝胶电泳分别检测细胞凋亡，细胞周期，和DNA片段改变。结果 硫芥可诱导淋巴细胞凋亡(P＜0．05)，对细胞周期有明显影响，主要是S期和G2／M期明显降低，引起淋巴细胞生长阻滞在Gl期；流式细胞仪PI染色出现亚二倍体峰(凋亡峰)，其Gl期DNA含量明显增加，S期含量减少；琼脂糖凝胶电泳呈典型的“梯状”带(DNA ladder)。结论 硫芥可抑制体外培养的淋巴细胞由Gl期进入S期，抑制体外培养的淋巴细胞增殖，通过诱导淋巴细胞凋亡实现作用机制。     

AO/EB染色法及流式细胞术检测DMF诱导人肝细胞凋亡

目的观察二甲基甲酰胺（DMF）诱导正常成人离体肝细胞凋亡情况。方法以50mmol/L、100mmol/L、150mmol/L和200mmol/L剂量DMF对正常成人离体肝细胞染毒。采用AO/EB双重染色法进行形态学观察;流式细胞术检测细胞凋亡率变化。结果AO/EB染色可见：活细胞核染色质着绿色,死亡细胞核染色质着橘红色,晚期凋亡细胞核染色质为橘红色并呈固缩状或圆珠状,早期凋亡细胞核染色质着绿色呈固缩状或圆珠状。染毒组早期凋亡细胞多于阴性对照组,随剂量增高,晚期凋亡细胞和死亡细胞也增多。不同剂量组间染毒24小时后,流式细胞术散点图可见,随染毒剂量增加,活细胞率逐渐下降,以200mmol/L剂量组的活细胞率最低。经单因素方差分析,空白对照组和各剂量组间早期凋亡细胞占细胞总数的百分率差异有统计学意义（F=8.299,P〈0.01）,随染毒剂量增高,早期凋亡细胞率增加。结论一定浓度的DMF能诱导正常成人离体肝细胞发生凋亡,其早期凋亡率有随DMF浓度的增高而增高的趋势。     

甲基丙烯酸环氧丙酯对人支气管上皮细胞周期及凋亡影响的研究

目的探讨甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)对人支气管上皮细胞周期及凋亡的影响。方法人支气管上皮细胞(16HBE)经1~16μg/ml剂量的GMA染毒不同次数后,应用流式细胞仪(FCM)检测细胞周期及凋亡率的改变,同时测定细胞分裂指数(MI)。结果经1次染毒处理后,随着染毒剂量的增加,G0/G1期细胞显著减少(P<0.01),S期和G2/M期细胞显著增加,凋亡细胞数增多,细胞分裂指数下降;随着染毒次数的增加,各剂量组细胞周期均明显阻滞于G0/G1期,但高剂量组细胞仍表现出S期和G2/M期增多现象;经3次染毒后,高剂量组细胞出现凋亡率下降、分裂指数升高现象。结论经GMA染毒处理后,16HBE细胞周期由G0/G1期向S期和G2/M期移动而呈现增殖性改变。