β-榄香烯逆转K562/ADM细胞MDR机制的探讨

目的:探讨β-榄香烯(β-elemene)对多药耐药细胞株K562/ADM的耐药逆转及作用机制。方法:MTT法检测抗药性逆转,免疫组化检测Bcl-2及P-gp蛋白的表达,流式细胞术对凋亡百分率及Bcl-2、P-gp蛋白的表达进行定量检测。结果:非细胞毒性浓度的β-elemene(4.0μg/ml)可显著降低ADM对K562/ADM细胞的IC50(P<0.01),逆转倍数为2.18倍;明显增强ADM对K562/ADM细胞的凋亡诱导作用,凋亡率由(1.88±0.11)%上升至(3.93±0.06)%(P<0.01);降低耐药细胞Bcl-2及P-gp的表达,Bcl-2的表达率由(94.8±1.9)%降至(66.7±0.9)%,P-gp的表达率由(98.7±2.1)%降至(76.8±1.4)%。结论:β-榄香烯可部分逆转K562/ADM细胞的耐药性,其逆转机制具有异质性,主要以抑制Bcl-2的表达从而诱导细胞凋亡来逆转MDR,同时兼具降低P-gp表达的作用。     

汉防己甲素联合屈洛昔芬逆转K562/A02细胞耐药与诱导凋亡

目的探讨汉防己甲素(Tet)联合屈洛昔芬(Drol)对耐药细胞系K562/A02的逆转作用及其与诱导凋亡的关系.方法采用甲基四唑蓝法(MTT)测定柔红霉素(DNR)的细胞毒性;采用DNA凝胶电泳法观察Tet、Drol单独及联合应用对K562/A02细胞凋亡诱导作用的影响.结果 0.62 μg/ml Tet、1.94 μg/ml Drol均能增加DNR对K562/A02的细胞毒作用,其半数抑制量IC50分别为7.28±2.06 μg/ml和7.58±3.44 μg/ml,逆转倍数分别为2.94倍和2.82倍.两药联合作用明显增强,其IC50为1.66±0.41 μg/ml,逆转倍数达12.9倍.0.62 μg/ml Tet、1.94 μg/ml Drol单独及联合应用均不会诱导K562/A02细胞凋亡.结论单独应用Tet、Drol可部分逆转K562/A02细胞的耐药性,两药联用具有明显协同效应.Tet、Drol逆转耐药的机理与诱导K562/A02细胞凋亡无关.     

川芎嗪联合三氧化二砷逆转K562/ADM细胞多药耐药的实验研究

目的探讨川芎嗪与三氧化二砷联合逆转耐药人红白血病细胞株K562/ADM多药耐药的效果。方法采用WST-8法测定细胞的药敏性及抗药性逆转,应用流式细胞术检测细胞凋亡、细胞内ADM浓度、P-gp蛋白的表达,采用免疫细胞化学二步法检测细胞GST-π表达。结果非细胞毒性浓度的TMP（20μg/ml）及As2O3（0.5μmol/L）可降低ADM对K562/ADM细胞的IC50（P〈0.05）,2种药物联合应用对ADM的逆转倍数明显高于两者单独应用（P〈0.05）,而且也高于两者单独应用之和;两者以非细胞毒性浓度联合应用提高K562/ADM细胞内ADM浓度和细胞凋亡百分率,作用大于两药单独应用,并且明显下调细胞P-gp和GST-π表达（P〈0.05,P〈0.01）。结论非细胞毒性剂量的TMP和As2O3,均可部分逆转有多药耐药表型的细胞株K562/ADM对阿霉素的耐药性,两者联合应用效果优于单独应用,具有协同作用,其机制可能与下调P-gp和GST-π表达有关。     

蝎毒逆转K562／ADM细胞多药耐药性的初步研究

观察东亚钳蝎毒(BMK)对K562／ADM细胞多药耐药性(MDR)的逆转作用。方法：MTT法，Hoechst33342和PI荧光染色，荧光分光光度法和流式细胞分光光度术。结果：K562／ADM细胞对阿霉素(ADM)具有明显的杭性，与K562细胞相比，抗性倍数约为33倍，而两者对BMK的IC50接近，差异无显著性(P＞0.05)；低毒剂量BMK(10.0μg／mL，50.0μg／mL)与ADM(4.0μg／mL)联合应用，可显著增强ADM对该细胞的生长抑制和诱导凋亡作用，升高细胞內ADM的浓度，降低该细胞对ADM的IC50，使该细胞对ADM的抗性有数倍逆转。结论：BMK可能是一种有效的MDR逆转剂，且与诱导细胞凋亡密切相关。     

β-榄香烯逆转人乳腺癌MCF-7/ADM细胞对阿霉素耐药性的研究

目的　探讨 β 榄香烯 (β ELE)逆转人乳腺癌MCF 7/ADM细胞对阿霉素 (ADM)的耐药性。方法　采用MTT法测定β ELE对人乳腺癌MCF 7/ADM细胞药物敏感性的影响。经荧光分光光度法检测 β ELE对细胞内化疗药物ADM积累的影响 ,应用流式细胞术观察耐药细胞的凋亡抑制蛋白bcl 2改变。结果　β ELE对MCF 7/ADM的耐药性有明显逆转作用 ,非细胞毒性剂量 (6 μg/ml)及低毒剂量 (13μg/ml)的 β ELE逆转倍数分别为 1.4倍及 2 .2倍。β 榄香烯作用后 ,MCF 7/ADM的细胞内ADM浓度明显增加 (P <0 .0 1) ,bcl 2由 90 .2 %降至 70 .0 % (P <0 .0 5 )。结论　β ELE可部分逆转MCF 7/ADM细胞的耐药性 ,逆转机制与增加细胞内药物积累及降低bcl 2的表达有关。     

硼替佐米增加耐药白血病细胞株K562/DNR对化疗药物的敏感性

目的:观察蛋白酶体抑制剂硼替佐米是否可以增加耐药白血病细胞株K562/DNR对化疗药物的敏感性.方法:MTT法计算硼替佐米逆转耐药倍数,流式细胞术(FCM)检测细胞调亡比及细胞内药物浓度.结果:表柔比星单独及联合硼替佐米作用于K562/DNR细胞株的IC50分别为417.0μg/ml和210.4 μg/ml,逆转倍数为1.98倍;柔红霉素单独及联合硼替佐米作用于K 562/DNR细胞株的IC50分别为457.7μg/ml和324.9 μg/ml,逆转倍数为1.4倍.单独应用表柔比星组细胞调亡比为(28.74±4.6)％,联合硼替佐米组细胞调亡比为(39.14±9.6)％.硼替佐米能使K562/DNR细胞内柔红霉素含量增加,而对K562/S细胞无类似影响.结论:蛋白酶体抑制剂硼替佐米能增加耐药白血病细胞株K562/ DNR的化疗药物的敏感性,逆转耐药性.     

补骨脂素逆转K562/ADM多药耐药细胞系耐药性研究

目的:研究补骨脂素对白血病细胞阿霉素耐药株(K562/ADM)多药耐药(multidrug resistance,MDR)性的逆转作用及其机制.方法:采用MTT法检测药物细胞毒性作用,计算其逆转倍数.结果:补骨脂素在1～20μmol·L-1范围内,对K562和K562/ADM无明显细胞毒作用,但与ADM联合用药可使ADM对K562/ADM的IC50明显下降,补骨脂素(1～20μmol·L-1)能不同程度地降低ADM对K562/ADM细胞的IC50值.结论:补骨脂素能逆转K562/ADM细胞的多药耐药.     

β-榄香烯体外逆转人肺腺癌细胞PC9耐吉非替尼的研究

[目的]探讨β-榄香烯体外逆转人肺腺癌细胞PC9耐吉非替尼的作用及其机制.[方法]噻唑蓝(MTT)比色法测定吉非替尼对PC9/ZD的耐药性,计算耐药倍数.MTT法检测无细胞毒的β-榄香烯浓度,并检测此浓度逆转PC9/ZD的作用,计算逆转倍数.Western Blot检测耐药相关蛋白P-gp、survivin的表达情况.[结果]吉非替尼对PC9细胞的IC50为0.21 μmol/L,对PC9/ZD细胞的IC50为5.45μmol/L,耐药倍数为25.9.当β-榄香烯浓度低于10μg/ml时,对PC9及PC9/ZD的抑制率均小于10％,没有细胞毒性.β-榄香烯10μg/ml可逆转PC9/ZD对吉非替尼的耐药性,逆转倍数为2.68,同时细胞内P-gP及survivin的表达水平明显降低.[结论]β-榄香烯具有逆转PC9/ZD细胞耐吉非替尼的作用,可能与下调耐药细胞内P-gp、survivin表达水平相关.     

水飞蓟素联合阿霉素对耐药细胞株MCF-7/ADM的逆转耐药作用

[目的]探讨水飞蓟素联合阿霉素对人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM耐药性的影响.[方法]采用MTT法测定单用阿霉素及其联合水飞蓟素对MCF-7/S、MCF-7/ADM细胞增殖抑制率(IR),计算耐药倍数和逆转倍数.[结果]阿霉素作用MCF-7/S的IC50值(2.89±0.35 μg/ml)明显小于MCF-7/ADM(56.85±2.12μg/ml),耐药倍数为27.6倍;阿霉素联合水飞蓟素作用MCF-7/ADM的IC50值(9.07±0.56μg/ml)明显小于单独使用阿霉素(59.52±2.38μg/ml),逆转耐药倍数为6.6倍.[结论]人乳腺癌MCF-7/ADM细胞对阿霉素具有明确耐药性,水飞蓟素能够明显逆转MCF-7/ADM对阿霉素的耐药性.     

中药提取物逆转K562/ADM细胞的耐药作用及其分子机制的探讨

目的 观察两种中药提取物黄芩苷、京尼平苷对多药耐药(MDR)K562/ADM细胞的耐药逆转作用,探讨其分子机制.方法 建立阿霉素(ADM)诱导K562/ADM细胞耐药模型,分别将不同浓度黄芩苷、京尼平苷作用于K562/ADM细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测其对化疗药物的敏感性,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测多药耐药基因-1(mdr-1)、拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)基因在mRNA水平的表达变化.结果 两种中药提取物黄芩苷、京尼平苷,可增加K562/ADM细胞对ADM的敏感性,K562/ADM细胞增殖受到明显抑制,耐药逆转倍数分别为1.95倍及1.46倍;RT-PCR检测mdr-1基因表达减弱,Topo Ⅱ基因表达增强(P<0.01).结论 黄芩苷、京尼平苷可通过降低K562/ADM细胞mdr-1基因表达和提高TopoⅡ的表达来逆转白血病细胞MDR.     

β-榄香烯联合紫杉醇诱导胃癌细胞凋亡的体外研究

目的:观察联合β-榄香烯和紫杉醇对诱导胃癌细胞凋亡以及对凋亡相关蛋白表达的影响。方法:β-榄香烯和紫杉醇单独及联合作用于胃癌SGC7901细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫印记检测凋亡相关蛋白的表达。结果:单药β-榄香烯作用SGC7901细胞24、48和72小时的IC50值分别为(52.56±6.26)、(28.69±2.36)和(13.33±0.64)μg/ml。单药紫杉醇作用24、48和72小时的IC50值为(7.23±1.98)、(1.72±0.76)和(0.22±0.19)μg/ml。选用低浓度药物(10μg/ml的β-榄香烯和2μg/ml的紫杉醇)联合处理SGC7901细胞24小时,与相应浓度β-榄香烯、紫杉醇单药组相比,两药联合组对SGC7901的增殖抑制率显著增强(P<0.05),细胞凋亡率显著提高。进一步研究发现β-榄香烯和紫杉醇联合后,诱导了PARP裂解以及显著下调了Bcl-2与Bax的比值。结论:β-榄香烯和紫杉醇联合用药后,可能通过下调Bcl-2与Bax的比值诱导PARP裂解,进而抑制胃癌细胞增殖和诱导细胞凋亡。     

5-溴汉防己甲素与汉防己甲素对K562/A02细胞多药耐药性逆转作用的比较

背景与目的:5-溴汉防己甲素(5-bromotetrandrine,BrTet)是汉防己甲素(tetrandrine,Tet)的溴化产物,具有逆转P-糖蛋白(P-glyeoprotein,P-gp)介导的肿瘤多药耐药(muhidrug resistance,MDR)的作用。本研究旨在比较BrTet与Tet对人白血病细胞K562/A02多药耐药的逆转作用。方法:采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)法检测不同浓度BrTet对K562细胞和K562/A02细胞的增殖抑制效应;检测阿霉素(adfiamycin,ADM)对K562细胞和K562/A02细胞增殖的抑制作用,以及加用BrTet、Tet时上述抑制作用的变化,并计算半数抑制浓度(IC50)及逆转倍数。Westernblot法检测各组细胞P-gp的表达,流式细胞仪检测各组细胞内ADM的蓄积。结果:K562/A02细胞对ADM的耐药倍数为49.51倍。2.0μmol/L及更低浓度的BrTet和1.5μmol/L及更低浓度的Tet对K562细胞和K562/A02细胞抑制率均小于10%,无明显细胞毒性作用。加入1.0μmol/L的Tet后,K562/A02细胞对ADM的耐药倍数为12.17倍。加入0.25、0.5和1.0μmol/L的BrTet后,K562/A02细胞对ADM的耐药倍数分别为17.88、9.97和4.24倍。1.0"mol/L的BrTet和Tet分别使K562/A02细胞内ADM浓度提高了69.0%和51.6%,使P-gp表达分别下调了51.1%和43.73%,其差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:BrTet及Tet均可逆转K562/A02细胞耐药,且前者较后者逆转作用更强,逆转机制与抑制P-gp的表达、增加细胞内抗肿瘤药物浓度有关。     

氯丙嗪对耐药细胞系K562/AO2多药耐药逆转作用的研究

目的研究氯丙嗪对耐药细胞系K562/AO2多药耐药逆转作用.方法应用免疫组化观察K562/AO2细胞系的耐药蛋白表达情况,用MTT法测定不同浓度的氯丙嗪对K562/AO2细胞系耐药逆转作用,用流式细胞术测定不同浓度的氯丙嗪与K562/AO2细胞作用后细胞内罗丹明的蓄积情况,用半定量RT-PCR法测定氯丙嗪对K562/AO2细胞多药耐药基因(mdr-1)mRNA表达的影响.结果K562/AO2细胞不但P-gp表达阳性,而且肺耐药相关蛋白(lung resistanceelatedprotein,LRP)表达也阳性;氯丙嗪能增强多柔比星对K562/AO2细胞的杀伤作用(单用ADM组、氯丙嗪0.75 μg/mL+ADM组、氯丙嗪1.5μg/m L+ADM组和氯丙嗪3μg/mL+ADM组对K562/AO2的抑制率分别为5.2%、25.9%、39.1%和74.8%)增加K562/AO2细胞内罗丹明的蓄积(对照组、氯丙嗪0.75 μg/mL组、氯丙嗪1.5 μg/mL组和氯丙嗪3μg/mL组细胞内的荧光强度的均值分别为1.87、10.28、48.75和65.63)对K562/AO2细胞mdr-1 mRNA表达无明显影响(对照组mdr-1和β-actin的面积比为0.41,氯丙嗪组为0.42).结论氯丙嗪对K562/AO2细胞的耐药有较强的逆转作用,并呈剂量依赖关系.     

2-甲氧基雌二醇逆转K562/AO2细胞耐药及其机制的初步研究

目的研究2-甲氧基雌二醇(2-ME)对K562/AO2细胞耐药性逆转作用及其可能机制。方法利用不同浓度的2-ME作用于K562及K562/AO2细胞,MTT法检测细胞对阿霉素的耐药性,计算耐药倍数及逆转倍数;利用AnnexinV /PI双染色法检测K562/AO2细胞的凋亡效应。结果与K562细胞相比,K562/AO2细胞的耐药倍数为50倍;2-ME可显著降低阿霉素对K562/AO2细胞的IC50,逆转倍数为5.9倍。AnnexinV /PI双染色法检测显示,1、4、16 μmol/L的2-ME处理K562/AO2细胞后细胞凋亡率分别为10.32%、21.56% 和16.45%, 而对照组凋亡率仅为6.68%。结论2-ME能够逆转K562/AO2阿霉素耐药,其机制可能与诱导K562/AO2细胞凋亡有关。     

MnSOD模拟化合物诱导人白血病多药耐药K562/ADM细胞凋亡

目的:研究锰超氧化物岐化酶模拟化合物(mimics of manganese superoxide dismutase,MnSODm)对人白血病K562/ADM耐药细胞增殖抑制及诱导凋亡作用.方法:以人白血病高表达耐药基因(mdr1)的K562/ADM多药耐药细胞为靶细胞,应用四氮唑蓝比色法(MTT法)测定细胞增殖活性;光学显微镜、荧光显微镜和透射电镜观察细胞形态学变化;Annexin v/PI双标记法检测K562/ADM细胞凋亡.结果:(1-50),mg/L MnSODm可抑制K562/ADM细胞增殖(P＜0.01),并呈时间和浓度依赖性.MnSODm诱导48h后,K562/ADM细胞出现典型的凋亡形态学改变;Annexin V/PI双染显示凋亡细胞显著增高.结论:MnSODm体外明显抑制人白血病K562/ADM耐药细胞的增殖,并诱导K562/ADM细胞凋亡.     

反义基因逆转肿瘤细胞多药耐药性及诱导细胞凋亡的研究

为探讨克服肿瘤细胞多药耐药(MDR_1)性的方法,提高化疗效果.本文采用多药耐药及义基因(MDR_1-AS PS-ODN)逆转K562/ADM肿瘤细胞的MDR_1,而诱导肿瘤细胞凋亡.发现MDR_1AS PS-ODN诱导K562/ADM细胞株细胞产生大量DNA断片,FACS检测发现几乎全部MDR~ K562/ADM细胞发生凋亡.其结果表明MDR_1-AS PS-ODN能有效、特异地抑     

斑蝥酸钠维生素B6注射液对人白血病K562/AO2细胞的逆转作用及机制的研究

目的研究斑蝥酸钠维生素B6注射液(SCA)体外对K562/AO2细胞多柔比星(ADM)耐药的逆转作用及机制.方法应用MTT法测定SCA作用人白血病K562/AO2细胞后对ADM敏感性的变化.采用流式细胞术(FCM)法测定SCA对K562/AO2细胞内ADM的影响及Bcl-2、P-gp蛋白表达的影响.结果SCA作用K562/AO2细胞前后,对ADM的IC50分别为(40.85±0.40)和(27.09±0.63) μg/mL,逆转倍数为1.51倍;FCM发现SCA能明显增加K562/AO2细胞内ADM的浓度,并使Bcl-2、P-gp蛋白表达下调.结论SCA能部分逆转K562/AO2对ADM的耐药性,机制可能与增加MDR细胞内的ADM浓度,抑制Bcl-2和P-gp蛋白表达有关.     

雷公藤红素逆转K562/A02细胞多药耐药的实验研究

目的探讨雷公藤红素逆转人慢性粒细胞白血病红白血病急变细胞株K562/A02多药耐药的效果。方法采用CCK-8法测定细胞的药敏性及耐药逆转性,应用流式细胞术检测细胞内ADM浓度、P-gp蛋白表达。结果雷公藤红素对K562/A02、K562的半数抑制率浓度（IC50）分别为（295.58±23.288）μmol/L、（411.59±26.551）μmol/L。K562/A02细胞对ADM的耐药性是K562细胞的79.78倍。细胞毒剂量的雷公藤红素作用后,ADM对K562/A02细胞的IC50显著下降（P〈0.05）,逆转倍数为117.860倍。细胞毒剂量（IC50）和非细胞毒剂量（IC10）的雷公藤红素处理后的K562/A02细胞内的ADM浓度显著增加（P〈0.05）,增加倍数分别为1.537倍和1.102倍。雷公藤红素能明显下调K562/A02细胞的P-gp表达。结论雷公藤红素对逆转K562/A02细胞的耐药性有一定的作用,其机制可能与下调P-gp表达有关。     

榄香烯联合紫杉醇诱导肺癌细胞凋亡和调控细胞周期的体外研究

目的:观察榄香烯和紫杉醇对肺癌A549细胞的诱导凋亡和周期调控作用。方法:榄香烯和紫杉醇单独及联合作用于肺癌A549细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,免疫印迹法检测蛋白的表达。结果:榄香烯(20μg/ml、80μg/ml)和紫杉醇(2μg/ml)两种药物联合作用A549细胞时,产生协同的增殖抑制作用。榄香烯只诱导A549细胞少量凋亡,紫杉醇使细胞阻滞在G2/M期。榄香烯和紫杉醇联合应用时,细胞凋亡率提高,并检测到PARP的裂解。榄香烯没明显改变survivin的表达,紫杉醇能上调survivin表达。低浓度榄香烯和紫杉醇联合后survivin仍高表达,而高浓度榄香烯和紫杉醇联合后,sur-vivin表达明显下调。结论:榄香烯和紫杉醇对肺癌A549细胞有诱导凋亡和调控细胞周期的作用。     

粉防己碱对人口腔上皮癌多药耐药KB-MRP1细胞株多药耐药性的逆转作用

背景与目的:粉防己碱(tetrandrine,Tet)是从中草药粉防已的根块中提取的双苄基异喹啉生物碱,具有逆转P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)介导的肿瘤多药耐药(multidrug resistance,MDR)作用.本研究探讨粉防己碱对人口腔上皮癌多药耐药细胞株KB-MRP1耐药的逆转作用及其可能的机制.方法:采用MTT法检测不同浓度粉防己碱对KB-3-1细胞和KB-MRP1细胞的增殖抑制效应;MTT法检测顺铂(cisplatin,DDP)、长春新碱(vincristine,VCR)、阿霉素(adriamycin,ADM)、依托泊苷(etoposide,VP-16)对KB-3-1、KB-MRP1细胞增殖的抑制作用及加用粉防己碱时的变化;采用流式细胞仪检测细胞内ADM蓄积程度以及细胞凋亡.结果:1.5μg/ml及更低浓度的粉防己碱对KB-3-1和KB-MRP1细胞无明显细胞毒性作用.KB-MRP1对VCR、ADM、VP-16和DDP的耐药倍数分别为21.23、38.39、12.47和1.31.加入1 μg/ml粉防己碱后,KB-MRP1对VCR、ADM、VP-16的耐药逆转倍数分别为4.96、5.85和4.27倍.加入1.5 μg/ml粉防己碱后,KB-MRP1对上述化疗药物的敏感程度提高更明显.1.5 μg/ml浓度的粉防己碱可明显提高ADM在KB-MRP1细胞内的蓄积,增强VCR诱导的KB-MRP1细胞凋亡.结论:粉防己碱可以逆转KB-MRP1细胞的多药耐药,逆转效果与药物浓度有关,逆转机制可能与增加细胞内化疗药物蓄积和增强化疗药物诱导的细胞凋亡有关.