托瑞米芬和他莫昔芬对MCF7/ADR多药耐药的逆转作用

目的：研究托瑞米芬（toremifene,TOR）和他莫昔芬（tamoxifen,TAM）对乳腺癌耐阿霉素细胞株MCF7/ADR多药耐药的逆转作用及其可能作用机制。方法：采用SRB法测量TOR、TAM对MCF7/ADR细胞的耐药逆转倍数;荧光显微镜、流式细胞仪测定加入TOR、TAM前后耐药细胞内荧光含量表达变化;Westernblotting检测TOR、TAM对P-gp表达的影响。结果：（5、10、20）μmol/L的TOR和TAM对MCF7/ADR耐药的逆转倍数分别为（1.5、7.0、35.4）倍和（2.0、5.4、30.7）倍,而对MCF7/S细胞没有显著性作用。加入TOR、TAM后,MCF7/ADR细胞内ADR荧光的呈现由核外进入核内,荧光含量亦具浓度依赖性提高。MCF7/S细胞P-gp表达阴性,而MCF/ADR细胞P-gp表达阳性。TOR[（5、10、20）μmol/L]与TAM[（5、10）μmol/L]对MCF7/ADR细胞株中的P-gp表达未产生显著性抑制作用。结论：TOR可明显逆转MCF7/ADR细胞株对ADR的耐药性,增强其细胞毒作用,逆转强度与TAM相当。其机制可能是通过对P-gp结构功能的调控来逆转耐药性,而不是通过下调MDR1基因的蛋白水平表达。     

托瑞米芬和他莫昔芬对MCF7/ADR多药耐药的逆转作用

目的:研究托瑞米芬(toremifene,TOR)和他莫昔芬(tamoxifen,TAM)对乳腺癌耐阿霉素细胞株MCF7/ADR多药耐药的逆转作用及其可能作用机制。方法:采用SRB法测量TOR、TAM对MCF7/ADR细胞的耐药逆转倍数;荧光显微镜、流式细胞仪测定加入TOR、TAM前后耐药细胞内荧光含量表达变化;Westernblotting检测TOR、TAM对P-gp表达的影响。结果:(5、10、20)μmol/L的TOR和TAM对MCF7/ADR耐药的逆转倍数分别为(1.5、7.0、35.4)倍和(2.0、5.4、30.7)倍,而对MCF7/S细胞没有显著性作用。加入TOR、TAM后,MCF7/ADR细胞内ADR荧光的呈现由核外进入核内,荧光含量亦具浓度依赖性提高。MCF7/S细胞P-gp表达阴性,而MCF/ADR细胞P-gp表达阳性。TOR[(5、10、20)μmol/L]与TAM[(5、10)μmol/L]对MCF7/ADR细胞株中的P-gp表达未产生显著性抑制作用。结论:TOR可明显逆转MCF7/ADR细胞株对ADR的耐药性,增强其细胞毒作用,逆转强度与TAM相当。其机制可能是通过对P-gp结构功能的调控来逆转耐药性,而不是通过下调MDR1基因的蛋白水平表达。     

托瑞米芬协同EP方案对耐药非小细胞肺癌的影响

目的研究托瑞米芬(TOR)联合鬼臼乙叉甙-顺铂(EP)方案,对耐药的且P-gp表达阳性的非小细胞肺癌(non-small celllung cance,NSCLC)的逆转作用,为提高化疗效果提供新方法.方法应用RT-PCR方法检测耐药的NSCLC患者外周血,P-gp阳性的38例随机分两组,逆转组应用TOR60mg,2次/日,1～7天后采用EP方案化疗;对照组仅用EP方案治疗.结果 (1)逆转组PR 7例,NC 9例,PD 3例,有效率为36.8%(7/19),中位生存期为9.2个月,1年生存率为42.1%;(2)对照组NC 8例,PD 11例,有效率为0,中位生存期为4.2个月,1年生存率为26.3%;(3)两组在有效率(x2=8.58,P＜0.005)、中位生存期(t=2.56,P＜0.01)方面差异显著;(4)逆转组P-gp转阴率为47.4%(9/19),对照组无转阴者;(5)毒副作用方面,主要为骨髓抑制和消化道反应,一般患者均可耐受.结论 TOR与EP方案联合对耐药的NSCLC患者具有显著的协同抗肿瘤效应,TOR是良好的肿瘤耐药逆转药物.     

托瑞米芬逆转乳腺癌耐药蛋白介导的多药耐药机制

目的 探讨托瑞米芬逆转乳腺癌耐药蛋白(BCRP)介导的多药耐药机制。方法 通过基因扩增,构建分别由BCRP启动子和巨细胞病毒(CMV)启动子启动表达BCRP的重组质粒pcDNA3-Promoter-BCRP和作为对照的质粒pcDNA3-CMV-BCRP,将其分别转染雌激素受体α（ERα）阳性的MCF-7和ERα阴性的MDA-MB-231乳腺癌细胞系,建立由BCRP启动子和CMV启动子启动表达BCRP的4种耐药细胞系MCF-7/Promoter-BCRP、MCF-7/CMV-BCRP、MDA-MB-231/PromoterBCRP和MDA-MB-231/CMV-BCRP。在耐药细胞培养基中加入托瑞米芬,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot、外排实验以及细胞毒性实验观察托瑞米芬对不同细胞系的耐药逆转效果。结果与空白对照组（未加药物）相比,托瑞米芬以剂量依赖方式抑制BCRP mRNA的表达,0.1、1和10 μmol/L托瑞米芬处理组MCF-7/Promoter-BCRP细胞中BCRP mRNA的表达水平分别下调29.5％(P＜0.05)、68.1％ (P＜0.01)和97.4％(P＜0.01);MCF-7/Promoter-BCRP细胞经托瑞米芬和17β-雌二醇联合处理后,细胞中BCRP mRNA的相对表达水平为64.2％±1.3％,明显高于托瑞米芬单独处理组(3.8％±0.2％,P＜0.01)。托瑞米芬对各组细胞系中BCRP蛋白表达的调控作用与mRNA相似。经托瑞米芬处理后,MCF-7/Promoter-BCRP细胞内米托蒽醌的荧光强度显著增强,外排米托蒽醌的能力降低了 47.3％ (P ＜0.05);经托瑞米芬和17β-雌二醇联合处理后,MCF-7/Promoter-BCRP细胞内米托蒽醌的荧光强度明显低于托瑞米芬单独处理组,外排米托蒽醌的能力升高了61.5％。托瑞米芬可有效逆转MCF-7/Promoter-BCRP细胞对米托蒽醌的耐药性。上述作用在MCF-7/CMV-BCRP、MDA-MB-231/Promoter-BCRP和MDA-MB-231/CMV-BCRP细胞中未能体现。结论 托瑞米芬可能通过ERot的介导与BCRP启动子上游调控序列中的ERE结合,负性调节BCRP的表达,抑制BCRP蛋白的功能,在体外有效逆转BCRP介导的多药耐药。     

肺癌多药耐药生物逆转策略

肺癌的耐药性一直是影响其化疗效果的一大难题。耐药性的产生机制非常复杂，随着现代分子生物学技术的发展，不断有新的观点提出，并据此在逆转耐药方面提出许多新的干预方法，如生物逆转策略。这是解决肺癌耐药值得探究并有应用前景的策略。     

大剂量托瑞米芬逆转肺癌多药耐药及化疗增敏的临床研究

目的探讨大剂量托瑞米芬增敏长春瑞滨和顺铂（NP方案）对非小细胞肺癌（NSCLC）的化疗及逆转肺癌多药耐药的效果。方法入组患者随机分为两组。治疗组采用大剂量托瑞米芬＋NP方案治疗。对照组仅用NP方案治疗。治疗组患者在口服托瑞米芬后第2天和第8天抽血测定托瑞米芬血清浓度。结果治疗组PR 8例,SD 14例,PD 2例,有效率为33.3%。对照组PR 2例,SD19例,PD 3例,有效率为8.3%。治疗组与对照组相比,有效率差异有显著性（P〈0.05）。治疗组中位生存期9.4个月,对照组为6.3个月,两组中位生存期差异有显著性（P〈0.05）。治疗组1年生存率41.7%,对照组为20.8%,两组差异无显著性（P〉0.05）。两组不良反应差异无显著性。托瑞米芬血清浓度在第2天和第8天均超过5μmol/L。结论通过随机对照研究证实,大剂量托瑞米芬能增敏长春瑞滨和顺铂对NSCLC的化疗及逆转肺癌多药耐药,联合NP方案治疗NSCLC安全有效。     

肺癌多药耐药生物逆转策略

肺癌的耐药性一直是影响其化疗效果的一大难题。耐药性的产生机制非常复杂，随着现代分子生物学技术的发展，不断有新的观点提出，并据此在逆转耐药方面提出许多新的干预方法，如生物逆转策略。这是解决肺癌耐药值得探究并有应用前景的策略。     

肺癌化疗多药耐药与逆转策略

恶性肿瘤化疗失败的主要原因是多药耐药的发生。研究表明,多药耐药的机制十分复杂,P-gp、TopoⅡ、GST-π、金属硫蛋白(metallothionein,MT)及p53基因突变等是肺癌产生多药耐药的物质基础。本文重点介绍非小细胞肺癌耐药因子及耐药逆转的对策,以指导临床化疗药物的筛选及治疗方案的优化,有助于提高肺癌患者的生存期和生存率。     

雌、孕激素受体在托瑞米芬逆转MCF7/ADR细胞耐药中的作用

目的：研究托瑞米芬（toremifene，TOR）对MCF7／ADR细胞耐药的逆转作用及雌孕激素受体可能在其中发挥的作用。方法：采用SRB法测定TOR的耐药逆转倍数；流式细胞仪测定加入TOR后耐药细胞内Rhodamine 123荧光含量表达变化；Western blot检测TOR对P-gP表达的影响；免疫组化测定TOR对细胞雌孕激素受体表达情况的影响。结果：5、10、20moL／L的TOR对MCF7／ADR耐药的逆转倍数分别为1．5、7．0、35．4倍，而对MCF7／S细胞没有显著性作用。加入TOR后，MCF7／ADR细胞内ADR荧光的呈现由核外进入核内，荧光含量显著提高，接近于敏感细胞。MCF7／S细胞中P-gp表达阴性，而MCF／ADR细胞中P-gp表达阳性。5、10、20mol／L TOR对MCF7／ADR细胞中P-gp表达未产生显著性抑制作用。MCF7／S细胞的雌激素受体表达阳性，孕激素受体表达弱阳性。MCF7／ADR细胞的雌、孕激素受体表达均阴性。10mol／L TOR对MCF7／S、MCF7／ADR细胞的雌、孕激素受体表达没有影响。结论：TOR可显著逆转MCF7／ADR细胞对ADR的耐药性。其逆转作用与雌、孕激素受体表达情况无明显关系，可能是通过抑制P-gp药泵功能来实现的。     

红霉素逆转乳腺癌多药耐药的临床研究

目的 :研究红霉素逆转乳腺癌多药耐药 (MDR)的临床疗效。方法 :采用免疫组化SP法检测乳腺癌P 糖蛋白 (P gp)表达 ,将P gp表达阳性者随机分两组 :红霉素加化疗组 (试验组 ) 2 8例 ,单纯化疗组 (对照组 ) 14例 ,采用CAF方案化疗。结果 :试验组CR PR 19例 ( 67.9% ) ,对照组 4例 ( 2 8 6% ),两组比较差异有显著性 (P <0 0 5)。结论 :红霉素对逆转乳腺癌MDR具有一定作用。     

非小细胞肺癌多药耐药性病理学检测的临床意义

 目的 检测113例非小细胞肺癌（NSCLC）中谷胱甘肽巯基转移酶π（GST-π）、肺耐药相关蛋白（LRP）、DNA拓扑异构酶Ⅱa（TopoⅡa）、多药耐药相关蛋白（MRP）和多药耐药基因（MDRt）的表达，观察上述指标与肿瘤I临床病理因素的关系及各指标表达之间的相关性。方法 采用免疫组化SP法检测GST-π、LRP、TopoⅡa蛋白的表达；应用原位杂交技术检测MRP和MDR1 mRNA表达。结果 （1）GST-π、LRP、TopoⅡa蛋白及MRP、MDR1 mRNA在113例NSCLC中的阳性表达率分别为75.2％、80．5％、60．2％、79．6％、51．3％。其中LRP表达最高，MDR1表达最低。（2）LRP、TopoⅡa和MRP的表达分别与肿瘤组织学类型有关。（3）GST-π与MRP（P〈0．05）、LRP与MRP（P〈0．01）、MDR，与MRP（P〈0．01）的表达间具有相关性。结论 （1）多种耐药相关基因的过度表达及其相互作用可能是NSCLC产生原发MDR的重要原因。（2）LRP和MRP过度表达，TopoⅡa高表达和MRP低表达可能分别与肺腺癌、鳞癌的化疗敏感性有关。     

载体表达小干扰RNA逆转卵巢癌的多药耐药

目的:探讨载体表达的小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA)逆转卵巢癌细胞多药耐药的可行性。方法:浓度梯度诱导法建立人卵巢癌阿霉素耐药细胞株OVCAR/AR;脂质体介导将MDR1特异性siRNA的表达载体(pSN/mdr1a和pSN/mdr1b)转染OVCAR/AR细胞;实时定量RT-PCR检测MDRlmRNA的表达;流式细胞术检测P-gp的表达,罗丹明试验检测P-gp的药物转运功能;MTT法检测OVCAR/AR细胞对化疗药的抵抗性。结果:转染pSN/mdr1a和pSN/mdr1b后,OVCAR/AR细胞的MDR1mRNA和P-gp的表达均显著下降,P-gp的转运功能减少,OVCAR/AR细胞对阿霉素、泰素的耐药性逆转。结论:载体表达的siRNA可持久有效地抑制卵巢癌耐药细胞MDR1mRNA和P-gp的表达,并逆转其多药耐药。     

TAM对非小细胞肺癌经NVB-DDP方案诱导耐药性逆转的临床观察

目的:以大剂量三苯氧胺(Tamoxifen,TAM)逆转非小细胞肺癌经多次长春瑞滨-顺铂方案治疗后所产生的多药耐药性,提高疗效。方法:研究前均以流式细胞技术检测患者外周血淋巴细胞(PBL)中P-gp的表达。将72例对长春瑞滨-顺铂方案治疗产生耐药性的非小细胞肺癌患者随机分成两组,每组36例。A组为三苯氧胺治疗组,B组为对照组。A组患者在本次研究中每次化疗前3天及化疗第1、2天口服TAM100mg,每日2次,化疗方案为长春瑞滨25mg/m2,iv,d1,8;顺铂40mg/m2ivd1～3,每28天重复,不少于2周期。B组不服用TAM,仅进行化疗,方案同A组。每周期结束后均检测P-gp的表达并评价临床疗效。结果:两组患者在本研究前PBL中P-gp均呈阳性,A组的总有效率为33.3%(12/36),并有47.2%(17/36)P-gp转阴或显著降低;B组总有效率为13.9%(5/36),P-gp无转阴或显著下降者。经统计学处理,两组临床有效率P<0.01,P-gp转阴率P<0.01,其差异均具有显著性。结论:大剂量TAM对经多次长春瑞滨-顺铂方案治疗后产生了耐药性的患者有较好的逆转作用,可使疗效再次提高。     

阿帕替尼逆转P-gp转运体介导的乳腺癌化疗多药耐药性的作用及其机制

目的 探讨阿帕替尼对人乳腺癌化疗多药耐药性的逆转作用及其机制。方法 不同浓度的阿帕替尼作用于体外培养的人乳腺癌MCF-7及MCF-7/ADR细胞48 h,MTT法检测阿帕替尼对两种细胞的细胞毒性;低毒浓度的阿帕替尼与化疗药物紫杉醇及阿霉素联用,探讨阿帕替尼对两种细胞化疗耐药性的影响;采用流式细胞术检测阿帕替尼对罗丹明123在MCF-7及MCF-7/ADR细胞内蓄积的影响;采用Pgp-Glo? Assay Systems试剂盒观察阿帕替尼对多药耐药相关蛋白P-gp的ATPase活性的影响;采用Western blot法检测阿帕替尼对P-gp表达及AKT磷酸化的影响。结果 阿帕替尼可浓度依赖性地逆转乳腺癌MCF-7/ADR细胞对紫杉醇及阿霉素的多药耐药性（P<0.05）、增加罗丹明123在MCF-7/ADR细胞内的蓄积（P<0.05）及激活P-gp转运体的ATPase活性（P<0.05）,而对P-gp的表达没有影响;此外,阿帕替尼不改变AKT的磷酸化水平。结论 阿帕替尼可能通过抑制P-gp转运体的外排功能逆转P-gp转运体介导的乳腺癌化疗多药耐药性。     

汉防己甲素逆转白血病细胞株K562/ADM多药耐药性机制研究

目的 研究汉防己甲素(TTD)对慢性粒细胞白血病急性变白血病细胞株K562／ADM多药耐药(MDR)逆转的机理。方法 采用流式细胞仪检测细胞内化疗药物的浓度及细胞表面P糖蛋白(P-gp)的表达；荧光定量PCR法检测MDR1 mRNA；通过流式细胞仪检测Anexin—V判断凋亡细胞的数量。结果 10μmol/L的TTD处理K562／ADM细胞后，细胞内阿霉素(ADM)的浓度明显提高；K562／ADM细胞MDR1 mRNA／P-gp的表达下降；TTD能增强ADM致细胞凋亡的作用。结论 汉防己甲素的耐药逆转机制除了下调MDR1 mRNA／P-gp的表达引起细胞内抗癌药物的积聚外，增加抗癌药物致细胞凋亡也是耐药逆转的重要原因。．     

屈洛昔芬逆转人乳腺癌耐药细胞株MCF7/ADR多药耐药性的研究

目的:研究屈洛昔芬(DRO)对乳腺癌耐药细胞株(MCF7/ADR)多药耐药性(MDR)的影响。方法:应用MTT、半定量RT-PCR和免疫细胞化学染色,研究DRO对MCF7/ADR药物敏感性、耐药相关基因MDR1、谷胱甘肽S转移酶Pi(GST-π)、拓扑异构酶Ⅱα(TopoⅡα)和多药耐药相关蛋白(MRP)表达的影响。流式细胞技术观察细胞内药物积累。结果:在20、10和5μmol/L浓度时DRO对MCF7/ADR耐药性的逆转倍数分别为16、8和3倍,逆转强度与同类化合物三苯氧胺相当。DRO处理后,MDR1和GSTπ基因表达水平明显降低。DRO使ADR在细胞内的积累分别增加到2.5(20μmol/L)、2.0(10μmol/L)和1.5(5μmol/L)倍。结论:DRO具有较强的逆转MCF7/ADR耐药性的作用,其逆转机制是多途径的。     

人肺腺癌多药抗药细胞系LC—3／CDDP细胞内阿霉素聚集量变化

多药抗药细胞系ＬＣ—３／ＣＤＤＰ为人肺腺癌细胞系ＬＣ—３经顺铂选择培养８个月建立的细胞系，对顺铂及其他几种抗肿瘤药物具有抗药性。对细胞内阿霉素聚集量测定发现，该细胞系细胞内阿霉素聚集量较亲代细胞明显减少。二性霉素Ｂ、芳香维甲酸乙酯可使细胞内阿霉素聚集量增加，两者联合应用基本可使抗药性逆转。细胞内药物聚集减少可能为ＬＣ—３／ＣＤＤＰ细胞系对多种抗肿瘤药物产生交叉抗药性的机制之一。