介入治疗前后宫颈癌组织局部肿瘤细胞Th1/Th2类因子表达动态变化的研究

目的:研究动脉介入化疗前后宫颈癌组织内肿瘤细胞Th1/Th2类细胞因子表达的动态变化。方法:用免疫组化法检测21例宫颈癌介入治疗前后标本IL-2、IFN-γ和IL-4的表达率及表达强度。结果:介入前,介入治疗后第7天及介入治疗后第14天,IL-2表达率为19.05%、85.71%、19.05%;IFN-γ表达率为28.57%、90.48%、38.10%;IL-4表达率为57.14%、76.19%、28.57%。各项指标3个时间点两两的比较,除介入前与介入后14天无统计学差异(P>0.05),其余均有统计学意义(P<0.01)。结论:介入治疗能有效地逆转癌组织局部肿瘤细胞Th1/Th2类细胞因子的表达,增强肿瘤局部免疫。     

Survivin、Fas与FasL在宫颈癌介入化疗前后组织中的表达及意义

目的:探讨细胞凋亡相关蛋白Survivin、Fas、FasL在宫颈癌术前行动脉介入化疗前后组织中的表达变化及其临床意义。方法:采用免疫组化的方法,检测56例ⅠB～ⅡB期的宫颈癌介入化疗前、后组织标本、40例正常宫颈组织以及30例宫颈上皮内瘤变组织中Survivin、Fas与FasL的表达,并分析其相关性,探讨介入前后各因子的表达与临床有效性的关系。结果:(1)介入化疗后宫颈癌组织中Survivin、FasL的表达较介入前显著下降,而Fas的表达则显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)介入化疗前后Fas表达变化与Survivin的表达变化及FasL表达变化呈明显负相关(r分别为-0.9580,-0.9530;P<0.05)。(3)术前介入前后宫颈癌组织中Survivin、FasL表达下降越明显,Fas表达上升越显著,临床有效率越高(P<0.05)。结论:凋亡蛋白Survivin、FasL、Fas表达变化与宫颈癌的发生发展密切相关,通过术前动脉介入化疗促进宫颈癌肿瘤细胞的凋亡,可达到抑制肿瘤生长、缩小肿瘤体积、降低临床分期及抑制远处转移的目的。     

Fas FasL在卵巢浆液性肿瘤组织中的表达及意义

目的　探讨Fas、FasL在正常卵巢和卵巢浆液性肿瘤组织中的表达及其临床意义。方法　 2 0 0 0年 3月至 2 0 0 1年 1月中国医科大学附属第二医院等应用免疫组化法检测Fas、FasL在 5 6例卵巢浆液性肿瘤及 8例正常卵巢组织新鲜标本中的表达。结果　Fas在卵巢浆液性癌 (OSC)中的阳性表达率为 39 5 % ,明显低于交界性肿瘤 (77 8% )、良性肿瘤组织 (77 8% )及正常卵巢组织 (75 0 % ) ,差异有显著性意义 (P <0 0 5 )。FasL在OSC中的阳性表达率为 78 9% ,明显高于交界性肿瘤 (4 4 4 % )、良性肿瘤组织 (33 3% )及正常卵巢组织 (37 5 % ) ,差异有显著性意义 (P <0 0 5 )。卵巢浆液性癌中 ,Fas、FasL表达与临床分期相关 (P <0 0 5 ) ,与其他生物学特征无关 (P >0 0 5 )。结论　Fas在卵巢浆液性癌中表达下调 ,FasL在卵巢浆液性癌中过表达。     

宫颈癌介入治疗前后敏感相关基因的表达谱研究

目的研究表达谱芯片筛选子宫颈癌介入治疗前后的差异表达基因,探究宫颈癌介入治疗的分子机制。方法取3例治疗有效的宫颈癌治疗前后的组织标本,采用基因表达谱芯片筛查差异表达基因,利用MAS软件挖掘差异表达基因的功能通路。结果介入治疗后和治疗前癌组织相比有209条基因表达上调,922条下降。功能分析示涉及细胞DNA修复、有丝分裂、BRCA1、BRCA2和ATR基因相关通路、乏氧相关因子等。结论表达谱芯片可用来快速高通量筛查可能与介入化疗栓塞敏感性相关的差异表达基因。     

口服大剂量米非司酮对子宫内膜癌细胞凋亡和端粒酶活性的影响

目的：研究口服大剂量米非司酮对子宫内膜癌细胞凋亡和端粒酶活性的影响，并探讨其作用机制。方法：12例未治疗的子宫内膜癌患者口服大剂量米非司酮（100mg/d,共5天）。第六天手术，用免疫组织化学法（LSAB法）检测用药前后内膜癌组织Fas、FasL表达的变化。用半定量端粒重复序列扩增法（semiquantitative telomere repeat amplification protocol,TRAP)测定用药前后内膜癌组织端粒酶活性的改变。结果：口服大剂量米非司酮后子宫内膜Fas表达明显升高（P＜0.01),FasL表达及端粒酶活性无明显改变（P＞0.05)。结论：口服大剂量米非司酮可促进子宫内膜癌细胞凋亡，但对端粒酶活性无明显影响。     

α1β3、ICAM-1、E-cadherin、P-选择素对宫颈癌局部浸润作用的研究

目的探讨细胞黏附分子在宫颈癌局部浸润中的作用。方法应用组织芯片技术和免疫组织化学方法对比检测子宫颈鳞状细胞原位癌30例、微小浸润癌34例、浸润癌36例中α1β3、ICAM-1、E-cadherin和P-选择素的表达。结果α1β3在原位癌中的表达率明显低于微小浸润癌和浸润癌(P<0.05),微小浸润癌与浸润癌的表达率无显著差别(P>0.05);P-选择素的表达率在原位癌、微小浸润癌和浸润癌中无显著差别(P>0.05);ICAM-1、E-cadherin在原位癌中的阳性表达率均显著高于微小浸润癌(P<0.05),微小浸润癌中的阳性表达率均显著高于浸润癌(P<0.05)。ICAM-1、E-cadherin在微小浸润癌、浸润癌中的表达水平密切相关(P<0.01),ICAM-1、E-cadherin的阳性表达与子宫颈癌的浸润呈显著负相关(r=-0.8726,P<0.01和r=-0.7968,P<0.01)。结论α1β3、ICAM-1、E-cadherin与宫颈癌的局部浸润有关,其中ICAM-1、E-cadherin在宫颈癌局部浸润过程中可能起着重要作用。     

环氧合酶-2、bcl-2蛋白在宫颈鳞癌组织中的表达及意义

目的:探讨宫颈鳞癌组织中环氧合酶(COX-2)、bcl-2蛋白的表达及其与宫颈癌临床分期、病理分级、淋巴转移的关系。方法:采用免疫组化法对40例宫颈癌组织中COX-2和bcl-2蛋白的表达进行检测分析,以10例正常宫颈组织作为对照。结果:COX-2和bcl-2蛋白在正常宫颈组织中阳性表达率均为0(0/10)。COX-2在宫颈原位癌、Ⅰ~Ⅱ期及Ⅲ期的阳性表达率分别为50.0%、54.5%和66.7%,宫颈鳞癌及正常宫颈组织组之间比较差异有显著性(P<0.05),宫颈原位癌、宫颈鳞癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期间差异无显著性(P>0.05)。COX-2在Ⅰ~Ⅱ期宫颈鳞癌表达与淋巴结转移有关(P<0.05)。bcl-2在宫颈原位癌、宫颈鳞癌Ⅰ~Ⅱ期、Ⅲ期癌细胞胞浆中未着色,但在癌间质有不同程度染色。bcl-2在宫颈癌及正常宫颈组织组之间差异有显著性(P<0.05)。宫颈原位癌、宫颈癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期间差异无显著性(P>0.05)。bcl-2与癌细胞分化程度及淋巴结转移无关(P>0.05)。COX-2与bcl-2在宫颈鳞癌组织中表达无相关性(P>0.05)。结论:COX-2和bcl-2蛋白在正常宫颈组织中均不表达。COX-2在宫颈鳞癌中的表达与临床分期和病理分级无关,与淋巴结转移有关。二者在宫颈癌中的表达无相关性。检测宫颈鳞癌组织中COX-2的表达有利于早期诊断及估计宫颈癌患者的预后。     

主动免疫治疗对原因不明复发性流产患者外周血淋巴细胞Fas表达的影响

目的:探讨经主动免疫治疗后对原因不明复发性流产(URSA)患者外周血淋巴细胞Fas表达的影响。方法:收集来我院就诊URSA患者30例,采用荧光标记流式细胞分析技术,检测经淋巴细胞主动免疫治疗前、一疗程结束后3周的外周血淋巴细胞Fas表达。同时选择同期正常育龄妇女20例,作为正常对照组,比较两组Fas表达情况。结果:①CD4+ T淋巴细胞的Fas表达,正常对照组与URSA组治疗前、后的比较中,差异无统计学意义(P>0.05);②URSA组治疗前的CD8+ T淋巴细胞和NK细胞的Fas表达均比正常对照组明显升高(P<0.05);③URSA组治疗后的CD8+ T淋巴细胞和NK细胞的Fas表达均较治疗前降低(P<0.05)。结论:URSA患者存在CD8+ T淋巴细胞和NK细胞的异常激活,主动免疫治疗可以降低Fas在淋巴细胞上的表达,从而有利于胚胎的发育。     

Survivin与Fas在宫颈不典型增生和宫颈癌中的表达及临床意义

目的探讨凋亡抑制蛋白Survivin、促细胞凋亡蛋白Fas在正常宫颈、宫颈上皮内瘤样变(CIN)和宫颈癌中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化S-P法,检测Survivin、Fas蛋白在9例正常宫颈、15例CIN、34例宫颈鳞癌组织中的表达。所有标本均取自2000～2002年间在中国医科大学附属第一医院及辽宁省肿瘤医院就医的患者。结果Survivin、Fas在正常宫颈组织中的阳性表达率分别为0、88.89%;在CIN中的阳性表达率分别为40.00%、53.33%;在宫颈鳞癌中阳性表达率分别为67.67%、44.12%,二者在宫颈不同组织的表达差异有显著性(P<0.05)。Survivin表达与宫颈鳞癌临床分期及病理分级成正相关(P<0.05),Fas表达仅与病理分级成正相关(P<0.05)。Survivin表达随宫颈疾病发展有明显增加趋势,Fas表达有明显降低趋势,二者的阳性表达呈负相关。结论Survivin表达引起的细胞凋亡抑制,在宫颈癌的发生发展中起一定作用。Survivin基因的表达与宫颈癌组织中Fas蛋白的表达呈负相关。     

增殖细胞核抗原对局部晚期宫颈癌新辅助化疗敏感性的预测价值

目的探讨增殖细胞核抗原作为评价局部晚期宫颈癌新辅助化疗敏感性指标的可行性。方法收集2007年1月至2007年9月南华大学第一附属医院妇产科收治的49例局部晚期宫颈癌患者新辅助化疗前后标本组织,采用免疫组织化学技术检测癌组织中增殖细胞核抗原的表达。结果49例局部晚期宫颈癌患者经新辅助化疗治疗2周后评价临床疗效,临床有效(CR+PR)率为79.6%(39/49)。新辅助化疗有效组化疗前宫颈癌组织中PCNA阳性细胞数比率明显高于无效组(P0.05)。结论增殖细胞核抗原(PCNA)是判定局部晚期宫颈癌化疗敏感性的重要指标。     

雌激素对去势小鼠脾细胞凋亡的作用机制探讨

目的:探讨雌激素对去势小鼠脾细胞凋亡、凋亡基因Fas、FasL及ER亚型表达的影响。方法:流式细胞仪检测不同浓度E2时去势小鼠脾细胞的凋亡率;RT-PCR方法检测细胞内Fas、FasL及ERα和ERβmRNA的表达。结果:除最低浓度(10-5μmol/L)外,去势+E2组凋亡率及Fas、FasL基因的表达都高于青年组(P<0.05);与去势对照组相比,E2在10-3μmol/L、10-2μmol/L浓度时凋亡率及Fas、FasL基因的表达增高(均P<0.01)。E2在10-4μmol/L时ERα、ERβ基因的表达升高(ERα:P<0.05;ERβ:P<0.01),以后随浓度增加ERα和ERβmRNA水平有下降去势。结论:高浓度E2致脾细胞凋亡,与上调凋亡促进基因Fas、FasL基因表达有关,低浓度E2可能逆转去势小鼠脾细胞凋亡。不同浓度E2对去势小鼠脾细胞ERα和ERβ基因表达的影响支持雌激素对ER表达的调节作用:在生理范围内为正向调节,超生理范围为负向调节。     

Upregulation of FasL by LPA on ovarian cancer cell surface leads to apoptosis of activated lymphocytes

OBJECTIVE: Constitutive expression and upregulation of FasL by malignant epithelial cells counterattack infiltrating natural killer (NK) cells and cytotoxic T lymphocytes (CTLs) and induce apoptosis of normal cells within the tumor, which may induce metastasis. As little is known about the mechanisms that regulate expression of Fas ligand and the subsequent release of FasL in epithelial ovarian cancer cells (EOC), we investigated the effects of lysophosphatidic acid (LPA) on FasL expression and associated signaling pathways. METHODS: We used established EOC cell lines that were incubated with or without LPA and FasL expression was detected by flow cytometry. Cells were additionally lysed and detected for total protein expression. Activated CD4+ T cells, after coculture with or without EOC, were collected for apoptosis staining and analysis by flow cytometry. RESULTS: Flow cytometry showed that LPA strongly upregulated FasL expression on the OVCAR3 cell surface (P < 0.01), yet in Dov13 cells, LPA significantly upregulated FasL expression only in the presence of the general matrix metalloproteinase (MMP) inhibitors GM6001 and MMP inhibitor II (P < 0.01). The MEK/ERK1/2 kinase cascade is required for FasL upregulation, since the MEK inhibitor PD98059 significantly inhibited FasL upregulation induced by LPA (P < 0.01). Type II secretory phospholipase A2 (sPLA2-II), which promotes protein exocytosis from secretory vesicles and gelatinase granules, affects FasL translocation from intracellular to the cell surface. Pretreatment of Dov13 cells with LPA increased activated T cell apoptosis in cocultures. CONCLUSIONS: These data suggest that upregulation of FasL by LPA provides EOC immune-privilege and leads to apoptosis of activated T lymphocytes.     

Fas系统在上皮性卵巢癌及其肿瘤浸润淋巴细胞中的表达

检测Ｆａｓ、ＦａｓＬ在上皮性卵巢癌及其肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）中的表达,探讨Ｆａｓ系统在卵巢癌免疫逃逸中的作用。方法：用流式细胞术检测了３１份上皮性卵巢癌、２０份卵巢良性肿瘤、１０份正常卵巢组织以及３１份卵巢癌ＴＩＬ、１２份卵巢良性肿瘤ＴＩＬ的Ｆａｓ及ＦａｓＬ的表达。结果：卵巢癌组织的Ｆａｓ表达明显低于卵巢良性肿瘤及正常卵巢组织（Ｐ＜０．０１）,其ＦａｓＬ表达则明显高于后者（Ｐ＜０．０１）;卵巢良性肿瘤及正常组织的Ｆａｓ、Ｆａｓ Ｌ表达无差异（Ｐ＞０．０５）。卵巢癌组织中含有丰富的ＴＩＬ,其Ｆａｓ及ＦａｓＬ的表达明显高于卵巢良性肿瘤ＴＩＬ,差异有显著性（Ｐ＞０．０５）。卵巢癌组织Ｆａｓ的表达与临床分期、组织学分级及淋巴结转移无关（Ｐ＞０．０５）;ＦａｓＬ的表达与临床分期无关但随组织学分级的升高而增加（Ｐ＜０．０５）,有淋巴结转移者ＦａｓＬ的表达明显高于无淋巴结转移者（Ｐ＜０．０５）。卵巢癌ＴＩＬ中Ｆａｓ及ＦａｓＬ的表达与各临床病理参数无关（Ｐ＞０．０５）。结论：上皮性卵巢癌组织中存在Ｆａｓ表达下调和ＦａｓＬ表达增加,ＦａｓＬ高表达者预后不良。肿瘤细胞可能通过ＦａｓＬ的过度表达,逃避免疫监视,诱导Ｆａｓ敏感的     

Mechanisms involved in the evolution of progestin resistance in human endometrial hyperplasia--precursor of endometrial cancer

BACKGROUND: Successful treatment of endometrial hyperplasia with progestins is commonly accompanied by the finding of an inactive or suppressed endometrium after therapy. However, approximately 30% of the endometrial hyperplasia cases do not respond to progestins and hyperplastic glands persist. The Fas/FasL system is known to play a role in tissue remodeling as a result of changes in menstrual hormone levels. The aims of this study are to examine Fas/FasL expression in endometrial hyperplasia of pre- and postprogestin treatment samples and to study the Fas/FasL regulation in vitro with Ishikawa cells after progestin stimulation. DESIGN: Pre- and posttreatment paraffin-embedded endometrial hyperplasia tissue samples from 26 women were examined by immunohistochemistry for changes in Fas/FasL expression related to the administration of progestins. Among 26 patients, 18 were successfully treated with progestins and 8 failed treatment. Fas/ FasL positivity was defined by the presence of 10% or more immunoreactive epithelial cells in each specimen. In positive cases, a percentage or an immunoscore of immunoreactive cells was given by counting 500 cells. Cell viability was evaluated by the MTT assay. The in vitro effects of progesterone on Fas/FasL expression and apoptosis in Ishikawa cells were examined by using Western blot and TUNEL assays, respectively. RESULTS: Fas immunoreactivity was present in 4/26 (15%) preprogestin cases with an average of 16% of the epithelial cells expressing Fas. FasL was expressed in 21/26 (80%) pretreatment cases with an average of 42% of the hyperplastic glandular cells being positive. In postprogestin cases, an increase of Fas expression (14/18, 77%) with an average of 47% stained cells was seen in responders (P < 0.001), while FasL was found in 16/18 (89%) responders with an average of 65% of cells positive (P = 0.587). In nonresponders, no significant changes in Fas/FasL expression were detected compared to pretreatment samples. With in vitro Ishikawa cells, a slight increase (10-20%) of Fas and FasL protein expression was detected after 24 h of progesterone treatment, but a more significant increase (220-343%) of both Fas and FasL expression was found after 48 h of withdrawing progesterone, which parallels apoptotic activity. CONCLUSIONS: The Fas/FasL system may be involved in the development of endometrial hyperplasia. Part of the molecular mechanisms of progestin therapy for endometrial hyperplasia is through upregulation of Fas/FasL expression. Dysregulation of Fas/FasL expression in hyperplastic endometrium may be part of the molecular mechanisms for nonresponders to progestin treatment. Intermittent, rather than continuous, progestin treatment may be more effective clinically for the treatment of endometrial hyperplasia.     

胎儿生长受限患者血清和胎盘的Fas与FasL蛋白变化及意义

目的:探讨孕妇血清和胎盘Fas/FasL系统的表达与胎儿宫内生长发育的关系。方法:35例胎儿生长受限(fetal growth restriction,FGR)患者,采用ELISA方法测定血清sFas和sFasL水平,采用Western blotting检测胎盘Fas和FasL的蛋白含量,并以45例正常孕妇为对照。结果:FGR组与对照组血清sFas水平分别为3.63±0.29 mg/L和1.17±0.53 mg/L,FGR组高于对照组(P<0.05)。FGR组胎盘组织FasL含量(0.341±0.371)与正常组(0.917±0.15)比较显著下降(P<0.05),并且FasL含量与胎盘相对重量和新生儿体质量呈显著正相关,相关系数分别为0.791和0.638。结论:FGR患者血清sFas水平升高,胎盘组织FasL下降与胎盘相对重量及新生儿体质量相关,提示母-胎界面免疫耐受异常亦可能是胎儿生长受限发病机制中的重要因素之一。     

复发性流产患者胎盘滋养细胞凋亡及Fas、FasL表达的研究

目的 :通过比较正常早孕妇女和复发性流产 (RSA)患者胎盘绒毛滋养细胞凋亡及Fas、FasL表达 ,进一步从细胞及分子水平探讨复发性流产的发病机理。方法 :应用免疫组织化学SP方法 ,测定 30例RSA患者和 2 5例正常早孕妇女胎盘绒毛滋养细胞Fas和FasL基因蛋白的表达 ,并通过MIAS 2 0 0 0医用彩色病理图像免疫组化测量系统对其表达进行半定量分析 ,其结果用平均灰度表示 ;同时应用DNA缺口原位末端标记技术 (TUNEL法 )测定两组胎盘绒毛滋养细胞凋亡情况。结果 :RSA组患者胎盘绒毛FasL的表达低于正常组 ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;而Fas表达两组比较差异无显著性 (P >0 0 5 ) ,胎盘绒毛细胞滋养细胞及合体滋养细胞的凋亡指数 ,RSA组明显高于正常组 ,差异有非常显著性 (P<0 0 1)。结论 :细胞凋亡的增加可能是RSA发生的一个重要病理过程 ,且RSA患者胎盘绒毛滋养细胞表面FasL表达减少 ,导致母胎间免疫耐受的破坏 ,引起异常的免疫反应可能是RSA发病的重要机制。