趋化因子CCL18对前列腺癌细胞迁移力、侵袭力和细胞增殖影响的研究

目的研究趋化因子CCL18对前列腺肿瘤细胞侵袭力、迁移力和细胞增殖的影响。方法通过培养前列腺肿瘤细胞LNCa P、DU145,并加入趋化因子蛋白CCL18,利用Transwell实验、Wound Healing实验和CCK8试剂盒来分别检测CCL18对前列腺肿瘤细胞侵袭力、迁移力及对细胞增殖的影响。结果经过趋化因子蛋白CCL18处理的前列腺肿瘤细胞,在Transwell实验中,肿瘤细胞跨膜细胞数显著增加(LNCa P:对照vs.CCL18=202.0±18.5 vs.279.7±27.6;DU145:对照vs.CCL18=60.3±6.5 vs.91.0±9.5);Wound Healing实验中,肿瘤细胞发生迁移的数量明显增加(LNCa P:对照vs.CCL18=127.3±14.3 vs.214.4±30.9;DU145:对照vs.CCL18=68.6±15.8 vs.129.4±12.0);细胞生长实验结果揭示肿瘤细胞增殖速度也显著加快。结论趋化因子蛋白CCL18能促进前列腺肿瘤细胞LNCa P、DU145的侵袭力、转移力,并加快前列腺肿瘤细胞的生长速度。     

MiR-451a对前列腺癌细胞迁移侵袭能力的影响

目的研究miR-451a在人前列腺癌组织中的表达情况,探讨miR-451a是否通过下调LMP7来影响雄激素非依赖性前列腺癌细胞系(DU145)细胞的增殖和侵袭能力。方法收集37例前列腺癌组织标本及40例良性前列腺增生组织标本,通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测各组组织中与前列腺癌相关的miR-451a、miR-28、miR-51、miR-157、miR-48、miR-137、LMP7mRNA的表达情况,Pearson相关分析检验miR-451a表达量与LMP7的相关性;免疫印迹试验(Western blot)分别检测两组LMP7的表达情况。进一步在细胞实验中,通过转染miR-451a mimic和miR-NC至离体培养的DU145细胞中,随后,Western blot检测DU145细胞中血管内皮生长因子(VEGF)、钙粘附蛋白E(E-cadherin)的表达情况,划痕试验和Transwell法观察细胞迁移侵袭情况,利用荧光素酶试验验证LMP7是miR-451a的靶基因;紧接着通过转染过表达LMP7的质粒至DU145细胞,检测DU145细胞中相应蛋白的表达情况,划痕试验和Transwell法观察细胞迁移侵袭情况。结果相比于前列腺增生组织,miR-451a在前列腺癌组织中的表达降低(P0.01);而miR-28、miR-51、miR-157、miR-48、miR-137的表达在两组之间无显著差异;前列腺癌组织中LMP7mRNA的表达增加(P0.01);MiR-451a与LMP7 mRNA的表达量呈负相关(r=-0.4708,P0.01)。在体外细胞实验中,相比于miR-NC组,转染miR-451a mimic后,DU145细胞中VEGF、E-cadherin、LMP7的表达减少(P0.05),DU145细胞的迁移侵袭能力下降(P0.01);荧光素酶试验结果显示,miR-451a能够降低LMP7-3'-UTR质粒的荧光素活性(P0.05);转染过表达LMP7质粒后,相比于miR-451+空质粒组,DU145细胞中VEGF和E-cadherin表达增加(P0.05),细胞的迁移侵袭能力得到部分恢复(P0.01)。结论在前列腺癌组织中,miR-451a低表达;MiR-451a通过下调LMP7抑制DU145细胞的迁移和侵袭。     

miR-203调控NEDD9抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭及迁移作用机制研究

目的 :研究mi R-203抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞NEDD9蛋白的作用对细胞侵袭和迁移的影响。方法:mi R-203脂质体转染MDA-MB-231细胞,通过细胞划痕实验和Transwell实验观察细胞侵袭和迁移能力的变化;通过蛋白印迹检测mi R-203对NEDD9表达的调控作用,并用sensor reporter确定mi R-203的靶标位点;最后,通过细胞"拯救"实验研究相关蛋白表达量的变化,用免疫荧光-激光共聚焦显微镜观察细胞片状伪足和黏着斑的改变,探究mi R-203对MDA-MB-231细胞侵袭和迁移能力的调节机制。结果:细胞划痕实验和Transwell实验显示,mi R-203抑制了MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移能力;通过生物信息学网站预测mi R-203的靶基因是NEDD9;蛋白印迹和sensor reporter检测结果显示,mi R-203通过与NEDD9 3′-UTR结合,下调NEDD9;共转染si NEDD9和mi R-203的"拯救"实验后的细胞划痕实验、蛋白印迹和免疫荧光-激光共聚焦结果显示,mi R-203抑制NEDD9表达导致激活态Rac1-GTP减少,致使细胞运动状态改变,侵袭迁移能力减弱,而si NEDD9干涉作用能"拯救"mi R-203对MDA-MB-231细胞迁移能力的抑制。结论 :mi R-203通过降解NEDD9,下调激活的Rac1水平,导致乳腺癌细胞MDA-MB-231片状伪足和黏着斑的减少或消失,从而抑制细胞的侵袭及迁移。     

LncRNA HOTAIR通过靶基因miR-20a-5p调控淋巴瘤细胞增殖、侵袭、迁移的分子机制研究

目的：探讨lnc RNA HOTAIR通过靶基因mi R-20a-5p对淋巴瘤细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其分子机制研究。方法：合成HOTAIR si RNA和si RNA NC质粒后，分别转染淋巴瘤Raji细胞，RT-q PCR检测HOTAIR的m RNA表达，分别通过CCK-8实验、Transwell和细胞划痕愈合实验检测Raji细胞的增殖、侵袭和迁移情况。mi Rcode软件预测lnc RNA HOTAIR的靶基因，并通过双荧光素酶实验分析HOTAIR与靶基因的关系。合成mi R-20a-5p inhibitor和inhibitor NC后，瞬时转染Raji细胞，RT-q PCR检测mi R-20a-5p表达，分析下调mi R-20a-5p对Raji细胞的增殖、侵袭和迁移的影响。用lnc RNA HOTAIR过表达质粒和mi R-20a-5p模拟物同时转染Raji细胞，分析Raji细胞的增殖、侵袭和迁移能力。过表达或下调mi R-20a-5p后，分析JAK/STAT3信号通路相关蛋白的表达。结果：转染HOTAIR si RNA后Raji细胞中HOTAIR表达降低（P<0.0...     

下调胞浆型磷脂酶A2β对前列腺癌细胞侵袭作用的影响

目的探讨降低胞浆型磷脂酶A2β（cPLA2β）的表达对前列腺癌细胞侵袭行为性作用。方法采用小干扰RNA质粒转染技术获得cPLA2p下调的前列腺癌DUl45克隆细胞。应用Western blotting检测cPLA2β在DU145中的表达情况。流式细胞术检测DU145细胞周期变化。克隆形成实验检测DU145细胞增殖能力情况,以及Boyden小室观察细胞侵袭能力的影响。结果质粒转染DUl45获得了cPLA2p下调显著的克隆细胞,与对照组相比cPLA2p蛋白表达水平明显降低（A=0．345＆A=0．924,t=13．457,P〈0．005）。DU145转染前后细胞周期没有变化,细胞增殖能力无影响（t=0．351,P〉0．005）。下调cPLA2β的DU145侵袭能力下降近80％,和对照组相比差异有统计学显著性意义（t=35．145,P〈0．001）。结论cPLA213表达情况与前列腺癌细胞侵袭能力改变有直接关系。     

Hsa-miR-145对人三阴性乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨Hsa-miR-145对人三阴性乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响,并初步分析其影响三阴性乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的可能机制.方法 运用脂质体介导的转染方法将miR-145阻遏物(miR-145 inhibitors)转染人三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231,以inhibitor negative control(inhibitor NC)作为阴性对照,通过MTT法和Transwell侵袭实验检测细胞的增殖能力和侵袭力;采用Transwell迁移实验及划痕试验检测细胞的迁移能力;利用生物信息学方法预测miR-145的靶基因,并对其靶基因进行基因功能分析.结果 (1)miR-145 inhibitors组细胞增殖活性明显高于inhibitor NC组(P<0.05);(2)划痕后miR-145 inhibitors组细胞迁移能力比inhibitor NC组明显增强(P<0.05);(3)Transwell侵袭及迁移实验均显示转染miR-145 inhibitors后,MDA-MB-231细胞的侵袭及迁移能力明显增强(P<0.01,P<0.05);(4)生物信息学方法预测miR-145的靶基因中,部分发挥了促进细胞增殖、侵袭及迁移的生物学功能.结论 (1)miR-145对人三阴性乳腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力可能存在负性调控作用;(2)miR-145可能通过多种靶基因发挥其对肿瘤的调控作用.     

miR-29c通过Tiam1抑制人食管鳞状细胞癌侵袭和转移的研究

目的研究微小RNA(mi R)-29c通过靶向T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam1)基因对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞侵袭和迁移的影响。方法通过细胞划痕和transwell实验观察mi R-29c过表达的ESCC细胞侵袭迁移能力的变化;通过免疫印迹法和sensor reporter实验研究mi R-29c对Tiam1的调控作用和靶标位点;在细胞"拯救"实验中通过免疫印迹法检测相关蛋白表达量的变化以及用免疫荧光-激光共聚焦显微镜观察细胞形态的改变,研究mi R-29c抑制ESCC细胞侵袭迁移的调节机制。结果细胞划痕实验和transwell实验显示mi R-29c能抑制ESCC细胞的侵袭迁移;通过生物信息学方法预测mi R-29c的靶基因是Tiam1;免疫印迹法和sensor reporter检测结果显示mi R-29c通过与Tiam1 3'-非翻译区(UTR)结合降解Tiam1;细胞功能"拯救"实验的细胞划痕、免疫印迹法和免疫荧光结果显示mi R-29c能抑制Tiam1的表达,导致激活态Rac1-三磷酸鸟苷(GTP)减少,致使细胞运动状态改变,迁移能力减弱;而人工合成的针对Tiam1的特异si RNA分子si Tiam1的干涉作用能"拯救"mi R-29C对ESCC细胞迁移能力的抑制。结论 mi R-29C通过降解Tiam1 m RNA,下调了Rac1的激活水平,导致细胞运动状态变化,从而抑制ESCC细胞的侵袭迁移。     

miR-103a-3p对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨mi R-103a-3p在人肺癌组织中的表达及对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法收集南通市肿瘤医院52例肺癌患者手术组织标本,q RT-PCR检测肺癌组织及癌旁组织中mi R-103a-3p的表达;采用Lipofecta mineTM3000将mi R-103a-3p mimic、mimic NC、mi R-103a-3p inhibitor及inhibitor NC转染至A549细胞中,q RT-PCR检测mi R-103a-3p的转染效率;CCK8实验检测其细胞增殖能力;流式细胞术检测其细胞凋亡能力;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力。结果 mi R-103a-3p在肺癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织(P0.01);q RT-PCR结果显示,转染mi R-103a-3p mimic组细胞中mi R-103a-3p的表达水平明显高于mimic NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力受到抑制;而转染mi R-103a-3p inhibitor组细胞中mi R-103a-3p的表达水平低于inhibitor NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力增强;但细胞凋亡在4组中变化均不明显。结论 mi R-103a-3p在肺癌组织中低表达,mi R-103a-3p能够抑制肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭。     

低频超声联合微泡增强脂质体介导Rac1-shRNA质粒转染前列腺癌细胞及对其生物学行为的影响

目的研究低频超声联合微泡增强脂质体介导的Rac1-shRNA质粒转染前列腺癌PC3、DU145细胞,并探索其对前列腺癌细胞凋亡、侵袭能力的影响。方法基础情况下Westernblot检测RWPE-1细胞、PC3细胞和DU145细胞的Rac 1蛋白表达。根据不同处理方式将细胞分为四组:PC3细胞对照组(A组)、超声加微泡联合脂质体转染PC3细胞组(B组)、DU145细胞对照组(C组)及超声加微泡联合脂质体转染DU145细胞组(D组)。通过蛋白质体外结合实验技术检测各组Rac1蛋白的活性及表达;流式细胞仪检测各组细胞早期凋亡情况;细胞侵袭实验检测各组细胞侵袭能力。结果基础情况下前列腺癌PC3、DU145细胞Rac1蛋白表达均较正常前列腺细胞RWPE-1增加,差异均有统计学意义(均P0.01);低频超声携微泡介导Rac-1shRNA质粒转染细胞后,B组Rac1蛋白表达量较A组表达减少,D组表达量较C组减少,差异均有统计学意义(均P0.01);早期细胞凋亡检测显示,B组高于A组,D组高于C组,差异均有统计学意义(均P0.01);同期细胞侵袭力实验显示,B组穿膜细胞数少于A组,D组的穿膜细胞数少于C组,差异均有统计学意义(均P0.01)。结论低频超声联合微泡可促进脂质体介导的Rac1-shRNA质粒转染人雄激素非依赖型前列腺癌细胞;通过抑制PC3、DU145细胞中Rac1蛋白表达可以促进癌细胞的早期细胞凋亡,同时可抑制癌细胞的侵袭能力。     

MicroRNA-451通过靶向RAB14抑制鼻咽癌细胞的生长、侵袭和迁移能力

目的:探讨mi R-451对鼻咽癌细胞增殖、侵袭和转移能力的影响。方法:选取正常鼻咽上皮细胞株NP69及4株鼻咽癌细胞株CNE-1、CNE-2、5-8F、6-10B,荧光定量PCR检测mi R-451的表达量。选取鼻咽癌细胞株CNE-1和CNE-2,分别转染mi R-451 mimics和阴性对照后,采用MTT法检测鼻咽癌细胞的增殖能力,划痕实验检测其侵袭能力,transwell迁移实验检测其迁移能力。通过生物信息学方法预测mi R-451的靶基因。结果:与正常鼻咽上皮细胞相比,mi R-451在鼻咽癌细胞株中的表达量明显降低。鼻咽癌细胞过表达mi R-451后,其增殖、侵袭和迁移能力均受到抑制。通过靶基因预测数据库预测RAB14为mi R-451的靶基因,并通过荧光素酶报告基因实验、RT-PCR、Western blot实验验证了这一结果。将RAB14低表达后,也在一定程度上抑制了鼻咽癌的增殖、侵袭和转移能力。结论:mi R-451通过靶向RAB14抑制了鼻咽癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力。     

低频超声联合微泡增强脂质体介导Racl—shRNA质粒转染前列腺癌细胞及对其生物学行为的影响

目的研究低频超声联合微泡增强脂质体介导的Racl-shRNA质粒转染前列腺癌PC3、DUl45细胞,并探索其对前列腺癌细胞凋亡、侵袭能力的影响。方法基础情况下Westernblot检测RWPE-1细胞、PC3细胞和DUl45细胞的Rac1蛋白表达。根据不同处理方式将细胞分为四组：PC3细胞对照组（A组）、超声加微泡联合脂质体转染PC3细胞组（B组）、DUl45细胞对照组（c组）及超声加微泡联合脂质体转染DUl45细胞组（D组）。通过蛋白质体外结合实验技术检测各组Racl蛋白的活性及表达;流式细胞仪检测各组细胞早期凋亡情况;细胞侵袭实验检测各组细胞侵袭能力。结果基础情况下前列腺癌PC3、DUl45细胞Racl蛋白表达均较正常前列腺细胞RWPE-1增加,差异均有统计学意义（均P〈0．01）;低频超声携微泡介导Rac-1shRNA质粒转染细胞后,B组Racl蛋白表达量较A组表达减少,D组表达量较C组减少,差异均有统计学意义（均P〈0．01）;早期细胞凋亡检测显示,B组高于A组,D组高于C组,差异均有统计学意义（均P〈0．01）;同期细胞侵袭力实验显示,B组穿膜细胞数少于A组,D组的穿膜细胞数少于C组,差异均有统计学意义（均P〈0．01）。结论低频超声联合微泡可促进脂质体介导的Racl-shRNA质粒转染人雄激素非依赖型前列腺癌细胞;通过抑制PC3、DUl45细胞中Racl蛋白表达可以促进癌细胞的早期细胞凋亡,同时可抑制癌细胞的侵袭能力。     

低频低功率超声联合微泡对DU145细胞及PC3细胞早期凋亡的影响

目的比较低频低功率超声联合微泡造影剂对人前列腺癌DU145细胞与PC3细胞早期凋亡率的不同影响。方法使用低频低功率超声连续波辐照人前列腺癌DU145细胞和PC3细胞悬液60 s,实验中两种细胞系各分为4组:空白对照组(A组)、单纯微泡组(B组)、单纯超声组(C组)和超声联合微泡组(D组),辐照后细胞继续培养24 h,流式细胞仪检测细胞早期凋亡情况,透射电镜观察细胞形态改变。结果两种细胞D组的早期细胞凋亡率明显高于其余各组(P﹤0.01),C组亦均高于A组(P﹤0.05),A、B组之间差异无统计学意义;两种细胞经相同处理后,C、D组PC3细胞的早期细胞凋亡率均高于DU145细胞(P﹤0.01)。透射电镜下两种细胞D组可见癌细胞体积变小变圆,空泡增多,有明显的凋亡小体形成,PC3细胞内还可见大量的自噬体出现。结论低频低功率超声联合微泡造影剂能明显诱导人前列腺癌细胞的早期凋亡,且对PC3细胞早期细胞凋亡作用强于DU145细胞。     

不同辐照模式低频超声对前列腺癌DUl45细胞的影响

目的探讨不同辐照模式低频超声对前列腺癌DUl45细胞的影响。方法对体外培养的人前列腺癌DUl45细胞悬液进行不同模式的低频超声辐照：第A组为对照组,第B组为脉冲波辐照模式,第C组为连续波辐照模式。辐照后即刻用荧光显微镜检测FD500染色阳性率反映细胞膜通透性改变情况;辐照后24h用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果与对照组相比,两种模式的超声波处理组FD500染色阳性率均增加;与连续波模式相比,脉冲波模式FD500染色阳性率增加明显,差异有统计学意义（P〈O．01）。脉冲波模式轻微抑制细胞增殖,连续波能明显抑制细胞增殖（P〈0．05）。与对照组相比,两种模式的超声波处理组DUl45细胞凋亡率均增加;与脉冲波模式相比,连续波模式DUl45细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论不同辐照模式低频超声能够影响前列腺癌DUl45细胞的生物学行为。应用于基因转染或载药目的时,选择脉冲波模式增加细胞膜通透性;应用于治疗目的时,选择连续波模式能够抑制肿瘤生长。     

Sorafenib对前列腺癌DU145细胞的抑制作用的研究

目的观察索拉非尼（Sorafenib）对雄激素非依赖性前列腺癌Du145细胞的抑制作用。方法用不同浓度Sorafenib处理前列腺癌DU145细胞24、48和72h后,MTT法检测Sorafenib对DUl45细胞的抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡变化,Westernblot检测不同浓度Sorafenib处理72h后DU145细胞内ERK和Bcl-2的表达。结果Sorafenib能显著抑制DU145细胞的体外生长,呈时间与剂量依赖性。DUl45细胞凋亡率随着Sorafenib剂量的增加而增大,具有良好的量效关系（P〈0．01）;Sorafenib处理DU145细胞72h后,ERK和Bcl-2蛋白的表达明显下调（P〈0．01）。结论Sorafenib抑制DU145细胞增殖、诱导细胞凋亡,可显著抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞的体外生长。     

薄荷醇抑制前列腺癌DU145细胞的增殖和迁移

目的探讨薄荷醇对雄激素非依赖性前列腺癌DU145细胞增殖和迁移能力的影响。方法通过RT-PCR、免疫组织化学和Western blot方法检测TRPM8和TRPA1的表达;MTT和划痕试验检测薄荷醇对DU145细胞的增殖和迁移能力的影响;流式细胞术检测TRPM8对DU145细胞周期和凋亡的影响。结果 RT-PCR、免疫组织化学和Western blot提示TRPM8在DU145细胞中高表达而TRPA1在DU145细胞中不表达;薄荷醇能诱导细胞周期阻滞于G0/G1期,与未经薄荷醇处理的细胞相比,经100μmol/L薄荷醇处理的细胞培养24、48和72h后,G0/G1期细胞显著增加（49.12%±1.92%vs61.71%±2.70%、77.65%±1.63%、71.81%±2.46%,P〈0.05,P〈0.01）,进而抑制细胞增殖（P〈0.05）,并抑制细胞迁移（P〈0.05）,流式细胞术检测显示薄荷醇并不引起细胞凋亡。结论 TRPM8可能成为前列腺癌治疗的一个新靶点,对于高表达TRPM8的雄激素非依赖性前列腺癌针对TRPM8通道的药物治疗可能比TRPM8基因治疗更为实用,因此,薄荷醇作为一个潜在的抗肿瘤药物也拥有很大的发展前景。     

miR-34a通过调控YY1抑制肾癌细胞的增殖及侵袭

目的探讨miR-34a在肾癌组织中表达、miR-34a对人肾癌ACHN细胞增殖和侵袭的影响及调控机制。方法实时聚合酶链反应(PCR)检测miR-34a在20例肾癌及癌旁组织中的表达;采用脂质体转染法将miR-34a mimics转染入肾癌ACHN细胞中,试验分空白对照组、阴性对照组、miR-34a mimics转染组。实时PCR检测转染24 h后miR-34a表达量;噻唑蓝(MTT)试验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;Transwell及Matrigel检测细胞侵袭能力;实时PCR和蛋白质印迹(Western blot)技术检测转染后转录因子YY1表达水平。结果与癌旁组织相比,20例癌组织中miR-34a平均表达量为1.06±0.67,显著低于癌旁组织(1.62±0.83,P<0.01);转染后24 h,miR-34a mimics转染组的miR-34a表达量为157.04±13.01,较阴性对照组显著上调(P<0.01);miR-34a mimics转染组细胞增殖能力显著降低(P<0.01),细胞生长被阻滞在G0/G1期;细胞侵袭能力明显减弱(P<0.01);转染miR-34a mimics后YY1基因在mRNA表达无明显变化(P>0.05),蛋白水平下调。结论 miR-34a在肾癌中低表达,可能与肾癌的发生有关;miR-34a调控YY1的表达可能是抑制肾癌细胞生物活性的重要机制之一。     

JKTBP在前列腺癌细胞系和组织中的表达差异及其意义

目的研究在雄激素依赖性及雄激素非依赖性前列腺癌细胞系、组织和前列腺增生（BPH）组织中JKTBP的表达差异。方法应用RT-PCR和Westernblot比较雄激素依赖性前列腺癌（AD-PCa）细胞系LNCaP及雄激素非依赖性前列腺癌（AI-PCa）细胞系DU145JKTBPmR—NA和蛋白的表达差异;应用免疫组化方法比较BPH、AD-PCa和AI-PCa组织中JKTBP的表达差异。结果在LNCaP细胞系中JKTBPmRNA和蛋白的表达水平均较低,相反,在DU145细胞系中两者均呈高表达,两细胞系间mRNA和蛋白的表达差异具有统计学意义（P〈0．05）。JKTBP在20例BPH组织中均表达阴性;在20例AD-PCa组织中有4例弱阳性,2例阳性,14例阴性;而在6例AI-PCa组织中5例呈强阳性表达,1例弱阳性;三组之间表达差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论JKTBP在AD／AI-PCa细胞系、组织和BPH组织中的表达存在差异,其可能参与了前列腺癌的进展过程,是前列腺癌进展的一个指标。