银杏叶提取物对人胚肺成纤维细胞增殖与凋亡的干预研究

目的:观察银杏叶提取物对人胚肺成纤维细胞增殖、凋亡的影响,为临床治疗肺纤维化提供理论依据。方法:HELF细胞培养后,分别分为A对照组;B模型组加入TGF-β1;C1-3TGF-β1+银杏叶提取物低中高剂量组。MTT法测量各孔吸光度OD值并计算各药物组细胞生长抑制率,流式细胞术Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡率。结果:与对照组相比,模型组细胞OD值明显升高;与模型组相比,银杏叶提取物各浓度组细胞增殖OD值均明显降低,其中高浓度组明显低于中、低浓度组,经统计学处理,有显著差异性(P0.05)。与对照组相比,模型组细胞凋亡率明显降低;与模型组相比,银杏叶提取物各浓度组细胞凋亡率均明显升高,其中高浓度组明显高于中、低浓度组,经统计学处理,有显著差异性(P0.05)。结论:TGF-β1可明显促进成肺纤维细胞的增殖,抑制其凋亡;银杏叶提取物具有抑制肺成纤维细胞增殖,促进其凋亡的作用,且作用成一定量效相关。     

平肺口服液抑制肺成纤维细胞生长和诱导凋亡

目的采用血清药理学方法,研究平肺口服液对人胚肺成纤维细胞增殖及诱导细胞凋亡的作用。方法平肺口服液10g/kg和20g/kg分别灌服大鼠,第1～7天每日一次,第8～10天每日两次,于第11天早上末次灌服后2h腹主动脉无菌采血制备含药血清。采用噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术分别检测平肺口服液含药血清对人胚肺成纤维细胞(CCC-HPF-1)增殖、细胞凋亡和细胞周期的影响。结果平肺口服液20g/kg灌服所得大鼠含药血清作用96h和120h分别能抑制CCC-HPF-1细胞增殖(P0.01);流式细胞术检测表明该含药血清作用96h能诱导CCC-HPF-1细胞发生凋亡(P0.05)和G1/G0期阻滞(P0.05)。结论平肺口服液能抑制肺成纤维细胞增殖,诱导细胞凋亡以及使细胞周期阻滞于G1/G0期,这可能有助于其预防放射性肺损伤。     

葛根素对人胚肺成纤维细胞增殖及细胞外基质合成的影响

目的观察葛根素对体外培养人胚肺成纤维细胞增生和凋亡以及细胞外基质形成的影响。方法用0～400gg／mL浓度的葛根素作用于体外培养的人胚肺成纤维细胞，24～96h后观察不同浓度的葛根素对成纤维细胞增殖活性及其功能的影响。MTT法观察成纤维细胞的生长活性，天狼猩红染色观察胶原生成情况。流式细胞仪测定细胞周期时相变化。结果80～400gg／mL浓度作用下24～72h范围内，葛根素可剂量和时间依赖性地抑制人胚肺成纤维细胞的增生（P〈0．05）。流式细胞仪检测结果发现，随着浓度的增大，G0／G1期细胞百分比逐渐上升，S期细胞百分比逐渐下降，说明细胞阻滞于G0／G1期。结论葛根素可在一定程度上抑制人胚肺成纤维细胞的增生，并诱导其凋亡，降低胶原的合成，作用呈时间和剂量依赖性。     

莪术醇对人胚肺成纤维细胞增殖的影响

目的:探讨莪术醇对人胚肺成纤维细胞增殖抑制作用.方法:MTT法观察莪术醇对人胚肺成纤维细胞增殖的抑制作用;天狼猩红染色法测定细胞胶原的分泌能力,流式细胞术检测细胞周期时相分布.结果:50～200 mg·L-1莪术醇作用细胞后能抑制人胚肺成纤维细胞的增殖和制胶原沉积,以96 h效果最为明显,并阻滞细胞停滞于G0/G1期,降低S期和G2/M期细胞时相比例.结论:莪术醇通过将细胞周期阻滞于G0/G1,减少DNA复制,抑制人胚肺成纤维细胞增殖和细胞分泌胶原.     

苦参碱对视网膜母细胞瘤细胞增殖与凋亡及PI3K/Akt信号通路的影响

目的:研究苦参碱对视网膜母细胞瘤(Rb)细胞增殖与凋亡及PI3K/Akt信号通路的影响。方法:将Rb细胞株Y79作传代培养,使用不同浓度(15、30、60、120mg/L)的苦参碱对细胞进行培养作为观察组,同时选择空白组作为对照组,采用噻唑蓝比色法(MTT)检测生长抑制情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,计算凋亡率,RT-PCR法检测PI3K、AktmRNA相对表达量,免疫组化法检测PI3K、Akt蛋白表达情况。结果:培养24小时、48小时、72小时后,观察组各组Y79细胞生长抑制率均高于对照组,并且随着时间与苦参碱浓度的增加,生长抑制率也在升高(P0.05);经过培养,观察组在G0/G1期的细胞比例高于对照组,处于S期和G2/M期细胞低于对照组(P0.05);相同时间内,随着苦参碱浓度的升高,细胞凋亡率明显升高,且高于对照组(P0.05)。相同浓度时,随着时间的增加,细胞凋亡率也升高,均高于同时期对照组(P0.05);观察组中各浓度条件下,PI3KmRNA、AktmRNA相对表达量均明显低于对照组(P0.05),并且随着浓度的升高,PI3KmRNA、AktmRNA相对表达量显著降低(P0.05);观察组中各浓度条件下,PI3K、Akt蛋白表达均低于对照组(P0.05),并且随着浓度的升高,PI3K、Akt蛋白表达也下降(P0.05)。结论:苦参碱能够明显抑制Rb细胞的增殖,促进细胞凋亡,可能是通过抑制PI3K/Akt信号通路,使细胞停留在G0/G1期,诱导细胞凋亡。     

苦参碱对宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡及Survivin基因表达的影响

目的:探讨苦参碱对宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡的影响及其可能的分子机制.方法:应用不同浓度的苦参碱作用于人宫颈癌Hela细胞,采用MTT法检测细胞增殖;Annexin V FITC/PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期;RT-PCR和Western blotting分析Survivin基因表达.结果:苦参碱对Hela细胞的体外增殖具有抑制作用,量效关系显著,与对照组比较有统计学差异(P＜0.01),半数抑制浓度(IC50)为2.60 g·L-1.经流式细胞仪检测表明,苦参碱能使Hela细胞G0-G1期逐渐增加,G2-M期和S期逐渐减少,并且随着剂量的增加,Hela细胞凋亡率明显增加(P＜0.01).苦参碱对Hela细胞Survivin 基因表达有一定的抑制作用(P＜0.01),并呈剂量依赖性.结论:苦参碱能有效抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制Survivin基因的表达有关.     

养阴清肺方对钴60照射后肺成纤维细胞周期和凋亡的影响

目的：探讨养阴清肺方对钴60照射后肺成纤维细胞的生长周期及凋亡的影响。方法：制备实验用含药血清：空白组、中药组、激素组、中药加激素组;采用钴60射线照射肺成纤维细胞后,用不同含药血清培养细胞,分别于24、48、72 h后用流式细胞技术检测各组的细胞周期及细胞凋亡。结果：24 h,各药物组的细胞凋亡与空白组均有差异（P〈0.05）,中药组的作用最突出。各药物组的细胞周期主要阻滞在G2/M期;空白组与各药物组的S期有显著差异（P〈0.05）。48 h,各药物组细胞凋亡与空白组均有差异（P〈0.05）,而各药物组之间没有差异（P〉0.05）。72 h,各药物组细胞凋亡与空白组均有差异（P〈0.05）;各药物组之间亦有差异（P〈0.05）。48、72h各组出现了以G0/G1期比例增高为主的G0/G1期和G2/M期同时阻滞的现象。结论：养阴清肺方能够影响细胞生长周期,减少细胞合成期,诱导G2/M期阻滞,促进肺成纤维细胞的凋亡。     

肺積1號方抑制荷瘤小鼠移植瘤生長及與調節細胞周期關系的實驗硏究

目的：研究肺积1号方对Lewis肺癌荷瘤小鼠移植瘤生长的抑制作用,并探讨其与调节细胞周期的关系。方法：构建Lewis肺癌小鼠模型,并分为空白对照组、肺积1号方小、中、大剂量组、顺铂五组,计算抑瘤率,流式细胞术分析肺积1号方对Lewis肺癌细胞周期及凋亡率的影响。结果：肺积1号方小、中、大剂量组及顺铂组均能抑制移植瘤的生长,与空白对照组比较差异有统计学意义（P〈0.01）;流式细胞术结果显示,肺积1号方中、大剂量组与模型组比较,G0/G1期细胞增加,差异具有统计学意义（P〈0.05）,同时S期、G2/M期细胞比例下降（P〈0.05）,作用呈剂量依赖性（P〈0.05）;肺积1号方小、中大剂量组与模型组比较,凋亡细胞增加,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论：肺积1号方能够抑制Lewis肺癌小鼠移植瘤生长,其作用呈剂量相关性,作用机制可能是通过使Lewis肺癌细胞阻滞在G0/G1期,不进入S期进行DNA复制,从而抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡有关。     

苦参碱和氧化苦参碱对SMMC-7721细胞增殖及Stat3,Stat5基因表达的影响

目的：观察苦参碱和氧化苦参碱对肝癌细胞SMMC-7721增殖及Stat3, Stat5基因表达的影响。方法：苦参碱和氧化苦参碱干预肝癌细胞SMMC-7721，MTT法检测其对肝癌细胞增殖的影响，双荧光染色观察细胞凋亡率，RT-PCR法检测其对SMMC-7721细胞Stat3, Stat5 mRNA的影响。结果：苦参碱和氧化苦参碱作用于肝癌细胞后，能显著抑制肝癌细胞增殖，促进其凋亡，并呈时间剂量依赖性；二者均能下调Stat3, Stat5 mRNA表达水平。以相同浓度苦参碱和氧化苦参碱比较，苦参碱对肝癌细胞Stat3, Stat5 mRNA下调作用更显著(P<0.05或P<0.01)。结论：苦参碱和氧化苦参碱能显著抑制SMMC-7721细胞增殖，其机制可能与下调Stat3, Stat5的基因表达，抑制细胞信号传导通路有关。     

低氧条件下启膈散与顺铂抑制食管癌细胞EC9706增殖的协同效应

目的观察低氧下启膈散和顺铂的抑制食管癌细胞增殖的协同效应,从细胞周期和凋亡探讨其机制。方法制备含药血清,MTT法检测启膈散和顺铂单用或联合应用对食管癌细胞EC9706增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果 8%、10%浓度的启膈散含药血清与1μg·ml-1顺铂联合抑制EC9706细胞增殖具有明显协同效应,Q值分别为1.18,1.25。用药各浓度与对照组相比细胞G1、G2期比率显著降低,S期显著升高(P0.01),顺铂高浓度组、启膈散组、联合低浓度组细胞G1期比率高于顺铂低浓度组,S期比率显著低于顺铂低浓度组(P0.05),联合高浓度组细胞G1期比率明显低于高浓度顺铂组(P0.05)。除启膈散组外,其他用药各组细胞凋亡率显著高于对照组(P0.01),联合高浓度组细胞凋亡率高于顺铂高、低浓度组(P0.05),顺铂组、联合组高浓度组细胞凋亡率明显高于低浓度组(P0.05)。结论启膈散含药血清和顺铂在抑制食管癌细胞EC9706增殖方面具有协同作用,其机理和诱导细胞凋亡有关。     

金复康口服液对人肺腺癌耐吉非替尼PC-9R细胞凋亡的影响

目的:探讨金复康口服液对人肺腺癌吉非替尼获得性耐药细胞株PC-9R的凋亡的影响及机制。方法:流式细胞术检测细胞周期及凋亡率,免疫组化法检测Caspase-3、Caspase-8的表达。结果:对于G1、G2期细胞数含量,金复康药物血清+吉非替尼组与金复康药物血清组、吉非替尼组比较,P<0.05,有统计学差异,对于S期细胞数含量,金复康药物血清+吉非替尼组、金复康药物血清组、吉非替尼组,P>0.05,无统计学差异,表明吉非替尼联合金复康药物血清后,金复康口服液增强了吉非替尼将细胞周期阻滞在G2期;在凋亡率方面,金复康药物血清+吉非替尼组与金复康药物血清组、吉非替尼组比较,P<0.05,有统计学差异,表明吉非替尼联合金复康药物血清后,金复康口服液增强了吉非替尼对PC-9R细胞的凋亡诱导作用;吉非替尼组、金复康药物血清+吉非替尼组与Con组比较,Caspase-3、Caspase-8的阳性表达率有统计学差异(P<0.05)。结论:金复康口服液能够逆转人肺腺癌吉非替尼获得性耐药细胞株对吉非替尼的凋亡抵抗,可能与上调caspase-3、caspase-8的表达有关。     

苦参碱对人结肠癌HT29细胞生长抑制作用的实验研究

目的研究苦参碱（matrine,MA）对人结肠癌HT29细胞系抑制和诱导凋亡的作用。方法分别采用MTT法检测细胞的生长抑制率,流式细胞仪、透射电镜观察MA处理HT29细胞后细胞周期阻滞和细胞凋亡的发生。结果2～32mg／mLMA均能抑制HT29细胞增殖（P〈0．05）,其抑制率与作用时间及浓度相关。4、8、16mg／mLMA处理HT29细胞后,G。／G,细胞明显高于阴性对照组（P〈0．05）,提示细胞周期停滞于G0／G1期。透射电镜可见,HT29细胞出现凋亡形态学改变。结论MA对HT29细胞有抑制作用,机制可能与阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡有关。     

肺岩宁对整合素连接激酶沉默后人肺癌A549细胞生物学活性的影响

目的在建立整合素连接激酶(ILK)基因RNAi慢病毒表达载体的基础上,研究ILK基因沉默后对人肺腺癌细胞A549细胞生物学活性的影响及中药肺岩宁方对细胞活性的影响。方法构建载体转染人肺腺癌细胞A549后,分为阴性对照病毒感染细胞组(NC组)、RNAi靶点病毒感染细胞组(KD组)、10%肺岩宁血清干预的NC组(NC+10%中药血清组)、10%肺岩宁血清干预的KD组(KD+10%中药血清组)、20%肺岩宁血清干预的NC组(NC+20%中药血清组)、20%肺岩宁血清干预的KD组(KD+20%中药血清组)及10%(10 mg/L)DDP干预的KD组(KD+10%DDP组)。MTT检测不同浓度的药物敏感性,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期变化,Transwell实验和克隆形成检测细胞的迁移和成瘤能力。结果①KD组与NC组相比,KD组细胞凋亡率上升(P0.05),G2/M期细胞总数的百分比明显降低(P0.01),转移率明显降低(P0.05),克隆数目明显减少(P0.05)。②KD+10%中药含药血清组与NC+10%中药血清组相比,KD+10%中药血清组细胞凋亡率明显上升(P0.05),G2/M期细胞总数的百分比明显降低(P0.01),转移率无显著性差异(P0.05),克隆数目明显减少(P0.05)。③KD+20%中药血清组与NC+20%中药血清相比,KD+20%中药血清细胞凋亡率下降(P0.01),G2/M期细胞总数的百分比降低(P0.01),转移率无显著性差异(P0.05),克隆数目明显减少(P0.05)。④KD+10%DDP组与NC+20%中药血清组相比,KD+10%DDP组细胞凋亡率上升(P0.01),G2/M期细胞总数的百分比明显降低(P0.01),转移率明显降低(P0.01),克隆数目明显减少(P0.01)。结论 ILK基因沉默后可以明显促进人肺腺癌细胞A549的凋亡,降低细胞迁移和成瘤能力,对细胞周期无调控作用;10%中药肺岩宁方含药血清有促进细胞凋亡及抑制细胞克隆形成的能力;20%中药含药血清可以抑制细胞克隆形成能力;10%DDP有促进细胞凋亡、抑制细胞迁移和克隆形成的能力。     

苦参碱对HT29人结肠癌细胞凋亡及Bax和BcL-2蛋白表达的影响

目的 研究苦参碱对人结肠癌HT29细胞凋亡及Bax和Bcl-2蛋白表达的影响.方法 取HT29人结肠癌细胞体外培养,加苦参碱处理24～48 h.采用MTT法检测细胞增殖,使用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,采用Western Blot法检测Bax和Bcl-2蛋白表达.结果 在2～16 mg/mL苦参碱作用下,HT29细胞增殖被明显抑制,且呈剂量和时间依赖性（P＜ 0.05或P＜0.01）;给予4、8和16 mg/mL苦参碱作用HT29细胞24 h后,细胞凋亡率分别为（14.84±2.35）％、（37.80±2.49）％和（54.10±1.60）％,均明显高于对照组（4.36±0.23）％（P＜0.05）;经苦参碱作用24 h后,细胞Bax蛋白表达增加,而BcL-2表达减少,呈剂量依赖性.结论 苦参碱能抑制HT29细胞增殖,并促进其凋亡,其机制可能与抑制BcL-2和促进Bax蛋白表达有关.     

蜂毒素对人胃癌细胞株BGC-823凋亡及其细胞周期的影响

目的：观察蜂毒素体外对人胃癌细胞株BGC-823增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法：采用MTT法观察不同浓度的蜂毒素（32,16,8,4,2μg/mL）体外对人胃癌细胞株BGC-823增殖的影响,并用流式细胞仪检测其诱导的细胞凋亡和周期阻滞效应。结果：①与对照组比较,蜂毒素有抑制人胃癌细胞株BGC-823增殖的作用（P〈0.01）,随着药物浓度的增大,其对细胞的抑制率也明显增大,呈现剂量依赖性。②蜂毒素浓度从4μg/mL开始,即可诱导细胞产生凋亡,随着剂量的增加诱导凋亡的效果更加明显。③在细胞周期方面,与阴性对照比较,蜂毒素作用24小时后S期细胞比例上升,而G0/G1期比例明显下降,蜂毒素浓度达到16μg/mL时G0/G1期前出现明显的亚二倍体区。结论：蜂毒素对人胃癌细胞株BGC-823的增殖具有抑制作用,且能够引起该细胞的凋亡及改变其细胞周期。     

苦参碱和氧化苦参碱对人肝癌细胞株 SMMC-7721凋亡的影响

目的：探讨苦参碱与氧化苦参碱对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响。方法采用MTT法检测SMMC-7721细胞增殖,并采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法检测SMMC-7721细胞凋亡。结果苦参碱与氧化苦参碱浓度为0.50～2.00 mg/ml时,细胞增殖抑制率均逐渐上升,呈药物浓度和作用时间的依赖性;同样浓度下（1.00 mg/ml）,苦参碱增殖抑制作用强于氧化苦参碱[24 h、48 h和72 h时苦参碱组分别为（42.39±0.04）%、（51.69±0.03）%、（78.98±0.05）%,氧化苦参碱组分别为（21.36±0.02）%、（36.16±0.02）%、（61.24±0.13）%;P均＜0.05]。苦参碱与氧化苦参碱浓度为0.25、0.50、1.00 mg/ml时SMMC-7721细胞凋亡率显著增高;同样时间点（48 h）,苦参碱对细胞凋亡的诱导强于氧化苦参碱[0.25、0.50、1.00 mg/ml时,苦参碱组凋亡率分别为（4.08±0.20）%、（4.32±0.19）%、（9.93±0.18）%,氧化苦参碱组分别为（2.20±0.18）%、（3.08±0.26）%、（9.01±0.20）%;P均＜0.05]。结论苦参碱和氧化苦参碱可抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖,促进其凋亡。     

4’-去甲基-4’-氧-环丁甲酰基-去氧鬼臼毒素及鬼臼苦素抑制肿瘤细胞生长作用研究

目的:探讨不同浓度4’-去甲基-4’-氧-环丁甲酰基-去氧鬼臼毒素对宫颈癌细胞Hela和黑色素瘤细胞B16增殖的抑制作用;鬼臼苦素对Hela细胞、肝癌Hep G2细胞、肺癌A549细胞及骨肉瘤MG-63细胞增殖的抑制作用。方法:采用MTT法检测不同浓度的4’-去甲基-4’-氧-环丁甲酰基-去氧鬼臼毒素及鬼臼苦素对以上多种癌细胞的抑制作用。结果:不同浓度4’-去甲基-4’-氧-环丁甲酰基-去氧鬼臼毒素与对照组(0.1%DMSO)相比,对肿瘤细胞生长抑制率明显升高,均有显著性差异(P<0.05);不同浓度鬼臼苦素与对照组(0.1%DMSO)相比,对肿瘤细胞生长抑制率也明显升高,均有显著性差异(P<0.05)。结论:4’-去甲基-4’-氧-环丁甲酰基-去氧鬼臼毒素对Hela细胞和B16细胞增殖具有明显的抑制作用,鬼臼苦素对Hela、MG-63、Hep G2及A549细胞具有明显的抑制作用。     

二氢青蒿素联合放疗对肺癌GLC-82细胞凋亡的影响及机制研究

目的研究二氢青蒿素（dihydroartemisinin,DHA）联合放疗对人肺腺癌GLC-82细胞周期和凋亡的影响及其机制。方法 MTT法检测不同浓度DHA分别在24、48、72 h对GLC-82细胞的抑制作用;克隆形成实验分析,多靶单击拟合模型方程计算放射增敏比,评价增敏效果;流式细胞术检测DHA联合放疗对GLC-82细胞周期和凋亡的影响;Western blot检测P53、P21、Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果不同浓度DHA（4、8、16、32、64、128μg/mL）作用24、48和72 h的IC50值分别为：38.25、20.58、10.36μg/mL,对GLC-82细胞的毒性有明显剂量和时间依赖性,抑制率较空白对照组明显增加（P〈0.01,P〈0.05）;DHA对GLC-82细胞具有放射增敏作用,其增敏比为1.4。DHA联合放疗可使GLC-82细胞周期的构成发生明显的变化并诱导细胞凋亡,凋亡率为21.5%,与空白对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。Western blot表明,DHA联合放疗作用GLC-82细胞后P53和P21的蛋白水平表达增加,同时下调Bcl-2蛋白表达（P〈0.01,P〈0.05）。结论 DHA对肺腺癌GLC-82细胞有较强的细胞毒性和放射增敏作用,其作用机制可能是使GLC-82细胞生长停滞在G0/G1期并诱导细胞凋亡,使S期细胞比例降低;使P53功能恢复,通过抑制Bcl-2蛋白的表达促使凋亡,从而起到杀伤肿瘤的作用。     

苦参碱对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用研究

目的：研究苦参碱对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用并初步探讨其机制。方法：采用♂昆明小鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性对照（硫普罗宁30mg/kg）组、苦参碱高、中、低剂量（80mg/kg、40mg/kg和20mg/kg）组,分别灌胃给药6天,于第6天末次给药2h后除正常对照组外,其余各组一次性灌胃给予50%乙醇（5g/kg）。乙醇处理12h后测定血清谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）的活性及肝脏组织匀浆丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽还原酶（GSH-px）的含量,并进行肝组织病理学切片检查及Ridit分析。结果：与模型组比较,苦参碱各剂量组血清AST、ALT活力和肝组织MDA含量显著降低（P〈0.05）;肝组织SOD、GSH-Px活力均升高（P〈0.05）;苦参碱高、中剂量组R值显著于模型组（P〈0.05）。结论：苦参碱对小鼠急性酒精性肝损伤具有保护作用,其保护作用可能与抗氧化应激相关。